CZ20021479A3

CZ20021479A3 - Přípravek regenerující sliznici a jeho použití

Info

Publication number: CZ20021479A3
Application number: CZ20021479A
Authority: CZ
Inventors: Peter Geistlich; Lothar Schloesser; Philip J. Boyne
Original assignee: Ed. Geistlich Soehne Ag Fuer Chemische Industri
Priority date: 2001-04-27
Filing date: 2002-04-26
Publication date: 2003-04-16
Also published as: RU2002111375A; EP1709981B1; US20020160036A1; PL353657A1; JP2003010313A; DE60216353T2; CA2383636C; CN1253213C; DE60216353D1; DE60235845D1; DK1709981T3; US6713085B2; PL206261B1; PT1252903E; EP1709981A1; AU3561802A; ATE346620T1; ES2342677T3; ES2275810T3; CN1383897A

Description

Přípravek regenerující sliznici a jeho použití

Oblast techniky

Předložený vynález se obecně týká přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje obnovu sliznice.

Dosavadní stav techniky

Použití dermoepidermálních štěpů a prostých štěpů orální sliznice při vestibulámích řezech a jiných typech chirurgických vestibulámích plastik dutiny ústní je již po nějakou dobu zavedeným postupem. Navíc se použití prostých slizničních štěpů odebraných z patra a lícní sliznice využívá při obnovování přilehlých slizničních povrchů ploch alveolámího hřbetu bez zubů, konkrétně ve spojení s použitím kořenové formy implantátů.

Přestože jsou tyto štěpovací postupy dobře zavedené, vyvinutí účinného aloplastického nebo xenogenního náhradního štěpového materiálu pro rekonstrukci a regeneraci normální slizniční membrány by přineslo mnohem širší využití chirurgických postupů u plastik ústní předsíně.

V oboru tak zůstává potřeba obecně zlepšení podpory regenerace sliznice, a to zvláště po chirurgických zákrocích při plastikách v ústní předsíni.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje obnovy sliznice, který obsahuje membránu obsahující přečištěný kolagenový materiál pocházející z přirozené tkáně obsahující kolagen.

Regenerace sliznice se v souladu s předloženým vynálezem podpoří použitím membrány sestávající z přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen.

Přehled obrázků na výkrese

Obr. 1 je půdorysem znázorňujícím proužek kolagenového membránového materiálu pokrývajícího plochu léčené sliznice.

Obr. 2 je průřezovým bokorysem znázorňujícím membránu pro použití podle předloženého vynálezu.

Obr. 3 je průřezovým bokorysem znázorňujícím jinou mebránu pro použití podle předloženého vynálezu.

Podrobný popis vynálezu

Předložený vynález se dále použití přípravku pro podporu regenerace sliznice. I když je toto použití je popsáno ve spojitosti s podporou regenerace sliznice v dutině ústní po určitých typech ústních operací, bude vysoce ohodnoceno, že tento způsob lze použít pro podporu regenerace sliznice v jakékoliv části těla, jež má poškozenou slizniční tkáň.

Ve zvýhodněných provedeních vynálezu zahrnuje použití přípravku pro podporu regenerace sliznice kroky překrytí léčené plochy proužkem sestávajícím z pásu kolagenového membránového materiálu, kde kolagenový membránový materiál sestává z alespoň jedné vrstvy s hladkým povrchem a vláknitým povrchem protilehlým k hladkému povrchu, přičemž vláknitý povrch umožňuje na sobě růst buněk, kde kolagenová membrána s výhodou dále obsahuje druhou vrstvu, převážně z kolagenu II nebo směsi kolagenu I a III, jež mají otevřenou, .· ___· · · · » . . .

··«·«· 0 · ··· · 0 0 0 houbovitou strukturu. Proužek se upevní přes poškozené místo sliznice, s výhodou stehy, a sliznice se ponechá regenerovat.

