CZ10671U1 - Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu - Google Patents
Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ10671U1 CZ10671U1 CZ200011377U CZ200011377U CZ10671U1 CZ 10671 U1 CZ10671 U1 CZ 10671U1 CZ 200011377 U CZ200011377 U CZ 200011377U CZ 200011377 U CZ200011377 U CZ 200011377U CZ 10671 U1 CZ10671 U1 CZ 10671U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- human insulin
- peptide
- analogues
- insulin sequence
- sequence analogues
- Prior art date
Links
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims description 6
- -1 phenylacetyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 4
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005515 capillary zone electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 102100027324 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Human genes 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101001009252 Homo sapiens 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N (2s,3r)-2-azaniumyl-3-phenylmethoxybutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CC1=CC=CC=C1 VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(=O)CCl)CC1=CC=CC=C1 MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylformamide Chemical compound ClCCl.CN(C)C=O MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- LLYKPZOWCPVRPD-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine;n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=CC=N1 LLYKPZOWCPVRPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical group [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oblast techniky
Technické řešení se týká analogů sekvence B23 - B30 lidského insulinu.
Dosavadní stav techniky
Sekvence B23 - B30 lidského insulinu je předmětem permanentního zájmu při semisynthesách analogů lidského insulinu. Příprava těchto analogů je založena na enzymově katalysované kondensaci desoktapeptidinsulinu se syntheticky připraveným analogem oktapeptidu Β23- B30. V této oblasti jsme vyvíjeli vynálezeckou aktivitu, v rámci, které jsme připravili jak analogy oktapeptidu, tak řadu analogů insulinu (CZ patenty č. 280691, 280692, 280 693, 280790, 280694, 280695, 280690, užitné vzory CZ 6381, CZ 9735). Jedním ze zadání je i příprava analogů insulinu s detegovatelnou značkou v definované posici peptidového řetězce insulinu.
Pro přípravu vhodného prekursoru peptidu jsme využili možnosti rozdílné protekce aminoskupiny v posici B23 (glycinu) a v postranním řetězci basické aminokyseliny v posici 829. Aminokyseliny v postranním řetězci byly chráněny v případě lysinu 2-C1-Z, kde Z je benzyloxykarbonyl, v případě omithinu skupinou Bzl. Aminoskupina glycinu byla substituována enzymově odštěpitelnou fenylacetylovou skupinou. Chrániči skupiny v postranním řetězci se uvolní při odštěpení peptidového řetězce z nosiče kyselinou fluorovodíkovou.
Podstata technického řešení
Předmětem technického řešení jsou analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu obecného vzorce:
X-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Y-Thr, kde X je Pac (fenylacetylová skupina), Y je zbytek L-lysinu (Látka I) nebo X je Pac, Y je zbytek L-omithinu (Látka II).
Peptidy se připraví syntheticky na pevné fázi, ze které se po ukončení výstavby uvolní spolu s odštěpením chránící skupiny v postranním řetězci basické aminokyseliny v posici B29.
| Příklady provedení | |
| Vysvětlení zkratek: | |
| Boc | - t-Butoxykarbonyl |
| DIEA | - Diisopropylethylamin |
| Bzl | - benzyl |
| Z | - benzyloxykarbonyl |
| DCM | - Dichlormetan |
| HOBt ester | - Hydroxybenztriazolový ester |
| DCC | - Dicyklohexylkarbodiimid |
| DMF | - Dimethylformamid |
| DMAP | - Dimethylaminopyridin |
| TFA | - Kyselina trifluoroctová |
| RPHPCL | - Vysokoúčinná kapalinová chromatografie na reversní fázi |
| TPCK | - Tosylfenylalaninchlorketon |
| FAB | - Fast Atom Bombardment. |
- 1 CZ 10671 Ul
Příklad 1
Příprava a isolace látky I
Peptid byl synthetisován methodou v pevné fázi dle Merrifielda. Jako semipermanentní chránění byla použita tert-butyloxykarbonylová skupina (Boc). Postranní řetězce byly chráněny takto: Lys(2-Cl-Z), Thr(Bzl), Tyr(2-Br-Z). Synthesa byla prováděna v 0,3 mmol měřítku.
Byl použit tento protokol synthesy:
1) debocylace působením 80 % TFA, 5 a 25 min.
2) promytí DCM, 1 min.
3) promytí DMF, 2x1 min.
4) neutralisace 10 % DIEA v DMP, 2x2 min.
5) promytí DMF, 2 x 1 min.
