CS254937B1 - Bivalentná vakcína proti nákaziivéinu chlamýdiovému a paratýfovému zmeíaniu oviec a sposob jej výroby - Google Patents

Description

254937

Vynález sa lýka bivalentnej vakcíny pro-ti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfo -vému zmetaniu oviec s olejovým solvens asposobu jej přípravy. V sňvislosti s budová-ním podnikov s velkou koncentráciou oviecsú nutné účinné preventivné opatrenia předinfekčnými chorobami postihujúcimi tentodruh zvierat. Tieto dve nákazy, ktoré patríamedzi zoonózy, vyvolávaje u dospělých ov-cí aborty, u jahniat septické formy ochorenia s nasledujúcimi úhynmi. Chlamydia psit-taci naviac vyvolává u baranov orchitídy, epididymitídy a vesikulitídy, pričom plemen-ný baran vylučuje spennou virulentně baktérie Chl. psittaci. Chlamydia psittaci před-stavuje jedného z dvoch reprezentantov ro-du Chlamydia, pričom niektoré kmene savyznačujú výraznou afinitou ku gravidnémuuteru (STORZ, J.: Chlamydia and Chlamydia-Induced Diseases, Charles C., Thomas Pub-lisher, Springfield, Illinois, USA, 1971, s. 171až 207 j, kde vyvolávajú zápal placenty, čo-ho dósledkom je u vačšiny infikovanýchzvierat potrat (STAMP, J. T. a kol.: Enzooticabortion in ewes. I. Transmission of the di-sease. Vet. Rec., 62, 1950, s. 251—254; TRÁV-NIČEK, M. a kol.: Veterinářství, XXVIII,1978, č. 12, s. 541). Ekonomická závažnostchlamýdiových aborlov je vysoká. V čerstvoinfikovaných stádach muže abortovať 56,9 %gravidných bahníc (WACHENDORFER, G.,VALDER, W. A.: Der Praktische Tierarzt,1976, č. 7, s. 422—426) resp. až 80 % bah-níc (HIEPE, Th.: Schafkrankheiten, VEBGustav Fischer Verlag Jena, 1970, s. 119).Živonarodené jahňatá od infikovaných ma-tiek sa vyznačujú nízkou životaschopnos-ťou, váčšinou hynú do 48 hodin, resp. trpiana pneumónie, polyartrítídy a keratokon-juktivitídy. Kmene Chlamydia psittaci, kto-ré vyvolávajú aborty u oviec, móžu vyvolataborty tiež u gravidných žien (JOHNSON,W. A. a kol.: Brit. Med. J. Febrary, 1985,290, s. 592—594), resp. systémové a orgá-nové onemocnenia (atypická pneumónia,tromboflebitídyť predovšetkým u profesio-nálně exponovaných pracovníkov (Surveil-lance zoonóz, ORNITÓZY, SLOVENSKO, 1978,s, 1—6, vydává Komisia vlády SSR pre ko-ordináciu práce na úseku boja proti ocho-reniam přenosným zo zvierat na l'udí). Sal-monella abortus ovis vyvolává u oviec pa-ratýfové zmetanie, pričom v infikovanomstádě móže abortovať 40—60 % oviec (VRZ-GULA, L. a kol.: Choroby oviec, Příroda, Bra-tislava, 1973, s. 21; HIEPE, Th.: Schafkrank-heiten, VEB Gustav Fischer Verlag Jena,1970, s. 142). V dosledku komplikaci! po a-borte (retencia sekundín, endometritídy) u-hynie v stádě až 5 % dospělých oviec. Ná-kaza postihuje aj narodené jahňatá, ktoréhynú na sepsu. Nakazit sa móže aj člověk.V súčasnej době sa v ČSSR na prevenciu in-fekčných potratov oviec vyrába monovalent-ná chlamýdiová vakcína bez adjuvansu akoaj vakcína proti paratýfovému nákazlivémuzmetaniu kobýl a oviec. Jedná sa o bujóno- vá kultúru dvoch bakteriálnych kmeňov Scl-monella abortus equi a Salmonella abortusovis, inaktivované teplom a konzervovanéfenolom. Vakcína je bez adjuvans a služi kochrannému očkovaniu chovných kobýl aoviec proti paratýfovému zmetaniu. Vakcínyproti chlamýdiovému zmetaniu oviec sa vy -rábajú v nasledujúcich európskych štátoch:Maďarsko — firma Phylaxia vyrába mono·valentnú vakcínu s aluminium hydroxyd gn-lom. Vakcína v dávke 2 ml s. c. sa používána prevenciu chlamýdiových abortov oviec.Francúzsko — firma IST (Institut de Séro-thérapie de Toulouse) vyrába vakcínu Chinmystan. Jedná sa o monovalentnú vakcínus olejovým adjuvans, ktorá sa používá naprevenciu chlamýdiových infekci! υ ovinev dávke 2 ml s. c. a u hovádzieho dobytkav dávke 5 ml s. c. Anglicko — firma Wellco-me vyrába monovalentnú vakcínu s olejo-vým adjuvans, určenú na prevenciu chlamý-diového abortu oviec v dávke 1 ml s. c. NOR— z iiterárnych údajov je známe (VALDER, A., WACHENDORFER, G.: Untersuchungenzur Wirksamkeit der Vakzination gegen denChlamydien aborí des Schafer, Deutsch.Tierárztl. Wschr., 82, 1975, 6, s. 220 -225),že v NDR sa experimentálně použila raono-valentná chlamýdiová vakcína bez adjuvansvyrobená v laboratórnych podmlcnkach.Proti paratýfovému zmetaniu oviec sa vyrá-ba monovalentná vakcína v NDR a NSR,pričom v obidvoch případ och sa jedná o bu-júnovú kultúru kmeňov Salmonella abortusovis, umrtvených formalínom bez adjuvans.Používá sa na prevenciu paratýfového zme-tania v dávke 5 a 10 ml s. c. Podlá dostup-ných informácií sa vo svete nevyrába vakcí-na proti nákazlivému chlamýdiovému a pa-ratýfovému zmetaniu oviec s olejovým adju-vansom.

