CS247067B2

CS247067B2 - Cosmetic agent

Info

Publication number: CS247067B2
Application number: CS826731A
Authority: CS
Inventors: Shinei Kashiwayama
Original assignee: Shinei Kashiwayama
Priority date: 1979-09-01
Filing date: 1982-09-20
Publication date: 1986-11-13

Abstract

Kosmetický prostředek obsahují jako hlavní složku produkt kultivace nového kmene Trichosporon Kashiwayama.They contain the cosmetic product as the main product component of the new strain cultivation product Trichosporon Kashiwayama.

Description

Vynález se týká kosmetického prostředku sestávajícího ze sterilního supernatantu vzniklého filtrací a sterilizací tekuté kultury nového kmene, kmene Trlchosporon Kashiwayama uloženého u FRI pod depozitním číslem 4 821, který lze identifikovat obvyklými způsoby jako kmen náležející rodu Geotricum nebo Endomyceopsis, nebo sestávajícího z koncentrátu nebo suchého produktu vzniklého z uvedeného sterilního supernatantu obvyklými způsoby nebo kosmetického prostředku obsahujícího jako účinnou složku uvedený sterilní supernatant nebo uvedený koncentrát nebo suchý produkt inkorporovaný do nosiče, jako je například běžný kožní krém nebo masťový základ.The invention relates to a cosmetic composition consisting of a sterile supernatant formed by filtering and sterilizing a liquid culture of a new strain, the Trlchosporon Kashiwayama strain deposited with FRI under deposit number 4,821, which can be identified by conventional means as a strain belonging to the genus Geotricum or Endomyceopsis or consisting of a concentrate or dry product formed from said sterile supernatant by conventional means or a cosmetic composition comprising as active ingredient said sterile supernatant or said concentrate or dry product incorporated into a carrier such as a conventional skin cream or ointment base.

O mikroorganismu, kterého se používá podle vynálezu, totiž o kmenu Trichosporon Kashiwayama se uvažuje, že náleží mezi kvasinky, avšak kmen je někdy klasifikován jako náležející mezi fungi imperfacti. Podle toho je možno konstatovat, že kmen lze identifikovat jako kmen náležející do rodu Geotricum nebo Endomycopsis, což se zakládá na vědeckém pojetí odborníků.The microorganism used according to the invention, namely the strain Trichosporon Kashiwayama, is considered to be a yeast, but the strain is sometimes classified as belonging to fungi imperfacti. Accordingly, it can be stated that the strain can be identified as a strain belonging to the genus Geotricum or Endomycopsis, which is based on the scientific concept of experts.

Kmen, který se používá podle vynálezu, se vyznačuje tím, že má korálkovité arthrospory a pseudomycelium. Kmen se kromě toho vyznačuje tím, že fermentační produkt kmene, tj. supernatant kultivační kapaliny, má sám o sobě prominentní kosmetický účinek na lidskou pokožku.The strain used according to the invention is characterized in that it has beaded arthrospores and pseudomycelium. In addition, the strain is characterized in that the fermentation product of the strain, i.e. the culture liquid supernatant, has in itself a prominent cosmetic effect on human skin.

Účinná látka, která vyvolává kosmetický účinek, je dosud neznámá. Použije-li se však sterilního supernatantu fermentační kapaliny, jejího koncentrátu nebo suchého produktu z této kapaliny jako takového, nebo po jeho smíchání s vhodným nosičem a upravení na přípravek vhodný k použití na lidskou pokožku, například mast, lze docílit následujících kosmetických účinků.The active ingredient which produces the cosmetic effect is still unknown. However, if a sterile fermentation liquid supernatant, concentrate or dry product thereof is used as such, or after mixing with a suitable carrier and preparation for use in a human skin, for example an ointment, the following cosmetic effects may be obtained.

1) Fermentační kapalina je slabě kyselá (má hodnotu pH v rozmezí 4,5 až 5,0) a je netoxická k pokožce. Podporuje ochranný účinek tukové membrány na pokožku, zejména antibakteriální kontrolní účinek vlastní tukové membráně.1) The fermentation liquid is weakly acidic (has a pH in the range of 4.5 to 5.0) and is non-toxic to the skin. It promotes the protective effect of the fat membrane on the skin, especially the antibacterial control effect of the fat membrane itself.

2) Zabraňuje se nadbytečnému odlupování části keratinu z rohovité vrstvy a současně se v rohovité vrstvě udržuje přiměřený obsah vody a lze tudíž udržovat v dobrém stavu vlastnosti pokožky jako takové, například vlhkost a pružnost.2) Unnecessary peeling of a portion of the keratin from the horn layer is avoided while maintaining an adequate water content in the horn layer and hence the skin properties as such, such as moisture and elasticity, can be maintained in good condition.

3) Je kontrolován metabolismus epidermálních buněk, aby byla podporována přiměřená tvorba keratinu a hladká propagace a diferenciace epidermálních buněk.3) Epidermal cell metabolism is controlled to promote adequate keratin production and smooth epidermal cell propagation and differentiation.

4) Zejména u mastné pokožky je kontrolováno nadbytečné vylučování tuku a zabraňuje se vzrůstu tloušťky tukové membrány. Podporuje se difúze tuku z vlasových foliklů na povrch pokožky a dociluje se ochranného účinku před tukovou dermatitidou, například akné.4) Especially in the case of oily skin, excessive fat secretion is controlled and an increase in the thickness of the fat membrane is prevented. It promotes the diffusion of fat from the hair follicles to the skin surface and achieves a protective effect against fat dermatitis, such as acne.

5) Protože vlákna kolagenu síťovitého stavu jsou zesilována nebo botnají, aby udržela přiměřený obsah vody v horních vrstvách, v pokožce je udržována dobrá a normální tvrdost a pružnost.5) Because the reticulated collagen fibers are reinforced or swellable to maintain an adequate water content in the upper layers, good and normal hardness and elasticity are maintained in the skin.