6) kondensace s trojnásobným molámím přebytkem HOBt esteru Boc chráněné aminokyseliny, 1 h. Ester byl připraven z Boc-aminokyseliny a HOBt působením DCC ve směsi DCM-DMF (9 : 1) 30 min, při 0 °C. Od vzniklého esteru byla odfiltrována dicyklohexylmoěovina, a filtrát zahuštěn za laboratorní teploty do koncentrace cca 0,1 M. Průběh reakce byl monitorován kvalitativním Kaiserovým testem. Pokud byl negativní, následoval další reakční krok. Pokud byl positivní, byl přidán DMAP, popř. byla pryskyřice promyta DCM a kondensace opakována s nově připraveným aktivním esterem.
7) promytí DMF, 3x1 min.
8) promytí DCM, 2 x 1 min.
Promývací objem byl ve všech případech 50 ml. Po dokončení synthesy byla odštěpena Boc chránící skupina z Gly, peptid-pryskyřice solvatována DCM a v ledové lázni, za míchání přikapáno vypočtené množství fenylacetylchloridu (dvojnásobný přebytek). Reakce byla kontrolována Kaiserovým testem. Po skončení reakce by peptid na pryskyřici promyt opakovaně DCM, methanolem a diethyletherem a vysušen do konstantní váhy.
Odštěpení peptidu z nosiče spolu s odštěpením chránících skupin bylo provedeno kapalným fluorovodíkem ve směsi HF: anisol (9: 1) při 0 °C, anisol byl extrahován studeným diethyletherem (4 x 50 ml). Peptid byl rozpuštěn v 20% kyselině octové (5 x 50 ml), pryskyřice odfiltrována a roztok peptidu lyofilisován.
Preparativní RP HPCL byla provedena na přístroji fy Knauer, na koloně (250 x 16 mm) plněné Separonem SGxC18 (10 pm). Peptid byl na kolonu nastříknut v množství 50 mg a eluován směsí methanol-voda obsahující 0,1 % TFA s kontinuálně stoupající koncentrací methanolu. Průtok byl 8,5 ml/min.
Příklad 2
Příprava a isolace látky II
Bylo postupováno stejně jako při přípravě látky I s tím rozdílem, že k výstavbě peptidu byl použit Om (Z).
Příklad 3
Odštěpení chrániči skupiny Pac zaminoskupiny postranního řetězce basické aminokyseliny v posici B29
Chráněný peptid (2 mg) byl rozpuštěn v 50 pl DMF, roztok byl zředěn Tris-HCI pufrem (0,05 M, pH 7,5) a cirkulován kolonou se zakotvenou peniciliamidohydrolasou (AO 216583). Produkt, peptid s odstraněnou chránící skupinou byl lyofilisován a analysován HPCL.
-2CZ 10671 Ul
Příklad 4
Kapilární zonová elektroforesa (CZE)
Analysa čistoty připravených peptidů byla prováděna metodou CZE na přístroji vyvinutém laboratoří elektroforetických metod ÚOCHB AV ČR se zdrojem vysokého napětí 0-15 kV.
Separačním prostorem byla křemenná kapilára s vnějším polyímidovým povlakem o vnitřním průměru 0,056 mm, vnějším průměrem 0,200 mm, celkové délce 315 mm a efektivní délce (od startu k detektoru) 200 mm. Peptidy byly analysovány v 0,5 M kyseliny octové, nebo v roztoku o složení 0,04 M Tris a 0,04 M Tricinu pH 8,1. Vzorek byl nanášen manuálně a měření bylo prováděno při laboratorní teplotě. Separace probíhala v režimu konstantního napětí 10,0 kV io a proud dosahoval hodnot 9,5 -10,8 μΑ. Detekce byla prováděna spektrometricky při 206 nm.
Příklad 5
Hmotová spektra jednotlivých peptidů. Měření bylo prováděno metodou FAB, která spočívá v ionisaci testovaných vzorků pomocí urychlených atomů xenonu. Vzorek byl umístěn na glycerinovou matrici. Snímání spekter bylo prováděno vícekanálovou analysou při nízké rozlišovací schopnosti. Byl použit třísektorový hmotový spektrometr YAB-EQ s geometrií BEQQ vyrobený firmou VG Analytical Manchester. Iontový zdroj pracoval při urychlovacím napětí 8 kV.
Příklad 6
Aminokyselinové složení peptidů. Peptidy byly hydrolysovány v 6 M HCI při teplotě 110 °C po dobu 20 hodin a jednotlivé aminokyseliny separovány na přístroji D-500 (Durrum corp.) Zastoupení prolinu nebylo vyhodnocováno.
