CS247067B2

CS247067B2 - Cosmetic product

Info

Publication number: CS247067B2
Application number: CS826731A
Authority: CS
Inventors: Shinei Kashiwayama
Original assignee: Shinei Kashiwayama
Priority date: 1979-09-01
Filing date: 1982-09-20
Publication date: 1986-11-13

Abstract

Kosmetický prostředek obsahují jako hlavní složku produkt kultivace nového kmene Trichosporon Kashiwayama.The cosmetic product contains as its main ingredient a product of the cultivation of a new strain of Trichosporon Kashiwayama.

Description

Vynález se týká kosmetického prostředku sestávajícího ze sterilního supernatantu vzniklého filtrací a sterilizací tekuté kultury nového kmene, kmene Trlchosporon Kashiwayama uloženého u FRI pod depozitním číslem 4 821, který lze identifikovat obvyklými způsoby jako kmen náležející rodu Geotricum nebo Endomyceopsis, nebo sestávajícího z koncentrátu nebo suchého produktu vzniklého z uvedeného sterilního supernatantu obvyklými způsoby nebo kosmetického prostředku obsahujícího jako účinnou složku uvedený sterilní supernatant nebo uvedený koncentrát nebo suchý produkt inkorporovaný do nosiče, jako je například běžný kožní krém nebo masťový základ.The invention relates to a cosmetic composition consisting of a sterile supernatant obtained by filtration and sterilization of a liquid culture of a new strain, the strain Trichosporon Kashiwayama deposited with the FRI under deposit number 4,821, which can be identified by conventional means as a strain belonging to the genus Geotricum or Endomyceopsis, or consisting of a concentrate or dry product obtained from said sterile supernatant by conventional means, or a cosmetic composition containing as an active ingredient said sterile supernatant or said concentrate or dry product incorporated into a carrier, such as a conventional skin cream or ointment base.

O mikroorganismu, kterého se používá podle vynálezu, totiž o kmenu Trichosporon Kashiwayama se uvažuje, že náleží mezi kvasinky, avšak kmen je někdy klasifikován jako náležející mezi fungi imperfacti. Podle toho je možno konstatovat, že kmen lze identifikovat jako kmen náležející do rodu Geotricum nebo Endomycopsis, což se zakládá na vědeckém pojetí odborníků.The microorganism used in the invention, namely the strain Trichosporon Kashiwayama, is considered to belong to yeasts, but the strain is sometimes classified as belonging to fungi imperfecti. Accordingly, it can be stated that the strain can be identified as belonging to the genus Geotricum or Endomycopsis, which is based on the scientific understanding of experts.

Kmen, který se používá podle vynálezu, se vyznačuje tím, že má korálkovité arthrospory a pseudomycelium. Kmen se kromě toho vyznačuje tím, že fermentační produkt kmene, tj. supernatant kultivační kapaliny, má sám o sobě prominentní kosmetický účinek na lidskou pokožku.The strain used in the invention is characterized in that it has bead-like arthrospores and pseudomycelium. The strain is further characterized in that the fermentation product of the strain, i.e. the culture liquid supernatant, itself has a prominent cosmetic effect on human skin.

Účinná látka, která vyvolává kosmetický účinek, je dosud neznámá. Použije-li se však sterilního supernatantu fermentační kapaliny, jejího koncentrátu nebo suchého produktu z této kapaliny jako takového, nebo po jeho smíchání s vhodným nosičem a upravení na přípravek vhodný k použití na lidskou pokožku, například mast, lze docílit následujících kosmetických účinků.The active ingredient that produces the cosmetic effect is still unknown. However, when the sterile supernatant of the fermentation liquid, its concentrate or the dry product of this liquid is used as such, or after mixing it with a suitable carrier and making it into a preparation suitable for use on human skin, such as an ointment, the following cosmetic effects can be achieved.

1) Fermentační kapalina je slabě kyselá (má hodnotu pH v rozmezí 4,5 až 5,0) a je netoxická k pokožce. Podporuje ochranný účinek tukové membrány na pokožku, zejména antibakteriální kontrolní účinek vlastní tukové membráně.1) The fermentation liquid is slightly acidic (has a pH value of 4.5 to 5.0) and is non-toxic to the skin. It supports the protective effect of the lipid membrane on the skin, especially the antibacterial control effect of the lipid membrane itself.

2) Zabraňuje se nadbytečnému odlupování části keratinu z rohovité vrstvy a současně se v rohovité vrstvě udržuje přiměřený obsah vody a lze tudíž udržovat v dobrém stavu vlastnosti pokožky jako takové, například vlhkost a pružnost.2) Excessive peeling of part of the keratin from the stratum corneum is prevented, and at the same time, an adequate water content is maintained in the stratum corneum, and therefore the properties of the skin as such, such as moisture and elasticity, can be maintained in good condition.

3) Je kontrolován metabolismus epidermálních buněk, aby byla podporována přiměřená tvorba keratinu a hladká propagace a diferenciace epidermálních buněk.3) Epidermal cell metabolism is controlled to promote adequate keratin formation and smooth epidermal cell propagation and differentiation.

4) Zejména u mastné pokožky je kontrolováno nadbytečné vylučování tuku a zabraňuje se vzrůstu tloušťky tukové membrány. Podporuje se difúze tuku z vlasových foliklů na povrch pokožky a dociluje se ochranného účinku před tukovou dermatitidou, například akné.4) Especially for oily skin, excessive sebum secretion is controlled and the thickness of the sebum membrane is prevented. The diffusion of sebum from the hair follicles to the skin surface is promoted, and a protective effect against sebum dermatitis, such as acne, is achieved.

5) Protože vlákna kolagenu síťovitého stavu jsou zesilována nebo botnají, aby udržela přiměřený obsah vody v horních vrstvách, v pokožce je udržována dobrá a normální tvrdost a pružnost.5) Because the reticular collagen fibers are thickened or swell to maintain adequate water content in the upper layers, good and normal hardness and elasticity are maintained in the skin.

