CS277564B6 - Způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplenentární aktivitě - Google Patents
Způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplenentární aktivitě Download PDFInfo
- Publication number
- CS277564B6 CS277564B6 CS32388A CS32388A CS277564B6 CS 277564 B6 CS277564 B6 CS 277564B6 CS 32388 A CS32388 A CS 32388A CS 32388 A CS32388 A CS 32388A CS 277564 B6 CS277564 B6 CS 277564B6
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- solution
- preparation
- modified
- calcium phosphate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 51
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims abstract description 14
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims abstract description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 abstract description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 abstract description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 abstract description 3
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 abstract 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 abstract 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 4
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 1,4-dithiothreitol Chemical compound SCC(O)C(O)CS VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001432959 Chernes Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000941 anti-staphylcoccal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000009177 immunoglobulin therapy Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Způsob přípravy modifikovaného imunoglobulinu
o nízké antikomplementární aktivitě je založen
na principu nespecifické sorpce balastních
látek na fosforečnan vápenatý, redukci imunoglobulinu
dithio-DL-treitolem, jeho alkylaci
jodacetamidem a oddělení nízkomolekulámích
látek dialyzou nebo diafiltrací. Takto připravený
roztok modifikovaného imunoglobulinu je stabilizován
přidáním malťózy, glycinu, popřípadě
sérového albuminu. Roztok 5% modifikovaného
imunoglobulinu, pokud byly při jeho přípravě
zachovány podmínky pro apyrogenní práci, je
vhodný pro intravenózní aplikaci. Má nízkou
antikomplementární aktivitu, neobsahuje vysoce
agregované bílkovinné komplexy, schopné vyvolat
nežádoucí reakce, má biologický poločas
vylučování porovnatelný s nativním imunoglobulinem
a při jeho aplikaci je maximálně sníženo
riziko přenosu virových onemocnění.
Description
Vynález se týká způsobu výroby přípravku chemicky modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplementární aktivitě, který je vhodný pro intravenozní aplikaci, způsobem umožňujícím zvýšení kvality, zejména z hlediska dalšího snížení antikomplementární aktivity, obsahu vysokomolekulárních agregovaných komplexů bílkovin, nežádoucího účinku biologicky aktivních látek a rizika přenosu některých virových onemocnění.
V průběhu posledních dvou desetiletí se všeobecně projevuje stále vzrůstající snaha využívat imunoglobulinovou frakci krevní plazmy nejen jako intramuskulární preparát, ale také upravit ji tak, aby bylo možné ji bezpečně aplikovat intravenozně. Tento vývoj je charakterizován snahou o přípravu plně účinného intravenozního roztoku, který by nevyvolával nežádoucí anafylaktické reakce u příjemců a byl bezpečný z hlediska přenosu virových onemocnění. Úkol spočívá v přípravě roztoku imunoglobulinu, který vykazuje velmi nízkou antikomplementární aktivitu, obsahuje pouze minimální množství agregovaných bílkovinných komplexů a obsahuje co nejméně biologicky aktivních látek, jako jsou skupinové látky krve, prekalikreinová aktivita gonadotropní hormon a podobně. Zároveň musí být vyloučena možnost přenosu virových onemocnění. Postupem doby bylo v této oblasti získáno mnoho zkušeností a existuje řada publikací, zabývajících se jak způsoby přípravy intravenožních preparátů a zjišťování jejich kvality, tak klinickým ověřováním jejich účinnosti a příklady aplikace při různých onemocněních. Nejdéle známým způsobem přípravy je parciální proteolytické štěpení,například pepsinem /H.E.Schultze,G.Schwick: Dtsch.Med.Wschr. 