6) Protože se zlepšuje krevní oběh, urychluje se metabolismus pokožky a přenos odpadního materiálu z pokožky do žil a jeho vylučování. Současně je urychlováno vylučování melaninového barviva mimo tělo.6) As blood circulation improves, the metabolism of the skin and the transfer of waste material from the skin to the veins and its excretion are accelerated. At the same time, the excretion of the melanin dye outside the body is accelerated.

7) U poruch pokožky způsobených oxidací při aktivním záření, působí fermentační kapalina nebo její sterilní supernatant na tukovou membránu jako antioxidační činidlo' a urychluje odbarvování abnormálně ukládaného melaninového barviva v kožních skvrnách a podobně. Když se použije fermentační tekutiny nebo jejího sterilního supernatantu v kombinaci s působením infračervených paprsků nebo orální aplikací vitaminu E, lze docílit preventivního synergického účinku u kontaktní dermatitidy, kožních skvrn a abnormálního ukládání barviva, způsobeného heliosensitivitou.7) In skin disorders caused by oxidation under active radiation, the fermentation liquid or its sterile supernatant acts on the fat membrane as an antioxidant and accelerates the bleaching of abnormally deposited melanin dye in skin spots and the like. When the fermentation fluid or its sterile supernatant is used in combination with infrared treatment or oral administration of vitamin E, a preventive synergistic effect on contact dermatitis, skin spots and abnormal dye deposition due to heliosensitivity can be achieved.

V dalším budou popsány mykologické vlastnosti kmene Trichosporon Kashiwayama, uloženého u FRI pod depozitním číslem 4 821, kterého se používá ve vynálezu.The mycological properties of the Trichosporon Kashiwayama strain deposited with FRI under deposit number 4,821 used in the invention will be described below.

(1) Morfologické vlastnosti:(1) Morphological characteristics:

lj Tvar a velikost (tekutá půda se sladovým extraktem): po třech dnech kultivace při teplotě 25 °C lze pozorovat buňky obdélníkového nebo vejčitého tvaru s velikostí 4 až 3 μτη. krát 3. až 20 gm, a jestliže se kultivace provádí po dobu pěti dní nebo déle, tvar buněk se stává nepravidelným a posléze se buňky stávají myceloidními.Shape and size (liquid soil with malt extract): after three days of cultivation at 25 ° C, rectangular or ovoid cells of 4 to 3 μτη size can be observed. 3 to 20 gm, and if the culture is carried out for five days or more, the shape of the cells becomes irregular and then the cells become myceloid.

2] Tvorba pseudomycelia (povrchová kultura na agarovém živném prostředí s bramborovým extraktem):2] Formation of pseudomycelium (surface culture on agar medium with potato extract):

Buňky mají pseudohyfový nebo pseudomyceliální charakter a mají charakteristické klikaté athrospory, nikoliv však konidie.The cells have a pseudohyphal or pseudomycelial character and have characteristic zigzag athrospores, but not conidia.

3] Askospory:3] Askospora:

Buňky nemají askospory.Cells do not have ascospores.

4] Ballistospory:4] Ballistospores:

Buňky nemají ballistospory.Cells do not have ballistospores.

(2) Charakteristické vlastnosti živné půdy:(2) Characteristics of the broth:

1) Kolonie na agarové živné půdě: (sladový extrakt — MY agarová kultivační půda):1) Colonies on agar broth: (malt extract - MY agar broth):

matný, bezbarvý, vlasovitý a hrubý povrch, s velice měkkým nevypouklým, avšak plochým, obarveným okrajem.matt, colorless, hairy and rough surface, with a very soft, non-convex but flat, colored edge.

2] Film na tekuté živné půdě (MY teku2470872] Film on liquid culture medium (MY teku247087

S tá živná půda se sladovým extraktem): Tvoří se bílý, chlupatý, vločkovitý a tuhý film.(Malt extract broth): A white, shaggy, flaky and solid film is formed.

(3) Fyziologické vlastnosti:(3) Physiological properties:

I) Zkvašování sacharidů:I) Fermentation of carbohydrates:

Nejsou zvkašovány glukóza, galaktóza, sacharóza, laktóza, treharóza, raffínóza, inzulín.Glucose, galactose, sucrose, lactose, treharose, raffinose, insulin are not excreted.

2} Využití sacharidů (asimilace):2} Use of carbohydrates (assimilation):

D-glukóza +, D-galaktóza +, maltóza —, raffínóza —sacharóza —, laktóza —, mléčnan sodný +, D-xylóza +, erythrit —, D-mannit +, L-sorbóza+, inosit —, treharóza —, D-arabinóza —, L-arabinóza —, jantaran sodný +, citran sodný +, octan sodný +, inulin —, rozpustný škrob —, ethanol +, glycerol +, cellobióza —.D-glucose +, D-galactose +, maltose -, raffinose — sucrose -, lactose -, sodium lactate +, D-xylose +, erythrite -, D-mannit +, L-sorbose +, inosit -, treharose -, D- arabinose -, L-arabinose -, sodium succinate +, sodium citrate +, sodium acetate +, inulin -, soluble starch -, ethanol +, glycerol +, cellobiose -.

Poznámka:Note:

+: využíváno —: nevyužíváno+: used -: not used

3) Využití dusičnanů:3) Utilization of nitrates:

Nejsou využívány.They are not used.

3) Využití dusitanů:3) Use of nitrites:

Nejsou využívány.They are not used.

5] Využití hydrochloridu ethylaminu: Není využíván.5] Use of ethylamine hydrochloride: Not used.

6) Rozklad glykosidu (arbutin):6) Decomposition of glycoside (arbutin):

Je rozkládán.It is decomposed.

7] Tvorba analogů škrobu:7] Formation of starch analogues:

Nevznikají.They do not arise.

8) Tvorba barviva:8) Dye formation:

Netvoří se.Does not form.

9) Tvorba esterů:9) Formation of esters:

Tvoří se.Creating.

10] Lakmusová mléčná reakce:10] Lacmus milk reaction:

Nesráží se.It doesn't shrink.

II) Požadavek vitamínů:II) Vitamins requirement:

Nejsou požadovány.Not required.

12) Odolnost k soli:12) Resistance to salt:

Kritická koncentrace od 6 do 8 hmot./ /obj. °/o.Critical concentration from 6 to 8 w / v ° / o.