6) Protože se zlepšuje krevní oběh, urychluje se metabolismus pokožky a přenos odpadního materiálu z pokožky do žil a jeho vylučování. Současně je urychlováno vylučování melaninového barviva mimo tělo.6) As blood circulation improves, skin metabolism and the transfer of waste material from the skin to the veins and its excretion are accelerated. At the same time, the excretion of melanin pigment out of the body is accelerated.

7) U poruch pokožky způsobených oxidací při aktivním záření, působí fermentační kapalina nebo její sterilní supernatant na tukovou membránu jako antioxidační činidlo' a urychluje odbarvování abnormálně ukládaného melaninového barviva v kožních skvrnách a podobně. Když se použije fermentační tekutiny nebo jejího sterilního supernatantu v kombinaci s působením infračervených paprsků nebo orální aplikací vitaminu E, lze docílit preventivního synergického účinku u kontaktní dermatitidy, kožních skvrn a abnormálního ukládání barviva, způsobeného heliosensitivitou.7) For skin disorders caused by oxidation under active radiation, the fermentation liquid or its sterile supernatant acts on the fat membrane as an antioxidant agent and accelerates the discoloration of abnormally deposited melanin pigment in skin spots and the like. When the fermentation liquid or its sterile supernatant is used in combination with the action of infrared rays or oral administration of vitamin E, a preventive synergistic effect can be achieved for contact dermatitis, skin spots and abnormal pigment deposition caused by heliosensitivity.

V dalším budou popsány mykologické vlastnosti kmene Trichosporon Kashiwayama, uloženého u FRI pod depozitním číslem 4 821, kterého se používá ve vynálezu.The mycological properties of the Trichosporon Kashiwayama strain deposited at FRI under accession number 4821, which is used in the invention, will be described below.

(1) Morfologické vlastnosti:(1) Morphological characteristics:

lj Tvar a velikost (tekutá půda se sladovým extraktem): po třech dnech kultivace při teplotě 25 °C lze pozorovat buňky obdélníkového nebo vejčitého tvaru s velikostí 4 až 3 μτη. krát 3. až 20 gm, a jestliže se kultivace provádí po dobu pěti dní nebo déle, tvar buněk se stává nepravidelným a posléze se buňky stávají myceloidními.lj Shape and size (malt extract liquid medium): after three days of cultivation at 25°C, rectangular or ovoid cells with a size of 4 to 3 μη. by 3 to 20 μη. can be observed, and if the cultivation is carried out for five days or more, the shape of the cells becomes irregular and eventually the cells become myceloid.

2] Tvorba pseudomycelia (povrchová kultura na agarovém živném prostředí s bramborovým extraktem):2] Pseudomycelia formation (surface culture on agar medium with potato extract):

Buňky mají pseudohyfový nebo pseudomyceliální charakter a mají charakteristické klikaté athrospory, nikoliv však konidie.The cells have a pseudohyphal or pseudomycelial character and have characteristic zigzag arthrospores, but no conidia.

3] Askospory:3] Ascospores:

Buňky nemají askospory.The cells do not have ascospores.

4] Ballistospory:4] Ballistospores:

Buňky nemají ballistospory.The cells do not have ballistospores.

(2) Charakteristické vlastnosti živné půdy:(2) Characteristics of nutrient medium:

1) Kolonie na agarové živné půdě: (sladový extrakt — MY agarová kultivační půda):1) Colonies on agar medium: (malt extract — MY agar culture medium):

matný, bezbarvý, vlasovitý a hrubý povrch, s velice měkkým nevypouklým, avšak plochým, obarveným okrajem.matte, colorless, hairy and rough surface, with a very soft, non-convex, but flat, colored edge.

2] Film na tekuté živné půdě (MY teku2470872] Film on liquid medium (MY teku247087

S tá živná půda se sladovým extraktem): Tvoří se bílý, chlupatý, vločkovitý a tuhý film.With the nutrient medium with malt extract): A white, hairy, flaky and stiff film is formed.

(3) Fyziologické vlastnosti:(3) Physiological properties:

I) Zkvašování sacharidů:I) Fermentation of carbohydrates:

Nejsou zvkašovány glukóza, galaktóza, sacharóza, laktóza, treharóza, raffínóza, inzulín.Glucose, galactose, sucrose, lactose, treharose, raffinose, insulin are not fermented.

2} Využití sacharidů (asimilace):2} Carbohydrate utilization (assimilation):

D-glukóza +, D-galaktóza +, maltóza —, raffínóza —sacharóza —, laktóza —, mléčnan sodný +, D-xylóza +, erythrit —, D-mannit +, L-sorbóza+, inosit —, treharóza —, D-arabinóza —, L-arabinóza —, jantaran sodný +, citran sodný +, octan sodný +, inulin —, rozpustný škrob —, ethanol +, glycerol +, cellobióza —.D-glucose +, D-galactose +, maltose —, raffinose — sucrose —, lactose —, sodium lactate +, D-xylose +, erythritol —, D-mannitol +, L-sorbose+, inositol —, treharose —, D-arabinose —, L-arabinose —, sodium succinate +, sodium citrate +, sodium acetate +, inulin —, soluble starch —, ethanol +, glycerol +, cellobiose —.

Poznámka:Note:

+: využíváno —: nevyužíváno+: used —: not used

3) Využití dusičnanů:3) Use of nitrates:

Nejsou využívány.They are not used.

3) Využití dusitanů:3) Use of nitrites:

Nejsou využívány.They are not used.

5] Využití hydrochloridu ethylaminu: Není využíván.5] Use of ethylamine hydrochloride: Not used.

6) Rozklad glykosidu (arbutin):6) Decomposition of glycoside (arbutin):

Je rozkládán.It is being decomposed.

7] Tvorba analogů škrobu:7] Formation of starch analogues:

Nevznikají.They do not arise.

8) Tvorba barviva:8) Dye formation:

Netvoří se.It is not forming.

9) Tvorba esterů:9) Formation of esters:

Tvoří se.It is forming.

10] Lakmusová mléčná reakce:10] Litmus milk reaction:

Nesráží se.It does not clot.

II) Požadavek vitamínů:II) Vitamin requirement:

Nejsou požadovány.They are not required.

12) Odolnost k soli:12) Salt resistance:

Kritická koncentrace od 6 do 8 hmot./ /obj. °/o.Critical concentration from 6 to 8 wt./ /vol. %/o.