87, 1643 (1962)/,/S.Barandun,P.Kistler,J.Jeunet,H.Istiker: Vox Sang. 7, 157 (1962)/, /S.Barandun: Biblthemat.No.17 (Kargel·,Basel 1964), Die Gamma-globulin - Therapie/, /1.Banda a kolektiv: čs. autorské osvědčení č. 239838 / nebo plasminem /J.T.Sqouris: Vox Sang. 13,71 (1967)/, /I.Biněva,L.Bazadžiev,B.Zacharia:Probl.Infect.Parazit.Dis. 12,84 (1985)/. Preparáty tohoto typu mají minimální antikomplementární aktivitu a neobsahují agregované pornylery /F.R.Seiler: Die gelben Hefte XXII (1),L (1982)/. Část odborníků pokládá takto připravený imunoglobulinový preparát prozatím za nejbezpečnější z hlediska možného výskytu reakcí u příjemce, naopak jiná skupina jej označuje za zastaralý, zejména z důvodů velmi nízkého biologického poločasu vylučování a možné přítomnosti vedlejších produktů enzymatického štěpení /F.Škvařil, B.Roth-Wicky,S.Barandum: Vox Sang. 38, 147 (1980)/, /J.Rómer, F.Škvařil: Vox Sang.42, 62 (1982)/, /B.M.Alving,J.S.Findayson (editors): Immunoglobulins, characteristics and uses of intravenous preparations. US Dep. of Helth, 1979/, /F.R.Seiler,R.G. Geursen (editors): 7S-Immunoglobulin zur intravenosen Anwendung. Kargel 1982/, /R.E.Schmidt,I.Stroehmann (editors):Immunoglobulin therapie Grundlagen und klinische Anwendung. Symposium in Bonn, Karger 1981/, /R.A.Good (editor): Am.J.Med 76,3A (1984) Intra veil·: as Immune Globulin and the Compromised Host/. Dalším typem intravenózního preparátu je roztok nepozměněného, vysoce purifikovaného plně nativního imunoglobulinu. Tento druh přípravku je vysoce účinný a má délku biologického poločasu stejnou jako normální imunoglobulin. Využívání nativního typu takovéhoto preparátu, má však jistá úskalí. Problém spočívá v bezpečném vyloučení výskytu všech reakcí u příjemce. Stává se totiž diskutabilní objektivně vymezit hranici mezi intramuskulárním a intravenózním preparátem a tak stanovit přijatelný stupeň nebezpečí možného výskytu nežádoucích klinických reakcí. Obecně zde platí zásada požadující maximálně dosažitelnou elektroforetickou čistotu imunoglobulinu, co nejnižší obsah agregovaných bílkovin, minimální antikomplementární aktivitu a minimální obsah biologicky aktivních látek. Riziko přenosu virových onemocnění se u těchto preparátů vylučuje pečlivou kontrolou vstupní suroviny a zařazením etanolového srážecího stupně nebo jiných purifikačních kroků do frakcionačních postupů /Η.H.Hoppe,T.Mester^.Henning, H.J.Krebs: Vox Sang. 25, 308 (1973)/, /C.J.Cunninghan: Biochem.Soc.Transs. 8, 178 (1980)/, /W.Scheider,D.Wolter,L.J.McCarty: Vox sang. 31, 141 (1976)/, /A.D.Friesen, J.M.Bowmann, H.W.Price: J.Appl.Biochem. 3, 166 (1981)/, /J.Vaňák, A. Stejskal: čs. autorské osvědčení č. 220 725/, /R.M.Condie: US Patent 4.130094 - 1979/, /R.M.Condie: US Patent 4.296027 - 1981/, /W. Guddat, K.Hillger: DD patent 208918 A 61 K - 39395/, /1.Štěpánek: čs. autorské osvědčení č. 255 356/, /R.S.Lane: Lancet 974 (1983)/, /A.M.L.Lewer a kolektiv: Lancet 1062 (1984)/, /H.D.Ochs a kolektiv: Lancet 404 (1985)/, /M.A.Wells a kolektiv: Transfusion 26 (2), 212 (1986)/, /H.Friedli,J.Morgethaler: Lancet 1215 (1985). Kvalita intravenózního neštěpeného imunoglobulinu bývá vymezena směrnicí na příklad Světové zdravotnické organizace /Směrnice WHO The Collection, Fractionation, Quality, Control and Use of Blood and Blood Products, Geneva 1981, str. 50/ nebo normou /Podniková norma PNY 31-147-82/. Při volbě kvality je nutné mít na zřeteli to, že čím jsou hodnoty sledovaných veličin stanoveny tolerantněji, tím více se zvyšuje nebezpečí vzniku komplikací u příjemce.