13) Optimální teplota:13) Optimal temperature:

°C.Deň: 32 ° C.

14) Optimální hodnota pH: 5,0.14) Optimal pH: 5.0.

15) Rozklad močoviny: Nerozkládá se.15) Urea decomposition: Not decomposed.

16) Růst na 50 % hmot./hmot. glukózovém agaru nebo 60 % hmot./hmot. agarovém prostředí s kvasničním extraktem.16) Growth to 50% w / w glucose agar or 60% w / w. agar medium with yeast extract.

Neroste.Don't grow.

17) Růst při teplotě 37 °C:17) Growth at 37 ° C:

Neroste.Don't grow.

18) Tvorba kyseliny z glukózy:18) Acid formation from glucose:

Netvoři se.Don't create.

19) Rezistence k cyklohexylimidu:19) Resistance to cyclohexylimide:

Resistentní.Resistent.

20) Rozklad olejů a tuků:20) Decomposition of oils and fats:

Rozkládají se.They decompose.

(4) Další mykologické vlastnosti:(4) Other mycological properties:

1) Tvorba pachu1) Odor formation

Tento kmen se vyznačuje tvorbou vonné složky. Z výsledků plynové chromatografie bylo nalezeno, že vonná složka se skládá hlavně z ethanolu, ethylacetátu, isopropylalkoholu, isopropylacetátu, isobutylalkoholu, isobutylacetátu, isoamylalkoholu a isoamylacetátu. Vůně je takzvaná jablečná vůně. Ve srovnání se známými kvasinkami, které produkují vonné látky, se kmen podle vynálezu vyznačuje tím, že nejenom tvorba vyšších alkoholů, ale i jejich etherů je vysoká.This strain is characterized by the formation of a fragrance component. From the gas chromatography results it was found that the fragrance component consists mainly of ethanol, ethyl acetate, isopropyl alcohol, isopropyl acetate, isobutyl alcohol, isobutyl acetate, isoamyl alcohol and isoamyl acetate. The smell is the so-called apple smell. Compared with the known fragrance-producing yeast, the strain according to the invention is characterized in that not only the formation of higher alcohols but also their ethers is high.

Optimální podmínky pro tvorbu těchto neutrálních vonných složek jsou následující:The optimum conditions for the formation of these neutral fragrances are as follows:

a) Počáteční hodnota pH 4,0 až 5,0 a udržení nízké hodnoty pH během fermentace.a) Initial pH of 4.0 to 5.0 and keeping the pH low during fermentation.

b) Celkový obsah dusíku činí 400 až 500 mg/1 živné půdy.(b) The total nitrogen content shall be between 400 and 500 mg / l of culture medium.

Jako zdroje anorganického dusíku se používá výhodně síranu amonného, dusičnanu amonného nebo chloridu amonného a jako zdroje organického dusíku se používá výhodně kvasničného extraktu, kasaminokyseliny a peptonu. Dále se dosáhne dobrých výslesdků přidáním aminokyselin, jako je například leucin, isoleucin, valin a fenylalanin.Preferably, ammonium sulfate, ammonium nitrate or ammonium chloride is used as the inorganic nitrogen source, and preferably yeast extract, casamino acid and peptone are used as the organic nitrogen source. Furthermore, good results are obtained by the addition of amino acids such as leucine, isoleucine, valine and phenylalanine.

c) Volba zdroje uhlíku.c) Choice of carbon source.

Jako zroj uhlíku je vhodná glukóza, galaktóza, ethylalkohol a glycerol. Výhodná koncentrace sacharidů je 5 % hmotnostních.Suitable carbon sources include glucose, galactose, ethyl alcohol and glycerol. The preferred carbohydrate concentration is 5% by weight.

d) Poměr inokulace buněk je 1 až 2 %.d) The cell inoculation ratio is 1 to 2%.

e) Teplota při kultivaci je v rozmezí 25 až 30 °C. Výhodná je stacionární kultura.e) The culture temperature is in the range of 25 to 30 ° C. Stationary culture is preferred.

2) Tvorba organických kyselin: Kyselina mravenčí, propionová, máselná, jantarová a citrónová vznikají z glukózy.2) Formation of organic acids: Formic, propionic, butyric, succinic and citric acids are formed from glucose.

Pro přípravu kosmetického prostředku za použití kmene Trichosporon Kashiwayama podle vynálezu lze použít obvyklé živné půdy s kvasničným extraktem. Podle jednoho výhodného provedení se provádí třepání nebo stacionární kultivace při teplotě 20 až 30 °C po dobu asi 24 hodin v pevném nebo tekutém prostředí, které obsahuje 0,3 % hmot./obj. glukózy, 0,5 % hmot./obj. sbíraného mléka a 0,05 % hmot./obj. kvasničného extraktu a má hodnotu pH 4,0 až 6,0 a stejná živná půda, jak je uvedená výše, se očkuje získaným produktem kultivace jako zárodkem stacionární kultivace nebo kutivace za třepání se provádí při teplotě 30 °C po dobu 3 až 7 dní.For the preparation of the cosmetic composition using the Trichosporon Kashiwayama strain according to the invention, conventional yeast extract broths can be used. According to one preferred embodiment, shaking or stationary cultivation is carried out at a temperature of 20 to 30 ° C for about 24 hours in a solid or liquid medium containing 0.3% w / v. glucose, 0.5% w / v of the milk collected and 0.05% w / v. The yeast extract and has a pH of 4.0 to 6.0 and the same broth as above is inoculated with the obtained culture product as a seed of stationary cultivation or shaking cultivation at 30 ° C for 3 to 7 days.

Tekutá kultura se podrobí filtraci a odstranění buněk obvyklými způsoby, například za použití membránového filtru a bezbuněnčný supernatant se koncentruje, například za sníženého tlaku, s výhodou při stupni koncentrace 4 až 25. Získaný koncentrát se sterilizuje obvyklými způsoby a skladuje při teplotě místnosti nebo v lednici.The liquid culture is subjected to filtration and cell removal by conventional means, for example using a membrane filter, and the cell-free supernatant is concentrated, for example under reduced pressure, preferably at a concentration level of 4 to 25. The obtained concentrate is sterilized by conventional means and stored at room temperature or refrigerator .