Chlamydia psittaci v organizme ovce vy-volává v gravidnej maternici zápal plodo-vých obalov, dosledkom čoho je přerušeni?spojenia medzi matkou a plodom a násled-né abort. Salmonella abortus ovis vyvolávázápal uteru, celkový septický stav v organižme matky a plodu, čoho dosledkom jeodúmrť plodu a jeho vypúdenie z těla mat-ky.

Zloženie olejového solvens použitého vbivalentnej vakcíne je uvedené v ďalšomtexte na str. 6. Obdobnú receptúru má ajolejové solvens z Biovety Nitra. Přesné zlo-ženie olejových solvens použitých vo vak-cínach firiem Wellcome a I. S. T, tieto fir-my v návodoch na použitie neuvádzajú,resp. ich z komerčných dovodov utajujň. Firma Wellcome popisuje olejové adjuvans po-užité vo svojej vakcíne ako fahký, tekutýparafín, firma I. S, T. len ako olejové ad-juvans.

Podstatou vynálezu je bivalentná vakcínaproti nákazlivému chlamýdiovému a para-týfovému zmetaniu oviec vyznačujúca satým, že obsahuje inaktivované elementárne telieska kmeňa Chlamydia psittaci v množ-stve 50 ,ug na 4 ml vakcíny a inaktivovanébakteriálně telá kmeňa Salmonella abortusovis v množstve minimálně 2X 5,6 .109 mik-róhov na 4 ml vakcíny. Bivalentná vakcínasa vyznačuje tým, že obsahuje kmeň Chla-mydia psittaci CAMP R-24 a kmeň Salmonella abortus ovis CCM 5611, ktoré sú ulo-žené v Sbírce patogenních mikroorganismů,Výzkumný ústav, veterinárního lékařství,Brno, Hudcova 70. Táto bivalentná vakcínasa ďalej vyznačuje tým, že obsahuje zrie-dovač vo formě lipoidného adjuvans puf-rovaný fyziologický roztok a konzervans.Podstatou vynálezu je tiež spósob výrobyvakcíny spočívajúci v tom, že kmeň Chla-mydia psittaci sa pomnožil je na žltkovýchvakoch kuřácích embryí po dobu 4 až 7 dní,po vybratí žítkových vakov následuje inak-tivácia formaldehydom a homogenizácie apo odstředění puriíikácie antígénu éterom.Kmeň Salmonella abortus ovis sa pomno-žuje v masopeptónovom bujóne pri teplote37 °C, potom sa inaktivujo formaldehydoma následné sa zmieša inaktivovaná kulturaCalmonella abortus ovis s adjuvansom a skoncentrovaným antigénom Chlamydia psi-ttaci a po homogenizácii sa rozplňuje. Spó-sob výroby sa vyznačuje tým, že olejovýadjuvans sa zmieša v rovnakom objemovompomere s inaktivovanou kulturou Salmonel-la abortus ovis.