Určitým kompromisním řešením, které odstraňuje některé nevýhody obou výše uvedených typů intravenóžních roztoků imunoglobulinů, je třetí způsob přípravy, založený na chemické modifikaci imunoglobulinu. Parciálním rozštěpením molekul imunoglobulinu a chemickým zablokováním příslušných funkčních skupin je zabráněno vzniku agregátů schopných vyvolat reakce u příjemce. Současně je dosaženo částečného snížení antikomplementární aktivity. Biologický poločas vylučování z organismu je srovnatelný s poločasem u nativního imunoglobulinu, protože štěpy jsou za vhodných podmínek schopné in vivo i in vitro, rekombinace. Obsah účinných protilátek zůstává nezměněn. Chemickou modifikací molekul bílkovin dochází k likvidaci biologicky aktivních látek, například prekalikreinové aktivity /P.M.Fernandes,J.L.Lundblad: Vox Sang. 39, 101 (1980)/ a k desaktivaci· popřípadě přítomných nativních virů /W.Stephan: Vox Sang. 20, 442 (1971)/, /A.M.Price,W.Stephan, B.Brotman: Vox Sang. 46 (2), 80 (1984)/, /W-.Stephan: Z.Klin.Chem. Klin.Biochem.: 7, 286 (1969)/, /D.D.Schroeder a spolupracovníci: Am.J.Med. 76 (3A), 33 (1984)/. Z nej známějších postupů modifikace imunoglobulinu se uvádějí reakce s beta propiolaktonem /W.Stephan: Beitr.Infusionther.Klin.Enahr. 11, 20 (1983)/, amidace imunoglobulinu /R/Schmidtberger: US Patent 4, 118379 - 1978/, sulfitolytické štěpení /F.Franěk,O.M.Zorina: Coll.Czech. Chern.Commun. 32, 3229 (1967)/, /H. Muller: Open-laid Patent Gazette DE-AS 2658 334 - 1976/, /Y.Masubo,Y.Tomibe,T.Watanabe, Y.Fukomoto: Vox Sang. 32, 200 (1977)/, /Y.Masubo,Y.Tomibe, Y.Fukomoto,T.Watanabe: Vox Sang. 32, 290 (1977)/, /P.Gronski, E.Kanzy,G.Luben: Die gelben Hefte 40 (1982)/, /Z.Olšovská, F.Franěk:Folia biologica 29 (4), 282 (1983)/, /Z.Olšovská, F.Franěk: Folia biologica 29 (6), 365 (1983)/, /P.Gronski,
T.Hofstaetter,E.J.Kanzy,G.Luben,F.R.Seiler: Vox Sang. 45, 144 (1985)/, /T. Hofstaetter,P.Gronski,E. J.Kanzy,H.U.Schorlemmer, F.R. Seiler: Vox Sang. 45, 155 (1983)/, /P.Gronski a spolupracovníci: Ric.Clin.Lab. 14 Suppl. 1, 7 (1984)/. Osvědčeným způsobem modifikace je redukce s následnou alkylací /P.M.Fernandes,J.L.Lundblad: Vox Sang. 39, 101 (1980)/, /D.D.Schroeder, D.T.Tankersley,J.L. Lunblod: Vox Sang. 40,373 (1981)/, /D.D.Schroeder a spolupracovníci: Am.J.Med. 76 (3A), 33 (1984)/. Podstatný vliv na kvalitu konečného preparátu, na jeho bezpečnost při klinické aplikaci a na exspirační dobu má složení stabilizačního roztoku. Ke stabilizaci intravenozních roztoků imunoglobulinu se nejčastěji užívá glycin v kombinaci s některým cukrem, na příklad s maltózou nebo glukózou v různých koncentracích. V některých případech se u roztoku nativního imunoglobulinu užívá k jeho protekci sérového albuminu /D.Gislason a spolupracovníci: Vox Sang. 34, 143 (1978)/ nebo modifikované želatiny /T.Tomoto,K.Ikeda,T.Suzuki: Vox Sang. 51, 85 (1986)/.
Na základě výsledků našich pokusů, uvedených v následující tabulce, a údajů, obsažených v citovaných pracích, byl navržen postup přípravy intravenózního roztoku imunoglobulinu s nízkou antikomplementární aktivitou, jak jej předkládá předmět vynálezu.