Podle předloženého vynálezu, jak je znázorněno na obr. 1, se poškození slizničního povrchu M vyhojí prostřednictvím umístění proužku 10 přes poškozené místo a připevněním proužku k okrajům povrchu sliznice kolem poškozeného místa. Překrytá plocha se poté ponechá, aby sliznice zregenerovala. Na obr. 1 je proužek 10 znázorněn po upevnění stehy 12 k povrchu sliznice M. Alternativně lze proužek přes poškozené místo upevnit pomocí adhezivního spojení proužku s okolní sliznici hostitele nebo s jinými strukturami obklopujícími léčenou plochu,

3r • · · · · · ···· · · · • · · · · · · například použitím organického lepidla, jak je v oboru známo, nebo jakýmkoliv jiným vhodným způsobem.

Proužek 10 se vytvoří z preparátu sestávajícího z kolagenové membrány o vhodné vláčnosti, aby se tato těsně přizpůsobila tvaru slizničního povrchu, na který je přiložena. Ve zvýhodněném provedení vynálezu obsahuje kolagenová membrána alespoň jednu kolagenovou vrstvu o vhodné pevnosti, aby umožnila přišití ke sliznici a ochránila slizniční povrch před poraněním během procesu hojení.

Prvé provedení kolagenové membrány pro použití jako krycího proužku podle předloženého vynálezu je znázorněno na obr. 2 jako membrána 14. Membrána 14 zahrnuje jednoduchou kolagenovou vrstvu 16, která má na jedné straně hladký povrch 18 a strukturovaný nebo vláknitý povrch 20 na straně druhé, protilehlé k hladkému povrchu. Hladký povrch 18 je s výhodou neporézní, aby poskytl mechanickou ochranu, například při jídle. Vláknitý povrch 20 je utvořen tak, aby umožnil na sobě růst buněk. Při použití je hladký povrch s výhodou orientován směrem od léčené plochy a vláknitý povrch je s výhodou orientován směrem k léčené ploše.

Ve zvýhodněných provedeních vynálezu je kolagenová vrstva 16 převážně z kolagenu I, kolagenu III nebo jejich směsi. Jedním z vhodných materiálů pro tuto vrstvuje Biogide® firmy Ed. Geistlich Sóhne AG fůr Chemische Industrie, zplnomocněný právní zástupce pro předložený vynález. Materiál Biogide® je popsán v US patentu ě. 5 837 278, který je zde zahrnut v odkazech.

Obr. 3 znázorňuje vícevrstvou kolagenovou membránu 14', kterou lze podle předloženého vynálezu použít jako krycí proužek. Tato membrána obsahuje první kolagenovou vrstvu 16, jak je znázorněno na obr. 2 a dále obsahuje druhou kolagenovou vrstvu 22, která má otevřenou, houbovitou strukturu. Druhá kolagenová vrstva 22 je s výhodou připevněna k vláknitému povrchu 20 první kolagenové membrány 16, aby byla umístěna na slizničním povrchu a aby podpořila r

4• ♦

regeneraci sliznice. Druhou vrstvu 22 lze vytvořit z kolagenu I, II, III, IV nebo VII, jakoukoliv kombinací těchto kolagenových typů, ale s výhodou se vytvoří převážně z kolagenu I, kolagenu II nebo kombinace kolagenu I a kolagenu III (např. 95 % kolagenu typu I a 5 % kolagenu typu III). Kombinace první a druhé vrstvy 16 a 22 zvyšuje tloušťku membrány 14', aby se s ní snadno zacházelo a zlepšilo se hojení. Tloušťka membrány se může různit v závislosti na jejím použití, ale typicky bude v rozmezí 0,5 až 5 mm, se zvýhodněným rozmezím 2 až 5 mm a nejvýhodnější je tloušťka 3 mm.

