CS248402B1 - Způsob stanovení mikrobiální kontaminace - Google Patents

Abstract

Postup k rychlému stanovení mikrobiální kontaminace v roztocích, atmosféře nebo na pevných látkách je založen na kultivaci stanovovaných zárodků zkoumaných vsoxků v živné půdě obsahující vedle neradioaktivnich oligosacharidů a/nebo polysacharidů a ostatních neradioaktivních látek jen monosacharidy značené uhlíkem 14 o měrné aktivitě vyšší než 1,8 TBq/M a následující absorpci vzniklého kysličníku uhličitého značeného -*-4C v alkalickém roztoku, například 0,1 M hydroxidu sodném, jehož oelková radioaktivita se změří radiometrickou metodou, například kapalinovou scintilací. Použitelnost kultivačního média je indikována barvou roztoku, která se při překročeni skladovací doby mění. Metodu lze využít v oboru léčiv, zejména radiofaxmak, dále v oborech potravinářského průmyslu, při kontrole životního prostředí a v klinické praxi, když vyvstává požadavek rychlého a kvantitativního určení mikrobiální kontaminace.

Description

Vynález se týká způsobu stanovení mikrobiálních zárodků v roztocích, atmosféře a nebo na pevných površích, použitelného především v oblasti výroby léčiv, zejména radiofarmak.

Podle prvého z dosud známých postupů se provádí průkaz mikrobiálních zárodků tak, že se zkoumaný vzorek přidá do živné půdy a kultivace dokazovaných zárodků probíhá za optimalizovaných podmínek tak dlouho, až přítomné zárodky se rozmnoží do té míry, až se živná půda zakalí. Tento postup vyžaduje zkoušku trvající cca 14 dní, přičemž se zakalení posuzuje subjektivně.

Podle druhého dosud známého postupu se živná půda radioaktivně označí a mikrobiální zárodky se prokážou pomocí radioaktivně značených metabolických produktů, přičemž kultivace vyžaduje dobu několika dní a těkavé radioaktivní produkty metabolismu, které přecházejí do plynné fáze nad kulturou se pomocí nosného plynu převedou do ionizační komory, v níž se měří elektrometrem.

Nevýhoda prvního postupu spočívá především v dlouhé kultivační době, která je potřebná k dostatku biomasy k vizuální indikaci, dále subjektivním hodnocení, takže postup je málo citlivý a nelze ho aplikovat pro zakalené vzorky nebo vzorky tvořící s kultivačním mediem zákal.

Nevýhoda druhého spočívá v poměrně dlouhé kultivační době, relativně nízké citlivosti a v tom, že k měření radioaktivity plynných metabolických produktů ploužícícfc jako indikátor přítomnosti mikrobiálních zárodkůjje zapotřebí speciální aparatury.

Výše uvedené nevýhody odstraňuje způsob stanovení rnikro— biální kontaminace podle vynálezu, jehož podstatou je, že se zkoumaný vzorek kultivuje v živné půdě obsahující vedle neradioaktivních oligosacharidů a nebo polysacharidů a ostatních potřebných složek živné půdy jen monosacharidy značené uhlíkem 14 o měrné aktivitě od 1,8 do 12 TBq/M a touto kultivací vzniklý oxid uhličitý značený se absorbuje v alkalickém roztoku, např. 0,1 M hydroxidu sodném, jehož celková radioaktivita se měří radiometrickou metodou, např. kapalinovou scintilací.

Výhody uvedeného způsobu spočívají v extrémní citlivost}*

- 2 24b 4U2 kdy kultivační doba může být podstatně zkrácena a důkaz mikrobiální kontaminace je rychlý, dále v tom, že může být použito obvyklé měřící zařízení, že souprava a její chování vůči kultivačnímu mediu neovlivňují výsledek a že se výsledky získávají jednoduchou a zároveň bezpečnou cestou objektivním záznamem a mohou být kvantifikovány.

V následujícím je ke znázornění uveden příklad aplikace, které ověem nejsou tímto omezeny.

