CS252746B1 - Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation - Google Patents

Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation Download PDF

Info

Publication number
CS252746B1
CS252746B1 CS861842A CS184286A CS252746B1 CS 252746 B1 CS252746 B1 CS 252746B1 CS 861842 A CS861842 A CS 861842A CS 184286 A CS184286 A CS 184286A CS 252746 B1 CS252746 B1 CS 252746B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
virus
vaccine
medium
cell
feline
Prior art date
Application number
CS861842A
Other languages
Czech (cs)
Slovak (sk)
Other versions
CS184286A1 (en
Inventor
Tomas Zuffa
Juraj Salaj
Jan Zac
Original Assignee
Tomas Zuffa
Juraj Salaj
Jan Zac
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tomas Zuffa, Juraj Salaj, Jan Zac filed Critical Tomas Zuffa
Priority to CS861842A priority Critical patent/CS252746B1/en
Publication of CS184286A1 publication Critical patent/CS184286A1/en
Publication of CS252746B1 publication Critical patent/CS252746B1/en

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Riešenie sa týká živej atenuovanej vakcíny proti panleukopénii mačiek a spůsobu jej přípravy na bukových kultúrach. Vakcína je určená na ochranné a núdzové očkovanie mačiek proti uvedenému ochoreniu. Živá atenuovaná vakcína proti panleukopénii mačiek je lyofilizovaná a vyznačuje sa tým, že obsahuje v 1 ml najmenej 103 TKIDso častíc parvovírusu mačiek, kmeňa FPVA-BN 110/83 CAPM V-291 adaptovaného na buňkové kultúry. Atenuovaný virusový kmeň panleukopénie mačiek sa pomnožuje na stabilnej mačacej linii buniek FE v minimálnom esenciálnom médiu podl'a Eaglea obohatenom o bovinné sérum pri teplote 37 °C, počas 4 až 8 dní. Po vytvoření výrazných cytopatických zmien sa kultivácia ukončí ia virusový materiál sa zmieša s lyofilizačným médiom tak aby obsahoval minimálně 104 TKIDso . ml"1 častíc virusu. Po lyofilizácii je obsah vakcinačného virusu v 1 ml najmenej 103 TKID50.The solution relates to a live attenuated vaccine against feline panleukopenia and a method for its preparation on cell cultures. The vaccine is intended for protective and emergency vaccination of cats against the above disease. The live attenuated vaccine against feline panleukopenia is lyophilized and is characterized in that it contains in 1 ml at least 103 TKIDso particles of feline parvovirus, strain FPVA-BN 110/83 CAPM V-291 adapted to cell cultures. The attenuated viral strain of feline panleukopenia is propagated on a stable feline FE cell line in Eagle's minimal essential medium enriched with bovine serum at a temperature of 37 °C, for 4 to 8 days. After the formation of significant cytopathic changes, the cultivation is terminated and the viral material is mixed with the lyophilization medium so that it contains at least 104 TKIDso. ml"1 virus particles. After lyophilization, the vaccine virus content in 1 ml is at least 103 TKID50.

Description

Vynález sa týkia živej atenuovanej vakcíny proti panleukopénii mačiek a sposobu Jej přípravy.The invention relates to a live attenuated vaccine against cat panleucopenia and to a process for its preparation.

Panleukopénia mačiek představuje hromadné ochorenie zažívacích ústrojov, ktoré sa klinicky prejavuje nechutenstvom, malátnosťou, zvracaním a hnačkou, ktorá može byť krvavá. Zvieratá majú horúčku a pri hematalogickom vyšetření sa zisťuje znížený počet leukocytov.Cat panleucopenia is a mass disease of the digestive tract that is clinically manifested by anorexia, malaise, vomiting and diarrhea, which may be bloody. The animals have a fever and a reduced leukocyte count is detected in the hematalog.

Ochoreinie sposohuje významné straty v stavoch mačiek, pričom úhyn představuje 20 až 50 % z celkového počtu zvierat. Ochorenie postihuje všetky věkové kategorie zvierat, ale najma mláďatá, pričom nástup je prudký a priebeh velini rýchly (JOHNSON, R. H.: Feline panleucopenia. Vet. Rec., March 29th, 1969,: 338 — 340).Ochoreinia causes significant losses in cat conditions, with mortality accounting for 20 to 50% of the total number of animals. The disease affects all ages of animals, but especially the young, with the onset being abrupt and progressing rapidly (JOHNSON, R. H .: Feline panleucopenia. Vet. Rec., March 29th, 1969 ,: 338-340).

Povodcom ochorenia je virus z čelade Parvoviridae, ktorého částice sú izomerické, neobalené a obsahujú dezoxyribonukleovú kyselinu. Virus sa replikuje v bunkovom jadre, a to· iba v určitých fáaach buňkového cyklu, preto je jehoi pestovanie in vitro poměrně obtiažné (O‘REILLY, K. J. — WHITAKER,The disease is caused by a virus of the Parvoviridae family whose particles are isomeric, uncoated and contain deoxyribonucleic acid. The virus replicates in the cell nucleus, and only in certain stages of the cell cycle, making its in vitro cultivation quite difficult (OREREYY, K.J. - WHITAKER,

A. M.: The development of feline cell lineš for the growth of feline infectious enteritis /panleucopaenia/ virus. J. Hyg. Camb., 67, 1969, :115; FLAGSTAD, A.: Studies on the growth of feline panleucopaenia virus in cell cultures. Acta. Path. microbiol. scand. Séct.,A. M .: Development of feline cell lines for the growth of infectious enteritis / panleucopaenia / virus feline. J. Hyg. Camb., 67, 1969, 115; FLAGSTAD, A .: Studies on the growth of panleucopaenia virus in cell cultures. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect.

