CS271835B1 - Method of purified allergens preparation from materials of biological origin - Google Patents
Method of purified allergens preparation from materials of biological origin Download PDFInfo
- Publication number
- CS271835B1 CS271835B1 CS883908A CS390888A CS271835B1 CS 271835 B1 CS271835 B1 CS 271835B1 CS 883908 A CS883908 A CS 883908A CS 390888 A CS390888 A CS 390888A CS 271835 B1 CS271835 B1 CS 271835B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- allergenic
- materials
- fraction
- separation
- gel
- Prior art date
Links
- 239000013566 allergen Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 claims description 9
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract description 3
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000013190 sterility testing Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(57) Řešení se týká způsobu průmyslové přípravy purifikovaných alergenů z extraktů alergenních materiálů biologického původu.
Je založeno na dělení komponent směsi dle jejich izoelektrických bodů samočinnou izoelektrickou fokusací bez nutnosti použití amíolytických pufrů a dle molekulových hmotností gelovou chromatografii. Podle navrženého způsobu se vodivost extraktů alergenních materiálů upraví odsolením a neředěním na hodnoty 400 až 1 000 pS/cm a koncentrace bílkovin do 40 g/1, poté se ne extrakt alergenních materiálů v autofokuséru působí stejnosměrným elektrickým proudem při napětí 100 až 2 000 V při teplotě 2 až 8 °C dokud procházející proud neklesne alespoň na polovinu původní hodnoty, izolovaná frakce s nejvyšší alergenní aktivitou se pomoci gelové chromatografie rozdělí dle molekulových hmotností s následnou separací frakce o nejvyšší alergenní účinnosti, čímž se získá frakce s užším rozmezím izoelektrických bodů a molekulových hmotností, popřípadě lze působení stejnosměrného elektrického proudu nebo dělení pomocí gelové chromatografie alespoň jednou opakovat. Purifikovaných alergenů je možno použít k desensibilizační léčbě injekční i perorální formou a k výrobě diagnostických setů pro stanovení koncentrací specifických protilátek proti danému alergenu v sérech pacientů metodami RAST a jejich enzymovými modifikacemi v podmínkách in vitro.
| 271 | 835 |
| (11) , | |
| (13) | Bl |
| (51) | Int. Cl.5 G 01 N 33/48 |
-w·
CS 271835 Bl
Vynález se týká způsobu průmyslové připravy purlfikovaných alergenů z materiálů biologického původu pro diagnostiku a terapii v oblasti humánní medicíny.
Dosud se při puriíikaci a izolaci alergenů z biologických materiálů používá v průmyslovém měřítku kombinace různých separačnich metod, jako sráženi extraktů alergenních materiálů roztoky anorganických solí, dialýzy či ultrafiltraoe rozpuštěného precipitátu s následnou frakcionacl takto získaného surového alergenu gelovou, ionexovou, afinitní či hydrofobní chromatografii, preparativní polyakrylamidovou elektroforézou a v omezeném rozsahu preparativní izoelektrickou fokusaci. Tyto purifikační postupy se vyznačují pracností a složitostí, vysokými nároky na přístrojové vybavení a v průmyslovém měřítku především vysokými cenami používaných médií(ionexů, amfolytických pufrů atd.). Z tohoto důvodů jsou purifikované alergeny drahé, což omezuje jejich široké využití v lékařské praxi.