Příklad bezbuněčného supernatantu připraveného podle tohoto vynálezu má vlastnosti uvedené v tabulce 1.An example of a cell-free supernatant prepared according to the invention has the properties listed in Table 1.

Tabulka 1Table 1

Bezbuněčný čištěný filtrát supernatantu produktu kultivace kmene podle vynálezu obsahuje malá množství aminokyselin, sacharidů a lipidů. Když se filtrát hodnotí kvantitativně, lze vidět, že celkový obsah dusíku je 0,005 až 0,15 °/o a celkový obsah fosforu je 0,004 až 0,014 %. lj Povaha a stav:The cell-free, purified filtrate of the culture product of the strain according to the invention contains small amounts of amino acids, carbohydrates and lipids. When the filtrate is evaluated quantitatively, it can be seen that the total nitrogen content is 0.005 to 0.15% and the total phosphorus content is 0.004 to 0.014%. Nature and condition:

nažloutlou průhlednou kapalinu s jemnou vůní.a yellowish transparent liquid with a delicate aroma.

2) Ověřovací zkoušky2) Validation tests

1) 20 ml filtrátu se odpaří na vodní lázni až se objem sníží asi na 50 ml. Potom se přidá ke koncentrátu 1 ml ninhydrinového zkušebního roztoku. Když se směs zahřeje po dobu 30 minut, tekutina získá fialovou barvu.1) Evaporate 20 ml of the filtrate in a water bath until the volume is reduced to about 50 ml. 1 ml of the ninhydrin test solution is then added to the concentrate. When the mixture is heated for 30 minutes, the liquid becomes violet.

2) 5 ml kyseliny dusičné se přidá ke koncentrátu vzniklému odpařením, stejně jako je popsáno u lj a směs se zahřívá k varu po dobu 20 minut. Když se směs ochladí, neutralizuje se přidáním 10% roztoku hydroxidu sodného. Potom se přidají ke směsi 2 ml zkušebního roztoku molybdenanu amonného. Když se směs zahřeje, kapalina zežloutne. Jestliže se ke kapalině přidá 10% roztok hydroxidu sodného stává se bezbarvou.2) Add 5 ml of nitric acid to the concentrate formed by evaporation as described for 1j and heat the mixture to boiling for 20 minutes. When the mixture was cooled, it was neutralized by addition of 10% sodium hydroxide solution. 2 ml of ammonium molybdate test solution are then added to the mixture. When the mixture warms, the liquid turns yellow. When a 10% sodium hydroxide solution is added to the liquid, it becomes colorless.

3) K 5 ml filtrátu se přidají 10 mg indolu a 2 ml kyseliny chlorovodíkové a směs se dostatečně protřepe. Když se směs potom zahřeje po dobu 10 minut, kapalina zčervená.3) To 5 ml of the filtrate were added 10 mg of indole and 2 ml of hydrochloric acid and the mixture was shaken sufficiently. When the mixture is then heated for 10 minutes, the liquid turns red.

3. Fyzikální vlastnosti:3. Physical properties:

lj Měrná tíha (d₂5²⁵): 1,000 až 1,015lj Specific gravity (d ²⁵ ₂ 5): 1.000 to 1.015

2) Index lomu (nD²⁴): 1,330 až 1,3402) Refractive index (nD ²⁴ ): 1.330 to 1.340

3) pH (25 °Cj: 4,5 až 5,5.3) pH (25 ° C): 4.5 to 5.5.

4. Odparek:4. Evaporator:

0,5 až 2,0 %.0.5 to 2.0%.

Analytické hodnoty příkladu koncentrátu (stupeň koncentrace 2} bezbuněčného supernatantu připraveného podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce 2.The analytical values of the example concentrate (concentration level 2) of the cell-free supernatant prepared according to the invention are shown in Table 2.

Filtrát představuje bezbarvou, až slaběThe filtrate is colorless, slightly faint

Tabulka 2Table 2

Obsah vody (podle metody sušení za mosférického tlaku):Water content (according to atmospheric pressure drying method):

Bílkoviny (koeficient 6,25):Proteins (coefficient 6,25):

Obsah lipidů (Soxhletovou extrakcí): Obsah vláken:Lipid content (Soxhlet extraction): Fiber content:

Obsah popela:Ash content:

Obsah cukru:Sugar content:

Celkový obsah pevných látek:Total solids content:

Obsah dusíku v aminové formě:Amine nitrogen content:

Filtrační kyselost:Filtration acidity:

Těkavá báze tvořící obsah dusíku:Volatile nitrogen-forming base:

Obsah arsenu (jako As₂0_:!j:Arsenic (as As ₂ _0:! J:

Obsah těžkých kovů (jako Pb):Heavy metal content (as Pb):

Celkový obsah rtuti:Total mercury content:

Obsah kadmia:Cadmium content:

Obsah vápníku:Calcium content:

Obsah fosforu:Phosphorus content:

Obsah kyseliny fosforečné:Phosphoric acid content:

Obsah kyseliny octové:Acetic acid content:

Obsah kyseliny máselné:Butyric acid content:

Obsah kyseliny mléčné:Lactic acid content:

Obsah kyseliny citrónové:Citric acid content:

Počet živých buněk:Number of living cells:

E. coli:E. coli:

Staphylococcus aureus:Staphylococcus aureus:

Počet hub:Number of mushrooms:

Počet kvasinek:Number of yeasts:

Obsah kyseliny propionové:Propionic acid content:

Obsah kyseliny sorbové:Sorbic acid content:

Kyselina benzoová:Benzoic acid:

Ester kyseliny p-hydroxybenzoové:P-Hydroxybenzoic acid ester:

Obsah vitamínu B_x:Vitamin B _x content:

Obsah vitamínu B₂:Vitamin B ₂ content:

Obsah vitamínu C:Vitamin C content:

Obsah vitamínu B_R:Vitamin B _R content:

Obsah vitamínu B_J2:Vitamin B content _J2 :