První vrstvu 16 v provedeních vynálezu znázorněných na obrázcích 2 a 3 lze vyrobit různými způsoby, které zahrnují, ale nejsou omezeny na kroky způsobu popsaného v US patentu č. 5 837 278, vysušením na vzduchu a vzduchovým sušením kašovité směsi (transparentní membrána podobná filmu), vysušením na vzduchu a sušením kašovité směsi za sníženého tlaku (transparentní membrána podobná filmu) nebo použitím stlačených pěn. První vrstvu 16 lze vyrobit z kolagenu I, II, III nebo IV nebo kombinacemi těchto kolagenových typů.

Druhá, houbovitá vrstva 22 v provedení vynálezu znázorněném na obr. 3 je s výhodou lyofilizovaná kolagenová kašovitá směs. Druhou vrstvu 22 lze vyrobit z kolagenu I, II, III, IV nebo VII nebo kombinacemi těchto kolagenových typů.

Druhá vrstva se s výhodou vyrobí z kolagenu I, kolagenu II nebo směsi kolagenu I a kolagenu III.

Druhou kolagenovou vrstvu 22 lze vytvořit z hovězího nebo vepřového materiálu a s výhodou se vytvoří z vepřového materiálu.

V provedení vynálezu znázorněném na obr. 3 mohou být první a druhá membránová vrstva 16 a 22 navzájem spojeny nebo kombinovány jakýmkoliv vhodným způsobem. Příklady tří vhodných způsobů kombinace zahrnují připevnění první membránové vrstvy k druhé mebránové vrstvě fibrinovým lepidlem, připevnění první membránové vrstvy k druhé mebránové vrstvě pomocí kolagenové kaše nebo překrytím první membránové vrstvy kolagenovou kaší požadovaného kolagenového typu pro druhou membránovou vrstvu a poté lyofilizaci této kombinace.

Je-li to požadováno, lze na membránu nanést růstové faktory jako EGF (epidermální růstový faktor), IGF-1 (růstový faktor podobný inzulínu), β-FGF (fibroblastový růstový faktor), PDGF (růstový faktor z destiček), TGF-β (transformující růstový faktor), které podporují regeneraci sliznice a/nebo je lze přidat na povrch membrány umístěné na slizníci.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava krycího proužku

A) První membránová vrstva se vyrobí podle postupu popsaného ve WO 93/11723 (příprava přečištěného kolagenu typu I, vepřová kůže), zde zahrnutého v odkazech. Finální promytá vlákna se nelyofilizují, ale materiál se za sníženého tlaku zbaví vzduchu a nalije na šablonu a vysuší laminámím prouděním za laboratorní teploty.

B) Drubá membránová vrstva se vyrobí podle postupu popsaného ve WO 93/11723 (příprava přečištěného kolagenu typu I, vepřová šlacha). Finální promytá vlákna se nelyofilizují. Vlákna se opět okyselí kyselinou chlorovodíkovou na pH 2,9 až 3,2 a tato kašovitá směs má obsah sušiny 1,2 až 1,8 %. Tato kašovitá směs se lyofilizuje do houbovité konzistence.

C) První a druhá membránová vrstva se spojí překrytím jedné strany první membránové vrstvy kašovitou směsí o pH 2,9 až 3,2, která je popsána výše. Kašovitá směs se rozetře a vrstvy se lyofilizují.

···· ·· ···· ·· 4« • 4 4 4 4 4 «

444 4 4 4 4 4

4 »4 4444

Příklad 2

Příprava krycího proužku

A) První membránová vrstva se vyrobí podle postupu popsaného v US patentu č. 5 837 278.

B) Druhá membránová vrstva se vyrobí podle postupu popsaného ve WO 99/19005, zahrnutého zde v odkazech, a určeného k přípravě kašovité směsi kolagenu typu II. Konkrétně je to příprava zmražené chrupavky z čerstvě zabitých prasat k promývacímu kroku studenou vodou, který je dostatečně dlouhý, aby hodnota pH u promývání byla 3 až 3,5. Tento materiál se poté pětkrát homogenizuje a zředí vodou za zisku homogenní hmoty s obsahem sušiny 0,5 až 2,0 %.

