CS268404B1 - Mousy b-lymphocyte hybridome production line hbs-02 author's certificate 36/86 - Google Patents
Mousy b-lymphocyte hybridome production line hbs-02 author's certificate 36/86 Download PDFInfo
- Publication number
- CS268404B1 CS268404B1 CS865404A CS540486A CS268404B1 CS 268404 B1 CS268404 B1 CS 268404B1 CS 865404 A CS865404 A CS 865404A CS 540486 A CS540486 A CS 540486A CS 268404 B1 CS268404 B1 CS 268404B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hbs
- author
- production line
- hbsag
- certificate
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 14
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 abstract 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešeni ee týká nové produkční myši hybrldomové linie HBS-02 vytvářející specifickou monoklonálni protilátku podtřidy IgGl proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B (HBsAg).The ee solution addresses the new production mouse the HBS-02 hybrid lines producing specificity monoclonal antibody subclass IgG1 against viral surface antigen hepatitis B (HBsAg).
Description
Vynález ee týká nové produkční hybridomová linie vytvářející specifickou monoklonální protilátku proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B /HBsAg/. Hybridom byl seetrojen fúzí buňky myéí myelomové linie a myšího lymfocytu, eenzibilizovaného antigenem HBs.The present invention relates to a novel hybridoma production line producing a specific monoclonal antibody against hepatitis B virus surface antigen (HBsAg). The hybridoma was secreted by fusion of a myeloma lineage cell and a mouse lymphocyte sensitized with HBs antigen.
Diagnostická séra proti HBsAg jsou základní složkou souboru imunoreagencií nezbytných pro aerologickou diagnoatiku onemocněni člověka virovou hepatitidou B a pro zjišťováni přítomnosti viru hepatitidy B v krvi a krevních derivátech v transfuzní službě. Tato séra jeou součásti souprav pro detekci HBsAg /SEVATEST ELISA H BsAg-l MACRO I nebo ELISA HBsAg MICRO 1/, které jsou používány ve zdravotnictví při rutinním vyšetřování krve.Diagnostic sera against HBsAg are an essential component of a set of immunoreagents necessary for the aerological diagnosis of human hepatitis B virus and for the presence of hepatitis B virus in blood and blood derivatives in the transfusion service. These sera are part of the HBsAg / SEVATEST ELISA H BsAg-1 MACRO I or HBsAg MICRO 1 / ELISA kits, which are used in healthcare in routine blood testing.
Diagnostická séra používaná pro stanovení HBsAg pomocí uvedených testů jsou hyperimuni králičí a kozí antiséra, připravovaná dosud opakovanou imunizaci zvířat purifikovaným HBsAb, připravovaným z lidských plazem nosičů HBsAg. Příprava HBsAg je značně náročná na materiální, metodické i organizační zajištění výrobního procesu. Nedostatkem tohoto způsobu přípravy hyperimuních antisér je, že některá zvířata nedostatečně reaguji na imunizaci HBsAg,čímž docházík výrobním ztrátám. Vedle žádaných protilátek proti HBsAg se v hyperimuních antisérech mohou vyskytnout i nežádoucí protilátky proti lidským sérovým bílkovinám, které je nutno ze séra odstranit vysycenim. Standardizace jednotlivých šarží diagnostických sér js při stávajícím způsobu přípravy obtížná a vždy neúplná, neboť z vlastní podstaty dosavadního způsobu přípravy imunních sér vyplývá, že nelze získat dvě výrobní ěaržs stejných vlastností.The diagnostic sera used to determine HBsAg by the above assays are hyperimmune rabbit and goat antisera, prepared by re-immunization of animals with purified HBsAb prepared from human reptiles of HBsAg carriers. The preparation of HBsAg is very demanding on the material, methodological and organizational support of the production process. The disadvantage of this method of preparing hyperimmune antisera is that some animals do not respond well to HBsAg immunization, resulting in production losses. In addition to the desired antibodies against HBsAg, unwanted antibodies to human serum proteins may be present in hyperimmune antisera and must be removed from the serum by saturation. Standardization of individual batches of diagnostic sera is difficult and always incomplete with the current method of preparation, because it follows from the very nature of the current method of preparation of immune sera that it is not possible to obtain two production batches with the same properties.
Dalším nedostatkem vyšetřování HBsAg prováděného pomoci dosud užívaných polyklonálních sér je, že nelze vyloučit chybné výsledky, způsobené nižší citlivosti nebo neočekávanými vlastnostmi diagnostických s^ér.Another disadvantage of HBsAg screening with polyclonal sera used to date is that erroneous results due to lower sensitivity or unexpected properties of the diagnostic sera cannot be ruled out.