Φ 4-> •H > •rd 4->
Φ
Přehled výsledků stanovení antikomplementární aktivity u 5% roztoků imunoglobulinů připravených různými postupy.
Φ
Q
Φ ta
Φ
Ό
>N >N
Φ Φ co in
04 > Φ >4 CL '3
| '>t | '>1 | '>1 | '>1 | '>1 | '>1 · | '>1 | '>1 | |
| β | β | β | β | β | β | β | β | β |
| 0) | 0) | φ | φ | Φ | Φ | Φ | Φ | φ |
| CL | (ta | Sta | Sta | (ta | (ta | Sta | CL | Sta |
| >Φ | >φ | >φ | >φ | >Φ | >Φ | >φ | >Φ | >Φ |
| 4-> | 4-1 | ψ) | .4-) | 4-) | 44 | 4-) | -μ | 44 |
| >cn | κη | κη | >Φ | κη | κη | >cn | >cn | κη |
| Φ | 0) | Φ | Φ | Φ | Φ | Φ | φ | Φ |
| β | β | β | β | β | β | β | β | β |
| Ή | 'rd | Ή | Ή | Ή | Ή | Ή | Μ ' | Μ |
| β | β | β | β | β | β | β | β | β |
| > | > | > | > | > | > | > | > | > |
| rd | •rd | •rd | rd | rd | rd | •rd | •rd | •rd |
| 4-> | +> | 4-) | 4-> | 4-) | 4-1 | 4-1 | 44 | 44 |
| Φ | Φ | Φ | Φ | Φ | Φ | Φ | Φ | Φ |
| β | β | β | β | β | β | β | β | β |
04
| sobem | zC rm | ο ω 04 | 0 Ο β ta β — •rd on β φ β Ο | β on μ | 'ď Μ | S’ Ο ta on Φ ο | β β •Η β | |||
| W Ο r4 | β > •rd 44 44 Φ | |||||||||
| β- | «β | κϋ | Λ | (ta | β | |||||
| β | (ta | r—1 | 3* | γ4 φ | Φ | Φ | ^ | φ | Λ | |
| rd | Ν | β | Φ β | β | β | 0 | β | ι-4 | ||
| r—1 | 44 | a | υ | (4 Μ | Φ | |||||
| β | β | cn | « | dP 'rd | Μ | 'rd | (ta (ta | Ή | ||
| Λ | '> | β | Ο | Ο | U | 0 | dP | |||
| 0 | β | β | '>1 | ο | in (ta | Cu | Sta | Μ β | (ta | |
| rd | Ν | Φ | β | (4 | β | μ | r4 > | μ | ιη | |
| Cn | «β | μ | φ | '>t Ο | Ο | 0 | .β Ή | 0 | ||
| 0 | Cd | 44 | > | Φ | β cn | tn | tn | β Η | tn | tn |
| β | β | Ο | β | Φ | > | |||||
| β | '>! | •rd | β. | > '>< | '>< | |||||
| S | β | 0 | '>< | 0 β | β | β | '>1 | β | ||
| •rd | Φ | 'rd | Η | β | Μ Φ | Φ | Φ | β | Φ | |
| > | β | Ο | Φ | Η > | > | > | Φ | > | ||
| 44 | Φ | r—{ | 44 | > | Η 0 | 0 | 0 | > | 0 | |
| 0 | μ | Md | Φ | 'rd | •rd Ο | ο | 0 | Φ | υ | |
| 44 | Sta | β | μ | >(4 | Λ Φ | φ | φ | 44 | φ | |
| Ν | •rd | μ | 144 | Λ | Φ μ | μ | (4 | cn | μ | |
| 0 | >μ | ο | Φ | φ | 44 CU | cu | (ta | >1 | (ta | |
| Ρί | cu | β | μ | Ν | cn ο | 0 | 0 | > | 0 |
Poznámka: a) - mikrostanovení podle Fultona a Dumbella, b) - stanovení podle PNY 31-147-82 c) - imunoglobulin obsahuje přibližně 10 % agregovaných podílů bílkovin d) - rozsah stanovených hodnot u více stanovení
| Φ | ||||||||
| +J | ο | |||||||
| -Η | ||||||||
| > | Λ | m | ID | ο | ||||
| •Η | tn | CX | Ο | ο | ||||
| -μ | ε | >Ν | 1 | I | 1 | |||
| 44 | Φ | Ο | Ο | ο | ||||
| Φ | ο | |||||||
| ιη | <0 | |||||||
| Ή | m | |||||||
| β | ο | Ο | ||||||
| μ | ||||||||
| χφ | ||||||||
| 4-> | ||||||||
| β | ||||||||
| Φ | ||||||||
| g | ||||||||
| Φ | φ | Ο | Γ** | |||||
| Γ~*4 | Q | |||||||
| ft | Φ | <ο | 00 | |||||
| g | ft | m | Ο | ο | ο | |||
| 0 | >Ν | >Ν | X. | X. | κ | |||