Obsah kyseliny pantothenové:Pantothenic acid content:

Obsah cholinu:Choline content:

Obsah kyseliny listové:Folic acid content:

Obsah niaxinu:Niaxin content:

Obsah celkového karotenu:Total carotene content:

Hodnota pH:PH value:

Skladba aminokyseliny*** at98,7 % stopa 0,2 % %Amino acid composition *** at98,7% trace 0,2%%

0,1 «/o 1,0 %0.1 «/ o 1.0%

1,3 % mg %1.3% mg%

0,6** mg % nedetegováno (mez detekce: 0,1 ppm) nedetegováno (mez detekce: 1 pprnj nedetegováno (mez detekce: 0,01 ppm) nedetegováno (mez detekce 0,01 ppm)0.6 ** mg% undetected (limit of detection: 0.1 ppm) undetected (limit of detection: 1 first undetected (limit of detection: 0.01 ppm) undetected (limit of detection 0.01 ppm)

14,7 mg %14,7 mg%

9,8 mg % nedetegováno (mez detekce: 0,1 %) nedetegováno (mez detekce 0,01 %) nedetegováno (mez detekce 0,01 % j9.8 mg% undetected (limit of detection: 0.1%) undetected (limit of detection 0.01%) undetected (limit of detection 0.01%)

0,06 %0,06%

0,02 θ/ο méně než 30 buněk v ml (-) (-) ( —)/ml (-j/ml nedetegováno (mez detekce 0,02 g/kg) nedetegováno (mez detekce 0,005 g/kg) 0,42' g/kg nedetegováno (mez detekce 0,005 g/kgj nedetegován (mez detekce 0,01 mg %) 0,02 mg % nedetegován (mez detekce 2 mg % ) nedetegován (mez detekce 5 gg %) nedetegován (mez detekce 0,05 gg %) 0,09 mg % nedetegován (mez detekce 0,03 % j nedetegován (mez detekce 1 ,«g % j nedetegován (mez detekce 0,03 mg %) nedetegován (mez detekce 0,02 mg °/oj0.02 θ / ο less than 30 cells per ml (-) (-) (-) / ml (-j / ml undetected (detection limit 0.02 g / kg) undetected (detection limit 0.005 g / kg)) 0, 42 'g / kg undetected (limit of detection 0.005 g / kgj not detected (limit of detection 0.01 mg%) 0.02 mg% undetected (limit of detection 2 mg%) undetected (limit of detection 5 gg%) undetected (limit of detection 0, 05 gg%) 0.09 mg% undetected (detection limit 0.03% j undetected (detection limit 1, «g% j undetected (detection limit 0.03 mg%) undetected (detection limit 0.02 mg ° / oj)

4,94.9

Arginin Arginine méně než 0,01 less than 0.01 lysin lysine méně než 0,01 less than 0.01 hisíidin hisíidin méně než 0,01 less than 0.01 fenylalanln phenylalanine méně než 0,01 less than 0.01 tyrosin tyrosine méně než 0,01 less than 0.01 leucin leucine méně než 0,01 less than 0.01 isoleucin isoleucine méně než 0,01 less than 0.01 methionin methionine méně než 0,01 less than 0.01 valin valine méně než 0,01 less than 0.01 alanin alanine méně než 0,01 less than 0.01 glycin glycine méně než 0,01 less than 0.01 prolin proline méně než .0,01 less than .0.01 kyseliny glutamová glutamic acid méně než 0,01 less than 0.01 serin serine méně než 0,01 less than 0.01 threonin threonine méně než 0,01 less than 0.01 kyselina asparagová aspartic acid méně než 0,01 less than 0.01 tryptofau tryptofau méně než 0,01 less than 0.01 cystin cystine méně než 0,01 less than 0.01 Poznámka Note

- % vztaženo na vodu *” počet ml 1N alkálie potřebné k titrování při neutralizaci 100 g vzorku ^1: *³ g aminokyseliny ve 100 g vzorku (cystin: metoda oxidace kyseliny permravončí, tryptofan: mlkrobiol. test)-% based on water * ”number of ml of 1N alkali required for titration at neutralization of 100 g of sample ^1: * ³ g of amino acid in 100 g of sample (cystine: method of oxidizing permravonic acid, tryptophan: mlcrobiol. test)

Pochopitelně bezbuněčného sterilního supernatantu lze použít jako kosmetického prostředku bez koncentrace. Avšak, z hlediska skladování nebo podobně, je výhodné, aby bezbuněčný sterilní supernatant byl koncentrován. Dále, používá se vysokého koncentrátu o stupni koncentrace více než 25 nebo lze použít suchého produktu. Takového koncentrátu, vysokého koncentrátu nebo suchého produktu lze použít jako kosmetického prostředku jako takového. Dále, kosmetický prostředek podle vynálezu lze vytvořit smícháním takového koncentrátu, vysokého koncentrátu nebo suchého produktu s krémem, masťovým základem nebo jiným nosičem.Of course, the cell-free sterile supernatant can be used as a cosmetic composition without concentration. However, for storage or the like, it is preferred that the cell-free sterile supernatant is concentrated. Further, a high concentrate having a degree of concentration of more than 25 or a dry product may be used. Such a concentrate, high concentrate or dry product may be used as a cosmetic composition per se. Further, the cosmetic composition of the invention may be formed by mixing such a concentrate, high concentrate or dry product with a cream, ointment base or other carrier.

Když je analyzován koncentrát vzniklý koncentrací výše uvedeného bezbuněčného sterilního supernatantu koncentračního stupně 4, lze vidět, že jsou obsaženy různé aminokyseliny a vitamíny. Avšak, protože analýza se provádí z všeobecných hledisek, je snadno pochopitelné, že i když se příslušně složky smíchají podle nalezených analytických hodnot, nelze připravit kosmetický prostředek podle vynálezu, jinými slovy předpokládá se, že účinnosti kosmetického prostředku podle vynálezu jsou založeny na neznámých složkách mimo dosah analýzy.When analyzing the concentrate formed by the concentration of the above cell-free sterile supernatant of concentration level 4, it can be seen that various amino acids and vitamins are present. However, since the analysis is carried out in general terms, it is readily understood that although the ingredients are mixed according to the analytical values found, the cosmetic composition of the invention cannot be prepared, in other words, the efficacy of the cosmetic composition of the invention is assumed to be based on unknown ingredients. impact analysis.

