CS277676B6 - Vakcina k prevenci, profylaxi a terapii infekčních onemocnění kostí - Google Patents

Abstract

Vakcína, určená k prevenci a profylaxi infekčních komplikací ortopedických operací, především při zavedení endoprotézy kyčelního kloubu a k léčbě vleklých zánětů kostní dřeně, obsahuje 3 kmeny Staphylococcus aureus s 3 kmeny Propionibacterium acnes v hmot. pomě ­ ru 1:1, přičemž podíl obsahu jednotlivých komponent se liší nejvýše o 10 %.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká bakteriální vakciny, obsahující kmeny .

Staphylococcus aureus a Propionibacterium acnes. Vakcina je určena svou specifickou i nespecifickou imunostimulační aktivitou k prevenci a profylaxi infekčních komplikací kostních a kloubních operací, především zavedení endoprotéz kyčelního kloubu, a k léčbě vleklých zánětů kostní dřeně.

Dosavadní stav techniky

U ortopedických operací sterilních onemocnění kostí se profylakticky používají antibiotika. Jsou ekonomicky náročná. Jejich účinky jsou krátkodobé, často potlačují imunitní odpověď organismu a vyvolávají vedlejší nežádoucí změny.

V léčbě infekčních onemocnění kostí se většinou kombinují antibiotika s chirurgickým výkonem. Tento postup, často i opakovaně prováděný, není vždy efektivní a potom je nutné přistoupit k amputaci končetiny. U postižených dochází ke změnám společenského postavení (invalidní důchod, nové rodinné a sociální poměry, psychická alterace a podobně), které ve svém důsledku vedou k dalším ekonomickým ztrátám.

Podstata vynálezu

Vakcina podle vynálezu upravuje specifickou reaktivitu na Staphylococcus aureus představující nej častější etiologické agens zánětů kostní dřeně. Kmeny Propionibacterium acnes působí jako adjuvans, stimulují i nespecifickou složku imunity především v oblasti monocytomakrofágového systému.

Vakcina obsahuje 3 kmeny druhu Propionibacterium acnes (PA 3, PA 17, PA 530) v neomezeném hmot, poměru a 3 kmeny druhu Staphylococcus aureus (SAX 44, SAX 52, SAX 63) v neomezeném hmot, poměru. Druhové směsi jsou zastoupeny v hmot, poměru 1:1.

Použití vakciny k prevenci a profylaxi infekčních komplikací ortopedických operací je ekonomicky méně náročné, její příznivý efekt je dlouhodobý a bez nežádoucích vedlejších účinků.

Vakcina při terapii vleklých zánětů kostní dřeně účinně doplňuje dosavadní způsob léčby a výrazně snižuje počet radikálních amputací. Podávání antibiotik u vakcinovaných pacientů je omezeno na krytí nezbytných chirurgických výkonů (nejčastěji odstranění sekvestrů).

Vakcina podle vynálezu se dá použít ve zdravotnictví.

V humánní medicíně je určena k prevenci a profylaxi infekčních komplikací ortopedických operací a k léčbě vleklých zánětů kostní dřeně.

Vakcina se s výhodou aplikuje perorálně například ve formě enterosolventních dražé nebo kapslí, popřípadě kapek. Aplikační formy se připravují tak, aby jedna denní dávka obsahovala 5 mg bakteriální směsi nebo poloviční množství v aplikačních formách pro děti.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Bakteriální kmeny Staphylococcus aureus č. SAX 44, SAX 52, SAX 63 byly kultivovány celofánovou technikou na krevním agaru při 37 °C po dobu 24 h, ve vzdušné atmosféře obsahující 10 % CO₂· Baktriání těla byla po pomnožení spláchnuta destilovanou vodou a dezintegrována opakovaným hlubokým zmrazováním. Získaný lyzát byl inaktivován zahřátím na teplotu 60 °C po dobu 1 h, nejméně 3x v intervalu 24 h. Po kontrole sterility byl veškerý materiál lyofilizován.

Bakteriální kmeny Propionibacterium acnes č. PA 3, PA 17, PA 530 byly kultivovány celofánovou technikou na VL agaru s 10 % beraní krve po dobu 48 h při 37 °C, v dusíkové atmosféře s 10 % CO₂. Po pomnožení byla bakteriální těla spláchnuta a extrahována destilovanou vodou 24 h při 4 °C. Získaný bakteriální lyzát byl inaktivován zahřátím na teplotu 60 °C po dobu 1 h, opakovaně nejméně 3x v intervalu 24 h. Po kontrole sterility byl veškerý materiál lyofilizován.