| 44 | Φ | Φ | ιη | Φ | ιη | τ™Η | <—Η | τ-Η |
| •Η μ | Ό | CO | Ο | V | V | |||
| β | ||||||||
| Φ |
| linu | ováný | ->i β Φ > 0 | '>1 β φ > 0 | '>1 β Φ > 0 | '>1 β φ > 0 | '>· β Φ > 0 | '>1 β φ ft | ||||||||
| β | '>t | 44 | >1 | 44 | 44 | '>1 | 44 | 44 | '>1 | 44 | >Φ | ||||
| Ή | Λ | β | H | β | •Η | β | •Η | β | •Η | β | Η | β | Ή | •μ | |
| β | 0 | Φ | U-l | Φ | Μ-Ι | φ | ΨΙ | Φ | ιμ | Φ | ιμ | Φ | Ψ4 | >tn | |
| χφ | r4 | ft | •H | ft | •Η | ft | •Η | ft | Ή | ft | Η | ft | •Η | ||
| > | tn | >φ | Ό | >Φ | >φ | Ό | >Φ | Ό | >Φ | >Φ | Ό | >1 | |||
| 0 | 0 | +» | 0 | +> | 0 | +> | 0 | -μ | 0 | -μ | 0 | μ | 0 | 44 | |
| . TABULKA (pokrač | Roztok imunoglobulinu úprava imun | připravený různým způsobem | 2+ sulfonovaný (SO^ ) parciálně š | g 1 | xn >Φ β r—1 Χφ •Η 0 μ φ ft + CN 'D Ο ω '>ϊ β φ > 0 β 0 U-I rd β ω | g 1 | >ω >φ β χφ Η 0 μ Φ ft '>1 β Φ > 0 >1 44 Φ Φ '>1 β Φ > 0 44 β t Φ μ | g 1 g Φ 0 +> •Η Φ μ +> 0 •Η Λ μ •Η Ό | >ω >Φ β r—I ΧΦ •Η 0 μ φ ft g φ 0 -μ Η Φ μ -μ 0 •Η X! •μ •Η β Φ > 0 44 •Η m •μ Ό 0 g | g 1 β β •Η g β Λ γΗ φ dP ΙΓ> Φ | >ω >Φ β χφ •Η 0 μ φ ft β Ν φ χφ β >1 > Φ Ό 0 ft β Φ > Φ μ ft •Η >μ ft | g 1 β β Ή g β X) φ Ή β Χφ Ό •Η >μ ft Ν Φ Λ | >ϋ) >Φ β χφ •Η 0 μ φ ft β Ν Φ χφ β >1 > φ Ό 0 ft '>1 β Φ > Φ μ ft •Η >μ ft | g 1 β β •Η g β Λ Φ dP uO ω | Ο •Η -μ >1 0 Φ -μ 0 μ ft ft ω ω ω 'w* g φ β Ή ω ft Φ ft >1 β Φ ft >φ μ >ω |
Navržený způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplementární aktivitě, který je vhodný pro intravenozní aplikaci, založený na kombinaci známých postupů přípravy fosforečnanu vápenatého, chemické modifikace imunoglobulinu DL-dithiotreitolem a přidání maltózy, glycinu a sérového albuminu jako stabilizačních složek, vyznačující se tím, že se vodný roztok obsahující 3 až 10 g imunoglobulinu, o elektroforetické čistotě nejméně 95 %, na každých 100 ml uvede do kontaktu s fosforečnanem vápenatým na dobu 30 až 60 minut, potom se fosforečnan vápenatý oddělí od tekutiny, k takto získanému roztoku imunoglobulinu se přidá 1,4-dithio-DL-treitol v množství 23 až 38 mg na každých 100 ml roztoku a po 30 minutovém míchání se přidá 50 až 100 mg jodacetamidu na každých 100 ml roztoku, míchá se dalších 60 minut, roztok takto modifikovaného imunoglobulinu se dialyzuje nebo diafiltruje proti roztoku obsahujícímu 0,2 až 0,4 g chloridu sodného na každých 100 ml, potom se upraví koncentrace bílkovin naředěním roztokem chloridu sodného o uvedené koncentraci, nebo naopak zahustí ultrafiltrací tak, aby obsahoval 4,5 až 5,5 g modifikovaného imunoglobulinu na 100 ml roztoku, potom se přidá stabilizační složky 1 až 5 g maltózy, 1 až 2,5 g glycinu, popřípadě 1 až 5 g sérového albuminu na každých 100 ml roztoku, jeho hodnota pH se upraví na 6,4 až 7,4 a provede se sterilní filtrace.