Vakcína podl'a vynálezu je určená k ak-tívnej imunoprofylaxii gravidných oviec akaktívnej imunoprofylaxii plemenných bara-nov. Medzi výhody, ktoré uvedená vakcínaprináša, patří: — súčasné pósobenie proti dvom závažnýminfekčným ochoreniam, ktoré sú radenémedzi zoonózy, — zlepšeme stability vakcína v dósledkupoužitia olejového adjuvans, —- vyššia úroveň chráneno-sti zvierat protiobidvom nákazam v dósledku použitiaolejového solvens, — radikálně zníženie výskytu abortov uoviec, vyvolávaných chlamýdiami a sal-monelami a súčasné zníženie úhynovjahniat do 48 hodin po narodení, — zníženie možnosti traumatizácie gravid-ných oviec, pretože počet manipulácií sozvieratami sa zníži zo 4 monovalentnýchvakcín na 2 u vakcíny bivalentnej, — v porovnaní s nákladmi na výrobu mo-novalentných vakcín, sú náklady na vý-robu bivalentnej vakcíny nižšie.

Vakcína představuje suspenziu inaktivo-vaných elementárnych teliesok Chlamydiapsittaci a inaktivovaných bakteriálnych tielSalmonella abortus ovis v pufrovanom fy-ziologickom roztoku, konzervované formal-dehydom a olejovým zriedovačom. Kompo-nenty na přípravu bivalentnej vakcíny protinákazlivému chlamýdiovému a paratýfové- 6 mu zmetaniu oviec s olejovým adjuvansom: 1. Kmeň Chlamydia psittaci CAMP R-24, i-zolovaný v ČSSR, povodně označenie EPá4/85 Debrad. 2. Kmeň Salmonella abortus ovis CCM 5611izolovaný vo V. Británii, povodně ozna-čenie: NCTC 10241, J. Taylor, CPHL Lon-don. 3. Kuracie embryá 5—7dňové, získané z ná-sadových vajec podl'a ČSN. 4. Pufrovaný fyziologický roztok o pH 7,2,0,25 sacharózový roztok vo fosfátovompufri, 1 M roztok chloridu sodného. A. Pufrovaný fyziologický roztok o pH 7,2 a) příprava fosfátového pufru: 1. 0.15 M roztok hydrofosforečnanusodného (NazHPCH . I2H2O) 53,79 g destilovaná voda 1 000,0 ml 2. 0,15 M roztok dihydrofosforečnanu draselného 20,41 g destilovaná voda 1 000,00 ml

Na dosiahnutie pufru o pH 7,2 zmieša-me roztoky č. 1 a 2 v nasledujúcom po-mere: roztok č. 1 14,3 ml roztok č. 2 5,7 ml 20,0 mlpufru o pH 7,2 b) příprava fyziologického roztoku:

NaC' (chlorid sodný) 8,5 g destilovaná voda 1 000,0 ml

Fyziologický roztok upravujeme pufromaž po dosiahnutie pH 7,2. B. 0,25 M sacharózový roztok vo fosfátovompufrovanom fyziologickom roztoku —příprava: sacharóza 85,0 g pufrovaný fyziol. roztok o pH 7,2 1 000,0 ml C. 1 M roztok chloridu sodného (NaCl) —příprava: chlorid sodný 58,44 g destilovaná voda 1 000,00 ml 5. Streptomycín 200 m. j. na 1 ml pufrova-ného fyziologického roztoku,

Gentamycín 0,2 mg na 1 ml pufrovanéhofyziologického roztoku. 6. Formaldehyd podl’a ČSN (36—38 % roz-tok p. a.) 886236. 254937 7 7. Zrieďovač a solvens — zloženie:

Olej vazelínový medicinálny AI Csl 3 24 000 g

Lanolín Čsl 3 8 000 g

Tween 80 (Polyoxyethylene sorbitanmonooleate, n ca.20) HLB 15,0;d20 1,07 MWca 1 300 1 600 g

Voda redestilovaná 66 400 g

Popis příkladu prevedenia: K namnoženiu Chlamydia psittaci (ele-mentárnych teliesok) sa používájú embryo-nované kuracie vajcia 5—7 dnové. Embryása infikujú 20 % hmot. suspenziou připra-venou zo žilkových vakov infikovanýchkmeňom Chlamydia psittaci v 0,25 M sacha-rózovom pufrovanom fyziologickom roztokuo pH 7,2 do žítkových vakov. Množstvo ino-kula ]e 0,2 až 0,4 ml na 1 embryo. Embryáuhynutá v prvých 3 dňoch vyradzujeme. Em-bryá uhynuté vo 4., 4. resp. 6. dni (na 7.den sa všetky embryá vyberajú) sa spracujú následovně:

Vyberu sa žilkové vaky, ktoré sa odvažia.Připraví sa 20 % hmot. suspenzia žítkovýchvakov s 1 M roztokom NaCl, pričom na kaž-dých 100 m' suspenzie sa přidá 0,5 mlformaldehydu. Materiál sa homogenizuje vmixéri počas 3 minút. Zhomogenizované žlt-kové vaky sa uložia do chladničky pri +4stupňoch Celzia na 72 hodin. Následuje cen-trifugácia pri 15 000 ot./min. po dobu 30minút. Odstráni sa tuk a supernatant. Sediment sa resuspenduje v dostatočnommnožstve fyziologického roztoku (*/2 pfivod-ného objemu) rozmiešaním. Suspenzia sanaleje do deiiaceho lievíka a přidá sa 1,5-násobok objemu éteru. Dobře sa pretrepe auloží sa do chladničky cez noc. Dójde k di-ferenciácii fáz. Používá sa vodná fáza, kto-rá obsahuje elementárne telieska Chlamy-dia psittaci. Zbytky éteru sa odstránia pre-bublávaním vzduchom. Následuje ďalšiacentrifugácia pri 15 000 ot./min. po dobu 30minút. Sediment sa resuspenduje v Ví po-vodného objemu vo fyziologickom roztoku.Suspenzia v deliacom :ieviku sa znova zmie-ša s éterom. Na separáciu jednotlivých vrs-tiev stačia teraz 2—3 hodiny. Následuje vy-bublanie éteru a závěrečná centrifugáciapri 12 00 ot./min. počas 30 minút. Sedimentsa nariedi fyziologickým roztokom tak, abyvznikol fahko zakalený roztok. Z takto na-riedeného antigénu připravíme 3 až 5 rie-dení v pomeroch 1 : 4, 1 : 8, 1 : 16, 1 : 32 a1 : 64. Následuje meranie hodnot extínkciena spektrofotometri pri vlnovej dlžke 420.Antigén sa meria oproti pufrovanému fyzio-logickému roztoku o pH 7,2. Následným vý-počtom za použitia koeficientu pre Chlamy-dia psittaci nastavíme obsah účinnej látkyna 1 mg na 1 ml. Obsah účinnej látky vovakcinačnej dávke — 50 /.íg na 4 ml sa do-siahne následným riedením pomocou sol-vens. Příprava antigénu Salmonella ahortus o- vis. Lyofilizovaný vakcinačný kmeň Salmo-nella abortus ovis sa po otvorení ampulkyrehydratuje v 0,2 ml masopeptonóvého bu-jónu a vyočkuje sa kfučkou na masopepto-nový agar a na Endov agar, kde sa inkubuje 24 hod. pri 37 CC. Na ďalšie pomnožova-nie kmeňa Salmonella abortus ovis sa po-užívá tekutá pomnožovacia půda nasledu-júceho zloženia:

Enzymatický kazeinový hydrolyzát

Imuna 10,0 g

Kyslý kazeinový hydrolyzát 10,0 g Sójový pepton 5,0 g

Chlorid sodný 5,0 g

Destilovaná voda ad 1 000,0 ml Z Endo agaru sa kfučkou prenesle kultu-ra do násad s obsahom 50 ml vyššie popí-sanej tekutej pomuožovacej půdy. Po 6 ho-dlnovej inkubácii pri 37 CC sa násada naoč-kuje do 10 litrových fliaš s obsahom 3 003milllitrov tekutej pomuožovacej půdy zapřísné sterilných podmienok (naliatie cezplameň), ffaše sa po výžíhaní hrdla starost-livo uzavru. Po premiešaní sa kultivuji! 2hodiny staticky pri 37 °C a potom následujesubmerzná kultivácia na třepačko 18 hodinpri 37 °C. Po kultivácii sa urobí odběr vzo-riek z každej kultivačnej ffaše na stanove-nie počtov mikróbov a na kontrolu čistotykultúry. Narastená kultura sa po odberevzoriek inaktivuje formaldehydom v množštve 0,5 ml na 100 ml kultúry po dobu 24hodin pri 37 CC. Stanovenie čistoty kultu -ry sa urobí vyočkovaním na masopsptónovýagar, Endov agar, agar s brilantovou mod-rou a galaktózou. Stanovenie počtu mikró-bov sa robí pomocou spektrofotometra. 1 mlnarastenej kultúry obsahuje minimálně 5,6 .. 109 jedincov Salmonella abortus ovis.

Zmiešanie antigénov Chlamydia psittaci aSalmonella abortus ovis a pridanie olejové-ho solvens. Inaktivovaná kultúra Salmonel-la abortus ovis, ktorá obsahuje v 1 ml mi-nimálně 5,6 . 109 mikróbov sa zinieša s rov-nakým objemom olejového solvens (poměr1 : 1). Na každý liter takto pripravenej vak-cíny sa přidá 12,5 ml koncentrovaného an-tigénu Chlamydia psittaci (obsah účinnejlátky 1 mg v 1 ml) čím sa dosiahne výsled-ná koncentrácia 50 ,ug na 4 ml vakcíny. Vý-sledná koncentrácia antigénov bude v 1vakcinačnej dávke, t. j. v 4 ml nasledovná:

Salmonella abortus ovis 2X 5,6 . 109 mikróbov

Chlamydia psittaci 50 μ%

Kontrola hotovej vakcíny: a) Skúška sterility:

Vakcína sa vyočkuje na krvný agar, En-dov agar a thioglykolátový bujón, ktorépočas 48 hodinovej inkubácii pri 37 °Cmusia ostať sterilnó. 2 5 4 9 3 7 9 b) Skúška inaktívácie:

Vakcína o objeme 0,2 ml sa injikuje dožítkových vakov 5—7 dílových kuřácíchembryí, pričoin v priebehu 5 dní nesmiedojsť k pomnoženiu Chlamydia psittaci.Vakcína sa vyočkuje 2X na šikmý ma-sopeptónový agar, 0,5 % hmot. hovadzíbujón a glukózový agar, ktoré sa inku-bujú 7 dní pri 37 °C a súbežne 10 dní priizbovej teplote. Počas tejto inkubácie 10 nesmie dSjsť k narasteniu Salmonella a-bortus ovis. c) Skúška neškodnosti: 2 králikom sa aplikuje s. c. dvojnásob-ná dávka, t. j. 8 ml vakcíny. Posúdeniepo 10 dňoch. Vakcína musí byť neškod-ná. V mieste aplikácie móže vzniknulreakcia, ktorá behom 14 dní mizne. Ne-smíc byt narušený celkový zdravotnýstav. Doterajšie výsledky:

Králíky

Počet Dávka Sposob podania Dni kusov 123456789 10 6 8 ml s. c. 6 ' 4 ml s. c.