Výsledky zkoušky toxicity za použití kuřecího embrya prokázaly, že výše uvedený bezbuněčný sterilní koncentrát (koncentrační stupeň 4) není toxický. Dále výsledky zkoušek s náplastěmi na lidském těle a zkoušky kontinuálního dráždění lidské pokožky prokázaly, že koncentrát není vůči lidskému tělu vůbec toxický. Kromě toho výsledky dráždění oka králíka prokázaly, že koncentrát není vůbec dráždivý. Výsledky zkoušek na antibiotické působení prokázaly, že koncentrát neobsahuje antibiotikum.The results of the chicken embryo toxicity test showed that the above cell-free sterile concentrate (concentration grade 4) is not toxic. Furthermore, the results of tests with patches on the human body and tests of continuous irritation of the human skin have shown that the concentrate is not toxic to the human body at all. In addition, the results of irritation of the rabbit eye showed that the concentrate was not irritating at all. The results of the antibiotic tests showed that the concentrate did not contain an antibiotic.

Bylo potvrzeno, že kosmetický prostředek podle vynálezu má příznivý účinek na kožní skvrny, poškozenou pokožku, kontaktní dermatitidu a popálenou pokožku. Tyto účinky jsou dále popsány v následujících pokusech.It has been confirmed that the cosmetic composition of the invention has a beneficial effect on skin spots, damaged skin, contact dermatitis and burned skin. These effects are further described in the following experiments.

Zkouška použití náplastí na lidském těle.Testing the use of patches on the human body.

Padesát žen, trpících některými kosmetickými vadami, ve stáří 23 až 44 let, bylo vybráno ke zkouškám. Na vnitřní stranu levého ramene a paravertebrální krajinu zad byly použity lepivé náplasti velikosti 4 cm x x 4 cm, obsahující asi 0,2 g koncentrátu (koncentračního stupně 2) podle vynálezu a po uplynutí doby 48 hodin byly náplasti odstraněny a ošetřené oblasti byly vyšetřeny. U žádné z těchto osob nebyla nepříznivě ovlivněna vnitřní strana levého ramene nebo paravertebrální oblast.Fifty women suffering from some cosmetic defects, aged 23 to 44 years, were selected for trials. Adhesive patches of 4 cm x 4 cm size containing about 0.2 g of concentrate (concentration grade 2) according to the invention were applied to the inside of the left shoulder and the paravertebral back region and after 48 hours the patches were removed and the treated areas examined. None of these subjects adversely affected the inside of the left shoulder or the paravertebral region.

Kontinuální zkouška na kožní dráždivost u člověkaContinuous skin irritation test in humans

Proužky sterilní gázy velikosti 10 cm² byly impregnovány asi 5 ml koncentrátu (koncentračního stupně 2} podle vynálezu a byly použity na pravou tvář 45 žen, stáří 23 až 45 let (35 žen trpělo některou z kosmetických vad nebo pod. a byly ošetřovány v dermatologické nemocnici a zbývajících deset žen byly zaměstnankyně této nemocnice) po dobu 15 minut.10 cm ² sterile gauze strips were impregnated with about 5 ml of concentrate (concentration grade 2) according to the invention and were applied to the right face of 45 women, aged 23 to 45 years (35 women suffered from any cosmetic defect or the like) and were treated in dermatological hospital and the remaining ten women were employees of this hospital) for 15 minutes.

Toto léčení bylo prováděno kontinuálně po dobu 40 dní. U žádné z žen nebyla pozorována žádná reakce a nevznikly potíže, jako například erythem.This treatment was performed continuously for 40 days. No reaction was observed in any of the women and no problems such as erythema occurred.

Zkouška dráždění oka u králíkaEye irritation test in rabbit

Jako pokusných zvířat bylo použito tří bílých králíků. Předem bylo potvrzeno, že oči nemají žádné abnormální znaky. Do pravého oka každého králíka bylo nakapáno· 0,1 ml koncentrátu (koncentrační stupeň 2) podle vynálezu a do levého oka bylo nakapáno 0,1 ml kontrolní tekutiny. Ihned po nakapání a 3, 6, 24, 48 a 72 hodin po nakapání byly obě oči vyšetřeny za použití štěrbinové lampy. Nepřirozené jevy, například jako zduření duhovky nebo spojivky nebylo vůbec pozorováno.Three white rabbits were used as experimental animals. It has been confirmed in advance that the eyes have no abnormal features. 0.1 ml of concentrate (concentration level 2) according to the invention was dripped into the right eye of each rabbit and 0.1 ml of control fluid was dripped into the left eye. Immediately after instillation and 3, 6, 24, 48 and 72 hours after instillation, both eyes were examined using a slit lamp. Unnatural phenomena such as swelling of the iris or conjunctiva have not been observed at all.

Zkouška ošetření skvrn pokožkySkin spots treatment test

Bylo vybráno 621 žen majících na tváří kožní skvrny, vyjma osob s jaterními chorobami nebo ženskými chorobami a těhotných žen, které vyhledaly ošetření kožních skvrn v dermatologických nemocnicích. Po umytí tváře byly kožní póry otevřeny ozónem a parou a na místo skvrny byla přiložena gáza impregnovaná koncentrátemA total of 621 women with skin spots were selected, except for people with liver or female diseases, and pregnant women who sought skin spots in dermatological hospitals. After the face was washed, the skin pores were opened with ozone and steam and a spot of impregnated with concentrate was applied to the spot