Předností navrženého postupu přípravy modifikovaného imunoglobulinu je to, že umožňuje výrobu potřebného léku vhodného pro intravenozní aplikaci, který vykazuje nízkou antikomplementární aktivitu, neobsahuje agregované podíly bílkovin, má snížený obsah biologicky aktivních látek, maximálně snižuje riziko přenosu virových onemocnění, je klinicky bezpečný a má biologický poločas vylučování srovnatelný s nativním neštěpeným imunoglobulinem. Roztok modifikovaného imunoglobulinu, připravený podle navrženého postupu, si podržuje stejný obsah protilátek, jaký měl výchozí materiál. Preparát je stálý při provedení zkoušky stability podle směrnice Světové zdravotnické organizace a nemění svůj vzhled a viskozitu po čtyřhodinovém zahřívání na 58 °C. Roztok modifikovaného imunoglobulinu je neškodný na morčatech a myších.
Způsob přípravy preparátu o nízké antikomplementární aktivitě je v principu založen na vhodné kombinaci nespecifické sorpce vysokomolekulárních látek na fosforečnan vápenatý, chemické modifikace molekuly imunoglobulinu redukcí dithiotreitolem a alkylací jodacetamidem. Nežádoucí nízkomolekulární látky jsou odstraněny dialýzou nebo diafiltrací. Injekční roztok je vhodným způsobem stabilizován. Účinek fosforečnanu vápenatého je možné dosáhnout jiným vhodným způsobem, na příklad užitím iontoměniče nebo sorbentu podobných vlastností. Provedení chemické modifikace diothiotreitolem a jodacetamidem je podle výsledků našich pokusů i podle zkušeností jiných autorů výhodnější, než je modifikace pomocí sulfitolýzy. Zařazením náležitě účinné dialýzy nebo diafiltrace je dosaženo nejen odstranění vedlejších produktů redukce a alkylace, ale také oddělení dalších nízkomolekulárních látek, původně obsažených ve výchozím roztoku imunoglobulinu řádově o čtyři řády. Jako stabilizační složka se nejlépe osvědčila kombinace maltózy a glycinu s doplněním o sérový albumin. Přítomnost albuminu zvyšuje stabilitu modifikovaného imunoglobulinu, zajišťuje blokování i stopových zbytků reakčních produktů, dále snižuje riziko anafylaktických reakcí a při klinické aplikaci napomáhá detoxikaci látek vzniklých v důsledku infekčního onemocnění v organizmu příjemce.
Z hlediska technologické přípravy je navržený postup jednoduchý a nevyžaduje žádná mimořádná zařízení. Předností postupu je také skutečnost, že umožňuje přípravu žádaného intravenozního preparátu, jehož léčebný význam se bude nepochybně dále zvyšovat, z imunoglobulinu připraveného způsobem, Vhodným pro intramuskulární aplikaci, o který zájem stále klesá.