Mnohé z uvedených problémů dosud používaného postupu přípravy diagnostických sér i řadu nedostatků vyplývajících z nevhodných vlastností dosud používaných polyklonálnich diagnostických sér je možné odstranit zavedením přípravy myších monoklonálních protilátek proti HBsAg produkovaných B~lymfocytárníml hybridomy. Hlavním přínosem zavedení monoklonálních protilátek je především zjednodušení a urychlení výrobního postupu, úspora purifikovaného HBs antigenu, standardizace přípravy jednotlivých šarži diagnostických sér,· zvýšeni citlivosti a specifity vyšetření i zkrácení doby nutné pro provedeni diagnostického testu. ........Many of the above problems of the prior art diagnostic sera preparation process, as well as a number of shortcomings resulting from the inappropriate properties of the polyclonal diagnostic serum sera used to date, can be overcome by introducing the preparation of murine monoclonal antibodies against HBsAg produced by B-cell hybridomas. The main benefit of the introduction of monoclonal antibodies is the simplification and acceleration of the production process, saving purified HBs antigen, standardizing the preparation of individual batches of diagnostic sera, · increasing the sensitivity and specificity of testing and reducing the time required to perform a diagnostic test. ........
Zdrojem monoklonální protilátky proti HBsAg je hybridomová linie HBS-02, uložená ve sbirce hybridomů Ústavu sér a očkovacích látek, Praha 10, W.Piecka 108 pod označením HBS - 02 AO 36/86.The source of the monoclonal antibody against HBsAg is the hybridoma line HBS-02, stored in the hybridoma collection of the Institute of Sera and Vaccines, Prague 10, W. Piecka 108 under the designation HBS - 02 AO 36/86.
Uvedený hybridom byl seetrojen způsobem známým z odborné literetury /S.Fazekas de St. Groth, D. Scheidiggsr: Production of monoclonal antibodiesi Strategy and tactics, □.Immunol. Meth. 35:1,1980^ □. Kalil, 0. Crevat, M. Fellous, □. Drouet, A.M. Courouce, C. Ropers: Production d'anticorps monoclonaux anti-HBs. Ann-lmmunol./Inst.Pasteur/ 132c,319,1981/ klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzi buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a eenzibilizovaných lymfocytů, získaných ze slezin myší kmene BALB/c, imunizovaných HBsAg.Said hybridoma was engineered in a manner known from the literature /S.Fazekas de St. Groth, D. Scheidiggsr: Production of monoclonal antibodies Strategy and tactics, □ .Immunol. Meth. 35: 1,1980 ^ □. Kalil, 0. Crevat, M. Fellous, □. Drouet, A.M. Courouce, C. Ropers: Production of anti-HBs monoclonal anticorpses. Ann.
B-lymfocytárni hybridomová linie HBS-02 produkuje zcela homogení protilátky tzv. protilátky monoklonální,1 které specificky reagují s HBsAg a nikoliv s lidskými plasmatickými bílkovinami. Hybridom HBS - 02 je možné pěstovat v podmínkách buněčné kultury in vitro nebo in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c nebo jej dlouhodobě uchovávat při teplotě kapalného dusíku. Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem HBS - 02 je specifická pro HBsAg a prostá dalších nežádoucích protilátek.The B-cell hybridoma line HBS-02 produces completely homogeneous antibodies called monoclonal antibodies, 1 which specifically react with HBsAg and not with human plasma proteins. The HBS-02 hybridoma can be grown in vitro or in vivo cell culture conditions in the peritoneal cavity of BALB / c mice or stored for a long time at liquid nitrogen temperature. The monoclonal antibody produced by the HBS-02 hybridoma is specific for HBsAg and free of other unwanted antibodies.
• Buňky hybridomů HBS-02 jeví ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk s volnými i na membránu vázanými polyribozomy. V podmínkách buněčné kultury rostou ja ko slaběadharujlclbuňky /poloeuspenznl kultura/ v mediu MEM nebo RPMI 1640, doplněném 2-merkaptoetenolem /5 x 10 M/, 10 % telecího séra pro tkáňové kultury a antibiotiky / 100 j. penicilinu, 100 pg streptomycinu a 40 pg gentamycinu v 1 ml/ při 37 °C· Střední generační doba produkční linie HBS - 02 činí 20 hodin. Produkovaná monoklonélní protilátka je myěi imunoglobulin třídy IgG 1, její izoelektrlcký bod je 5,6 až 6,1.• HBS-02 hybridoma cells show an ultrastructural picture of typical myeloma cells with free and membrane-bound polyribosomes. Under cell culture conditions, 10% calf serum for tissue culture and antibiotics (100 .mu.l of penicillin, 100 .mu.g of streptomycin and 40 .mu.g of streptomycin and 40 .mu.g of streptomycin and pg gentamicin in 1 ml / at 37 ° C · The mean generation time of the HBS-02 production line is 20 hours. The monoclonal antibody produced is a mouse IgG 1 class immunoglobulin, with an isoelectric point of 5.6 to 6.1.