B, 1975, 83: 71 — 78; O‘SHEA, J. D. — STUDDERT, M. J.: Growth of an autonomously replicating parvovirus /Feline Panleukopenia/: Kinetics aind morphogenesis. Arch. Virol., 57, 1978, :107 — 122; ENDO, M. SHINAGAWA, M. — GOTO, H. — ET AL.: Growth characterististics of feline panleukopenia virus in synchronized kitten kidney cells. Jpn. J. Vet. Sci., 43, 1981,: 65 — 70).B, 1975, 83: 71-78; O‘SHEA, J.D. - STUDDERT, M. J .: Growth of autonomously replicating parvovirus / Feline Panleukopenia /: Kinetics aind morphogenesis. Arch. Virol. 57 (1978): 107-122; ENDO, M. SHINAGAWA, M. - GOTO, H. - ET AL .: Growth Characteristics of Feline Panleucopenia Virus in Synchronized Kitten Kidney Cells. Jpn. J. Vet. Sci., 43, 1981, 65-70).

Specifická profylaxia je založená na pasívnej imunizácii podáním hyperimúnnehO’ séra alebo' imúninych sérových globulínov, ale najčastejšie sa využívá aktívna imunizácia. Spočiatku sa používali očkovacie látky, inaktivované a skůr živé připravené z virusu panleukopénie mačiek (ERHARDT, W.: Ober die Anwendung von Passiv- und AktivImpfstoffen gegen die Panleukopenie der Katzen. Berl. Munch. Tierárztl. Wschr., 90, 1977,: 337 — 340; CHAPPUIS, G. — PETERMANN, H. G.: Zur Prophylaxe von Viruskrankheiten der Katze. Prakt. Tierarzt. 2, 1979,: 112 — 115; POVEY, R. CH. — KOONSE, H. — HAYS, Μ. B.: Immunogenicity and safety of an inactivated vaccine for the prevention of rhinotracheitis, caliciviral disease, and panleukopenia in cats. JAVMA, 177, 1981 4: 347 — 350).Specific prophylaxis is based on passive immunization by administration of hyperimmune serum or immunoglobulins of serum globulins, but active immunization is most commonly used. Initially, vaccines were used, inactivated and live skins prepared from the cat panleucopenia virus (ERHARDT, W .: Ober die Anwendung von Passiv- und Aktiviflstoffen gegen die Panleucopenia der Katzen. Berl. Munch. Tierarztl. Wschr., 90, 1977, 337) - 340; CHAPPUIS, G. - PETERMANN, HG: Zur Prophylaxis von Viruskrankheiten der Katze, Prakt Tierarzt 2, 1979: 112-115, POVEY, R. CH - KOONSE, H. - HAYS, B. B. : Immunogenicity and Safety of an Inactivated Vaccine for the Prevention of Rhinotracheitis, Caliciviral Disease, and Panleucopenia in Cats (JAVMA, 177, 1981 4: 347-350).

Nevýhodou inaktivovaných vakcín je, že ich účinnost je významné ovplyvňovaná najma prítomnosťoiu materských protilátok a obsahom účinného antigénu. Imunita trvá len krátku dobu — niekoíko mesiacov, pričom chrání lein proti subklinickej infekcii, ale z hladiska tlmenia nákazy je významná skutočnosť, že takéto očkovanie nezabráni intenzívnemu vylučovaniu virulentného virusu do prostredia. V poslednom období získali převahu živé vakcíny, ktoré obsahujú virus oslabený sériovým pasážovainím na buňkových kultúrach. Po ich aplikácii dosahujú hladiny specifických protilátok úroveň, ako po prirodzenej infekcii virulentným kmeňom. Protilátky sa zisťujú už na 3. deň po inokulácii a perzistujú najmenej 2 roky. Poitomstvo' od imúnnych matiek je chráněné proti infekcii materskými protilátkami, z ktorých 10 % získává transplacentárne a 90 % kolostrom. Na druhej straně tieto protilátky napriaznivu ovplyvňujň imunitnú odpověď na podanie živých aleboi inaktivovaných vakcín (SICOTT, F. W. — CSIZA, C. K. — GILLESPIE, J. H.: Miaternally derived immunity to feline panleukopenia. JAVMA, 156, 1970, 4: 439 — 453). Z experimentálnych aj praktických skúseností vyplývá, že podmienkou pre dosiahnutie dlhodobej chránenosti je očkovanie mláďat až vo veku okolo 16 až 18 týždňov.A disadvantage of inactivated vaccines is that their efficacy is significantly influenced in particular by the presence of maternal antibodies and the content of the effective antigen. Immunity lasts only a short time - several months, while protecting lein against subclinical infection, but in terms of attenuating the disease, it is important that such vaccination does not prevent the intensive secretion of the virulent virus into the environment. Recently, live vaccines that contain virus attenuated by serial passages on cell cultures have prevailed. After their application, the levels of specific antibodies reach a level as after natural infection with a virulent strain. Antibodies are detected as early as 3 days after inoculation and persist for at least 2 years. The motherhood of immune mothers is protected against infection by maternal antibodies, of which 10% are transplacental and 90% colostromal. On the other hand, these antibodies adversely affect the immune response to the administration of live or inactivated vaccines (SICOTT, F.W. - CSIZA, C.K. - GILLESPIE, J.H. Experimental and practical experience suggests that vaccination of pups at the age of about 16 to 18 weeks is a precondition for achieving long-term protection.

