CS259211B1 - Spůsob výroby amfolytických pufrov - Google Patents

Description

Vynález sa týká spósobu pripravy amfolytických pufrov, vhodných pre elektromigračné metody, ako izoelektrické fokusovánie.

Doteraz sa pre izoelektrické fokusovánie a iné elektromigračné metodiky ako amfolytické pufre používali syntetické látky. Příprava týchto látok je velmi zložitá a nákladná. Préto sú uvedené výrobky tažko dostupné a vylučujú ich použitie v preparatívnom meradle pri priemyselnom použití. Výroba amfolytických pufrov podía ČSSR AO č. 187 104 má tú nevýhodu, že východzia surovina obsahuje až 40 % solí, čo komplikuje spósob výroby, pretože vyžaduje odsolovanie gélovou filtráciou.

Uvedené nevýhody odstraňuje vypález, ktorého podstata spočívá v tom, že bielkoviny získané z odstrodeného mlieka Standardného zloženia sa podrobia minerálnej hydrolýze kyselinou chlorovodíkovou. Táto sa zo vzniknutého roztoku odstráni odpařením a zostávajúcim roztokom sa po přefiltrovaní naplní autofokusačná aparatúra, kde pósobením jednosměrného prúdu sa získá gradient pH. Zmiešaním vybraných frakcií sa ziskavajú amfolytické pufre požadovaného rozsahu.

Vynález umožňuje jednoduchú výrobu velkého množstva amfolytických pufrov so štandardnými vlastnostami, bez obsahu sacharózy pre analytické i priemyselné použitie izoelektrickej separácie, expedovatelné aj v lyofilizovanom stave, čo predlži expiračnú dobu pufrov.

Přiklad

K príprave amfolytických pufrov z odstředěného mlieka s maximálnym obsahom tuku 0,05 objem, percent, ktoré obsahuje 26 až 30 g kazeínu v litri. Prvým krokom je izolácia mliečnej bielkoviny vyzrážaním v izoelektrickom bode pri pH 4,7 jednomolárnym roztokom 4 -2 kyseliny chlorovodíkovej. Po naslednom odstředění pri 10 m.s 20 minút sa na izolovaný kazeín pósobi šesťmolárnym roztokom kyseliny chlorovodíkovej v pomere 1:50 k množstvu bielkoviny, ktorá sa dalej hydrolyzuje pod spatným chladičom pri teplote 105 °C 40 hodin.

Do roztoku sa přidává 10 ml/1 kyseliny mravenčej, aby sa zabránilo vzniku huminových látok, ktoré sú produktami rozkládájúceho sa tryptofánu v přítomnosti oukorných zložiek.

Préd započetím hydrolýzy sa do roztoku přidává 1 % hmot. aktivného uhlí, ktorý už behom hydrolýzy viaže na seba vačšinu látok obsahujúcich ultrafialové světlo a roztok vyčiruje. Po skončení hydrolýzy sa roztok ochladí na teplotu 20 °C a po filtrácii-sa z filtrátu odpaří kyselina chlorovodíková za zníženého tlaku najvhodnéjšie v rotačnom odparováku pri teplote 40 °C tak, aby výsledný roztok vykazoval měrnou elektrickou vodivost 2 až 3 mS.cm Potom sa roztok naleje do autofokusera, kde prebieha autofokusácia pri 4 °C po dobu 48 až 72 hodin tak, aby příkon elektrického prúdu nepřesahoval 3 W. NapStie sa postupné zvyšuje z počiatočných 100 W až na 100 W. Po ukončení autofokusovánia, kéd klesne prúd pod 0,5 mA sa z fokusačnej aparatúry zhromaždia tie frakcie, ktoré sú najbližšie v gradiente pH k hodnotám, žiadúcim po projekcii potřebného rozsahu pH pre výsledný produkt.

Zvolená zmes sa podía potřeby móže ešte raz refokusovať. Výsledná vodivost pufrov sa upraví na 1 mS.cm a obsah sušiny na 40 % hmot. Získaný produkt sá pre izoelektrickú fokusáciu použije v 2 až 3 objemových % koncentrácii v pomere k médiu.

Vynález móže nájsť široké praktické použitie vo výskumných pracoviskách, v priemysle farmaceutiokorn, chemickom, potravinárskom a pri všetkých využitiach elektromigračných technik.

Claims (1)

1. Spósob výroby amfolytických pufrov na báze bielkovín vyznačujúci sa tým, že odstředěné mlieko sa hydrolyzuje kyselinou chlorovodíkovou, výhodné 6 mol kyselinou chlorovodíkovou, následné odpařuje do hodnoty vodivosti roztoku 2 až 3 mS.cm a roztok sa autofokusuje aspoň 48 hod.