Ovce 8 4 ml s. c. 10 8 ml s. c. neg. neg. neg. neg. dj Skúška neškodnosti je založená na vzo-stupe hladin proti!átok u zdravého krá-líka voči antigénu Chlamydia psitlaci aSalmonella abortus ovis. Králikom sa a-plikuje 4 ml vakcíny s. c. Po 10 dňochsa urobí revakcinácia tou istou dávkou.Po dalších 14 dňoch sa kardiálnou punk-ciou odoberá krv a zisfujú sa hladinyprotilátok. Na detekciu cblamýdiových protilátok používáme metodu reakcievazby komplementu, na detekciu salmo-nelových protilátok metodu pomalejskúmavkovej ag’utinácie. Za účinný po-važujeme antigén, voči ktorému sa vy-tvoria protilátky minimálně v riedení1 : 16, resp. rozďiel proti iniciálnym tií-rom musí byť v priemere 2 riedenia. Do-terajšie výsledky:

Králíky — aplikovaná konipletná vakcína

Králík číslo Dávka Sposob podania Chlamýdlepřed vakc. — protilátkypo vakc. před vakc. po vakc. 1 4 ml s. c. 0 32 0 160 2 4 ml s. c. 0 32 0 80 3 4 ml s. c. 0 32 0 40 4 4 ml s. c. 0 32 0 80

Aplikovaný len chlamýdiový antigén s olejovým adjuvansom — 1 2 ml s. c. 0 32 0 10 2 2 ml s. c. 0 64 0 10 Aplikovaný len salmonelový antig ,én s olejovým a djuvansom — 1 2 ml s. c. 0 8 0 40 2 2 ml s. c. 0 8 0 20 11

Ovce — aplikovaná kompletně vakcína

Ovca číslo Dávka Sposob podania Chlamýdiepřed vakc. 1 4 ml s. c. 16 2 4 ml s. c. 8 3 4 ml s. c. 16 4 4 ml s. c. 16 5 4 ml s. c. 8 6 4 ml s. c. 8 7 4 ml s. c. 16 8 4 ml s. c. 0 9 4 ml s. c. 8 10 4 ml s. c. 16 11 4 ml s. c. 32 12 4 ml s. c. 16 e) Stanovenie pH sa nastaví na 7,0 +0,3. f) Vzhl'ad vakcíny: Vakcína představuje mliečne bielu zakalená olejovitá tekuti-nu bez sedimentu a vločiek.

Vakcína bola pokusné vyrobená a ověře-ná v rámci laboratórneho overovania u krá-likov a oviec (viď vyššie uvedené výsledky).V rámci laboratórneho overovania sa pou-žili vakcinačné výsledky). V rámci labora-tórneho overovania sa použili vakcinačnédávky 2, 4 a 8 ml s. c. kvůli zisteniu znášan-livosti vakcíny a sledovaniu postvakcinač-ných titrov. V priebehu overovania nebolizistené žiadne postvakcinačné reakcie aniu oviec ani u králikov. Vzostup protilátok uoviec voči obidvom antigénom poukazuje nadobrá chránenosť, ktorá vakcína vyvolává.Naviac je možné počítat u chlamýdiovéhoantigénu aj s buňkovou zložkou imunity.Vzostup protilátok u králikov poukazuje navhodnost týchto zvierat pri testovaní áčin-nosti vakcíny. Z čelenžných pokusov bol zatial' urobenýpredpokus na stanovenie dávky pre vlastnučelenž. V predpokuse sa použil homológnykmeň, ktorý bol podaný i. v. v dávke 2 a 4cm3 a s. c. v dávke 2 a 4 cm3. Pokus zatialnie je ukončený, bude pokračovat v najbliž-šom pripášťacom období oviec. V predpoku-se sa sledovali nasledujáce ukazovatele:TRIAS, sérologické vyšetrenie pomocou RVK,hematologické vyšetrenie, Skin-test a kli-nické sledovania. 12 protilátky Salmonelly — protilátky po vakc. před vakc. po vakc. 64 0 40 32 10 40 64 10 20 32 10 20 32 10 40 64 20 40 256 10 40 16 0 20 128 10 80 64 10 40 128 10 80 64 10 40

Klinické overovanie vakcíny proti chla-mýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviecsa vykonávalo podlá metodiky schválenejÚSKVBL v Brně. Vlastně overovanie sa ro-bilo v dvoch chovoch oviec a to na JRD Vel-ký Lipník, okr. Stará Lubovňa a JRD Drie-nov, okr. Prešov. Výsledky overovania sánasledujáce: JRD Vel'ký Lipník, okr. Stará Lubovňa