I (koncentrační stupeň 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu. Přiložená gáza byla pokryta náplastí typu „Saran — —Wrap“ a po dobu 15 až 20 minut bylo provedeno ozáření infračervenými paprsky, aby koncentrát pronikl do pokožky. Toto ošetření bylo prováděno' jednou týdně a pokračovalo po dobu tří měsíců. Bylo nalezeno, že u 363 žen (58,4 %) se vysoce zlepšil stav, u 122 žen (19,8 %) došlo k poměrnému zlepšení, u 133 žen (21,4 °/q) nebylo pozorováno žádné zlepšení, u jedné ženy (0,01 %] došlo ke zhoršení a u dvou zbývajících žen (0,03 %) byla pozorována kontaktní dermatitida (předpokládá se, že kontaktní dermatitida byla způsobena důvody irelevantními k tomuto ošetření j. Počet osob, u kterých se zlepšil stav podstatně nebo relativně, byl vyšší než 80 °/o. Dále u 60 % z 365 žen, u nichž se podstatně zlepšil stav, kožní skvrny zcela zmizely.I (concentration step 2) of the cell-free supernatant of the invention. The enclosed gauze was covered with a "Saran - Wrap" patch and was irradiated with infrared rays for 15 to 20 minutes to allow the concentrate to penetrate the skin. This treatment was performed once a week and continued for three months. It was found that in 363 women (58.4%) the condition improved significantly, in 122 women (19.8%) there was a relative improvement, in 133 women (21.4 ° / q) no improvement was observed, in one women (0.01%) worsened and contact dermatitis was observed in the two remaining women (0.03%) (contact dermatitis was believed to be due to reasons irrelevant to this treatment. j) The number of subjects who had significantly improved the condition or relatively, it was higher than 80 ° / o. Furthermore, in 60% of the 365 women in whom the condition improved significantly, skin spots disappeared completely.

Zkouška ošetření kožních trhlin a jemných vrásekTest for treatment of skin cracks and fine wrinkles

Obvykle ženy starší než 25 až 30 let jsou nervózní z kožních trhlin a jemných vrásek a tento sklon je nápadný zejména u žen ve stáří 35 až 40 let, i když ženy starší než 40 let jsou nervózní podobně z kožních trhlin a jemných vrásek. Pro tuto zkoušku bylo vybráno 962 žen, které hodlaly navštívit dermatologické nemocnice (150 žen ve stáří 25 až 30 let, 218 žen ve stáří 30 až 35 let, 248 žen ve stáří 35 až 40 let, 172 žen ve stáří 40 až 45 let a 174 žen starších více než 45 let]. Po umytí pokožky obličeje byly kožní dutiny otevřeny ozónem a párou a gáza impregnovaná koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu byla přiložena těsně na pokožku tváře a gáza byla pokryta páskou typu Saran—Wrap. Po dobu 15 až 20 minut bylo provedeno ozáření infračervenými paprsky, aby koncentrát pronikl do pokožky. Bylo zjištěno, že po jednom ošetření byla poškozená kůže význačně zlepšena u 698 žen (73 °/o), k poměrnému zlepšení došlo u 156 žen (16 °/o), stav se nezměnil u 72 žen (7 °/o) a stav se nezhoršil u žádné z ošetřených žen, přičemž zbytek tvořilo 36 žen (4 %).Usually women older than 25 to 30 years are nervous from skin cracks and fine wrinkles, and this tendency is particularly noticeable in women aged 35 to 40 years, although women older than 40 years are nervous similar to skin cracks and fine wrinkles. 962 women were selected to visit dermatological hospitals (150 women aged 25-30 years, 218 women aged 30-35 years, 248 women aged 35-40 years, 172 women aged 40-45 years, and 174 women over 45 years of age] After washing the facial skin, the skin cavities were opened with ozone and steam and the gauze impregnated with concentrate (concentration level 2) of the cell-free supernatant of the invention was applied tightly to the facial skin and covered with Saran-Wrap. for 15 to 20 minutes, infrared irradiation was performed to allow the concentrate to penetrate the skin, and it was found that after one treatment, the damaged skin was significantly improved in 698 women (73 ° / o), with a relative improvement in 156 women (16 ° / o). o), the condition did not change in 72 women (7 ° / o) and the condition did not deteriorate in any of the treated women, the remainder being 36 women (4%).

Vzhledem k tomu, že kůže s trhlinami přechází v jemné vrásky, předpokládá se, že koncentrát podle vynálezu, který je účinným při ošetřování kůže s trhlinami, předchází vzniku jemných vrásek.Since the cracked skin becomes a fine wrinkle, it is believed that the concentrate of the invention, which is effective in treating the cracked skin, prevents fine wrinkles.

Zkouška účinku při kontaktní dermatitiděTest of effect in contact dermatitis

Byla vybrána žena stáří 21 let, která trpěla vyrážkou svěděním na víčkách obou očí od toho dne, kdy vyměnila oční stín od výrobce A za oční stín od výrobce B a byla stanovena diagnóza, že trpí kontaktní dermatitidou. Dermatolog ošetřil napadené oblasti gázou impregnovanou koncentrátem (stupeň koncentrace 2] bezbuněčného supernatantu podle vynálezu. Nebyl vůbec použit žádný steroldní preparát ani prostředek protizánětlivě účinný a antihistaminově účinný. Ošetřované osobě bylo podáno asi 20 ml koncentrátu a koncentrát byl přikládán nebo aplikován po dobu asi 30 minut dvakrát denně tj. ráno a večer. Po uplynutí doby 48 hodin od začátku íéčby svědění bylo odstraněno a po uplynutí doby 96 hodin od začátku léčby vyrážka v podstatě zmizela. Po uplynutí doby 1 týdne nebyla vyrážka vůbec pozorována.A 21-year-old woman was selected who had a rash of itching on the eyelids of both eyes since the day she exchanged eye shadow from manufacturer A with eye shadow from manufacturer B and was diagnosed as suffering from contact dermatitis. The dermatologist treated the affected areas with a gauze impregnated concentrate (concentration level 2) of the cell-free supernatant of the present invention.No sterol preparation or anti-inflammatory and antihistaminic agent was used at all, about 20 ml of the concentrate was administered to the treated person. twice a day, in the morning and in the evening, the itching was cleared 48 hours after the start of the treatment and the rash disappeared after 96 hours after the start of treatment, and no rash was observed after 1 week.