C) První a druhá membránová vrstva se spojí nalitím kašovité směsi z předešlého kroku na první vrstvu. Po 30 minutách se spojený produkt lyofilizuje.

Příklad 3

Příprava krycího proužku

B) Druhá membránová vrstva se vyrobí působením roztoku IM hydroxidu sodného po 4 hodiny při 20 °C na prasečí kůži, která je zbavena tuku a poté působením roztoku IM kyseliny chlorovodíkové po 2 hodiny při 20 °C a homogenizací, jak je popsáno v příkladu 2.

·«·· • ·· ··· • · · ·· ····

J?

Ό

Příklad 4

Příprava krycího proužku

A) První membránová vrstva se vyrobí vysušením kašovité směsi získané v příkladu 3, a to prostřednictvím odstranění vody acetonem, přičemž acetonem nasáklý produkt se stlačí mezi dvěma skleněnými tabulkami a aceton se odstraní působením sníženého tlaku menšího než 100 Pa (1 mBar) při 35 °C po dobu 48 hodin.

B) Druhá membránová vrstva se vyrobí smísením ekvivalentních množství kašovitých směsí, které jsou výsledkem druhých kroků v příkladech 2 a 3 a lyofilizací směsi do houbovité konzistence.

C) První a druhá membránová vrstva se spojí lepením fibrinovým lepidlem.

Příklad 5

Testování

Zkoumaný membránový materiál byl připraven z prasečího kolagenu typu I a typu III, vyrobeného do dvou vrstev. Spodní nebo vnitřní (druhá) vrstva kolagenové membrány má zdrsněný povrch, který se umístí na chirurgicky připravené místo hostitele, aby se urychlilo utvoření krevní zátky a podpořila neoangiogeneze. Vnější (první) vrstva dvojvrstvé kolagenové membrány má hladký povrch s odpovídajícími elastickými vlastnostmi, aby se umožnilo přišití k okrajům sliznice u hostitele a aby se ochránily štěpové (krycí proužek) materiály před poraněním v ústech během biologického odbourávání a procesu hojení. Použitými místy byly všechny čtyři ústní slizniční kvadranty dospělých paviánů Papio anubis. Do hloubky podslizničního vaziva Špičáku a třenového zubu v ústní předsíni bylo vyříznuto eliptické poranění o rozměrech 3 cm x 2 cm. Tento model poskytl dvanáct vzorků pro vyhodnocení stavu vyříznutých míst v ústní předsíni.

• · titititi titi ti • titi ti ti ti ti titi ti ti titi ti • ti ti • ti ti • ti ti • ti titititi

Dále byla plocha přilehlé sliznice horní čelisti bez zubů využita k určení toho, jak by byl tento materiál účinný, kdyby se užil jako základ pro obnovení přilehlé slizniční membrány na plochách alveolámího hřbetu bez zubů. U tří zvířat byla bilaterálně vyříznuta plocha 1,5 cm x 3 cm přes hranu hřbetu táhnoucího se z lícního povrchu a hranu hřbetu 1 cm přes povrch patra.

Membránový materiál byl umístěn a upevněn k okrajům slizničního povrchu hostitele, a to pomocí jednotlivých stehů jednovláknovým nylonem 4-0. (Celkový počet stehů pro každou umístěnou kolagenovou membránu se různil od 10 do 16.) Zvířata se pooperativně překryla antibiotiky po čtyři pooperaČní dny, přičemž toto překrytí antibiotiky sestávalo z penicillinu, 150 000 jednotek prokainu a 150 000 jednotek Bicillinu, podaných intramuskulárně. Zvířata měla pravidelnou stravu a byl jim povolen volný pohyb ve velkých klecích s výběhy.