Biologický pokus na 20 ks oviec vykona-ný 20. 5. 1986. Bola podaná vakcína podlánávodu. Žiadne lokálně resp. celkové změ-ny zdravotného stavu neboli pozorované.Bola podaná dávka 10 ml s. c. Vakclnácia —bolo vakcínovaných 200 bahníc po synchro-nizácii. Vakcinácia sa urobila 28. 5. 1986,sáčasne bol urobený odběr krvných vzoriekna zistenie iniciálnych hladin protilátok u30 ks. Revakcinácia — sa vykonala 18. 6.1986 taktiež u všetkých 200 ks bahníc a sárčasne sa urobil odběr krve od 30 ks indivi-duálně označených zvierat. Ďalšie odběrykrvných vzoriek sa urobili po 2 a 4 mesia-coch po revakcinácii. Výsledky sérologických vyšetření (titre)za použitia KFR a antigénu Chl. psittaci sáuvedené vo zvláštnej Správě o klinickom o-verovaní vakcíny.

Kontrolná skupinu představovalo 312 ksoviec, ktorým bo o podané placebo (adju-vans bez antigénu) a ktorá bola držaná od-delene od pokusnej skupiny. Výskyt abortovv uvedených skupinách bol nasledujáci: 13 234937 14

Počet oviec Počet abortov % Příčina skup. vakc. 200 4 2,0 neinfekčná skup. kontr. 312 27 8,33 Chb psittaci Porovnanie výskytu abortov s minulou sezónou je nasledujúce: Počet oviec Počet abortov % Příčina 1985-86 557 39 7,0 Chl. psittaci 1986-87 312 27 8,33 Chl. psittaci Kontr. skup. 200 4 2,0 neinfekčná Hodnotenio ný 17. 6. 1986. Bola podaná vakcína podT.

Dynamika tvorby protilátok po podaníchlamýdiového antigénu mala výrazný vze-stup po prvej 'átke. Druhá dávka tieto hla-diny čiastočne udržala. Výšky hladin proti-látok u chlamýdiových vakcín však nie jev priamej úměrnosti s protektívnym účin-kom vakcíny, pretože tu zohráva hlavnú ú-lohu buňková zložka imunity. U protilátokvoči antigénu salmonel bol vzestup protilá-tok najvyšší po 1. dávke, kým 2 mesiace porevakcinácii sine zaznamenali mierny vzo-stup.

Samotná vakcína bola znášaná ovcamibez akýchkofvek lokálnych či celkových re-akcií. Případné zdravotně poruchy nesúvi-seli s podáním vakcíny. Výskyt abortov vovakcinovanej skupině a skupině kontrol-ně], resp. v chove v predchádzajúcej sezó-ně svědčí pre kladný efekt po vakcinácii.JRD Drienov, okres Prešov

Biologický pokus na 20 ks oviec vykona- návodu. Žiadne lokálně resp. celkové změ-ny zdravotného stavu neboli pozorované.

Vakcinácia — bolo vakcinovaných 274 ksbahníc po synchronizácii. Vakcinácia sa u-robila 26. 6. 1986, súčasne bol urobený od-běr krvným vzoriek na zistenle iniciálnychhladin protilátok u 30 ks individuálně ozna-čených oviec.

Revakcinácia — sa vykonala 21. 7. 1986 uvšetkých vakcinovaných kusov. Súčasne saurobil odběr krvných vzoriek od 30 indivi-duálně označených oviec. Výsledky sérologických vyšetření (titre)za použitia KFR a antigénu Chl. psittaci súuvedené vo zvláštně] Správě o klinickom o-verovaní vakcíny.

Kontrolou skupinu tvořilo 270 ks oviec,ktorým boto podané placebo (adjuvans bezantigénu) a ktorá bola držaná oddelene odpokusné] skupiny. Výskyt abortov v uvede-ných skupinách bol nasledu]úci:

Počet oviec Počet abortov % Příčina skup. vakc. (okotené) 174 2 1,14 neinfekčná skup. kontr. 270 13 4,81 nezistená inf. etiológia

Porovnáme výskytu abortov s minulou sezónou je nasledujúce:

Počet oviec Počet abortov % Příčina 1985-86 464 26 5,60 Chl. psittaci 1986-87 270 13 4,81 nezistená inf. příčina kontr. skup. 174 2 1,14 neinfekčná Hodnotenie zaznamenali sme žiadne lokálně či celkové

Vzostup protilátok voči antigénu Chl. psit-taci bol výraznější po 2. dávke. Hladiny pro-tilátok po 4 mesiacoch po revakcinácii savýrazné znížili. Protektívny účinok chlamý-diových vakcín je založený predovšetkýmna bunkovej zložke imunity. U protilátokvoči salmonelovému antigénu sme zazname-ná1 i vzostup už po prvek dávke vakcíny.