Příklad 1

Do kultivačního roztoku prostého cukrů se přidá monosacharid značený uhlíkem 14 o měrné aktivitě 1,8 až 12 TBq/M, např. /U-l^c/ ribosa a pro kultivaci potřebná hladina uhlohydrátů se doplní vhodným oligosacharidem nebo polysacharidem, např. sacharosou, dále bílkovinná složka, např. kaseinový pepton, živné soli, vitaminové složky a barvivo sloužíví jako pH indikátor, např. bromkresolový purpur a nakonec se přidá zkoumaný vzorek, kultura se vzduchotěsně uzavře, medium se kultivuje při teplotě místnosti po dobu kratší než 24 hodin a poté vzniklý oxid uhličitý o vysoké měrné aktivitě se pomocí proudu nosného plynu vymyje a uvede do nádobky obsahující alkalický roztok, např. roztok etanolaminu, v němž se absorbuje a po přidání scintilačního roztoku se pomocí obvyklého zařízení pro měřeni kapalinové scintilace změří jako radioaktivita.

Např. kultivační medium o složení udaném v příkladu 2 se připraví rozpuštěním substrátů v destilované vodě a roztok se obvyklým způsobem sterilizuje.

- 3 Příklad 2

Název látky kaseinový pepton sacfearosa kvasničný extrakt chlorid sodný citrát sodný střední fosforečnan draselný tween síran hořečnatý chlorid manganatý síran železnatý vitamin ribosa (měrná aktivita 1,8-12 TBq/mol ) bromkresolový purpur

248 402

Koncentrace 9 g/1 g/1

7.5 g/1 5 g/1

2.5 g/1

1,0 g/1 0,2 g/1 1,1 g/1 0,1 g/1 0,01 g/1 5 mg/1

KBq/1 1 mg/1

Hodnota pH činí 7,2

Modře zbarvená sterilizovaná živná půda vzduchotěsně uzavřená se může skladovat nejméně alespoň půl roku· Případdé znehodnocení media indikuje změna barvy indikátorů do žlutá. K prokázání mikrobiálních zárědků se asepticky aaplní 10 ml kultivačního media do sterilní 25 ml kultivační lahvičky, do níž se přidá kapalný nebo pevný vzorek,lahvička se vzduchotěsně uzavře a kultivace probíhá za třepání při 37°C. Potom se do druhé nádobky, která je vytvarována tak, aby mohla sloužit jako kyveta pro scintilační měření, předloží 2 ml roztoku 1M etanolaminu v methylcellosolvu. Pomocí vhodného systému sestávajícího ze dvou injekčních kapilár, které se vedou skrze propichovací zátku kultivační lahvičky, se vede pomalu proud plynu 1,5 1/hod. např. tlakového vzduchu, prostorem nad kultivačním mediem do roztoku etanolaminu.

Po 5 minutách se uvádění plynu do etanolaminu zastaví, přidá

- 4 248 402 se 8 ml dioxanového scintilačního koktejlu a změří se radioaktivita. Obvykle se při zárodkuprostých vzorcích naměří hodnota nižší naž 3 Bq. Zdvojení této hodnoty nebo hodnoty věší -indukují mikrobiální kontaminaci.

Tento postup lze užít také v potravinářském průyslu, kontroly životního prostředí a klinické praxe, když vyvstává požadavek rychlého a kvantitativního určení mikrobiální kontaminace.

Claims (1)

1. Způsob stanovení mikrobiální kontaminace v roztocích, atmosféře nebo na pevných látkách_fvyznačený tím, že se zkoumaný vzorek kultivuje v živné půdě obsahující vedle neradioaktivních oligosacharidů a nebo polysacharidů a ostatních potřebných složek živné půdy jen monosacharidy značené uhlíkem 14 o měrné aktivitě od 1,8 do 12 TBq/M a touto kultivací vzniklý oxid uhličitý značený se absorbuje v alkalickém roztoku,např. 0,1 M hydroxidu sodném, jehož celková radioaktivita se měří radiometrickou metodou, např. kapalinovou scintilací.