Sposob kultivácie parvovírusu v buňkových kultúrach za účelom pomnoženia virusového materiálu na přípravu pokusných vakcín popísali viacerí autoři (GORMAN, J. R. — HARTSOUGH, G. R. — BURGER, D. — ET AL.: The preliminary use of attenuated feline panleukopenia virus to protéct cats against panleukopenia and mink against virus enteritis. Cornell Vet., 55, 1965,: 559 — 566; MOCHIZUKI, M. — KONISHI, S. — OGATA, M.: Studies on feline panleukopenia. II. Antigenicities of .the virus. Jpn. J. vet. Sci., 40, 1978, 4: 375 — 383; BERGMAN, R. — SUNDQUIST, B. — STROMAN, L. Production of a feline parvovirus vaccine usiing monalayer cell systéme in roller flasks and microcarriers. Develop. biol. Standard., 55, 1984,: 77 — 78). Použili najma primárné kuitúry mačacích a psích embryonálnych buniek alebo z nich připravené stabilně buňkové linie. Infekciu buniek robili obvykle za 4 až 6 hodin po nasadení do· kultivačných nádob. Nakolko množenie virusu nebolo doprevádzané pravidelným vývojom cytopatických zmien, kontrolovali obsah virusu v tkanivových tekutinách na základe přítomnosti intranukleárnych teliesok, imunofluorescentnou metodou připadne výšky hemaglutinačného titru. Pri infekcii buniek sa často používal oplach fyziologickým roztokom a výměna kultivačného média. Velkovýrobně technológia výroby vakcín vyžaduje však minimálně množstvo operácií a podfa možnosti priamu, pohotovú a presvedčivú mikroskopickú kontrolu množenia virusu na základe Specifických cytopatických zmien.The method of parvovirus cultivation in cell cultures for the propagation of viral material for the preparation of experimental vaccines has been described by several authors (GORMAN, JR - HARTSOUGH, GR - BURGER, D. - ET AL. mink against enteritis virus Cornell Vet., 55, 1965, 559-556, MOCHIZUKI, M. - KONISHI, S. - OGATA, M.: Studies on feline panleucopenia, II Antigenicities of the virus Jpn. Sci., 40, 1978, 4: 375-383, BERGMAN, R. - SUNDQUIST, B. - STROMAN, L. Production of a feline parvovirus vaccine using a monalayer cell system in roller flasks and microcarriers. 55, 1984, 77-78). In particular, they used primary kits of feline and canine embryonic cells or stably cell lines prepared therefrom. The cells were usually infected 4 to 6 hours after seeding in the culture flasks. Since virus multiplication was not accompanied by regular development of cytopathic changes, they checked the virus content in tissue fluids based on the presence of intranuclear bodies, by immunofluorescent method or hemagglutination titer height. Saline rinsing and culture medium replacement were often used for cell infection. However, large-scale vaccine production technology requires at least a number of operations and, as far as possible, direct, prompt and convincing microscopic control of virus propagation based on specific cytopathic changes.

Táto úloha bola vyriešená následovně:This task was solved as follows:

Bola připravená živá lyofilizovaná vakcína proti panleukopénii mačiek, lyofilizovaná, ktorá obsahuje v 1 ml najmenej 103 She was ready to live freeze-dried vaccine against feline cats, lyophilized, containing 1 ml of at least 10 3

252748252748

TKIDso častíc virusu panleukopénie mačiek, kmeň FPVA-BN 110/83 CAPM V-291.Cat Panleucopenia Virus TKID 50 strain FPVA-BN 110/83 CAPM V-291.

Uvedený virusový kmeň bol adaptovaný na kultúry buniek stabilnej mačacej linie FE. Ako rastové médium bolo použité minimálně esenciálně médium pódia Eaglea obohatené o bovínne sérum, v ktorom sa virus pomnožoval pri teplote 36 až 38 °C po dobu 4 až 8 dní. Po vytvoření zřetelných eytopatických zmien sa virusový materiál zmiešal s lyofilizačným médiom tak, aby obsahoval minimálně 104 TKIDso častíc virusu enteritídy mačiek v 1 ml.Said virus strain was adapted to cultures of stable feline FE cell lines. The growth medium used was at least essentially the bovine serum-enriched podium Eagle medium in which the virus was propagated at 36-38 ° C for 4-8 days. After making clear eytopathic changes, the viral material was mixed with the lyophilization medium to contain at least 10 4 TKID 50 of the cat enteritis virus particles per ml.

Virusový kmeň panleukopénie mačiek s označením FPVA-BN 110/83 a _ zbierkovým číslom CAPM V-291 uložený v Československé) zbierke mikroorganizmov na Výskumnom ústave veterinárneho lekárstva v Brně, Hudcova 60, sme získali z povodně virulentného virusu izolovaného z infekčných materiálov cestou sériových pasáži na mačacej bunkovej linii označenej FE. Homogenita vírusovej populácie a stabilita imunohiologických vlastností atenuovaného kmeňa sa dosiahla izolováním linie metodou hraničných riedení so šesťnásobným opakováním.The viral strain of cat panleucopenia designated FPVA-BN 110/83 and the collection number CAPM V-291 deposited at the Czechoslovak Microorganism Collection at the Veterinary Research Institute in Brno, Hudcova 60, was obtained from a flood virulent virus isolated from infectious materials via serial passages on a feline cell line designated FE. The homogeneity of the viral population and the stability of the immunohiological properties of the attenuated strain were achieved by isolating the line by a six-fold borderline dilution method.