Příklad 1 g lyofilizovaného imunoglobulinu, vhodného pro přípravu intramuskulárního preparátu, který vykazuje nejméně 95 % elektroforetickou čistotu, se rozpustí ve 200 ml destilované apyrogenní vody a pH roztoku se upraví na hodnotu 7,2 ± 0,2 pomocí 0,2 M roztoku hydroxidu sodného nebo 0,2 M kyseliny octové. K roztoku se přidá 40 ml hustého sedimentu fosforečnanu vápenatého, připraveného podle dále uvedeného postupu. Vzniklá suspenze se míchá 60 minut, potom se fosforečnan oddělí filtrací přes vrstvy typu K5 a EKS2. Dále se přidá na každých 100 ml filtrátu 23 až 38 mg 1,4-dithio-DL-treitolu a po 30 minutovém míchání se přidá 55 až 100 mg jodacetamidu. Roztok se míchá dalších 60 minut. Roztok redukovaného a alkylovaného imunoglobulinu se potom dialyzuje třikrát opakovaně proti 20 násobnému objemu 0,2 až 0,4% roztoku chloridu sodného nebo se za podobných podmínek podrobí diafiltraci. Dialyzovaný roztok se naředí na koncentraci 5 ± 0,5 % bílkovin a přidá se na každých 100 ml 1 až.5 g maltózy, 1 až 1,5 g glycinu a 1 až 5 g sérového albuminu. Provede se konečná kontrola, popřípadě úprava pH na hodnotu 6,4 až 7,4, roztok se sterilně zfiltruje a rozplní na požadované dávky. Celý pracovní postup se provádí při teplotách 4 až 8 °C a musí se provádět podle zásad apyrogenní práce. Z 20 g výchozího množství lyofilizovaného imunoglobulinu bylo uvedeným postupem připraveno 260 ml 5% roztoku, který vykazoval antikomplementární aktivitu 0,06 CH50/mg. Roztok byl neškodný při zkouškách na myších a morčatech a měl nezměněný obsah antistafylokokových protilátek. Roztok byl stabilní při zahřívání na 58 ’C po dobu 4 hodin.
Příklad 2 ‘
250 ml 3 až 8% roztoku imunoglobulinu, který vznikl rozpuštěním sedimentu bílkovin při etanolové francionaci a vykazuje nejméně 95% elektroforetickou čistotu, se přefiltruje přes filtrační vrstvu typu ΕΚ. K filtrátu se přidá 40 ml hustého sedimentu fosforečnanu vápenatého připraveného podle dále uvedeného postupu. Sorpce na fosforečnan vápenatý, redukce a alkylace, dialyza, diafiltrace a složení stabilizátoru je stejné jako v příkladě 1. Pokud po dialýze je koncentrace bílkovin nižší, roztok se zahustí ultrafiltrací na požadovanou koncentraci. Sterilně zfiltrovaný roztok se rozplní do požadovaných dávek a usuší lyofilizací.
Příprava fosforečnanu vápenatého:
Fosforečnan vápenatý se připraví pozvolným směšováním 0,2M roztoku chloridu vápenatého a 0,2M středního fosforečnanu sodného v ekvimolárním poměru za stálého míchání. Vzniklá suspenze se po ukončení srážení ještě míchá 20 až 30 minut a potom se promývá dekantací s destilovanou vodou tak dlouho, pokud roztok vykazuje reakci na přítomnost vápníkových nebo fosforečnanových iontů. Sraženina se ponechá sedimentovat při +4'°C po dobu 16 až 24 hodin, vodná fáze se oddělí a sediment se během dalších 24 hodin užije k sorpci nebo se vysterilizuje autoklávováním. Celý postup práce musí být proveden podle zásad platných pro apyrogenní práci.