13) Optimální teplota:13) Optimum temperature:

°C.°C.

14) Optimální hodnota pH: 5,0.14) Optimum pH value: 5.0.

15) Rozklad močoviny: Nerozkládá se.15) Decomposition of urea: Does not decompose.

16) Růst na 50 % hmot./hmot. glukózovém agaru nebo 60 % hmot./hmot. agarovém prostředí s kvasničním extraktem.16) Growth on 50% w/w glucose agar or 60% w/w yeast extract agar medium.

Neroste.It doesn't grow.

17) Růst při teplotě 37 °C:17) Growth at 37°C:

Neroste.It doesn't grow.

18) Tvorba kyseliny z glukózy:18) Acid formation from glucose:

Netvoři se.Monsters are formed.

19) Rezistence k cyklohexylimidu:19) Resistance to cyclohexylimide:

Resistentní.Resistant.

20) Rozklad olejů a tuků:20) Decomposition of oils and fats:

Rozkládají se.They are breaking down.

(4) Další mykologické vlastnosti:(4) Other mycological properties:

1) Tvorba pachu1) Odor creation

Tento kmen se vyznačuje tvorbou vonné složky. Z výsledků plynové chromatografie bylo nalezeno, že vonná složka se skládá hlavně z ethanolu, ethylacetátu, isopropylalkoholu, isopropylacetátu, isobutylalkoholu, isobutylacetátu, isoamylalkoholu a isoamylacetátu. Vůně je takzvaná jablečná vůně. Ve srovnání se známými kvasinkami, které produkují vonné látky, se kmen podle vynálezu vyznačuje tím, že nejenom tvorba vyšších alkoholů, ale i jejich etherů je vysoká.This strain is characterized by the production of an aromatic component. From the results of gas chromatography, it was found that the aromatic component mainly consists of ethanol, ethyl acetate, isopropyl alcohol, isopropyl acetate, isobutyl alcohol, isobutyl acetate, isoamyl alcohol and isoamyl acetate. The aroma is the so-called apple aroma. Compared with known yeasts that produce aromatic substances, the strain according to the invention is characterized by the fact that not only the formation of higher alcohols but also their ethers is high.

Optimální podmínky pro tvorbu těchto neutrálních vonných složek jsou následující:The optimal conditions for the formation of these neutral aromatic components are as follows:

a) Počáteční hodnota pH 4,0 až 5,0 a udržení nízké hodnoty pH během fermentace.a) Initial pH value of 4.0 to 5.0 and maintaining a low pH value during fermentation.

b) Celkový obsah dusíku činí 400 až 500 mg/1 živné půdy.b) The total nitrogen content is 400 to 500 mg/1 nutrient medium.

Jako zdroje anorganického dusíku se používá výhodně síranu amonného, dusičnanu amonného nebo chloridu amonného a jako zdroje organického dusíku se používá výhodně kvasničného extraktu, kasaminokyseliny a peptonu. Dále se dosáhne dobrých výslesdků přidáním aminokyselin, jako je například leucin, isoleucin, valin a fenylalanin.As inorganic nitrogen sources, ammonium sulfate, ammonium nitrate or ammonium chloride are preferably used, and as organic nitrogen sources, yeast extract, casamino acid and peptone are preferably used. Furthermore, good results are achieved by adding amino acids such as leucine, isoleucine, valine and phenylalanine.

c) Volba zdroje uhlíku.c) Choice of carbon source.

Jako zroj uhlíku je vhodná glukóza, galaktóza, ethylalkohol a glycerol. Výhodná koncentrace sacharidů je 5 % hmotnostních.Suitable carbon sources include glucose, galactose, ethyl alcohol and glycerol. The preferred concentration of carbohydrates is 5% by weight.

d) Poměr inokulace buněk je 1 až 2 %.d) The cell inoculation rate is 1 to 2%.

e) Teplota při kultivaci je v rozmezí 25 až 30 °C. Výhodná je stacionární kultura.e) The temperature during cultivation is in the range of 25 to 30° C. Stationary culture is preferred.

2) Tvorba organických kyselin: Kyselina mravenčí, propionová, máselná, jantarová a citrónová vznikají z glukózy.2) Formation of organic acids: Formic, propionic, butyric, succinic and citric acids are formed from glucose.

Pro přípravu kosmetického prostředku za použití kmene Trichosporon Kashiwayama podle vynálezu lze použít obvyklé živné půdy s kvasničným extraktem. Podle jednoho výhodného provedení se provádí třepání nebo stacionární kultivace při teplotě 20 až 30 °C po dobu asi 24 hodin v pevném nebo tekutém prostředí, které obsahuje 0,3 % hmot./obj. glukózy, 0,5 % hmot./obj. sbíraného mléka a 0,05 % hmot./obj. kvasničného extraktu a má hodnotu pH 4,0 až 6,0 a stejná živná půda, jak je uvedená výše, se očkuje získaným produktem kultivace jako zárodkem stacionární kultivace nebo kutivace za třepání se provádí při teplotě 30 °C po dobu 3 až 7 dní.For the preparation of a cosmetic composition using the Trichosporon Kashiwayama strain according to the invention, conventional culture media with yeast extract can be used. According to one preferred embodiment, shaking or stationary cultivation is carried out at a temperature of 20 to 30 ° C for about 24 hours in a solid or liquid medium containing 0.3% w/v glucose, 0.5% w/v skimmed milk and 0.05% w/v yeast extract and having a pH of 4.0 to 6.0, and the same culture media as mentioned above is inoculated with the obtained culture product as a seed of the stationary culture or shaking cultivation is carried out at a temperature of 30 ° C for 3 to 7 days.

Tekutá kultura se podrobí filtraci a odstranění buněk obvyklými způsoby, například za použití membránového filtru a bezbuněnčný supernatant se koncentruje, například za sníženého tlaku, s výhodou při stupni koncentrace 4 až 25. Získaný koncentrát se sterilizuje obvyklými způsoby a skladuje při teplotě místnosti nebo v lednici.The liquid culture is subjected to filtration and cell removal by conventional methods, for example using a membrane filter, and the cell-free supernatant is concentrated, for example under reduced pressure, preferably at a concentration level of 4 to 25. The concentrate obtained is sterilized by conventional methods and stored at room temperature or in a refrigerator.