Uvedený kmeň FPVA-BN 110/83 CAPM V-291 je charakterizovaný týmito imunobiologickými vlastnosťami:The strain FPVA-BN 110/83 CAPM V-291 is characterized by the following immunobiological properties:

1. Pri dodržaní definovaných kultivačných podmienok je množenie virusu na stabilnej bunkovej linii FE doprevádzané vývojom výrazných cytopatických zmien s obsahom 105 až 10e TKIDso . ml-1.1. Following the defined culture conditions, virus multiplication on a stable FE cell line is accompanied by the development of significant cytopathic changes containing 10 5 to 10 e TKID 50. ml- 1 .

2. Vakcinačný virus je neškodný pre všetky věkové kategorie zvierat, pričom mláďatá bez materinských protilátok možu byť úspešne imunizované počnúc vekom 6 týždňov.2. The vaccine virus is harmless to all ages of the animals, and pups without maternal antibodies can be successfully immunized from the age of 6 weeks.

3. Vakcinačný virus sa nevylučuje z organizmu očkovaných zvierat a neprenáša sa na spoluustajnené vnímavé zvieratá.3. The vaccine virus shall not be excluded from the organism of vaccinated animals and shall not be transmitted to co-susceptible susceptible animals.

4. Očkovanie vnímavých zvierat vyvolá chránenosť počnúc 4. dňom po podaní vakcíny.4. Vaccination of susceptible animals will confer protection starting on day 4 after vaccine administration.

5. Imunita vyvolaná jednorázovým očkováním zvierat starších ako 12 týždňov trvá najmenej jeden rok, a je doprevádzaná prítomnosťou Specifických protilátok.5. The immunity induced by a single vaccination of animals over 12 weeks of age lasts for at least one year and is accompanied by the presence of Specific Antibodies.

Stabilná buňková línia FE, vykazovala pri jej získaní nedostatočné rastové vlastnosti, charakterizované pomalým množením buniek a neschopnosťou vytvořit súvislý monolayer. Uvedené vlastnosti bunkovej linie nezodpovedali nárokom na intenzívně množenie uvedeného virusu so získáním virusových suspenzi! s dostatočnými titrami potřebnými pre výrobu vakcíny. Prejavom nedostatečných rastových vlastností bunkovej linie bolo aj chýbanie vývoja cytopatických zmien po infekcii vakcinačným kmeňom, čo nedovolovalo sledovat a hodnotit stupeň pomnoženia výrusu. Sériovým pasážovaním bunkovej linie FE vo vybraných médiách (MEM, BEM,The stable FE cell line showed insufficient growth characteristics in its recovery, characterized by slow cell proliferation and inability to form a continuous monolayer. Said cell line properties did not correspond to the claims for intensely multiplying said virus to obtain virus suspensions! with sufficient titers to produce the vaccine. Lack of development of cytopathic changes after infection with the vaccine strain was also a manifestation of insufficient growth characteristics of the cell line, which did not allow to monitor and evaluate the degree of virus propagation. Serial passage of the FE cell line in selected media (MEM, BEM,

M199) s obsahom novorodeneckého séra sme po 25 pasážach v médiu MEN derivovali populáciu buniek, ktorá vykazuje následovně vlastnosti:M199) with neonatal serum content, after 25 passages in MEN medium, we have derived a cell population that exhibits the following properties:

1. Líniu je možné pasážovať v pomere 1:1. The line may be passaged in a ratio of 1:

: 3 až 1: 4 v 72 až 96 hodinových intervalech pomocou roztoku verzén-trypsín.: 3 to 1: 4 at 72 to 96 hour intervals using a version-trypsin solution.

2. Najvhodnejšie rastové médium je minimálně esenciálně médium podfa Eaglea s prídavkom 5 až 15 hmot. percent bovínného séra.2. The most suitable growth medium is at least essentially the Eagle medium with an addition of 5 to 15 wt. percent bovine serum.

3. Bunkovů líniu je možné uchovávat v zmrazenom stave pri teplotách pod —100 °C, s použitím protekčného média, ktoré obsahuje 10 až 20 hmotnostných percent dimetylsulfoxidu.3. The cell line can be stored frozen at temperatures below -100 ° C, using a protection medium containing 10 to 20 weight percent dimethylsulfoxide.

4. Množenie vakcinačného virusu je pravidelné sprevádzané výraznými cytopatickými změnami na 4. až 8. deň po infekcii v závislosti od dávky virusu.4. Vaccine virus multiplication is periodically accompanied by marked cytopathic changes at days 4-8 post infection depending on virus dose.

Dosiahnuté titry virusu dovofujú realizovat efektívnu výrobu očkovacej látky proti panleukopénii mačiek.The achieved virus titers allow the effective production of a vaccine against cat panleucopenia.