Vakcína bola znášaná ovcami velmi dob-ré podobné ako v lokalitě Velký Lipník. Ne- reakcie. Zníženie výskytu abortov u vakci-novanej skupiny v porovnaní so skupinoukontrolnou a predchádzajúcou sezónou svěd-čí o protektívnom účinku vakcíny.

Postvakcinačná buněčná imunita sa hod-notila iba na malom súbore zvierat a takvýsledky t. č. nie sú smerodajné. Výsledkytestovania 4 antigénov na modelových zvie-ratách (morča, myš) za použitia Skin-testupodlá FAYE a kol. (1974) sú následovně: vkožnom teste zo štyroch testovaných kme-

Claims (7)

1. 254937 15 ňov najintenzívnejšie reagoval vakcinačnýkmen — šířka indurůcie 6—9 mm, čo před-stavuje 4. stupeň stupnice podl'a Faye. Akokontroly boli použité: 16

   1. Tuberkulínový alergen v množstve 50(Wg·
2. 2. Antigén připravený z neinfikovanéhožítkového vaku. PREDMET

   1. Bivalentná vakcína proti nákazlivémuchlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu o-viec vyznačujťica sa tým, že obsahuje inak-tivované elementárne telieska Chlamydíapsittaci v množstve 50 ^g na 4 ml vakcínya inaktivované bakteriálně telá kmeňa Sal-monella abortus ovis v množstve minimálně2X 5,6 . 109 mikróbov na 4 ml vckcíny aadjuvans v množstve 2 ml na 4 ml vakcíny.

   2. Bivalentná vakcína podlá bodu 1, vy-značujúca sa tým, že obsahuje kmeň Chla-mýdia psittaci CAPM R-24, ktorý v organiz-me ovce vyvolává zápal plodových obalovčoho následkom je abort.
3. 3. Bivalentná vakcína podlá bodu 1, vy-značujúca sa tým, že obsahuje kmeň Sal-monella abortus ovis CCM 5611, ktorý v or-ganizme ovce vyvolává septický stav mat-ky a plodu a jeho odúmrť, čoho následkomje abort.
4. 4. Bivalentná vakcína podlá bodov 1 až 3vyznačujúca sa tým, že obsahuje pufrovanýfyziologický roztok a konzervans a zrieďo-vač vo formě lipoidného adjuvans.
5. 5. Sposob výroby bivalentnej vakcíny pro- YNÁLEZU ti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfo-vému zmetaniu oviec, podlá bodov 1 až 4,vyznačujúci sa tým, že kmeň Chlamýdiapsittaci sa pomnožuje na žítkových vakochkuřácích embryí po dobu 4 až 7 dní, po vy-hřátí žítkových vakov následuje inaktiváciaformaldehydom a homogenizácia a po od-stránení purifikácia antigénu éterom a kmeňSalmonella abortus ovis sa pomnožuje v te-kutej pomnožovacej pode za použitia sub-merznej kultivácie pri teplote 37 °C, potomsa inaktivuje formaldehydom a následné sazmieša inaktivovaná kultúra Salmonella a-bortus ovis s adjuvansom a s koncentrova-ným antigénom Chlamýdia psittaci a po ho-mogenizácii sa rozplňuje.
6. 6. Sposob výroby podlá bodu 5 vyznaču-júci sa tým, že k infekcii 5—7 denných ku-řácích embryí sa používá 10—20 % hmot.suspenzie infikovaných žítkových vakov vdávke 0,2 ml na jedno kuracie embryo.
7. 7. Sposob výroby podlá bodu 5, vyznaču-júci sa tým, že sa olejový adjuvans zmiešav rovnakom objemovom pomere s inaktivo-vanou kultúrou Salmonella abortus ovis. Severografia, n. p. závod 7, Most Cena 2,40 Kčs