Příklad bezbuněčného supernatantu připraveného podle tohoto vynálezu má vlastnosti uvedené v tabulce 1.An example of a cell-free supernatant prepared according to the present invention has the properties shown in Table 1.

Tabulka 1Table 1

Bezbuněčný čištěný filtrát supernatantu produktu kultivace kmene podle vynálezu obsahuje malá množství aminokyselin, sacharidů a lipidů. Když se filtrát hodnotí kvantitativně, lze vidět, že celkový obsah dusíku je 0,005 až 0,15 °/o a celkový obsah fosforu je 0,004 až 0,014 %. lj Povaha a stav:The cell-free purified filtrate of the supernatant of the culture product of the strain of the invention contains small amounts of amino acids, carbohydrates and lipids. When the filtrate is evaluated quantitatively, it can be seen that the total nitrogen content is 0.005 to 0.15% and the total phosphorus content is 0.004 to 0.014%. lj Nature and condition:

nažloutlou průhlednou kapalinu s jemnou vůní.yellowish transparent liquid with a mild odor.

2) Ověřovací zkoušky2) Verification tests

1) 20 ml filtrátu se odpaří na vodní lázni až se objem sníží asi na 50 ml. Potom se přidá ke koncentrátu 1 ml ninhydrinového zkušebního roztoku. Když se směs zahřeje po dobu 30 minut, tekutina získá fialovou barvu.1) 20 ml of the filtrate is evaporated on a water bath until the volume is reduced to about 50 ml. Then 1 ml of ninhydrin test solution is added to the concentrate. When the mixture is heated for 30 minutes, the liquid acquires a purple color.

2) 5 ml kyseliny dusičné se přidá ke koncentrátu vzniklému odpařením, stejně jako je popsáno u lj a směs se zahřívá k varu po dobu 20 minut. Když se směs ochladí, neutralizuje se přidáním 10% roztoku hydroxidu sodného. Potom se přidají ke směsi 2 ml zkušebního roztoku molybdenanu amonného. Když se směs zahřeje, kapalina zežloutne. Jestliže se ke kapalině přidá 10% roztok hydroxidu sodného stává se bezbarvou.2) 5 ml of nitric acid is added to the concentrate obtained by evaporation as described in lj and the mixture is heated to boiling for 20 minutes. When the mixture has cooled, it is neutralized by adding 10% sodium hydroxide solution. Then 2 ml of ammonium molybdate test solution is added to the mixture. When the mixture is heated, the liquid turns yellow. If 10% sodium hydroxide solution is added to the liquid, it becomes colorless.

3) K 5 ml filtrátu se přidají 10 mg indolu a 2 ml kyseliny chlorovodíkové a směs se dostatečně protřepe. Když se směs potom zahřeje po dobu 10 minut, kapalina zčervená.3) To 5 ml of the filtrate, 10 mg of indole and 2 ml of hydrochloric acid are added and the mixture is shaken sufficiently. When the mixture is then heated for 10 minutes, the liquid turns red.

3. Fyzikální vlastnosti:3. Physical properties:

lj Měrná tíha (d₂5²⁵): 1,000 až 1,015lj Specific gravity (d ₂ 5 ²⁵ ): 1.000 to 1.015

2) Index lomu (nD²⁴): 1,330 až 1,3402) Refractive index (nD ²⁴ ): 1.330 to 1.340

3) pH (25 °Cj: 4,5 až 5,5.3) pH (25 °C): 4.5 to 5.5.

4. Odparek:4. Evaporator:

0,5 až 2,0 %.0.5 to 2.0%.

Analytické hodnoty příkladu koncentrátu (stupeň koncentrace 2} bezbuněčného supernatantu připraveného podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce 2.The analytical values of an example of a concentrate (concentration level 2) of cell-free supernatant prepared according to the invention are given in Table 2.

Filtrát představuje bezbarvou, až slaběThe filtrate is a colorless to slightly

Tabulka 2Table 2

Obsah vody (podle metody sušení za mosférického tlaku):Water content (according to the atmospheric pressure drying method):

Bílkoviny (koeficient 6,25):Protein (coefficient 6.25):

Obsah lipidů (Soxhletovou extrakcí): Obsah vláken:Lipid content (Soxhlet extraction): Fiber content:

Obsah popela:Ash content:

Obsah cukru:Sugar content:

Celkový obsah pevných látek:Total solids content:

Obsah dusíku v aminové formě:Nitrogen content in amine form:

Filtrační kyselost:Filtration acidity:

Těkavá báze tvořící obsah dusíku:Volatile base forming nitrogen content:

Obsah arsenu (jako As₂0_:!j:Arsenic content (as As ₂ 0 _:! j:

Obsah těžkých kovů (jako Pb):Heavy metal content (as Pb):

Celkový obsah rtuti:Total mercury content:

Obsah kadmia:Cadmium content:

Obsah vápníku:Calcium content:

Obsah fosforu:Phosphorus content:

Obsah kyseliny fosforečné:Phosphoric acid content:

Obsah kyseliny octové:Acetic acid content:

Obsah kyseliny máselné:Butyric acid content:

Obsah kyseliny mléčné:Lactic acid content:

Obsah kyseliny citrónové:Citric acid content:

Počet živých buněk:Number of live cells:

E. coli:E. coli:

Staphylococcus aureus:Staphylococcus aureus:

Počet hub:Number of mushrooms:

Počet kvasinek:Number of yeasts:

Obsah kyseliny propionové:Propionic acid content:

Obsah kyseliny sorbové:Sorbic acid content:

Kyselina benzoová:Benzoic acid:

Ester kyseliny p-hydroxybenzoové:p-Hydroxybenzoic acid ester:

Obsah vitamínu B_x:Vitamin B _x content:

Obsah vitamínu B₂:Vitamin _B2 content:

Obsah vitamínu C:Vitamin C content:

Obsah vitamínu B_R:Vitamin B _R content:

Obsah vitamínu B_J2:Vitamin B _J2 content:

Obsah kyseliny pantothenové:Pantothenic acid content:

Obsah cholinu:Choline content:

Obsah kyseliny listové:Folic acid content:

Obsah niaxinu:Niacin content:

Obsah celkového karotenu:Total carotene content:

Hodnota pH:pH value:

Skladba aminokyseliny*** at98,7 % stopa 0,2 % %Amino acid composition*** at98.7% trace 0.2% %

0,1 «/o 1,0 %0.1 to 1.0%

1,3 % mg %1.3% mg%

0,6** mg % nedetegováno (mez detekce: 0,1 ppm) nedetegováno (mez detekce: 1 pprnj nedetegováno (mez detekce: 0,01 ppm) nedetegováno (mez detekce 0,01 ppm)0.6** mg % not detected (detection limit: 0.1 ppm) not detected (detection limit: 1 ppm) not detected (detection limit: 0.01 ppm) not detected (detection limit 0.01 ppm)

14,7 mg %14.7 mg%

9,8 mg % nedetegováno (mez detekce: 0,1 %) nedetegováno (mez detekce 0,01 %) nedetegováno (mez detekce 0,01 % j9.8 mg % not detected (detection limit: 0.1%) not detected (detection limit 0.01%) not detected (detection limit 0.01% j

0,06 %0.06%

0,02 θ/ο méně než 30 buněk v ml (-) (-) ( —)/ml (-j/ml nedetegováno (mez detekce 0,02 g/kg) nedetegováno (mez detekce 0,005 g/kg) 0,42' g/kg nedetegováno (mez detekce 0,005 g/kgj nedetegován (mez detekce 0,01 mg %) 0,02 mg % nedetegován (mez detekce 2 mg % ) nedetegován (mez detekce 5 gg %) nedetegován (mez detekce 0,05 gg %) 0,09 mg % nedetegován (mez detekce 0,03 % j nedetegován (mez detekce 1 ,«g % j nedetegován (mez detekce 0,03 mg %) nedetegován (mez detekce 0,02 mg °/oj0.02 θ/ο less than 30 cells in ml (-) (-) ( —)/ml (-j/ml not detected (detection limit 0.02 g/kg) not detected (detection limit 0.005 g/kg) 0.42' g/kg not detected (detection limit 0.005 g/kgj not detected (detection limit 0.01 mg %) 0.02 mg % not detected (detection limit 2 mg % ) not detected (detection limit 5 gg %) not detected (detection limit 0.05 gg %) 0.09 mg % not detected (detection limit 0.03 % j not detected (detection limit 1 ,«g % j not detected (detection limit 0.03 mg %) not detected (detection limit 0.02 mg °/oj

4,94.9

Arginin Arginine méně než 0,01 less than 0.01 lysin lysine méně než 0,01 less than 0.01 hisíidin hisiidine méně než 0,01 less than 0.01 fenylalanln phenylalanine méně než 0,01 less than 0.01 tyrosin tyrosine méně než 0,01 less than 0.01 leucin leucine méně než 0,01 less than 0.01 isoleucin isoleucine méně než 0,01 less than 0.01 methionin methionine méně než 0,01 less than 0.01 valin valine méně než 0,01 less than 0.01 alanin alanine méně než 0,01 less than 0.01 glycin glycine méně než 0,01 less than 0.01 prolin proline méně než .0,01 less than .0.01 kyseliny glutamová glutamic acid méně než 0,01 less than 0.01 serin serine méně než 0,01 less than 0.01 threonin threonine méně než 0,01 less than 0.01 kyselina asparagová aspartic acid méně než 0,01 less than 0.01 tryptofau tryptophan méně než 0,01 less than 0.01 cystin cystine méně než 0,01 less than 0.01 Poznámka Note

- % vztaženo na vodu *” počet ml 1N alkálie potřebné k titrování při neutralizaci 100 g vzorku ^1: *³ g aminokyseliny ve 100 g vzorku (cystin: metoda oxidace kyseliny permravončí, tryptofan: mlkrobiol. test)- % based on water *” number of ml of 1N alkali required for titration when neutralizing 100 g of sample ^1: * ³ g of amino acid in 100 g of sample (cystine: performatic acid oxidation method, tryptophan: microbiol. test)

Pochopitelně bezbuněčného sterilního supernatantu lze použít jako kosmetického prostředku bez koncentrace. Avšak, z hlediska skladování nebo podobně, je výhodné, aby bezbuněčný sterilní supernatant byl koncentrován. Dále, používá se vysokého koncentrátu o stupni koncentrace více než 25 nebo lze použít suchého produktu. Takového koncentrátu, vysokého koncentrátu nebo suchého produktu lze použít jako kosmetického prostředku jako takového. Dále, kosmetický prostředek podle vynálezu lze vytvořit smícháním takového koncentrátu, vysokého koncentrátu nebo suchého produktu s krémem, masťovým základem nebo jiným nosičem.Of course, the cell-free sterile supernatant can be used as a cosmetic composition without concentration. However, from the viewpoint of storage or the like, it is preferable that the cell-free sterile supernatant is concentrated. Furthermore, a high concentrate with a concentration degree of more than 25 is used or a dry product can be used. Such a concentrate, high concentrate or dry product can be used as a cosmetic composition as such. Furthermore, the cosmetic composition of the invention can be formed by mixing such a concentrate, high concentrate or dry product with a cream, ointment base or other carrier.

Když je analyzován koncentrát vzniklý koncentrací výše uvedeného bezbuněčného sterilního supernatantu koncentračního stupně 4, lze vidět, že jsou obsaženy různé aminokyseliny a vitamíny. Avšak, protože analýza se provádí z všeobecných hledisek, je snadno pochopitelné, že i když se příslušně složky smíchají podle nalezených analytických hodnot, nelze připravit kosmetický prostředek podle vynálezu, jinými slovy předpokládá se, že účinnosti kosmetického prostředku podle vynálezu jsou založeny na neznámých složkách mimo dosah analýzy.When the concentrate obtained by concentrating the above-mentioned cell-free sterile supernatant of concentration stage 4 is analyzed, it can be seen that various amino acids and vitamins are contained. However, since the analysis is carried out from a general point of view, it is easy to understand that even if the ingredients are mixed according to the analytical values found, the cosmetic composition of the invention cannot be prepared, in other words, it is assumed that the efficacy of the cosmetic composition of the invention is based on unknown ingredients beyond the scope of the analysis.