Výběr kultivačného séra:Selection of culture serum:

Kultivačně sérum s dobrými rastovými vlastnosťami pre uvedenú bunkovů líniu može obsahovat nešpecifické inhibitory najviac v titry 1: 32, stanovenom hemaglutinačno-inhibičným testom.Culture serum with good growth properties for said cell line may contain non-specific inhibitors at a maximum of 1: 32 as determined by the haemagglutination-inhibition assay.

Postup výroby vakcíny:Vaccine production procedure:

Spósob infekcie buniek FE vakcinačným vírusom:Method of infection of FE cells with vaccine virus:

A.A.

Suspenzia bunieik linie FE o hustotě 5 iaž 10.10s buniek .ml-1 v rastovom médiu sa zmieša s vakcinačným vírusom pri multiplicite infekcie od 0,0001 do 0,001. Zmes virusu a buniek sa inkubuje pri 36 až 38 °C počas 30 až 60 minút. Potom sa zmes virusu a buniek nariedi v rastovom médiu, ktoré představuje minimálně esenciálně médium podfa Eaglea s pH 6,8 až 7,3 a prídavkom piatich až desiatich hmotnostných percent bovinneho séra s vyznačenou kvalitou.The suspension lines of the FE bunieik a density of 5 cells Iaz 10:10 .ml -1 in the growth medium was treated with the vaccine virus at a multiplicity of infection of 0.0001 to 0.001. The virus-cell mixture is incubated at 36-38 ° C for 30-60 minutes. Thereafter, the virus-cell mixture is diluted in a growth medium which is at least essentially essential according to Eagle's pH of 6.8 to 7.3 and the addition of five to ten percent by weight of bovine serum of indicated quality.

B.B.

Do bunkovej suspenzie v rastovom médiu sa přidá inokulum vakcinačného· virusu o multiplicite infekcie 0,0001 až 0,001, ktorá sa ihned' vyleje do kultivačnej nádoby. Takto připravená suspenzia buniek za účelom přípravy sa kultivuje na skle, plastickej hmote, štacionárnym spósobom, alebo v otáčaných ffašiach („rolleroch“), připadne na mikronosičoch, pri 36 až 38 % počas 4 až 8 dní. Množenie virusu je sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.A vaccine virus inoculum with a multiplicity of infection of 0.0001 to 0.001 is added to the cell suspension in the growth medium and immediately poured into the culture vessel. The cell suspension thus prepared for preparation is cultured on glass, plastic, in a stationary manner, or in roller bottles, optionally on microcarriers, at 36 to 38% for 4 to 8 days. Virus multiplication is accompanied by marked cytopathic changes.

C.C.

Infekcia prichytených buniek na kultivačnom povrchu — po štvor- až šesťhodinovej inkubácii buniek linie FE pri 36 až 38 °C. Do rastového média sa přidá inokulum vakcinačného virusu pri multiplicite infekcie 0,0001 až 0,001. Inkubácia pokračuje pri 36 až 38 °C počas 4 až 8 dní. Množenie virusu je rovnako ako v bode A a B sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.Infection of adherent cells on the culture surface - after a 4 to 6 hour incubation of FE-line cells at 36-38 ° C. Vaccine virus inoculum is added to the growth medium at a multiplicity of infection of 0.0001 to 0.001. Incubation is continued at 36-38 ° C for 4-8 days. As in A and B, virus multiplication is accompanied by significant cytopathic changes.

Zmes infekčných tekutin sa získává vtedy, keď 80 až 90 percent monolayeru vykazuje specifické změny. Takto připravená virusová suspenzia sa kontroluje -na přítomnost nežiadúcich kontaminujúcich mikroorganizmov a stanoví sa obsah virusu titráciou na buňkách linie FE. Po ukončení kultivácie sa virusový materiál zmieša s lyofilizačným médiom v pomere 50 až 75 hmotnostných percent virusu k 50 až 25 hrnotnostným percentám lyo-filizačného média a uchovává pri —15 až —20 °C až do lyofilizácie. Lyofilizačné médium je možné pri zachovaní rovnakých hmotnostných pomerov přidávat až tesne před lyofilizáciou. Na přípravu lyofilizovanej vakcíny sa použijú infekčně tekutiny s obsahom minimálně 104 TKIDso . ml-1vírusu, bakteriologicky sterilně. Homogenizovaná virusová suspenzia s lyofilizačným médiom, ktoré obsahuje sacharózu, fosforečnanový pufor, glutamát sodný alebo draselný, bovinný albumin alebo iný zdroj bielkovín, dextran alebo želatinu (BOVARNICK, M. R. — MILLER, J. C. — SYNDER, J. C.: The influence of certain salts, amonoacidis, sugars, aMd proteins on the stability of rickettsiae. J. Bacteriol., 59, 1950,: 509 — 522) sa rozplňuje do ampuliek, alebo liekoviek, lyofilizuje, v-zduchotesne uzatvára a uchovává pri chladničkovej teplote. Vakcína připravená podfa uvedeného postupu obsahuje najmenej 103 TKIDso. ml-1 vakcinačného virusu, čo představuje jednu imunizačnú dávku.A mixture of infectious fluids is obtained when 80 to 90 percent of the monolayer exhibits specific changes. The virus suspension thus prepared is checked for the presence of undesirable contaminating microorganisms and the virus content is determined by titration on FE-cell cells. Upon completion of the culture, the viral material is mixed with the lyophilization medium at a ratio of 50 to 75 weight percent of the virus to 50 to 25 weight percent of the lyophilization medium and stored at -15 to -20 ° C until lyophilization. The lyophilization medium may be added just prior to lyophilization, while maintaining the same weight ratios. Infectious fluids containing at least 10 4 TKID 50 are used to prepare the lyophilized vaccine. ml -1 virus, bacteriologically sterile. Homogenised virus suspension with lyophilization medium containing sucrose, phosphate buffer, sodium or potassium glutamate, bovine albumin or other protein source, dextran or gelatin (BOVARNICK, MR - MILLER, JC - SYNDER, JC: J. Bacteriol., 59, 1950,: 509-522) is dispensed into ampoules or vials, lyophilized, sealed and stored at refrigerated temperature. The vaccine prepared as described above contains at least 10 3 TKID 50. ml -1 vaccine virus, which represents a single immunization dose.