Příkled 1Example 1
Za účelem pomnožení produkční hybridomové linie HBS - 02 e zíekání monoklonélní protilátky bylo vyseto do kultiveční nádobky 1 χ 105 buněk /1 ml kultivečniho médie. Po 3 dnech růstu buněk bylo z kultiveční nádoby získáno kultivační médium, obohacené o monoklonélní protilátky,· vytvořené buňkemi produkční hybridomové linie. Monoklonélní protilátky reagovaly s purifikoveným HBeAg v radiolmunologickém stanoveni až do ředěni 1 t 106.In order to amplify the HBS-02 hybridoma production line and to produce the monoclonal antibody, 1 χ 10 5 cells / 1 ml of culture medium was seeded in a culture vessel. After 3 days of cell growth, a culture medium enriched with monoclonal antibodies generated by the cells of the production hybridoma line was obtained from the culture vessel. The monoclonal antibodies reacted with purified HBeAg in a radioimmunoassay up to a dilution of 1 t 10 6 .
Příkled 2Example 2
Monoklonélní protilátko proti HBsAg byle získáne in vivo po inokuloci 5 x 10 buněk hybridomové produkční linie HBS - 02 do peritoneálnl dutiny myěi kmene BALB/c, které bylo 14 dní předem injikováno stejným způsobem 0,5 ml parafinového oleje. Monoklonálnl protilátky proti HBeAg byly obseženy v oscltické tekutině, získoné z peritoneálnl dutiny myěi zo 12 dni po inokuloci buněk. Monoklonálnl protilátky reagovaly s purifikovenýmThe anti-HBsAg monoclonal antibody was obtained in vivo after inoculation of 5 x 10 cells of the hybridoma production line HBS-02 into the peritoneal cavity of a BALB / c mouse, which had been injected in the same manner with 0.5 ml of paraffin oil 14 days in advance in the same manner. Monoclonal antibodies against HBeAg were contained in the osmotic fluid obtained from the peritoneal cavity of the mouse from 12 days after inoculation of the cells. Monoclonal antibodies reacted with purified antibodies
HBeAg v radiolmunologickém stanovení až po ředěni 1 : 10 . Bylo získáno 5 ml ascitlcké tekutiny e obsahem imunoglobulinu 12 mg/ml.HBeAg in radioimmunoassay only after dilution 1:10. 5 ml of ascites fluid with an immunoglobulin content of 12 mg / ml was obtained.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS865404A CS268404B1 (en) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | Mousy b-lymphocyte hybridome production line hbs-02 author's certificate 36/86 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS865404A CS268404B1 (en) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | Mousy b-lymphocyte hybridome production line hbs-02 author's certificate 36/86 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS540486A1 CS540486A1 (en) | 1989-07-12 |
| CS268404B1 true CS268404B1 (en) | 1990-03-14 |
Family
ID=5398887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS865404A CS268404B1 (en) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | Mousy b-lymphocyte hybridome production line hbs-02 author's certificate 36/86 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS268404B1 (en) |
-
1986
- 1986-07-16 CS CS865404A patent/CS268404B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS540486A1 (en) | 1989-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5204095A (en) | Monoclonal antibodies against hepatitis B virus | |
| EP0038642B1 (en) | A monoclonal antibody against hepatitis b and its production, a hybridoma producing the monoclonal antibody and compositions containing it, the propagation of the hybridoma and the monoclonal antibody for use as an antiviral agent against hepatitus b and in isolating hepatitus b surface antigen from a sample | |
| CN112877296A (en) | Anti-phenacetin monoclonal antibody hybridoma cell strain AD and preparation method and application thereof | |
| WO1983001739A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| CS268404B1 (en) | Mousy b-lymphocyte hybridome production line hbs-02 author's certificate 36/86 | |
| CS268403B1 (en) | Mouse b-lymphocytar hybridome production series hbs-01 a0 35/86 | |
| WO1988000240A1 (en) | Preparation of monoclonal antibodies | |
| Groves et al. | A bovine monoclonal antibody to oestrone/oestradiol prepared by a (murine× bovine)× bovine interspecies fusion | |
| EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| FI93469B (en) | A method for producing a hybridoma cell line and an antibody produced by it | |
| WO1986003498A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| EP0093776A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
| US5849539A (en) | Thymidine kinase-lacking ouabain-resistant chicken hybridoma | |
| EP0186371A2 (en) | Monoclonal antibodies specific to antigens of Hepatitis B virus | |
| CS235850B1 (en) | Mousy lymphocytare hybridome producing anti-matter against human transferine | |
| JPH01160494A (en) | Monoclonal antibody against human immunodeficiency virus and method for producing the monoclonal antibody | |
| CS228859B1 (en) | Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance against human erythrocytic group a-antigene | |
| CS255642B1 (en) | Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus | |
| CS253336B1 (en) | Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12 | |
| CS240846B1 (en) | Mouse lymphatic hybridom img czas in-%4 | |
| CS228860B1 (en) | Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance a | |
| CS270543B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu 2-l/5 | |
| JPH01500722A (en) | Production of antibodies against pancreatic α-amylase and use for diagnosis | |
| CS253240B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridome hbs1c6b12 | |
| CS265495B1 (en) | Mouse lymphocytar hybridome producing antibodies against"core" antigen of b-hepatitis |