Výsledky zkoušky toxicity za použití kuřecího embrya prokázaly, že výše uvedený bezbuněčný sterilní koncentrát (koncentrační stupeň 4) není toxický. Dále výsledky zkoušek s náplastěmi na lidském těle a zkoušky kontinuálního dráždění lidské pokožky prokázaly, že koncentrát není vůči lidskému tělu vůbec toxický. Kromě toho výsledky dráždění oka králíka prokázaly, že koncentrát není vůbec dráždivý. Výsledky zkoušek na antibiotické působení prokázaly, že koncentrát neobsahuje antibiotikum.The results of the toxicity test using the chick embryo showed that the above cell-free sterile concentrate (concentration level 4) is not toxic. Furthermore, the results of the human body patch test and the continuous human skin irritation test showed that the concentrate is not toxic to the human body at all. Furthermore, the rabbit eye irritation results showed that the concentrate is not at all irritating. The results of the antibiotic activity test showed that the concentrate does not contain an antibiotic.

Bylo potvrzeno, že kosmetický prostředek podle vynálezu má příznivý účinek na kožní skvrny, poškozenou pokožku, kontaktní dermatitidu a popálenou pokožku. Tyto účinky jsou dále popsány v následujících pokusech.It has been confirmed that the cosmetic composition of the invention has a beneficial effect on skin spots, damaged skin, contact dermatitis and burned skin. These effects are further described in the following experiments.

Zkouška použití náplastí na lidském těle.Testing the use of patches on the human body.

Padesát žen, trpících některými kosmetickými vadami, ve stáří 23 až 44 let, bylo vybráno ke zkouškám. Na vnitřní stranu levého ramene a paravertebrální krajinu zad byly použity lepivé náplasti velikosti 4 cm x x 4 cm, obsahující asi 0,2 g koncentrátu (koncentračního stupně 2) podle vynálezu a po uplynutí doby 48 hodin byly náplasti odstraněny a ošetřené oblasti byly vyšetřeny. U žádné z těchto osob nebyla nepříznivě ovlivněna vnitřní strana levého ramene nebo paravertebrální oblast.Fifty women, aged 23 to 44 years, suffering from some cosmetic defects, were selected for testing. Adhesive patches measuring 4 cm x x 4 cm, containing about 0.2 g of the concentrate (concentration level 2) according to the invention, were applied to the inner side of the left shoulder and the paravertebral region of the back, and after a period of 48 hours the patches were removed and the treated areas were examined. In none of these individuals was the inner side of the left shoulder or the paravertebral region adversely affected.

Kontinuální zkouška na kožní dráždivost u člověkaContinuous human skin irritation test

Proužky sterilní gázy velikosti 10 cm² byly impregnovány asi 5 ml koncentrátu (koncentračního stupně 2} podle vynálezu a byly použity na pravou tvář 45 žen, stáří 23 až 45 let (35 žen trpělo některou z kosmetických vad nebo pod. a byly ošetřovány v dermatologické nemocnici a zbývajících deset žen byly zaměstnankyně této nemocnice) po dobu 15 minut.Strips of sterile gauze measuring 10 ^cm2 were impregnated with about 5 ml of the concentrate (concentration level 2) according to the invention and were applied to the right cheeks of 45 women, aged 23 to 45 years (35 women suffered from some cosmetic defect or the like and were treated in a dermatological hospital and the remaining ten women were employees of this hospital) for 15 minutes.

Toto léčení bylo prováděno kontinuálně po dobu 40 dní. U žádné z žen nebyla pozorována žádná reakce a nevznikly potíže, jako například erythem.This treatment was carried out continuously for 40 days. No reaction was observed in any of the women and no problems such as erythema occurred.

Zkouška dráždění oka u králíkaRabbit eye irritation test

Jako pokusných zvířat bylo použito tří bílých králíků. Předem bylo potvrzeno, že oči nemají žádné abnormální znaky. Do pravého oka každého králíka bylo nakapáno· 0,1 ml koncentrátu (koncentrační stupeň 2) podle vynálezu a do levého oka bylo nakapáno 0,1 ml kontrolní tekutiny. Ihned po nakapání a 3, 6, 24, 48 a 72 hodin po nakapání byly obě oči vyšetřeny za použití štěrbinové lampy. Nepřirozené jevy, například jako zduření duhovky nebo spojivky nebylo vůbec pozorováno.Three white rabbits were used as experimental animals. It was confirmed in advance that the eyes had no abnormal features. 0.1 ml of the concentrate (concentration level 2) of the invention was instilled into the right eye of each rabbit, and 0.1 ml of the control liquid was instilled into the left eye. Immediately after instillation and 3, 6, 24, 48 and 72 hours after instillation, both eyes were examined using a slit lamp. Abnormal phenomena such as swelling of the iris or conjunctiva were not observed at all.

Zkouška ošetření skvrn pokožkySkin spot treatment trial

Bylo vybráno 621 žen majících na tváří kožní skvrny, vyjma osob s jaterními chorobami nebo ženskými chorobami a těhotných žen, které vyhledaly ošetření kožních skvrn v dermatologických nemocnicích. Po umytí tváře byly kožní póry otevřeny ozónem a parou a na místo skvrny byla přiložena gáza impregnovaná koncentrátem621 women with skin spots on their faces, excluding those with liver diseases or gynecological diseases and pregnant women, who sought treatment for skin spots in dermatology hospitals were selected. After washing the face, the skin pores were opened with ozone and steam, and gauze impregnated with the concentrate was applied to the spot.

