CS255234B1 - Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against common antigen of human acute lymphoblastic leucemia - Google Patents
Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against common antigen of human acute lymphoblastic leucemia Download PDFInfo
- Publication number
- CS255234B1 CS255234B1 CS867009A CS700986A CS255234B1 CS 255234 B1 CS255234 B1 CS 255234B1 CS 867009 A CS867009 A CS 867009A CS 700986 A CS700986 A CS 700986A CS 255234 B1 CS255234 B1 CS 255234B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cells
- acute lymphoblastic
- antigen
- mouse
- antibody
- Prior art date
Links
- 101000980463 Treponema pallidum (strain Nichols) Chaperonin GroEL Proteins 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 title description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 25
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 102100036774 Afamin Human genes 0.000 description 9
- 101000928239 Homo sapiens Afamin Proteins 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004524 haematopoietic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000000512 proximal kidney tubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti společnému antigenu lidských akutních lymfoblastických leukémií (CALL), uloženého ve sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV pod označením IMG CZAS NEM-78. Monoklonální protilátka hybridomu MEM-78 je vhodná pro použití v enzymoimunologické analýze nebo nepřímé imunofluorescenční analýze buněk s exprimovaným společným antigenem lidských akutních lymfoblastických leukémií.The present invention relates to mouse lymphocytic antibody-producing hybridoma a common human acute antigen lymphoblastic leukemia (CALL) stored in the collection of hybridomas \ t genetics of the CSAV under the designation IMG CZAS NEM-78. MEM-78 hybridoma monoclonal antibody it is suitable for use in enzyme immunoassays analysis or indirect immunofluorescence analyzing the cells with the expressed common antigen human acute lymphoblastic leukemia.
Description
Vynálezu se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzi buňky myší myelomové linie Sp2/0-Agl4 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkujícího protilátku proti společnému antigenu lidských akutních lymfoblastických leukémií (CALLA - common acute lymphoblastic leukemia antigen). Společný antigen lidské akutní lymfoblastioké leukémie byl poprvé popsán Greaves M. S., Brown G., Rapson N. T., Glister,T. A. (Antisera to acute lymphoblastic leukemia cells. Clin. Immuno-path. 4:67, 1976) a je dnes považován za standardní imunologický znak platný pro diagnózu tohoto onemocnění.The invention relates to a novel hybridoma, i.e. a hybrid unicellular organism, constructed by fusing a mouse myeloma cell line Sp2 / 0-Ag14 and a mouse spleen lymphoid cell producing an antibody against a common antigen of human acute lymphoblastic leukemia (CALLA). The common antigen of human acute lymphoblastic leukemia was first described by Greaves M.S., Brown G., Rapson N.T., Glister, T. A. (Antisera to acute lymphoblastic leukemia cells. Clin. Immuno-path. 4:67, 1976) and is now considered a standard immunological trait valid for the diagnosis of this disease.
Protilátky proti antigenům přítomným na určité populaci buněk se nedají připravit imunizací zvířat buněčnou suspenzí lymfocytů nebo membránovou frakcí, tj. konvenční imunizací. Konvenční imunizace má neodstranitelnou nevýhodu v tom, že séra obsahují protilátky proti mnoha membránovým antigenům, z nichž některé jsou přítomny na více typech buněk; séra proto nelze použit k jemnému rozlišení buněčných typů a tříd. Příprava čistého antigenu bez kontaminace jinými membránovými komponentami k imunizaci je pracná a většinou neúspěšná.Antibodies against antigens present in a particular cell population cannot be prepared by immunizing animals with a cell suspension of lymphocytes or membrane fraction, i.e., conventional immunization. Conventional immunization has the unavoidable disadvantage that sera contain antibodies against many membrane antigens, some of which are present on multiple cell types; sera cannot therefore be used to subtly differentiate cell types and classes. Preparation of pure antigen without contamination with other membrane components for immunization is laborious and mostly unsuccessful.
