CS244399B1 - Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01 - Google Patents
Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01 Download PDFInfo
- Publication number
- CS244399B1 CS244399B1 CS851215A CS121585A CS244399B1 CS 244399 B1 CS244399 B1 CS 244399B1 CS 851215 A CS851215 A CS 851215A CS 121585 A CS121585 A CS 121585A CS 244399 B1 CS244399 B1 CS 244399B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hla
- hybridoma
- monoclonal antibody
- img
- csaz
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení ee týká myšího hybridomu, produkujícího protilátku proti membránovému antigenu lidských HLA-Bw4 pozitivních bunšk, uloženého, ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením HLA-01. Monoklonálni protilátka hybridomu HLA-01 je vhodná pro použití v mikrocytotoxiokém testu v přítomnosti komplementu a v přímém radloimunoanalytickém vazebném testu pro detekci lidských HLA-Bw4 pozitivních bunšk.
Description
(54)
Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01
Řešení ee týká myšího hybridomu, produkujícího protilátku proti membránovému antigenu lidských HLA-Bw4 pozitivních bunšk, uloženého, ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením HLA-01. Monoklonálni protilátka hybridomu HLA-01 je vhodná pro použití v mikrocytotoxiokém testu v přítomnosti komplementu a v přímém radloimunoanalytickém vazebném testu pro detekci lidských HLA-Bw4 pozitivních bunšk.
244 399
244 399
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné buňky produkující protilátku proti membránovému antigenu HLA-Bw4 přítomnému na lidských lymfocytech. HLA antigeny mají zásadní význam pro regulaci různých funkcí imunitního systému. Identifikace těchto antigenů má význam při transplantaci životně důležitých tkání a orgánů a při diagnostice některých patologických stavů.
Doposud se protilátky proti antigenům hlavního histokompatibilitního systému člověka, HLA, získávají ze sér žen po opakovaných těhotenstvích nebo od pacientů po opakovaných transfuzích krve. Ačkoliv tato séra mají zásadní význam při definici HLA antigenů, jejich omezení spočívá v tom, že antiséra obsahují protilátky v nízkém titru, jsou multispecifická a křížově reagují. Velice těžko se vyhledávají antiséra, která by obsahovala protilátky, které by identifikovaly některá vzácně se vyskytující HLA specifičnosti. Z tohoto důvodu se hledaly přístupy, které by umožnily snadněji identifikovat HLA antigeny Jeden z přístupů je imunizace dobrovolníků nebo pokusných zvířat. Sérum takto imunizovaných lidí nebo zvířat odebírané po určité době působení antigenu slouží jako zdroj protilátek užívaných pro identifikaci HLA antigenů. Tento postup nazývaný konvenční imunizací má řadu nevýhod. Získávání protilátek ze sér imunizovaných dobrovolníků z etického hlediska nemá praktického použití. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém organismu různé a neopakovatelné. Organismus vytváří protilátky proti celé řadě membránových antigenů a specificita sér závisí na způsobu jejich absorbce a testování. Antiséra připravená konvenčním způsobem je proto velmi těžké standardizovat.
Nevýhody konvenčních sér proti antigenům hlavního histokompatibilitního systému člověka HLA v principu odstraňuje použití hybridomové technologie. Produkt hybridomu - monoklonální protilátka - je zaměřena vždy proti jediné antigenní determinan tě. Je-li konstruován dostatečně velký sor^bor hybridomů, je
- x 244 399 pravděpodobné, že se z něho podaří vyhledat hybridom syntetizující protilátku, která rozeznává antigenní determinantu hlavního histokompatibilitního systému člověka HLA.
Podle publikovaného výsledku (Brodsky, F.M., Parham, P., Barnstable, G.J., Grumpton, M.J., Bodmer, W.F.: Monoclonal antibodies for analysis of HLA systém. Inimunol. Rev., 47:
1979; Radka, S.F., Kostyu, L.D., Amos, D.B.: A monoclonal antibody directed against the HLA-Bw6 epitope. J.Immunol., 128:2804, 1982) se dá soudit, že lze připravit moňoklonólní protilátky specificky detegující polymorfní determinanty HLA komplexu výhodné pro diagnostické účely.