Zkouška ošetření spálenin a opařeninTest of treatment of burns and scalds

Žena stáří 47 roků s opařeninou horkou vodou na vnější části levého předloktí (stupeň spáleiny II) se zčervenáním a otokem a s malými puchýři navštívila dermatologa asi hodinu poté, co se opařila. Postižená krajina byla ihned ochlazena tekoucí vodou a gáza impregnovaná koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného sterilního supernatantu podle vynálezu byla použita na postižené místo a pokryta naolejovaným papírem. Potom byla postižená krajina ovázána. Po uplynutí doby 24 hodin bylo zjištěno, že malé puchýřky zcela zmizely, ačkoliv zčervenání a otok ještě trval a pacientka necítila žádnou bolest.A 47-year-old woman with scalds of hot water on the outside of her left forearm (degree of burn II) with redness and swelling, and with small blisters, visited a dermatologist about an hour after she was scalded. The affected landscape was immediately cooled with running water and the gauze impregnated with concentrate (concentration level 2) of the cell-free sterile supernatant of the invention was applied to the affected area and covered with oiled paper. Then the affected landscape was bandaged. After 24 hours, it was found that the small blisters had completely disappeared, although the redness and swelling still persisted and the patient felt no pain.

Muž stáří 30 let, který se opařil horkou vodou na zadní části pravé nohy (stupeň spáleniny II) se zčervenáním a otokem velikosti vejce, byl ošetřen koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného sterilního supernatantu podle vynálezu stejně jako je to popsáno vpředu. Po uplynutí doby 24 hodin zmizel otok, ačkoliv zčervenání ještě zůstávalo a pacient netrpěl žádnou bolest.A 30 year old male who was scalded with hot water at the back of his right leg (burn degree II) with redness and swelling of egg size was treated with a concentrate (concentration level 2) of the cell-free sterile supernatant of the invention as described above. After 24 hours, the swelling disappeared, although the redness remained and the patient suffered no pain.

Takto bylo prokázáno, že koncentrát podle vynálezu má významný účinek na spáleniny a opařeniny.It has thus been shown that the concentrate of the invention has a significant effect on burns and scalds.

Kosmetický prostředek podle vynálezu bude nyní popsán s odkazem na následující příklady.The cosmetic composition of the invention will now be described with reference to the following examples.

PřikladlHe did

Provzdušňováním míchaný fermentační tank objemu 1 000 litrů byl naplněn 800 litry živné půdy stejného složení, jaké je popsáno vpředu a po sterilizaci horkem a přirozeném ochlazení byla tato živná půda naočkována inokulem získaným předběžnou kultivací při teplotě 28 °C po dobu asi 30 hodin v 10 litrech stejného· živného prostředí a v malém vzdušněném míchaném fermentačním tanku. Potom byla prováděna kultivace při teplotě asi 28 °C po dobu asi 70 hodin za vzdušnění a míchání. Po ukončení fermentace byla kultivační tekutina filtrována, aby byly odstraněny pevné částice a buňky. Získaný filtrát byl koncentrován membránovým způsobem reverzní os247067 mózou, takže objem byl zredukován na 200 litrů.A 1000 liter aeration stirred fermentation tank was filled with 800 liters of nutrient broth of the same composition as described above, and after heat sterilization and natural cooling, the broth was inoculated with inoculum obtained at 28 ° C for about 30 hours in 10 liters. of the same culture medium and in a small airborne stirred fermentation tank. Thereafter, cultivation was carried out at about 28 ° C for about 70 hours with aeration and stirring. After the fermentation was complete, the culture fluid was filtered to remove solid particles and cells. The resulting filtrate was concentrated by reverse osmosis in a membrane manner so that the volume was reduced to 200 liters.

Získaný koncentrát byl sterilizován výměníkem tepla deskového typu, sterilně naplněn do skleněných nádob a uskladněn v lednici (5 °C).The concentrate obtained was sterilized by a plate type heat exchanger, sterile filled into glass containers and stored in a refrigerator (5 ° C).

Příklad 2Example 2

Sterilizovaný koncentrát získaný v příkladu 1 byl lyofilizován a získaný prášek byl smíchán se sterilním krémovým základem za vzniku kosmetického prostředku.The sterilized concentrate obtained in Example 1 was lyophilized and the obtained powder was mixed with a sterile cream base to form a cosmetic composition.

Příklad 3Example 3

Kosmetický přípravek byl připraven inkorporací 1 g sterilizovaného koncentrátu ¹⁴ získaného v příkladu 1 do kosmetického základu obsahujícího 1 g kyseliny stearové, 7 gramů včelího vosku, 4 g samoemulgovatelného monostearátu glycerolu, 30 g tekutého parafinu, 0,1 g bezvodého lanolinu a 40 gramů přečištěné vody a hnětením směsi obvyklým způsobem. Přípravek byl nalit a plněn do ampulí a naplněné ampule byly určeny k prodeji.The cosmetic composition was prepared by incorporating 1 g of sterilized concentrate ¹⁴ obtained in Example 1 into a cosmetic base containing 1 g of stearic acid, 7 grams of beeswax, 4 g of self-emulsifiable glycerol monostearate, 30 g liquid paraffin, 0.1 g anhydrous lanolin and 40 grams purified water and kneading the mixture in a conventional manner. The formulation was poured and filled into ampoules and the filled ampoules were for sale.

Příklad 4Example 4

Kosmetický prostředek byl připraven inkorporací vhodných množství hydrochloridu pyridoxinu, χ-oryzanolu, allantoinu, DL-atokoferolu a norkového oleje do přípravku připraveného' v příkladu 3.The cosmetic composition was prepared by incorporating appropriate amounts of pyridoxine hydrochloride, χ-oryzanol, allantoin, DL-atocopherol and mink oil into the formulation prepared in Example 3.

Claims

Cosmetic composition, characterized in that it consists of a product obtained by cultivating the Trichosporon Kashiwayama microorganism deposited in the FRI collection under deposit number 4,821, which can be identified as a microorganism belonging to the genus Geotricum or EnVYNALEZU domycopsis, either as a sterile liquid free of cells or a sterile filtrate or sterile supernatant, or a concentrate or dry product of a culture of the microorganism, optionally with the addition of conventional cosmetic ingredients.