Biopsie vestibulámích chirurgických míst byly provedeny na konci tří týdnů a šesti týdnů. Po třech týdnech byla provedena biopsie na jedné straně (2 kvadranty) u každého zvířete v rozsahu od vnějšího přirozeného zbylého slizničního povrchu u hostitele přes povrch membránového materiálu na opačném spodním okraji štěpu u hostitele. Povrchy vzorků byly vhodně označeny stehy pro orientaci při histologickém vyšetření. Plocha pro biopsii byla stažena jednotlivými stehy a ponechána vyhojit. Dva kvadranty každého zvířete byly ponechány šest týdnů, po kterých byla celá plocha vyříznuta a povrch sliznice podebrán a dán k sobě, aby se rána bezprostředně zatáhla.

Podobně byly provedeny biopsie okolní slizniční plochy, jedna strana po třech týdnech a jedna strana každého zvířete po šesti týdnech pro celkem tri vzorky pro každou periodu.

Stehy byly ve všech případech odstraněny ve čtrnáctém pooperačním dni. Klinický pooperační průběh u zvířat byl bez komplikací. Nebyl získán klinický důkaz zánětu nebo infekce a odlupování membránového materiálu. Membrána ·»·♦

44

4 4 4 » 4 fa

4 4 ·

4 ♦

4 4

4444 zůstala na místě a okraje vykazovaly postupnou reepitelizaci z vnějších povrchů sliznice hostitele. Plochy reziduálního membránového materiálu byly klinicky vidět od druhého přes třetí pooperační týden. Po šesti týdnech bylo celé operované místo reepitelizované a sliznice vypadala normálně.

Biopsie na konci třech týdnů vykazovaly reepitelizaci na okrajích, s normální tvorbou kolíčků sítě. Byly vidět odbourávající se plochy kolagenu s epitelem migrujícím přes povrch membrány. Ve střední části membrány o rozměrech asi 0,5 cm x 0,3 cm (z původní velikosti 3 cm x 2 cm) nebyla reepitelizace.

U vzorků po šesti týdnech se přes překrytou plochu vytvořil vynikající povrch sliznice, s nepřehlédnutelnou podslizniční neoangiogenezí a po úplném vyříznutí a biopsii překryté plochy i očividnou normální tvorbou stratifíkovaného šupinovitého epitelu. Bylo prokázáno úplné přijetí membránového materiálu. Pod povrchem epitelu byly vidět velmi malé plochy zbytkového kolagenu. Použitá barviva byla Masonův trichrom a hematoxylin a eosin.

U vzorků po šesti týdnech byly provedeny mnohočetné řezy, aby bylo umožněno úplné zhodnocení celých překrytých ploch, aby při histologickém vyšetřovacím způsobu nezůstal žádný reziduální membránový materiál jako nedetegovaný.

Když se krycí proužek umístil na zadní alveolámí hřbet a povrch patra horní čelisti, bylo vidět nahrazení membránového materiálu, které bylo podobné jako u testového místa v hloubce ústní předsíně. Po třech týdnech byl vidět reziduální membránový materiál, který byl ve střední části překrytého místa. Na vnějších okrajích překrytého místa byly vidět fíbroblasty a migrující epitel. U vzorků po šesti týdnech byla u všech vzorků vidět nově přichycená sliznice na povrchu patra, na alveolámí hraně hřbetu a lícní straně alveolámího hřbetu. To indikovalo úplné přijetí materiálu a vynikající opětovné vytvoření okolní sliznice.

• 0 «* ···· • ·«» 0

9 9

9 49

4 · « 9 wHistologický vzhled prokázal, že tento materiál lze použít na zadní čelistní ploše k obnovení okolní sliznice ve spojení s kořenovou formou implantátů, i když tato plocha působnosti nebyla v tomto testu konkrétně studována.

Vybraná místa pro vestibulámí štěpování u testovaných zvířat byla slizniční vestibulámí plocha Špičáku a třenového zubu v horní a dolní čelisti. Tato plocha je u paviána Papio anubis zvláště náchylná k poranění během krmení a žvýkání a sloužila jako testovací místo, které je vystaveno zátěži. Studovaný materiál byl tak umístěn do polohy, která měla vysokou pravděpodobnost poškození s následnou infekcí a uvolněním krycího proužku. Toto se nevyskytlo na žádném z testovaných míst a materiály zůstaly na místě a byly biologicky odbourány velmi jemným způsobem, a to činností buněk hostitele.