Podstatného pokroku při výběru vhodného dárce při klinických transplantacích orgánů, při posuzování paternitních sporů, při diagnostice některých onemocnění, u kterých bylo prokázáno, že jejich výskyt je asociován s výskytem některých HLA antigenů, se dosáhne, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti polymorfní determinantě HLA komplexu. Bw4 hybridom je uložený ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská 1083, pod označením HLA-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Richiardi, P., Amoroso, A., Grepaldi, T., Ceppellini,
R. , Trucco, M.: A xenogeneic monoclonal antibody recognizing. specificities controlled by HLA-A and B alleles. Immunogenetics, 12:615-626, 1981; Russo, C., Ah-Kau Ng, Pellegrino, M.A., Ferrone,
S. : The monoclonal antibody CR11-351 discriminates HLA-A2 variante identified by T cells. Immunogenetics, 18:23-35, 1983) klonováním souboru hybridních buněk, získaných ze slezin myší kmene BALE/c imunizovaných lymfocyty izolovanými z periferní krve dárce PS
HLA genotypu (HLA-A3,28, HLA-B14, 16/39, Bw4, Bw6, Dw2, DR2, DR6).
Výhodou hybridomů je, že produkuje homogenní protilátku monoklonální, která je schopná specificky reagovat s buňkami nesoucími antigen HLA-Bw4 kódovaný HLA-B lokusem. Hybridom HLA-01 je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALE/c. Z konzerv uchovávaných v kapalném dusíku je možno zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenů. Protilátka pro244 399
- 3 dukovaná hybridomem HLA-01 reaguje specificky s populacemi lidských lymfocytů exprimujících antigen Bw4 a není třeba se zbavovat balastních protilátek.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 4 x 10^ buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 14 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 13ti dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš uhubena a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 2,5 ml ascitická tekutiny, která obsahovala 6 m^ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala specificky v mikrocytotoxickém testu v přítomnosti komplementu a v přímém radioimunoanalytickém vazebném testu s lymfocyty periferní krve exprimujícími na svém povrchu Bw4 antigen. V mikrocytotoxickém testu byla ascitická tekutina aktivní s buňkami imunizujícího jedince PS ještě v ředění 1:10 . Výsledky mikrocytotoxického i přímého radioimunoanalytického testu ukázaly, že monoklonální protilátka HLA-01 deteguje Bw4 antigen kódovaný HLA-B lokusem.^Tento výsledek byl získán jednak na základě vyšetření lymfocytů periferní krve od 60 jedinců otypizovaných na HLA antigeny konvenčními séry a jednak na základě vyšetření 4 mnohočetných rodin (8 rodičů a 32 dětí). Při testování lymfocytů 60 nepříbuzných jedinců náhodně vybraných ' reagovala protilátka s lymfocyty pouze těch lidí, jejichž lymfocyty exprimovaly antigen Bw4. V rodinných studiích provedených na 8 rodičích a 32 dětech bylo prokázáno, že gen pro antigen, který tato protilátka deteguje, segreguje s hlavním histokompatibilitním systémem člověka HLA a deteguje antigen Bw4. Naproti tomu negativní výsledky s monoklonální protilátkou HLA-01 v obou použitých testech byly získány s buňkami Daudi, což je permanentní lyrafoidní linie, která neexprimuje HLA-A, -B, -C antigeny a též s lymfocyty 14 inbredních kmenů myší.
Buňky hybridomu HLA-01 mají ultrastrukturní obraz typických myelomových buněk. Cytoplasma obsahuje velké množství polyribosomů, mitochondrie a slabě vyvinuté endoplasmatické retikulum. In vitro
244 399 rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM) a pyruvát sodný (1mM). Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomu MEM-12 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05mM), pufrem HEPES (10mM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10$). Hybridom je kultivován při 37°C. Střední generační čas je 15,6 hod. a 5 měsíců po sestrojení byl modélní počet chromozomů 96. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgG2b s lehkými řetězci typu kappa, její izoelektrický bod je pH 6,9«7,O.
Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem HLA-01 reaguje specificky s lidskými lymfocyty izolovanými z periferní krve. Hybridom'HLA-01 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky, která deteguje buňky nesoucí Bw4 antigen v diagnostických metodách. Monoklonální protilátka hybridomu HLA-01 může být využita v klinických imunologických laboratořích k výběru vhodného dárce při klinických transplantacích životně důležitých orgánů a tkání, při diagnostice onemocnění, u nichž byla prokázána signifikantní asociace s výskytem HLA-Bw4 antigenu a v soudním lékařství při paternitních sporech.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMySí Iymfocytémí hybridom IMG-CZASl ŘLA-Ol, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgQ2b proti membránovému antigenu lidských HLA-Bw4 pozitivních buněk.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS851215A CS244399B1 (cs) | 1985-02-20 | 1985-02-20 | Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS851215A CS244399B1 (cs) | 1985-02-20 | 1985-02-20 | Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS121585A1 CS121585A1 (en) | 1985-08-15 |
| CS244399B1 true CS244399B1 (cs) | 1986-07-17 |
Family
ID=5345975
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS851215A CS244399B1 (cs) | 1985-02-20 | 1985-02-20 | Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS244399B1 (cs) |
-
1985
- 1985-02-20 CS CS851215A patent/CS244399B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS121585A1 (en) | 1985-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Förster et al. | Expansion and functional activity of Ly‐1+ B cells upon transfer of peritoneal cells into allotype‐congenic, newborn mice | |
| Katz | Lymphocyte differentiation, recognition, and regulation | |
| Ewert et al. | Ia-like alloantigens in the chicken: Serologic characterization an ontogeny of cellular expression | |
| Pennell et al. | Cross-reactive idiotypes and common antigen binding specificities expressed by a series of murine B-cell lymphomas: etiological implications. | |
| Berzofsky | Immune response genes in the regulation of mammalian immunity | |
| Tosi et al. | Binding of one monoclonal antibody to human Ia molecules can be enhanced by a second monoclonal antibody | |
| Szenberg et al. | Direct demonstration of murine thymus-dependent cell surface endogenous immunoglobin. | |
| McGuire et al. | Analysis of serum and lymphocyte surface IgM of healthy and immunodeficient horses with monoclonal antibodies | |
| CN108659125A (zh) | 抗幽门螺旋杆菌蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用 | |
| Hämmerling et al. | Immunofluorescence analysis of Ig determinants of mouse thymocytes and T cells | |
| Donaldson et al. | At least two loci encode polymorphic class I MHC antigens in the horse | |
| David et al. | Serologic and biochemical studies of the Ia system of the mouse H-2 gene complex. Further evidence for an IC subregion | |
| EP0216854A1 (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES AND TEST PROCEDURE. | |
| JPH08512195A (ja) | クラミジアワクチン及びその製造方法 | |
| De Vries et al. | Absence of autoantibodies to peptides shared by HLA-B27. 5 and Klebsiella pneumoniae nitrogenase in serum samples from HLA-B27 positive patients with ankylosing spondylitis and Reiter's syndrome. | |
| CS244399B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom IMG-CSAZ HLA-01 | |
| Davies et al. | Differences between pig tissues in the expression of major transplantation antigens: possible relevance for organ allografts. | |
| JPS61185183A (ja) | 膣トリコモナスに対して細胞溶解性のモノクロ−ナル抗体を産生するハイブリツド細胞系統 | |
| Dorva et al. | Tumor‐bound immunoglobulins. I. Further analysis of the characteristics of binding of immunoglobulins to in vivo‐grown tumor cells | |
| Hansen et al. | Ia specificities on parental and hybrid cells of an IA mutant mouse strain. | |
| Kristensen et al. | The swine histo compatibility system SLA: serological studies in the common Swiss and Danish swine breeds | |
| JPS60156383A (ja) | 膣トリコモナス決定因子に対して向けられたモノクロ−ナル抗体を産生するハイブリツド細胞系統 | |
| McKenzie et al. | A histocompatibility region (H-2IC) in the IC region of the H-2 complex of the mouse | |
| JPH06153979A (ja) | 魚類イリドウイルスに対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するためのハイブリドーマ及び方法 | |
| Higgins et al. | A comparative study of complement activation |