V ČSfR je znám způsob dělení a purifikace biologických materiálů na základě rozdílnosti jejich izoelektrických bodů bez použití amfolytických pufrů - samočinná izoelektrická fokusace (čs. autorské osvědčeni č. 211 B56) a zařízení k provádění způsobu (čs. autorské osvědčení č. 234 801). Princip samočinné izoelektrické fokusace podle uvedeného autorského osvědčení spočívá v tom, že na směs látek biologického charakteru, pokud jejich roztok má vodivost do 400 xiS/cm a koncentraci dělených látek do 50 g/1, se působí stejnosměrným proudem po dobu 6 až 72 hodin. Pro dělení alergenů, jejichž molekulové hmotnosti se pohybují v širokém rozmezí 10 000 až 100 000, způsob dělení samočinnou izoelektrickou fokusaci podle autorského osvědčení č. 211 856 nevyhovuje.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob přípravy purifikovaných alergenů z materiálů biologického původu samočinnou izoelektrickou fokusaci a následnou gelovou chromatografii, vyznačující se tím, že vodivost extraktů alergenních materiálů se upraví odsolením a neředěním na hodnoty 400 až 1 000 jjS/cm a koncentrace bílkovin do 40 g/1, potom se na extrakt alergenních materiálů v autofokuséru působí stejnosměrným elektrickým proudem při napětí 100 až 2 000 V při teplotě 2 až 8 °C, dokud procházející proud neklesne alespoň na polovinu původní hodnoty, izolovaná frakce s nejvyšší alergenní aktivitou se pomocí gelové chromatografie rozdělí podle molekulových hmotností s následnou separací frakce o nejvyšší alergenní účinnosti, čímž se získá frakce s užším rozmezím izoelektrických bodů a molekulových hmotností, popřípadě lze působení stejnosměrného elektrického proudu nebo dělení pomocí gelové chromatografie alespoň jednou opakovat.
Alergenně nejúčinnějšl frakci lze použít jako diagnostický či desensibilizační alergen v injekční nebo perorální formě v humánní medicíně nebo k laboratorní diagnostice v podmínkách in vitro.
Optimalizací podmínek samočinné izoelektrické fokusace pro alergeny podle vynálezu se docílí větší dělicí schopnosti, v jejímž důsledku lze získat čistší alergen, což je z hlediska jeho použití velmi důležité.
Příklad:
Bytový prach se v poměru 1 : 5 (hmot./obj.) extrahuje 48 h 0,005 mol/1 NH^OH za občasného promíchání. Po uplynutí této doby se oddělí roztok alergenu od pevného zbytku a vyprecipituje trojnásobným objemem vychlazeného acetonu. Po 12 hodinovém stání se precipitát odfiltruje, promyje acetonem a vysuší. Takto získaný surový alergen se rozpustí v destilované vodě v koncentraci 0,86 g/1 na roztok o vodivosti 480 pS/cm a podrobí se samočinné izoelektrické fokusaci v autofokusačnim zařízení. Napětí se pohybuje v rozmezí 200 až 1 200 V, přičemž součin napětí a procházejícího proudu nepřesáhne hodnotu 5 W pro fokusér o objemu 1 litr. Fokusace byla ukončena po 200 hodinách (pokles proudu na polovinu). Všechny operace až do ukončení fokusace se provádějí při 4 °C.
Obsah komůrek fokuséru o nejvyšší alergenní aktivitě stanovené standardními metodami (kožními testy) - jednalo se o komůrky s pH mezi 9,5 až 12,5 - se sjednotí a rozdělí podle molekulových hmotností na sloupci molekulového síta Sephadex G 200, frakce o nejCS 271835 Bl vyšší alergenní aktivitě se zlyofilizuje. Po odpovídajícím naředění Cocovým roztokem, sterilní filtraci, otestování sterility a netoxicity ji lze použít jako diagnostický či desensibilizačni alergen v injekční formě nebo se lyofilizát po rozpuštění v 50% glycerinu použije jako alergen perorální.