Použité lyofilné médium podfa BOVARNICK, M. R. — MILLER, J. C. — SNYDER, J.Used lyophilic medium according to BOVARNICK, M. R. - MILLER, J. C. - SNYDER, J.

C.: The influence o-f certain salts, aminoacids, sugars, and proteins on the stability of rickettsiae. J. Bacteriol 59, 1950,: 509 — 552) je vhodné aj na lyofilizáciu iných druhov vakcinačných vírusov. Preto ak sa přidá do infekčnej suspenzie obsahujúcej iný druh vakcinačnéh-o virusu, například virus psinky, je možné tieto suspenzie navzájom miešať v fubovofnom pomere a lyo-filizovať.C .: The influence of certain salts, aminoacids, sugars, and proteins on the stability of rickettsiae. J. Bacteriol 59, 1950, 509-552) is also suitable for the freeze-drying of other vaccine virus species. Therefore, when added to an infectious suspension containing another type of vaccine virus, such as distemper virus, these suspensions may be mixed with each other at any rate and lyophilized.

Uvedené příklady predmet vynálezu nijak neo-bmedzujú ani nevyčerpávajú:The following examples are not intended to limit or limit the invention in any way:

1. Spósob kultivácie:1. Method of cultivation:

Suspenzia buniek, připravená pomocou proteolytických fermentov v rastov-om médiu, ktoré obsahuje definované množstvo amino-kyselín, a vitamínov s prídavkom 10 hmot. % séra určeného pre tkanivové kultúry sa kultivuje na skle, plastickej hmotě, štacionárnym spósobom alebo v otáčaných ffašiach (rolleroch), připadne v suspenzii na mikronosičoch.A cell suspension prepared by proteolytic ferments in a growth medium containing a defined amount of amino acids and vitamins with the addition of 10 wt. % of the tissue culture serum is cultured on glass, plastic, in a stationary manner or in rotated bottles, optionally in suspension on microcarriers.

2. Spósob infekcie buňkových kultúr vakcinačným vírusom:2. Method of infection of cell cultures with vaccine virus:

Buňkové kultúry, připravené a pěstované podfa bodu 1. sa infikujú vakcinačným vírusom pri multiplicite infekcie najmenej 0,001 nasledovnými spósobmi:Cell cultures prepared and cultured according to point 1 are infected with the vaccine virus at a multiplicity of infection of at least 0.001 in the following ways:

a)a)

Suspenzia buniek linie FE o hustotě 10.Suspension of FE 10 cells.

. 10 buniek .ml-1 v rastovom médiu sa zmieša s vakcinačným vírusom pri multiplicite infekcie 0,001. Zmes virusu a buniek sa inkubuje pri 37 °C počas 30 minút. Potom sa zmes virusu a buniek nariedi v rastovom médiu, ktoré představuje minimálně esenciálně médium podfa Eaglea s pH 7,1 a prídavkom 10 hmot. % bovinného séra.. 10 .ml -1 those cells in the growth medium was treated with the vaccine virus at a multiplicity of infection of 0.001. The virus-cell mixture is incubated at 37 ° C for 30 minutes. Thereafter, the mixture of virus and cells is diluted in a growth medium which is at least essentially the Eagle medium at pH 7.1 with the addition of 10 wt. % bovine serum.

bjbj

De suspenzie buniek linie FE -o hustotě 5 .105. ml-1v rastovom médiu sa přidá inokulum vakcinačného virusu o multiplicite infekcie 0,0001, -a infikovaná suspenzia sa ihned vyleje do- kultiv-ačnej nádoby. Takto připravená suspenzia buniek za účelom přípravy vakcíny sa kultivuje v Rouxových ffašiach pri teplote 37 °C počas 6 dní. Množenie virusu je sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.De cell suspension FE-0 density 5.10 5 . ml -1 in the growth medium, a vaccine virus inoculum with a multiplicity of infection of 0.0001 is added, and the infected suspension is immediately poured into a culture vessel. The cell suspension thus prepared for vaccine preparation is cultured in Roux flasks at 37 ° C for 6 days. Virus multiplication is accompanied by marked cytopathic changes.

c]c]

Infekcia prichytených buniek na kultivačnoím povrchu po šesťhodinovej kultivácii buniek linie FE pri 37 °C sa do rastového média přidá inokulum vakcinačného virusu pri multiplicite infekcie 0,001. Inkubácia pokračuje pri 37 aC počas 6 dní. Množenie virusu je rovnako ako v bode a] a b) sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.Infection of the adherent cells on the culture surface after six hours of culturing the FE-line cells at 37 ° C was added to the growth medium with a vaccine virus inoculum at a multiplicity of infection of 0.001. Incubation is continued at 37 and C for 6 days. As in a) and b), the multiplication of the virus is accompanied by significant cytopathic changes.