Na základě těchto testů se dospělo k závěru, že použití kolagenové membrány jako krycího proužku podle předloženého vynálezu je vynikající náhradou za autogenní štěpy měkké tkáně. Některé typy aloplastických nebo alogenních povrchových překryvů mají tendenci způsobovat stahování rány a vznik jizvy. Umělé potahy povrchu kůže mají také tendenci se buď biologicky odbourávat a předčasně se odlupovat nebo zůstat po delší dobu a prodloužit zánětlivou odezvu. S předloženým vynálezem nebylo zaznamenáno ani zjizvení, ani prodloužená zánětlivá odezva. Ani nebyla zaznamenána podslizniční fíbróza, která se někdy objeví při použití chirurgických obvazů.

Z uvedeného tak vyplývá, že tento materiál by mohl být využit jako náhrada prostých slizničních štěpů nebo dermoepidermálních štěpů pro udržení vestibulámí tloušťky sliznice a obnově okolní sliznice v ploše kořenové formy implantátů. Některé zřejmé výhody tohoto způsobu jsou v tom, že se membrána bude a) biologicky odbourávat bez nežádoucí zánětlivé odezvy, b) že membrána podpoří regeneraci plochy normální sliznici a c) že membrána je technicky vhodná pro chirurgické zákroky a snáší šití.

to* totototo toto « «toto to • toto toto toto • · 9 • to totototo tt

Protože k popsaným provedením vynálezu lze udělat mnohé detailní modifikace, obměny a změny, předpokládá se, že veškerý obsah předchozího popisu a znázornění v doprovodných obrázcích se vykládá ve smyslu ilustrativním a ne ve smyslu tento vynález omezujícím.

Claims

NÁROKY

4J

Ύζ

PATENTOVÉ

1. Přípravek regeneruj ící sliznici pro podporu obnovy sliznice, vyznačující se t i m, že obsahuje membránu obsahující přečištěný kolagenový materiál pocházející z přirozené tkáně obsahující kolagen.
2. Přípravek regeneruj ící sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 1, vyznačující se tím, že membrána obsahuje bariérové vrstvy zahrnující vnější hladkou bariérovou plochu, a dále zahrnuje vláknitou plochu protilehlou k uvedené hladké bariérové ploše.
3. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 1, vyznačující se t i m, že bariérová vrstva je převážně z kolagenu I, kolagenu III nebo jejich směsi.
4. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 3, vyznačující se t i m, že membrána obsahuje vícevrstvý pásek kolagenového membránového materiálu, který obsahuje matrixovou vrstvu kolagenového materiálu přilnutého k uvedené vláknité ploše.
5. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 4, vyznačující se t i m, že matrixová vrstva obsahuje kolagen I, kolagen II, kolagen III, kolagen IV, kolagen VII nebo jejich kombinace.
6. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 1, vyznačující se tím, že membrána má tloušťku 0,5 až 5 mm.

• ·«··
7. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 5, vyznačující se t i m, že matrixová vrstva obsahuje převážně kolagen I.
8. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 5, vyznačující se tím, že matrixová vrstva obsahuje převážně kolagen II.
9. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 1, vyznačující se t i m, že membrána je nosičem alespoň jednoho růstového faktoru regeneruj ícího sliznici.
10. Přípravek regenerující sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 9, vyznačující se t i m, že alespoň jeden růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající z epidermálního růstového faktoru - EGF, růstového faktoru podobnému inzulínu - IGF-1, fibroblastového růstového faktoru - β-FGF, růstového faktoru z destiček - PDGF, transformujícího růstového faktoru - TGF-β nebo jejich směsi.
11. Použití přípravku regeneruj ícího sliznici pro podporu regenerace sliznice, přičemž uvedený přípravek obsahuje membránu obsahující přečištěný kolagenový materiál pocházející z přirozené tkáně obsahující kolagen.
12. Použití přípravku regeneruj ícího sliznici pro podporu regenerace sliznice podle nároku 11, přičemž membrána obsahuje bariérové vrstvy zahrnující vnější hladkou bariérovou plochu, a dále zahrnuje vláknitou plochu protilehlou k uvedené hladké bariérové ploše.