Nevýhody konvenčních sér proti membránovým antigenům v principu odstraňuje použití hybridové technologie. Produkt hybridomu - monoklonální protilátka - je zaměřena vždy proti jediné antigenni determinatně. Je-rli konstruován dostatečně velký soubor hybridomů, je pravděpodobné, že se z něho podaří vyhledat hybridom syntetizující protilátku, která rozeznává antigenni determinantu charakterizující určitý typ lymfocytů nebo leukemických buněk.In principle, the use of hybrid technology eliminates the disadvantages of conventional sera against membrane antigens. The hybridoma product - a monoclonal antibody - is always directed against a single antigenic determinant. If a sufficiently large set of hybridomas is constructed, it is likely that a hybridoma synthesizing an antibody that recognizes the antigenic determinant characterizing a particular lymphocyte or leukemic cell type is likely to be found.
Je řada antigenů (diferenciačních antigenů) na leukemických buňkách, které jsou asociovány s určitým stadiem diferenciace, při kterém je vývoj leukemické buňky zastaven.There are a number of antigens (differentiating antigens) on leukemic cells that are associated with a particular stage of differentiation at which the development of the leukemic cell is stopped.
Tyto antigeny se liší molekulární hmotností, chemickou strukturou a fyziologickou funkcí.These antigens differ in molecular weight, chemical structure and physiological function.
K detailní analýze antigenů na leukemických buňkách je nezbytně nutné mít protilátky proti co největšímu počtu diferenciačníoh antigenů. Podle publikovaných výsledků (Kung,For detailed analysis of antigens on leukemic cells, it is essential to have antibodies against as many differentiation antigens as possible. According to published results (Kung,
P. C., Talie, M. A., DeMaria, Μ. E., Butler, M. S., Lifter, J., Goldstein, G.; Strategies for generating monocloňal antibodies defining human T-lymphocyte differentiation antigens. Transplant. Proč. 12, Suppl. 1:141-146, 1980) se dá soudit, že lze připravit monoklonální protilátky specificky detegující různé antigeny na povrchu leukocytů nebo leukemických buněk.P. C., Talie, M.A., DeMaria, Μ. E., Butler, M.S., Lifter, J., Goldstein, G .; Strategies for generating monoclonal antibodies defining human T-lymphocyte differentiation antigens. Transplant. Why. 12, Suppl. 1: 141-146, 1980), it can be concluded that monoclonal antibodies specifically detecting various antigens on the surface of leukocytes or leukemic cells can be prepared.
Podstatného pokroku v diagnostice lidských leukémií, projevujícího se vyšší spolehlivostí analytického výsledku, se dosáhne, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti společnému antigenu přítomnému na lidských buňkách akutních lymfoblastických leukémií, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1083, pod označením IMG CZAS MEM-78.Substantial progress in the diagnosis of human leukemias, which results in higher reliability of the analytical result, will be achieved if a hybridoma producing a monoclonal antibody against a common antigen present on human cells of acute lymphoblastic leukemia is available in the Hybridoma Collection of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences. Vídeňská No. 1083, under the designation IMG CZAS MEM-78.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St.Said hybridoma was obtained by a method known from the literature (Fazekas de St.
Groth, S., ScheijHegger, D.: Production of mcnoclonal antibodies: Stratégy and tactics,Groth, S., ScheijHegger, D .: Production of mcnoclonal antibodies: Strategies and tactics,
J. Xmmunol. Meth;, 35:1-21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře, 266:550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c imunizovaných buňkami leukemické linie NALM-6. Na membráně těchto buněk je silně exprimován antigen společný pro buňky akutní lymfoblastické leukémie.J. Xmmunol. Meth., 35: 1-21, 1980; Galfré, G., Howe, SC, Butstein, GW, Howard, JC: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell line, Nature, 266: 550, 1977) by cloning a collection of hybrid cells obtained from the spleen of mice BALB / c strains immunized with NALM-6 leukemia cell cells. An antigen common to acute lymphoblastic leukemia cells is strongly expressed on the membrane of these cells.
výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s lidskými buňkami akutní lymfoblastické leukémie. Hybridom MEM-78 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkována hybridomem MEM-78, reaguje se společným antigenem buněk akutní lymfoblastické leukemie a není třeba se zbavovat protilátek blastních.the advantage of the hybridoma is that it produces a homogeneous monoclonal antibody that is capable of specifically reacting with human acute lymphoblastic leukemia cells. The MEM-78 hybridoma can be cultured in vitro in animal cell media and is adapted for growth in vivo in the peritoneal cavity of BALB / c mouse mice. From cans stored in liquid nitrogen, antibody production can be started without additional antigen. The antibody produced by the hybridoma MEM-78 reacts with a common antigen of acute lymphoblastic leukemia cells and does not need to be rid of blast antibodies.
PříkladExample
Za účelem pomnožení hybridových buněk in vivo bylo aplikováno 3 x 106 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovacých buněk, byla myš 10 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně).To expand the hybrid cells in vivo, 3 x 10 6 cells were injected into the peritoneal cavity of mice. To improve attachment of the delivery cells, the mouse was treated with paraffin oil (0.5 ml intraperitoneally) 10 days prior to transfer of the hybridoma cells.
Po 22 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš uhubena a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 3 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 10 mg/ml imunoglobulinu.After 22 days of hybridoma growth in the peritoneal cavity, the mouse was exterminated and the produced ascites fluid was collected. A total of 3 ml of ascites fluid containing 10 mg / ml of immunoglobulin was obtained.
Monoklonální protilátka reagovala s kontinuálními lidskými leukemickými liniemi s exprimovaným společným antigenem lymfoblastické leukezmie v nepřímém enzymoimuňologickém a imunofluorescenčním testu. Lymfocyty, mónocyty a erytrocyty. s protilátkou nereagovaly, granulocyty reagovaly s protilátkou velmi slabě. Specificita protilátky je identická s monoklonální protilátkou ALB2 (Boucheix C., Perrot J. Y., Mirshahi M., Giannoni F.,The monoclonal antibody reacted with human leukemia continuous lines expressing an antigen common lymphoblastic leukemias from Mie indirect enzyme immunoassay, and immunofluorescence assay. Lymphocytes, monocytes and erythrocytes. granulocytes reacted very weakly with the antibody. The specificity of the antibody is identical to the monoclonal antibody ALB2 (Boucheix C., Perrot JY, Mirshahi M., Giannoni F.,
Billard M., Bernadou M., Rosenfeld C. : A new ser of monoclonal antibodies against acute lymfoblastic leukemia. Leukemia Research 9:597-604, 1985), jak bylo prokázáno opakovanými paralelními stanoveními na následujících kontinuálních lidských leukemických liniích:Billard M., Bernadou M., Rosenfeld C.: A new ser of monoclonal antibodies against acute lymphoblastic leukemia. Leukemia Research 9: 597-604, 1985) as demonstrated by repeated parallel assays on the following continuous human leukemia lines:
Positivní: Reh, KM-3, NALM, Ráji, DaudiPositive: Reh, KM-3, NALM, Paradise, Daudi
Negativní: MOLR-4, CEM, HL-60, U937Negative: MOLR-4, CEM, HL-60, U937
Protilátka MEM-78 a ALB2 reaguje také s některými buňkami kostní dřeně a nehemopoeticbuňkami (fetálními buňkami střeva a podocyty. proximálních tubulů ledvin).MEM-78 and ALB2 also react with some bone marrow cells and non-haemopoietic cells (fetal intestinal cells and sub-cells, proximal kidney tubules).