Claims (1)
- PATENTOVÉ NÁROKYZpůsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplementární aktivitě, který je vhodný pro intravenozní aplikaci, využívající postupů zahrnujících přípravu fosforečnanu vápenatého,chemické modifikace imunoglobulinu DL-dithiotreitolem a přidáni maltózy, glycinu a sérového albuminu jako stabilizačních složek, vyznačující se tím, že se vodný roztok obsahující 3 až 10 g imunoglobulinu, o elektroforetické čistotě nejméně 95 %, na každých 100 ml uvede do kontaktu s fosforečnanem vápenatým na dobu 30 až 60 minut, potom se fosforečnan vápenatý oddělí od tekutiny, k takto získanému roztoku imunoglobulinu se přidá 1,4-dithio-DL-treitol v množství 23 až 38 mg na každých 100 ml roztoku a po 30 minutovém míchání se přidá 50 až 100 mg jodacetamidu na každých 100 ml roztoku, míchá se dalších 60 minut, roztok takto modifikovaného imunoglobulinu se dialyzuje nebo diafiltruje proti roztoku obsahujícímu 0,2 až 0,4 g chloridu sodného na každých 100 ml, potom se upraví koncentrace bílkovin naředěním roztokem chloridu sodného o uvedené koncentraci, nebo naopak zahustí ultrafiltrací tak, aby obsahoval 4,5 až 5,5 g modifikovaného imunoglobulinu na 100 ml roztoku, potom se přidají stabilizační složky 1 až 5 g maltózy, 1 až 2,5 g glycinu, popřípadě 1 až 5 g sérového albuminu na každých 100 ml roztoku, jeho hodnota pH se upraví na 6,4 až 7,4 a provede se sterilní filtrace.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS32388A CS277564B6 (cs) | 1988-01-18 | 1988-01-18 | Způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplenentární aktivitě |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS32388A CS277564B6 (cs) | 1988-01-18 | 1988-01-18 | Způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplenentární aktivitě |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS8800323A1 CS8800323A1 (en) | 1990-08-14 |
| CS277564B6 true CS277564B6 (cs) | 1993-03-17 |
Family
ID=5335149
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS32388A CS277564B6 (cs) | 1988-01-18 | 1988-01-18 | Způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplenentární aktivitě |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS277564B6 (cs) |
-
1988
- 1988-01-18 CS CS32388A patent/CS277564B6/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS8800323A1 (en) | 1990-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0073371B1 (en) | Intravenously injectable immune serum globulin and method of preparing same | |
| JP6612186B2 (ja) | 抗体調製物 | |
| EP0037078B1 (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor xiii | |
| DE2801123C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös applizierbaren Serumeiweiß-Präparates | |
| US20030143222A1 (en) | Method of producing igg | |
| AU2001273907A1 (en) | A method of producing IgG | |
| US5132406A (en) | Method of producing immunoglobulin preparations for intravenous injection | |
| US3916026A (en) | Method for the preparation of gamma-globulin suitable for intravenous use | |
| US4199450A (en) | Process of separating from an aqueous medium a protein or a morphologically organized unit by liquid exclusion chromatography | |
| JPH06321994A (ja) | アンチトロンビン調製物およびその調製方法 | |
| US4322403A (en) | Method for the preparation of an immune globulin solution suitable for intravenous use | |
| AU709608B2 (en) | Preparation of virally inactivated intravenously injectable immune serum globulin | |
| EP0253313B1 (en) | Process for heat treating chemically unmodified gamma-globulin | |
| JPS59227827A (ja) | マラリア原虫由来糖鎖関連抗原及びその製造法 | |
| CS277564B6 (cs) | Způsob výroby přípravku modifikovaného imunoglobulinu o nízké antikomplenentární aktivitě | |
| EP0234405A2 (de) | Verwendung eines immunglobulinhaltigen Präparates zur Prophylaxe und Therapie von AIDS beim Menschen | |
| DE19600939C1 (de) | Verfahren zur Trennung von IgG und IgA | |
| JPH0720874B2 (ja) | 生化学的薬剤及びその製造方法 | |
| DE2014957C2 (de) | Verfahren zur Reinigung von Proteinen des Blutserums oder -plasmas | |
| JP4331798B2 (ja) | アレルゲン処方 | |
| JP4003235B2 (ja) | 静注用免疫グロブリン製剤の製造方法 | |
| JPH0723319B2 (ja) | 血液製剤から血液型抗体を除去する方法 | |
| JPS6237009B2 (cs) | ||
| JPH07103045B2 (ja) | 非化学修飾γ−グロブリンの加熱処理方法 | |
| JPS5872526A (ja) | モノクロ−ルｈｂｓ抗体の製造方法 |