Průmyslová využitelnost
Látky dle technického řešení lze využít v základním výzkumu, ve farmaceutickém průmyslu a ve zdravotnictví.
Claims (1)
- 25 NÁROKY NA OCHRANU1. Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu obecného vzorce:X-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Y-Thr kde X je fenylacetylová skupina, Y je zbytek L-lysinu nebo X je fenylacetylová skupina, Y je zbytek L - omithinu. 35
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ200011377U CZ10671U1 (cs) | 2000-11-16 | 2000-11-16 | Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ200011377U CZ10671U1 (cs) | 2000-11-16 | 2000-11-16 | Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ10671U1 true CZ10671U1 (cs) | 2000-12-15 |
Family
ID=5474729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ200011377U CZ10671U1 (cs) | 2000-11-16 | 2000-11-16 | Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ10671U1 (cs) |
-
2000
- 2000-11-16 CZ CZ200011377U patent/CZ10671U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gray et al. | Conotoxin GI: disulfide bridges, synthesis, and preparation of iodinated derivatives | |
| Tam et al. | Synthesis of large cyclic cystine-knot peptide by orthogonal coupling strategy using unprotected peptide precursor | |
| Gerber et al. | Partial primary structure of bacteriorhodopsin: sequencing methods for membrane proteins. | |
| Hudson et al. | Methionine enkephalin and isosteric analogues I. Synthesis on a phenolic resin support | |
| Felix et al. | Applications of BOP reagent in solid phase synthesis: II. Solid phase side‐chain to side‐chain cyclizations using BOP reagent | |
| Talbo et al. | Determination of the covalent structure of an N‐and C‐terminally blocked glycoprotein from endocuticle of Locusta migratoria: Combined use of plasma desorption mass spectrometry and Edman degradation to study post‐translationally modified proteins | |
| EP0082568B1 (en) | Retro-inverso analogues of c-terminal penta and hexapeptides of substance p. | |
| Aimoto et al. | Development of a facile method for polypeptide synthesis. Synthesis of bovine pancreatic trypsin inhibitor (BPTI). | |
| Marbach et al. | Synthesis of [2‐p‐Fluorophenylalanine] oxytocin and its Desamino Analogue Using the S‐Acetamidomethyl Protecting Group | |
| XUE et al. | Synthesis of S‐alkyl and C‐terminal analogs of the Saccharomyces cerevisiae a‐factor: Influence of temperature on the stability of Fmoc and OFm groups toward HF | |
| CZ10671U1 (cs) | Analogy sekvence B23 - B30 lidského insulinu | |
| Niall et al. | Protected Edman degradation: A new approach to microsequence analysis of proteins | |
| TIAN et al. | Synthesis of phosphotyrosine‐containing peptides by the solid‐phase method: A re‐examination of the use of Boc‐Tyr (PO3Bzl2)‐OH | |
| Skribanek et al. | Mass spectrometric and chemical stability of the Asp‐Pro bond in herpes simplex virus epitope peptides compared with X‐Pro bonds of related sequences | |
| Schmitt et al. | The α‐helical conformation of the undecapeptide boc‐l‐Ala‐[Aib‐Ala] 2‐Glu (OBzl)‐Ala‐[Aib‐Ala] 2‐OMe: Synthesis, X‐Ray crystal structure, and conformation in solution | |
| Hargrave | Synthesis of multiphosphorylated peptide from a C-terminal bovine rhodopsin sequence. | |
| Vieira et al. | Peptide structure modifications: effect of radical species generated by controlled gamma ray irradiation approach | |
| Caporale et al. | Characterization of synthetic parathyroid hormone analogs and of synthetic by-products | |
| Žertová et al. | Strong uterotonic inhibitors–analogs of 1-deamino-8-D-homoarginine-vasopressin with p-substituted phenylalanine in position 2 | |
| CZ292131B6 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
| Hashimoto et al. | Neurokinin B analogs substituted with glycine | |
| CZ10670U1 (cs) | Zkrácené deriváty lidského insulinu | |
| CZ9803U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
| TAMAMURA et al. | Acceleration of the Nα-deprotection rate by the addition of m-cresol to diluted methanesulfonic acid and its application to the Z (Ome)-based solid-phase syntheses of human pancreastatin-29 and magainin 1 | |
| Hlaváček et al. | Preparation of tritiated oostatic peptides for study of radioactivity incorporation in flesh fly Neobellieria bullata |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20041116 |