K průkazu, že protilátka MEM-78 rozpoznává společný antigen na povrchu buněk lidské lymfoblastické leukémie bylo použito tří přístupů:Three approaches have been used to demonstrate that MEM-78 recognizes a common antigen on the surface of human lymphoblastic leukemia cells:
a) Monoklonální protilátka MEM-78 precipitovala z metabolicky značených (methioninem 35a) The monoclonal antibody MEM-78 precipitated from metabolically labeled (methionine 35)
S) buněk (Brown J. L., Kato K., Silver J., Nathenson S. G.: Notable diversity in peptide composition of murine H-2K and H-2D alloantigens. Biochemistry 13:3174-3178, 1974) leukemické linie NALM-6 antigen o mol. hmotnosti 100 kDa (za redukujících i neredukujících podmínek), prokázanou pomocí elektroforézy v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného; mol. hmotnost této antigenní frakce odpovídá mol. hmotnosti společného antigenu lidských lymfoblastických leukémií - CALLA.S) cells (Brown JL, Kato K., Silver J., Nathenson SG: Notable diversity in peptide composition of murine H-2K and H-2D alloantigens. Biochemistry 13: 3174-3178, 1974) of leukemia line NALM-6 antigen o mol. mass of 100 kDa (under reducing and non-reducing conditions), demonstrated by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate; mol. the weight of this antigen fraction corresponds to mol. weight of the common antigen of human lymphoblastic leukemias - CALLA.
b) Identita antigenů rozeznávaných protilátkami MEM-78 a ALB2 byla také prokázána izolací příslušného antigenu imunoafinitní chromatografií na imobilizované protilátce MĚM-78 a demonstrací silné reaktivity tohoto antigenu s protilátkou ALB2. Tento průkaz byl proveden následovně: částečně vyčištěná protilátka MEM-78 byla navázána na CNBr-Sepharosu 4B (Pharmacia, Uppsala, Švédsko) (5 mg/ml). Buňky leukemické linie NALM-6 byly solubilizovány v roztoku obsahujícím detergent NP-40 (1 %) a získaný extrakt byl nanesen na kolonku Sepharosy 4B s kovalentně navázanou protilátkou MEM-78. Po důkladném promytí byl specificky adsorbovaný antigenem vymyt roztokem 2% dodecylsulfátu sodného (SDS) a získaný vzorek analyzován elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS.b) The identity of the antigens recognized by the MEM-78 and ALB2 antibodies was also demonstrated by isolating the respective antigen by immunoaffinity chromatography on immobilized antibody ME-78 and demonstrating the strong reactivity of this antigen to the ALB2 antibody. This detection was performed as follows: the partially purified MEM-78 antibody was bound to CNBr-Sepharose 4B (Pharmacia, Uppsala, Sweden) (5 mg / ml). NALM-6 leukemia cell cells were solubilized in a solution containing NP-40 detergent (1%) and the extract obtained was applied to a Sepharose 4B column with a covalently bound MEM-78 antibody. After thorough washing, the specifically adsorbed antigen was eluted with 2% sodium dodecyl sulfate (SDS) and the sample was analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of SDS.
Po skončení elektroforézy byly separované proteiny elekroforeticky převedeny na nitrocelulózovou membránu (Towbin, H., Stachelin, T., Gordon, J.: Electrophoretic transfer of proteine from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: proceduře and some applications. Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 76:4350-4354, 1979) a detěgovány nepřímým enzymoimunologickým testem s využitím příslušné monoklonální protilátky a prasečí antimyší protilátky konjugované s peroxidázou (OSOL, Praha). Jak protilátka MEM-78, tak ALB2 reagovaly silně s izolovaným antigenem.After electrophoresis, the separated proteins were electrophoretically converted to a nitrocellulose membrane (Towbin, H., Stachelin, T., Gordon, J .: Electrophoretic Transfer of Proteins from Polyacrylamide Gels to Nitrocellulose Sheets: Procedure and Some Applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4350-4354, 1979) and detected by an indirect enzyme immunoassay using the appropriate monoclonal antibody and porcine anti-mouse antibody conjugated to peroxidase (OSOL, Prague). Both MEM-78 and ALB2 reacted strongly with the isolated antigen.
c) Identita' antigenů rozpoznávaných protilátkami MEM-78 a ALB2 byla prokázána tak, že antigen reagující s protilátkou MEM-78 byl nejprve přemístěn k jednomu pólu leukemických buněk NALM-6, tzv. vytvoření čepiček (capping) s následným pohlcením antigenu do nitra většiny buněk a pak byla testována reaktivita takto pozměněných buněk s protilátkou ALB2.c) The identity of the antigens recognized by the MEM-78 and ALB2 antibodies was demonstrated by first moving the antigen reactive with MEM-78 to one pole of NALM-6 leukemic cells, the so-called capping followed by uptake of the antigen into most cells and then reactivity of the altered cells with ALB2 was tested.