//4

Ť4 ► · ··*·
13. Použití přípravku regenerují čího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 11, přičemž bariérová vrstva je převážně z kolagenu I, kolagenu III nebo jejich směsi.
14. Použití přípravku regenerujícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 13, přičemž membrána obsahuje vícevrstvý pásek kolagenového membránového materiálu, který obsahuje matrixovou vrstvu kolagenového materiálu přilnutého k uvedené vláknité ploše.
15. Použití přípravku regeneruj ícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 14, přičemž matrixová vrstva obsahuje kolagen I, kolagen II, kolagen III, kolagen IV, kolagen VII nebo jejich kombinace.
16. Použití přípravku regeneruj ícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 11, přičemž membrána má tloušťku 0,5 až 5 mm.
17. Použití přípravku regeneruj ícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 5, přičemž matrixová vrstva obsahuje převážně kolagen I.
18. Použití přípravku regenerujícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 15, přičemž matrixová vrstva obsahuje převážně kolagen II.
19. Použití přípravku regenerujícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 11, přičemž membrána je nosičem alespoň jednoho růstového faktoru regenerujícího sliznici.

·«·· ··· ··· ♦· ··· »· ·»

Ad η
20. Použití přípravku regeneruj ícího sliznici pro podporu obnovy sliznice podle nároku 19, přičemž alespoň jeden růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající z epidermálního růstového faktoru - EGF, růstového faktoru podobnému inzulínu IGF-1, fibroblastového růstového faktoru - β-FGF, růstového faktoru z destiček PDGF, transformujícího růstového faktoru - TGF-β nebo jejich směsi.
21. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice.
22. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, podle nároku 21, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž přípravek obsahuje membránu obsahující bariérové vrstvy zahrnující vnější hladkou bariérovou plochu, a dále zahrnuje vláknitou plochu protilehlou k uvedené hladké bariérové ploše.
23. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, podle nároku 21, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž bariérová vrstva je převážně z kolagenu I, kolagenu III nebo jejich směsi.
24. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, podle nároku 23, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice přičemž membrána obsahuje vícevrstvý pásek kolagenového membránového materiálu, který obsahuje matrixovou vrstvu kolagenového materiálu přilnutého k uvedené vláknité ploše.

• to » ·· ··· ·· • « · · • · · ··« ··

4Ί·· ··« ·
25. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž přičemž matrixová vrstva obsahuje kolagen I, kolagen II, kolagen III, kolagen IV, kolagen VII nebo jejich kombinace.
26. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž membrána má tloušťku 0,5 až 5 mm.
27. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž matrixová vrstva obsahuje převážně kolagen I.
28. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž matrixová vrstva obsahuje převážně kolagen II.
29. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž membrána je nosičem alespoň jednoho růstového faktoru regeneruj ícího sliznici.

• ··♦· »« • · ♦ · * · • ··· · · • 9 9 9 9 • · · ·

999 99 · *« *·«· • · 9

9 9 9

9 9 9 • * 9 9

9 9 9 9 ¥Ť~
30. Použití přečištěného kolagenového materiálu pocházejícího z přirozené tkáně, která obsahuje kolagen, pro výrobu přípravku regeneruj ícího sliznici, který podporuje regeneraci sliznice, přičemž alespoň jeden růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající z epidermálního růstového faktoru - EGF, růstového faktoru podobnému inzulínu - IGF-1, fibroblastového růstového faktoru - β-FGF, růstového faktoru z destiček - PDGF, transformujícího růstového faktoru - TGF-β nebo jejich směsi.