3. Zber vakcinačného virusu:3. Collection of vaccine virus:

Vakcinačný virus sa produkuje v rastovom médiu na buňkových kultúrach pěstovaných podfa bodu 1 a infikovaných podfa boduThe vaccine virus is produced in growth medium on cell cultures grown under point 1 and infected under point

2. Po vytvoření rozsiahlych cytopatických zmien stanovených mikroskopicky sa kultivácia ukončí a do rastového média s pomnoženým vírusom sa přidá priamo do kultivačných nádob vhodné lyofilizačné médium v pomere 67 hmot. % vírusovej suspenzie a 33 hmot. percent lyofilizačného média. Zmes sa dalej uchovává v kultivačných nádobách v zmrazenom stave až do lyoflllzácie.2. After extensive cytopathic changes, determined microscopically, the culture is terminated and appropriate lyophilization medium is added directly to the culture vessels in a 67 wt. % viral suspension and 33 wt. percent lyophilization medium. The mixture is then stored frozen in culture flasks until lyophilized.

Homogenizovaný virusový materiál s požadovaným obsahom infekčných jednotiek (najmenej 104 TKIDso. ml-1), ktorý neobsa252746 huje kontaminujúce mikroorganizmy sa rozplríuje do ampuliek, lyofilizuje, vzduchotěsně uzatvorí a uchovává pri chladničkovej teplote. Vakcína připravená podía uvedeného postupu obsahuje najmenej 103-° TKIDso. . ml-1 vakcinačného virusu.Homogenized viral material with the required content of infectious units (at least 10 4 TKID 50 ml -1 ), which does not contain contaminating microorganisms, is dispensed into ampoules, lyophilized, sealed and refrigerated. The vaccine prepared according to the above procedure comprises at least 10 -3 ° TKID 50. . ml -1 vaccine virus.

Claims (6)

1. Živá atenuovaná vakcína proti panleukopénii mačiek, vyznačujúca sa tým, že obsahuje v 1 ml najmenej 103 TKIDso častíc virusu panleukopénie mačiek, kmeň FPVA-BN 110/83 CAPM V-291 adaptovaný na buňkové kultury.A live attenuated vaccine against feline panleucopenia comprising at least 10 3 TKID 50 particles of feline panleucopenia virus in 1 ml, strain FPVA-BN 110/83 CAPM V-291 adapted to cell cultures. 2. Živá atenuovaná vakcína proti panleukopénii mačiek podTa bodu 1, vyznačujúca sa tým, že obsahuje lyofilizačné médium v množstve 25 až 50 hmot. percent, vztiahnuté na hmotnost celej vakcíny.2. A live attenuated vaccine against cat panleucopenia according to claim 1, characterized in that it contains a lyophilization medium in an amount of 25 to 50% by weight. percent, based on the weight of the whole vaccine. 3. Sposob víroby vakcíny podía bodov 1 a 2, vyznačujúci sa tým, že atenuovaný kmeň panleukopénie mačiek sa pomnožuje na stabilnej mačacej linii buniek FE v minimálnom esenciálnonn médiu podía Eaglea s pH 6,8 až 7,3 obohatenom o bovinné sérum pri teplote od 36 do 38 °C po dobu 4 až 8 dni, až do vytvorenia výrazných cytopatických zmien a potom sa virusový materiál zmieša s lyofilizačným médiom tak, aby obsahoval minimálně 104 TKIDso . ml“1.3. The vaccine production method according to claims 1 and 2, characterized in that the attenuated cat panleucopenia strain is propagated on a stable feline FE cell line in Eagle's minimum essential medium at pH 6.8-7.3 supplemented with bovine serum at 36 to 38 ° C for 4 to 8 days, until significant cytopathic changes are made, and then the viral material is mixed with the lyophilization medium to contain at least 10 4 TKID 50. ml “ 1 . 4. Sposob výroby vakcíny podía bodu 3, vyznačujúci sa tým, že ako přísada do kultivačného média sa použije bovinné sérum s definovaným obsahom nešpecifických inhibítorov proti odpovedajúcemu virusu.4. The vaccine production method of claim 3, wherein bovine serum with a defined content of non-specific inhibitors against the corresponding virus is used as an additive in the culture medium. 5. Sposob výroby vakcíny podía bodov 3 a 4, vyznačujúci sa tým, že infekcia buniek na produkciu virusu sa robí buď tak, že bunYNÁLEZU ková suspenzia s obsahom 5 až 10.10B .ml-1 buniek v rastovom médiu sa infikuje vírusom při MOI najmenej 0,0001 na buňku, inkubuje pri 36 až 38 °C počas 30 až 60 minút, potom sa 10- až 20krát nariedi v rastovom médiu, vyleje do kultivačnej nádoby a kultivuje pri teplote 36 až 38 °C až do zberu virusu, alebo buňková suspenzia s obsahom 4 až 8.105.ml_1 buniek v rastovom médiu sa infikuje vírusom pri MOI najmenej 0,0001 na buňku a inkubuje pri 36 až 38 °C až do zberu virusu, alebo do kultivačných nádob sa nasadzuje buňková suspenzia v rastovom médiu s obsahorn 4 až 8.105.ml_1 buniek, a kultúry sa po 4- až 6hodinovej inkubácii pri 36 až 38 °C infikujú priamo do rastového média vírusom pri MOI najmenej 0,0001 na buňku a inkubujú až do zberu virusu.5. The vaccine production method according to items 3 and 4, characterized in that the infection of the cells for the production of the virus is carried out either by a cell suspension of 5-10.10 B. Ml -1 cells in the growth medium being infected with the virus at an MOI of at least 0.0001 per cell, incubated at 36-38 ° C for 30-60 minutes, then diluted 10- to 20-fold in growth medium, poured into a culture vessel and cultured at 36-38 ° C until virus harvest, or cellular suspension containing 4 to 8.10 5 .ml _1 cells in growth medium were infected with virus at an MOI of less than 0.0001 per cell and incubated at 36 to 38 ° C and the virus harvest, and the culture vessels are deployed in a cell suspension in growth medium obsahorn 4 to 8.10 5 .ml _1 cells and culture at the 4 to 6 hour incubation at 36 to 38 DEG C. are infected directly into the growth medium virus at MOI less than 0.0001 per cell and incubated until the virus harvest. 6. Sposob výroby vakcíny podía bodov 3 až 5, vyznačujúci sa tým, že sa k virusovým suspenziám přidává po ukončení inkubácie lyofilizačné médium, ktoré obsahuje sacharózu, fosforečnanový pufor, glutamát sodný alebo draselný, bovinný albumin alebo iný zdroj bielkovín a želatinu alebo dextrán a zmes sa uchovává až do lyofilizácia v zmrazenom stave pri teplotách vyšších ako —20 stupňov Celsia, alebo sa lyofilizuje okamžité.6. The vaccine production method according to claims 3 to 5, characterized in that a lyophilization medium containing sucrose, phosphate buffer, sodium or potassium glutamate, bovine albumin or other protein source and gelatin or dextran is added to the virus suspensions after the incubation. the mixture is kept frozen at temperatures above -20 degrees Celsius until freeze-dried or freeze-dried immediately.
CS861842A 1985-07-31 1986-03-17 Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation CS252746B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS861842A CS252746B1 (en) 1985-07-31 1986-03-17 Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS855593A CS252736B1 (en) 1985-07-31 1985-07-31 Vital attenuated vaccine against parvoviral enteritis of minks and method of its preparation
CS861842A CS252746B1 (en) 1985-07-31 1986-03-17 Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS184286A1 CS184286A1 (en) 1987-03-12
CS252746B1 true CS252746B1 (en) 1987-10-15