Bylo zjištěno, že po odstraněni společného antigenu akutních lymfoblastických leukémií (protilátkou MEM-78) vymizí také schopnost NALM-6 buněk vázat protilátku ALB2, zatímco reaktivita s protilátkou nepříbuzné specifičnosti B2M-01 (Hilgert, I., Hořejší, V., Krištofová, H.: The use of murine monoolonal antibody B2M-01 for detection and purifioation of human ^^-microglobulin. Pol. biol. (Praha) 30:369-376, 1984) se nezmění. Tento test byl prováděn tak, že NALM-6 buňky byly indukovány 30 min při 20 °C v roztoku protilátky NEM-78 a poté 30 min při 37 °C s prasečí protilátkou proti myšímu imunoglobinu. S takto připravenými buňkami byl proveden běžný nepřímý imunofluorescenční test, tj. inkubace s protilátkami NEM-78, ALB2, B2M-01 a ve druhém kroku s prasečím antimyším imunoglobinem značeným fluoresoeinisóthiokyanátem. NALM-6 buňky byly před inkubací s následující protilátkou promyty vždy fyziologickým roztokem.It was found that the removal of the common antigen of acute lymphoblastic leukemias (MEM-78 antibody) also abolishes the ability of NALM-6 cells to bind ALB2, while reactivity with antibody of unrelated specificity B2M-01 (Hilgert, I., Hořejší, V., Krištofová, H.: The use of murine monoolonal antibody B2M-01 for detection and purification of human ^^ - microglobulin (Pol. Biol. (Prague) 30: 369-376, 1984) will not change. This assay was performed by inducing NALM-6 cells for 30 min at 20 ° C in a NEM-78 antibody solution and then for 30 min at 37 ° C with a porcine anti-mouse immunoglobin antibody. The cells thus prepared were subjected to a conventional indirect immunofluorescence assay, i.e. incubation with NEM-78, ALB2, B2M-01 antibodies and in a second step with porcine anti-mouse immunoglobin labeled with fluorescein isothiocyanate. NALM-6 cells were washed with saline before incubation with the following antibody.
Buňky hybrid'mu NEM-78 mají ultrastrukturní obraz typických myelomových buněk.NEM-78 hybrid cells have an ultrastructural pattern of typical myeloma cells.
In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM), pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označované jako RPMI, Ostav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomu MEM-78 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05 mM), pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 20 hod. a 5 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 92.· Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgGl s lehkými řetězci typu kapa, její isoelektrický bod je pH 6,7 až 6,9.They grow in vitro as semi-suspension cultures. The basic culture medium is Eagle's minimum essential medium with Hanks salt mixture supplemented with non-essential amino acids, L-glutamine (3mM), sodium pyruvate (1mM). This medium (referred to as RPMI, the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences) is supplemented with penicillin, streptomycin, gentamycin, 2-mercaptoethanol (0.05 mM), HEPES buffer (10 mM) and inactivated bovine serum for the cultivation of MEM-78 hybridoma (Bioveta, Ivanovice). in Haná, 10%). The hybridoma is cultured at 37 ° C. The mean generation time is 20 hours and 5 months after construction, the modal number of chromosomes was 92. · The antibody produced is monoclonal immunoglobulin of the IgG1 subclass with kappa light chains, its isoelectric point is pH 6.7 to 6.9.
Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem MEM-78 reaguje se společným antigenem lymfoblastioké leukémie. Hybridom MEM-78 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti buňkám lidské lymfoblastioké leukémie v analytických metodách. Monoklonální protilátka hybridomu MEM-78 může být využita pro klasifikaci akutních lymfoblastických leukémií při klinické diagnostice ve zdravotnických zařízeních. Monoklonální protilátka MEM-78 může být využita také v transplantační terapii k odstranění leukemickýoh buněk persistujících v autologních buňkách kostní dřeně u pacientů s akutní lymfoblastickou leukémií.The monoclonal antibody produced by the hybridoma MEM-78 reacts with a common antigen of lymphoblastic leukemia. The MEM-78 hybridoma can be industrially used as a source of monoclonal antibody against human lymphoblastic leukemia cells in analytical methods. The MEM-78 hybridoma monoclonal antibody can be used to classify acute lymphoblastic leukemias in clinical diagnosis in healthcare settings. The monoclonal antibody MEM-78 can also be used in transplantation therapy to remove leukemia cells persisting in autologous bone marrow cells in patients with acute lymphoblastic leukemia.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867009A CS255234B1 (en) | 1986-09-30 | 1986-09-30 | Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against common antigen of human acute lymphoblastic leucemia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867009A CS255234B1 (en) | 1986-09-30 | 1986-09-30 | Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against common antigen of human acute lymphoblastic leucemia |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS700986A1 CS700986A1 (en) | 1987-06-11 |
| CS255234B1 true CS255234B1 (en) | 1988-02-15 |
Family
ID=5418412
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS867009A CS255234B1 (en) | 1986-09-30 | 1986-09-30 | Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against common antigen of human acute lymphoblastic leucemia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS255234B1 (en) |
-
1986
- 1986-09-30 CS CS867009A patent/CS255234B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS700986A1 (en) | 1987-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Janeway Jr et al. | Monoclonal antibodies specific for Ia glycoproteins raised by immunization with activated T cells: possible role of T cellbound Ia antigens as targets of immunoregulatory T cells. | |
| JPS62500027A (en) | A chemically synthesized polypeptide that produces antibodies immunoreactive with Epstein-Barr virus nuclear antigens | |
| Cullen et al. | The distribution of alloantigenic specificities of native H-2 products | |
| Andersen et al. | Studies on the specificity of smooth-muscle antibodies | |
| CN117761297A (en) | Preparation method of CD64 flow type antibody marked fluorescent protein | |
| US4845198A (en) | Hybridoma antibody which binds IL-2 receptor | |
| US5413910A (en) | Measuring non-dystrophin proteins and diagnosing muscular dystrophy | |
| JP3506252B2 (en) | HTLV-I/HTLV-II Analysis and Methods | |
| CS255234B1 (en) | Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against common antigen of human acute lymphoblastic leucemia | |
| EP0174874A2 (en) | Hybrid cell line producing monoclonal antibody cytolytic to trichomonas vaginalis | |
| US5430129A (en) | Purified, native dystrophin | |
| CS253687B1 (en) | Mouse lymphocytaric hybridome img czas mem-57 | |
| CS255235B1 (en) | Mouse lymphocytaric hybridom producing substance against human transferine receptor | |
| CS248382B1 (en) | Mousy lymphocite hybridome img czas mem-18 | |
| EP0143367A2 (en) | Method for production of monoclonal antibodies for cancer diagnosis and therapy | |
| CS244396B1 (en) | Mousy lymphocytoid hybridome img czas mkm-32 | |
| Tax et al. | An antigen cross-reactive with gp52 of mammary tumor virus is expressed on a B cell subpopulation of mice. | |
| US5238824A (en) | Hybridomas and monoclonal antibodies therefrom reactive toward antigens from edwardsiella ictaluri | |
| CS252450B1 (en) | Mousy lymphocytar hybridome img hl-4% | |
| JPH03112485A (en) | Hla-c gene and dna probe, and transformant cell | |
| CS243879B1 (en) | Mousy lymphocytoid hybridom img-czas hl-38 | |
| JP2948594B2 (en) | Monoclonal antibody | |
| CS264752B1 (en) | Mouse lymphocytaric hybridom img czasmem-31 | |
| Sullivan et al. | Genetic control of the immune response to human adult haemoglobin (HbA1) and sickle cell haemoglobin (HbS) | |
| CS244200B1 (en) | Mousy lymphocytoid hybridome img czas mkm-12 |