I (koncentrační stupeň 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu. Přiložená gáza byla pokryta náplastí typu „Saran — —Wrap“ a po dobu 15 až 20 minut bylo provedeno ozáření infračervenými paprsky, aby koncentrát pronikl do pokožky. Toto ošetření bylo prováděno' jednou týdně a pokračovalo po dobu tří měsíců. Bylo nalezeno, že u 363 žen (58,4 %) se vysoce zlepšil stav, u 122 žen (19,8 %) došlo k poměrnému zlepšení, u 133 žen (21,4 °/q) nebylo pozorováno žádné zlepšení, u jedné ženy (0,01 %] došlo ke zhoršení a u dvou zbývajících žen (0,03 %) byla pozorována kontaktní dermatitida (předpokládá se, že kontaktní dermatitida byla způsobena důvody irelevantními k tomuto ošetření j. Počet osob, u kterých se zlepšil stav podstatně nebo relativně, byl vyšší než 80 °/o. Dále u 60 % z 365 žen, u nichž se podstatně zlepšil stav, kožní skvrny zcela zmizely.I (concentration level 2) of the cell-free supernatant according to the invention. The attached gauze was covered with a "Saran — —Wrap" type patch and irradiated with infrared rays for 15 to 20 minutes to allow the concentrate to penetrate the skin. This treatment was carried out once a week and continued for three months. It was found that 363 women (58.4%) had a highly improved condition, 122 women (19.8%) had a relatively improved condition, 133 women (21.4%) had no improvement, one woman (0.01%) had a worsening condition, and two remaining women (0.03%) had contact dermatitis (it is assumed that the contact dermatitis was caused by reasons unrelated to this treatment). The number of people who improved significantly or relatively was higher than 80%. Furthermore, 60% of the 365 women who improved significantly had complete resolution of the skin spots.

Zkouška ošetření kožních trhlin a jemných vrásekSkin crack and fine wrinkle treatment trial

Obvykle ženy starší než 25 až 30 let jsou nervózní z kožních trhlin a jemných vrásek a tento sklon je nápadný zejména u žen ve stáří 35 až 40 let, i když ženy starší než 40 let jsou nervózní podobně z kožních trhlin a jemných vrásek. Pro tuto zkoušku bylo vybráno 962 žen, které hodlaly navštívit dermatologické nemocnice (150 žen ve stáří 25 až 30 let, 218 žen ve stáří 30 až 35 let, 248 žen ve stáří 35 až 40 let, 172 žen ve stáří 40 až 45 let a 174 žen starších více než 45 let]. Po umytí pokožky obličeje byly kožní dutiny otevřeny ozónem a párou a gáza impregnovaná koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu byla přiložena těsně na pokožku tváře a gáza byla pokryta páskou typu Saran—Wrap. Po dobu 15 až 20 minut bylo provedeno ozáření infračervenými paprsky, aby koncentrát pronikl do pokožky. Bylo zjištěno, že po jednom ošetření byla poškozená kůže význačně zlepšena u 698 žen (73 °/o), k poměrnému zlepšení došlo u 156 žen (16 °/o), stav se nezměnil u 72 žen (7 °/o) a stav se nezhoršil u žádné z ošetřených žen, přičemž zbytek tvořilo 36 žen (4 %).Usually, women over 25 to 30 years old are nervous about skin cracks and fine wrinkles, and this tendency is especially noticeable in women aged 35 to 40, although women over 40 are similarly nervous about skin cracks and fine wrinkles. For this test, 962 women who were going to visit dermatology hospitals were selected (150 women aged 25 to 30 years, 218 women aged 30 to 35 years, 248 women aged 35 to 40 years, 172 women aged 40 to 45 years and 174 women older than 45 years). After washing the facial skin, the skin cavities were opened with ozone and steam and gauze impregnated with a concentrate (concentration level 2) of the cell-free supernatant according to the invention was applied tightly to the facial skin and the gauze was covered with Saran-Wrap tape. Infrared irradiation was performed for 15 to 20 minutes to allow the concentrate to penetrate the skin. It was found that after one treatment, the damaged skin was significantly improved in 698 women (73%), and there was a relative improvement in 156 women (16 %/o), the condition did not change in 72 women (7 %/o) and the condition did not worsen in any of the treated women, with the remainder being 36 women (4 %).

Vzhledem k tomu, že kůže s trhlinami přechází v jemné vrásky, předpokládá se, že koncentrát podle vynálezu, který je účinným při ošetřování kůže s trhlinami, předchází vzniku jemných vrásek.Since cracked skin tends to develop into fine wrinkles, it is believed that the concentrate of the invention, which is effective in treating cracked skin, prevents the formation of fine wrinkles.

Zkouška účinku při kontaktní dermatitiděContact dermatitis efficacy test

Byla vybrána žena stáří 21 let, která trpěla vyrážkou svěděním na víčkách obou očí od toho dne, kdy vyměnila oční stín od výrobce A za oční stín od výrobce B a byla stanovena diagnóza, že trpí kontaktní dermatitidou. Dermatolog ošetřil napadené oblasti gázou impregnovanou koncentrátem (stupeň koncentrace 2] bezbuněčného supernatantu podle vynálezu. Nebyl vůbec použit žádný steroldní preparát ani prostředek protizánětlivě účinný a antihistaminově účinný. Ošetřované osobě bylo podáno asi 20 ml koncentrátu a koncentrát byl přikládán nebo aplikován po dobu asi 30 minut dvakrát denně tj. ráno a večer. Po uplynutí doby 48 hodin od začátku íéčby svědění bylo odstraněno a po uplynutí doby 96 hodin od začátku léčby vyrážka v podstatě zmizela. Po uplynutí doby 1 týdne nebyla vyrážka vůbec pozorována.A 21-year-old woman was selected who had suffered from an itchy rash on the eyelids of both eyes since the day she changed from eye shadow from manufacturer A to eye shadow from manufacturer B and was diagnosed with contact dermatitis. The dermatologist treated the affected areas with gauze impregnated with a concentrate (concentration level 2) of the cell-free supernatant according to the invention. No steroidal preparation or anti-inflammatory and antihistamine agents were used at all. About 20 ml of the concentrate was administered to the person being treated and the concentrate was applied or applied for about 30 minutes twice a day, i.e. morning and evening. After 48 hours from the start of treatment, the itching was eliminated and after 96 hours from the start of treatment, the rash had essentially disappeared. After 1 week, the rash was not observed at all.