Family

ID=5401109

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS855593A CS252736B1 (en) 1985-07-31 1985-07-31 Vital attenuated vaccine against parvoviral enteritis of minks and method of its preparation
CS861843A CS252747B1 (en) 1985-07-31 1986-03-17 Vital attenuated vaccine against parvovirosis of dogs and method of its preparation
CS861842A CS252746B1 (en) 1985-07-31 1986-03-17 Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS855593A CS252736B1 (en) 1985-07-31 1985-07-31 Vital attenuated vaccine against parvoviral enteritis of minks and method of its preparation
CS861843A CS252747B1 (en) 1985-07-31 1986-03-17 Vital attenuated vaccine against parvovirosis of dogs and method of its preparation

Country Status (1)

Country Link
CS (3) CS252736B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS252736B1 (en) 1987-10-15
CS184286A1 (en) 1987-03-12
CS559385A1 (en) 1987-03-12
CS184386A1 (en) 1987-03-12
CS252747B1 (en) 1987-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2396976C2 (en) Vaccines and methods of treating canine influenza
EP2271663B1 (en) Novel avian astrovirus
CN106399260B (en) Canine distemper and parvovirus combined live vaccine and preparation method thereof
AU592786B2 (en) Canine parvovirus vaccines
US11291715B2 (en) Diluent for cell-associated alphaherpesvirus vaccine
US3520972A (en) Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains
IE51389B1 (en) Feline infectious peritonitis virus,its preparation and vaccines containing it
US3080291A (en) Serial passage of distemper virus in tissue cultures of chick embryo and canine tissue and vaccine therefrom
US4571386A (en) Feline infectious peritonitis vaccine
RU2452511C1 (en) Attenuated strain of serotype 2 african swine fever virus for developing diagnostic and vaccine preparations
US3585266A (en) Live rabies virus vaccine and method for the production thereof
US4279893A (en) Vaccine against Newcastle fowl disease, method for preparing and use thereof
US3961046A (en) Mumps vaccine and preparation thereof
US2965544A (en) Tissue culture propagated canine distemper virus and vaccine thereof
CS252746B1 (en) Live attenuated vaccine against, panleukopenia cats and its preparation
CA2178553A1 (en) Marek's disease vaccine
CA1097219A (en) Respiratory syncytial vaccine
RU2806164C1 (en) Associated vaccine against canine distemper, parvovirus and coronavirus enteritis, adenovirus infection of dogs
US4004974A (en) Live virus culture vaccine against carnivore distemper and method of producing same
RU2045960C1 (en) Vaccine for prevention of plague, infectious hepatitis, adenovirosis, parvoviral enteritis and canine leptospirosis
RU2774588C2 (en) Improved diluent for vaccine against cell-associated alpha-herpesvirus
RU2325185C1 (en) Production methods of dry cultural rinderpest virus-vaccine for minor ruminants
US3178351A (en) Vaccine
Ritova et al. Live tissue-culture influenza vaccine
KR100556275B1 (en) Cat vaccine containing chlamydiacittaci and its manufacturing method