Finální forma vakciny byla připravena:

I. 1. Smícháním sušin kmenů Staphylococcus aureus č. SAX 44, SAX 52, SAX 63 v hmot, poměru 1:1:1.

2. Smícháním sušin kmenů Propionibacterium acnes č. PA 3, PA 17, PA 530 v hmot, poměru 1:1:1.

II. Smícháním sušin 1. a 2. v hmot, poměru 1:1.

Příklad 2

Bakteriální kmeny Staphylococcus aureus č. SAX 44, SAX 52, SAX 63 byly kultivovány fermentorovou technikou v BHI při 37 °C po dobu 24 h. Po pomnožení byla bakteriální těla oddělena . od živného média promytím v destilované vodě centrifugací při 2 000 až 2 500 G. Izolovaná bakteriální těla byla dezintegrována hlubokým zmrazováním a inaktivována formolem (0,1 ml 4 % formolu nA 1 ml suspenze). Po kontrole sterility byl veškerý materiál lyofilizován.

Bakteriální kmeny Propionibacterium acnes č. PA 3, PA 17, PA 530 byly kultivovány fermentorovou technikou ve VL bujónu po dobu 48 h při 37 °C. Po pomnožení byla bakteriální těla oddělena od živného média opakovaným promytím v destilované vodě centrifugací při 2 000 až 2 500 G. Izolovaná bakteriální těla byla extrahovaná 24 h při 4 °C. Získaný lyzát byl inaktivován zahřátím na teplotu 60 °C po dobu 1 h, nejméně 3x v intervalu 24 h. Po kontrole sterility byl veškerý materiál lyofilizován. '

Finální forma vakciny byla připravena:

I. 1. Smícháním sušin kmenů staphylococcus aureus č. SAX 44, SAX 52, SAX 63 v hmot, poměru 1:1:1.

2. Smícháním sušin kmenů Propionibacterium acnes č. PA 3, PA 17, PA 530 v hmot, poměru 1:1:1.

II. Smícháním sušin 1. a 2. v hmot, poměru 1:1.

Farmakologické testy

Byla zkoumána nespecifická protekční účinnost vakciny u SPF myší při rozličných infekčních podnětech. Současně byl ověřován její vliv na retikuloendotelový systém. Jednorázová dávka 1,5 mg byla podávána intraperitoneálně skupinám po 20 myších.

Vakcinovaná zvířata byla v různých časových intervalech infikována intraperitoneálně a intravenózně. Získané výsledky prokázaly, že bylo dosaženo statisticky významné ochrany proti infekcím bakteriálními kmeny Pasteurella multocida, Klabsiella pneumoniae a kvasinkou Candida albicans.

U SPF myší, kterým byla podána vakcina, byla provedena histologická vyšetření sleziny a jater. Získané výsledky prokázaly silnou stimulaci retikuloendotelového systému.

U myší očkovaných vakcinou podle vynálezu byl zaznamenán zvýšený počet slezinných lymfocytů. Počet lymfocytů ve slezinách vakcinovaných myší se pohyboval v rozmezí 2,9 až 3,2 x 10⁹/l 1, průměrný počet lymfocytů u kontrolních nevakcinovaných myší byl 3,9 x 10⁷/l 1.

Dále byla zjišťována specifická účinnost vakciny na imunitní systém u morčat a králíků. Obě skupiny zvířat byly imunizovány vakcinou podanou intramuskulárně v denní dávce 4 mg, celkem lOx v desetidenních intervalech. Metodou ELISA byla v séru vakcinovaných zvířat potvrzena tvorba specifických protilátek proti teichoové kyselině Staphylococcus aureus.

Adjuvantní účinek vakciny byl ověřován také u morčat a králíků, skupiny zvířat byly imunizovány a/ usmrcenými kmeny druhu staphylococcus aureus, b/ usmrcenými kmeny druhu Staphylococcus aureus s inkompletním Freundovým adjuvans, c/ vakcinou podle vynálezu. Pouze imunizace vakcinou podle vynálezu vedla k signifikantnímu zvýšení hladiny specifických protilátek proti druhu Staphylococcus aureus.

Klinické testy

Preventivní a profylaktické podání vakciny u kostních a kloubních operací:

Počet pacientů 84

Antibiotika nemusela být podána, pacienti se zhojili bez infekčních komplikací

Léčebné podání vakciny u vleklých zánětů kostní dřeně:

Počet pacientů 121

Zhojení kostního i kožního postižení 71 %

Zhojení kostního postižení, přetrvávání kožních reziduí 13 %

V léčení (dosud nehodnoceno) 16 %

Claims (3)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Vakcina k prevenci, profylaxi a terapii infekčních onemocnění kostí, vyznačující se tím, že obsahuje 3 synergisticky působící kmeny Propionibacterium acnes v neomezeném hmot, poměru a 3 kmeny druhu Staphylococcus aureus v neomezeném hmot, poměru s tím, že druhové směsi jsou zastoupeny v hmot, poměru 1:1, přičemž podíl obsahu jednotlivých druhů se liší nejvýše o 10 % a celkové množství bakteriální sušiny v 1 léčebné dávce je 4,5 až 5,5 mg.

2. Vakcina podle bodu 1, vyznačující se tím, že obsahuje kmeny Propionibacterium acnes č. PA

3, PA 17, PA 530 a kmeny Staphylococcus aureus č. SAX 44, SAX 52, SAX 63.