Zkouška ošetření spálenin a opařeninBurn and scald treatment test

Žena stáří 47 roků s opařeninou horkou vodou na vnější části levého předloktí (stupeň spáleiny II) se zčervenáním a otokem a s malými puchýři navštívila dermatologa asi hodinu poté, co se opařila. Postižená krajina byla ihned ochlazena tekoucí vodou a gáza impregnovaná koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného sterilního supernatantu podle vynálezu byla použita na postižené místo a pokryta naolejovaným papírem. Potom byla postižená krajina ovázána. Po uplynutí doby 24 hodin bylo zjištěno, že malé puchýřky zcela zmizely, ačkoliv zčervenání a otok ještě trval a pacientka necítila žádnou bolest.A 47-year-old woman with a hot water scald on the outer part of her left forearm (scald stage II) with redness and swelling and small blisters visited a dermatologist about an hour after she was scalded. The affected area was immediately cooled with running water and gauze impregnated with a concentrate (concentration stage 2) of the cell-free sterile supernatant according to the invention was applied to the affected area and covered with oiled paper. The affected area was then bandaged. After 24 hours, it was found that the small blisters had completely disappeared, although the redness and swelling still persisted and the patient did not feel any pain.

Muž stáří 30 let, který se opařil horkou vodou na zadní části pravé nohy (stupeň spáleniny II) se zčervenáním a otokem velikosti vejce, byl ošetřen koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného sterilního supernatantu podle vynálezu stejně jako je to popsáno vpředu. Po uplynutí doby 24 hodin zmizel otok, ačkoliv zčervenání ještě zůstávalo a pacient netrpěl žádnou bolest.A 30-year-old man who had been scalded with hot water on the back of his right leg (grade II burn) with redness and swelling the size of an egg was treated with a concentrate (grade 2) of the cell-free sterile supernatant of the invention as described above. After 24 hours, the swelling had disappeared, although the redness still remained and the patient was not in any pain.

Takto bylo prokázáno, že koncentrát podle vynálezu má významný účinek na spáleniny a opařeniny.It has thus been demonstrated that the concentrate according to the invention has a significant effect on burns and scalds.

Kosmetický prostředek podle vynálezu bude nyní popsán s odkazem na následující příklady.The cosmetic composition according to the invention will now be described with reference to the following examples.

PřikladlExample

Provzdušňováním míchaný fermentační tank objemu 1 000 litrů byl naplněn 800 litry živné půdy stejného složení, jaké je popsáno vpředu a po sterilizaci horkem a přirozeném ochlazení byla tato živná půda naočkována inokulem získaným předběžnou kultivací při teplotě 28 °C po dobu asi 30 hodin v 10 litrech stejného· živného prostředí a v malém vzdušněném míchaném fermentačním tanku. Potom byla prováděna kultivace při teplotě asi 28 °C po dobu asi 70 hodin za vzdušnění a míchání. Po ukončení fermentace byla kultivační tekutina filtrována, aby byly odstraněny pevné částice a buňky. Získaný filtrát byl koncentrován membránovým způsobem reverzní os247067 mózou, takže objem byl zredukován na 200 litrů.A 1,000-liter aerated stirred fermentation tank was filled with 800 liters of a nutrient medium of the same composition as described above, and after heat sterilization and natural cooling, this nutrient medium was inoculated with an inoculum obtained by preliminary cultivation at 28°C for about 30 hours in 10 liters of the same nutrient medium and in a small aerated stirred fermentation tank. Then, cultivation was carried out at about 28°C for about 70 hours with aeration and stirring. After the fermentation was completed, the culture liquid was filtered to remove solid particles and cells. The filtrate obtained was concentrated by a membrane method using reverse osmosis, so that the volume was reduced to 200 liters.

Získaný koncentrát byl sterilizován výměníkem tepla deskového typu, sterilně naplněn do skleněných nádob a uskladněn v lednici (5 °C).The obtained concentrate was sterilized using a plate-type heat exchanger, sterilely filled into glass containers and stored in a refrigerator (5 °C).

Příklad 2Example 2

Sterilizovaný koncentrát získaný v příkladu 1 byl lyofilizován a získaný prášek byl smíchán se sterilním krémovým základem za vzniku kosmetického prostředku.The sterilized concentrate obtained in Example 1 was lyophilized and the obtained powder was mixed with a sterile cream base to form a cosmetic composition.

Příklad 3Example 3

Kosmetický přípravek byl připraven inkorporací 1 g sterilizovaného koncentrátu ¹⁴ získaného v příkladu 1 do kosmetického základu obsahujícího 1 g kyseliny stearové, 7 gramů včelího vosku, 4 g samoemulgovatelného monostearátu glycerolu, 30 g tekutého parafinu, 0,1 g bezvodého lanolinu a 40 gramů přečištěné vody a hnětením směsi obvyklým způsobem. Přípravek byl nalit a plněn do ampulí a naplněné ampule byly určeny k prodeji.A cosmetic preparation was prepared by incorporating 1 g of the sterilized concentrate ¹⁴ obtained in Example 1 into a cosmetic base containing 1 g of stearic acid, 7 grams of beeswax, 4 g of self-emulsifying glycerol monostearate, 30 g of liquid paraffin, 0.1 g of anhydrous lanolin and 40 grams of purified water and kneading the mixture in the usual manner. The preparation was poured and filled into ampoules and the filled ampoules were intended for sale.

Příklad 4Example 4

Kosmetický prostředek byl připraven inkorporací vhodných množství hydrochloridu pyridoxinu, χ-oryzanolu, allantoinu, DL-atokoferolu a norkového oleje do přípravku připraveného' v příkladu 3.The cosmetic composition was prepared by incorporating appropriate amounts of pyridoxine hydrochloride, χ-oryzanol, allantoin, DL-α-tocopherol and mink oil into the composition prepared in Example 3.

Claims

Cosmetic composition, characterized in that it consists of a product obtained by cultivating the Trichosporon Kashiwayama microorganism deposited in the FRI collection under deposit number 4,821, which can be identified as a microorganism belonging to the genus Geotricum or EnVYNALEZU domycopsis, either as a sterile liquid free of cells or a sterile filtrate or sterile supernatant, or a concentrate or dry product of a culture of the microorganism, optionally with the addition of conventional cosmetic ingredients.