Vynález je možno použít při purifikaci alergenů z biologických materiálů různého původu jako pylů, trav, bylin, stromů a keřů, prachů z různých prostředí a materiálů, členovců (hmyz, roztoči), řas a sinic, potravin, bakterií, plísní, hub a kvasinek. Kromě vlastni terapie lze purifikovaných alergenů využít i k alergodiagnostice in vitro k výrobě diagnostických setů pro stanovení koncentrací specifických protilátek v sérech pacientů proti danému alergenu metodami RAST a jejich enzymovými modifikacemi.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob přípravy purifikovaných alergenů z materiálů biologického původu samočinnou izoelektrickou fokusací a následnou gelovou chromatografii, vyznačující se tím, že vodivost extraktů alergenních materiálů se upraví odsolením a naředěním na hodnoty 400 až 1 000 ^iS/cm a koncentrace bílkovin do 40 g/1, potom se na extrakt alergenních materiálů v autofokuséru působí stejnosměrným elektrickým proudem při napětí 100 až 2 000 V při teplotě 2 až 8 °C, dokud procházející proud neklesne alespoň na polovinu původní hodnoty, izolovaná frakce s nejvyšší alergenní aktivitou se pomocí gelové chromatografie rozdělí podle molekulových hmotností s následnou separací frakce o nejvyšší alergenní účinnosti, čímž se získá frakce s užším rozmezím izoelektrických bodů a molekulových hmotností, popřípadě lze působení stejnosměrného elektrického proudu nebo dělení pomocí gelové chromatografie alespoň jednou opakovat.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS883908A CS271835B1 (en) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS883908A CS271835B1 (en) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS390888A1 CS390888A1 (en) | 1990-03-14 |
| CS271835B1 true CS271835B1 (en) | 1990-11-14 |
Family
ID=5380522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS883908A CS271835B1 (en) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS271835B1 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7887821B2 (en) | 2007-12-20 | 2011-02-15 | Alk-Abello A/S | Process for producing an allergen extract |
-
1988
- 1988-06-07 CS CS883908A patent/CS271835B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS390888A1 (en) | 1990-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CH634334A5 (de) | Neues glycoprotein und verfahren zu dessen herstellung. | |
| Coyne et al. | Guinea Pig Lymphotoxin (LT) II. Physicochemical Properties of LT Produced by Lymphocytes Stimulated with Antigen or Concanavalin A: Its Differentiation from Migration-Inhibitory Factor (MIF) | |
| DE3019847A1 (de) | Verfahren zur herstellung von menschlichem interferon und es enthaltende mittel | |
| EP0307002A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Antithrombin III-Konzentrates | |
| JPS62174027A (ja) | 改良されたキモパパイン及び製薬学的組成物 | |
| DE3316464A1 (de) | Virusantigen, verfahren zu seiner gewinnung und anwendung in diagnose und therapie (impfstoff) | |
| CS271835B1 (en) | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin | |
| Franklin et al. | Comparison of honeybee venoms and their components from various sources | |
| Hirst | THE NATURE OF THE VIRUS RECEPTORS OF RED CELLS: III. Partial Purification of the Virus Agglutination Inhibitor in Human Plasma | |
| CN111530439B (zh) | 一种制备血清中定值梅毒特异性抗体的方法 | |
| Shulman et al. | The allergic response to stinging insects: I. Preparation of extracts and their biochemical characterization | |
| US4228068A (en) | Peptide complexes of DNA-containing organisms | |
| Kuo et al. | A new allergen from the perienteric fluid of Ascaris suum with respect to charges | |
| Mackie et al. | On the immunological nature of the principle in serum responsible for the Wassermann reaction, with reference also to the flocculation reaction of Sachs and Georgi | |
| DE2815758C3 (de) | Peptidkomplexe aus DNS-haltigen Organismen | |
| RU2031657C1 (ru) | Способ получения аллергена для выявления сенсибилизации организма грибами рода candida | |
| JP4581082B2 (ja) | 自己免疫増強剤、その製造方法及びそれを用いた化粧料 | |
| AT356823B (de) | Diagnoseverfahren zum nachweis von colien- terotoxin | |
| DE2353035B2 (de) | Verfahren zur Stabilisierung menschlicher oder tierischer Körperflüssigkeiten oder pflanzlicher Extrakte | |
| CN109771641A (zh) | 一种圆柏花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法 | |
| Williams | Ancylostoma caninum: Analysis of antigens of the canine hookworm | |
| Jones et al. | Studies on the Fractionation of Tuberculin and Johnin: I. Fractionation of Tuberculin Proteins | |
| Eichhorn | FIXATION, WITH SPECIAL REFERENCE TO BOVINE TUBERCULOSIS | |
| Porter | The Precipitin, Complementbinding, and Anti-Opsonic Tests in Tuberculous and Normal Cattle | |
| US4426454A (en) | Diagnostic method for immune disorders |