CS242391B1 - Method of cystathionines,cysteine proteinases' natural inhibitors insulation from solutions won from natural materials by means by means of immobilized cysteine proteinases - Google Patents
Method of cystathionines,cysteine proteinases' natural inhibitors insulation from solutions won from natural materials by means by means of immobilized cysteine proteinases Download PDFInfo
- Publication number
- CS242391B1 CS242391B1 CS843779A CS377984A CS242391B1 CS 242391 B1 CS242391 B1 CS 242391B1 CS 843779 A CS843779 A CS 843779A CS 377984 A CS377984 A CS 377984A CS 242391 B1 CS242391 B1 CS 242391B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cystatin
- immobilized
- cysteine proteinases
- solution
- cysteine
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Způsob spočívá v isolaci cystatinu z roztoku pomocí cysteinové proteinázy imobilizované polymerací glutaralčlehydem na polymerní nosič na bázi polyetylentsreftalátu vsádkovým uspořádáním při pH roztoku 5 až 8, s výhodou při pH 6,5» po následném oddělení pevné fáze s cystatinem a jejím opětném suspendováním do vodné fáze se cystatin uvolní z vazby s imobilizovanou cysteinovou proteinázou do vodného roztoku při pH menším než 3,5 nebo vyšším než 10,0.The method consists in isolating cystatin from solution using cysteine proteinase immobilized by glutaraldehyde polymerization to a polymeric carrier based on polyethylene terephthalate in a batch configuration at pH 5 to 8, preferably at pH 6.5% subsequent separation of the solid phase with cystatin and re-suspending it into the aqueous phase, cystatin is released from binding with immobilized cysteine proteinase to aqueous solution at a pH of less than 3.5 or greater than 10.0.
Description
Způsob izolace cystatinů, přirozených inhibitorů cysteinových proteináz, z roztoku získaných z přírodních materiálů pomocí imobilizovaných cysteinových proteinázProcess for the isolation of cystatins, natural inhibitors of cysteine proteinases, from a solution obtained from natural materials by means of immobilized cysteine proteinases
Způsob spočívá v isolaci cystatinu z roztoku pomocí cysteinové proteinázy imobilizované polymerací glutaralčlehydem na polymerní nosič na bázi polyetylentsreftalátu vsádkovým uspořádáním při pH roztoku 5 až 8, s výhodou při pH 6,5» po následném oddělení pevné fáze s cystatinem a jejím opětném suspendováním do vodné fáze se cystatin uvolní z vazby s imobilizovanou cysteinovou proteinázou do vodného roztoku při pH menším než 3,5 nebo vyšším než 10,0.The method consists in isolating cystatin from solution by cysteine proteinase immobilized by polymerization of glutaraldehyde onto a polymer carrier based on polyethylene terephthalate in a batch arrangement at a pH of solution of 5 to 8, preferably at pH 6.5 after subsequent solid phase separation with cystatin and resuspending in the aqueous phase For example, cystatin is released from binding with immobilized cysteine proteinase to an aqueous solution at a pH of less than 3.5 or greater than 10.0.
242 391242 391
- 1 242 391- 1 242 391
Vynález se týká izolace cystatinů, přirozených inhibitorů cysteinových proteináz, z roztoků připravených z vajec, vaječného bílku, extraktů tkání a tělních tekutin živočichů, čerstvých, sušených nebo zmražených, pomocí cysteinových imobilisovaných proteináz.The invention relates to the isolation of cystatins, natural inhibitors of cysteine proteinases, from solutions prepared from eggs, egg white, tissue extracts and animal body fluids, fresh, dried or frozen, by cysteine immobilized proteinases.
λpřičemžλp while taking
Postupy dosud použité pro izolace cystatinů^ cystatiny jsou přirozené inhibitory cysteinových proteináz bílkovinné povahy, o relativní molekulové hmotnosti 10 až 15 kD, stabilních v roztocích o pH 2 až 12, stabilních ve vodných roztocích při teplotách nad 80 G, schopných vazby na aktivní jakož i na inaktivováné deriváty cysteinových proteináz, využívají aktivních nebo inaktivovaných cysteinových proteináz imobilizovaných na polymerních nosičích na bázi modifikovaných agarosových gelů, například na gel Sepharosa 4B aktivovaný bromkyanem, který dodává firma Pharmacia Švédsko, nebo Reacti-gel firmy Pierce z USA, v provedení kolonové afinitní chromatografie. Tyto gely se vyznačují nízkou mechanickou odolností, neumožňují tlakovou filtraci ani intenzivní míchání rotujícími míchadly, bez poškození nosiče.The procedures used to date for the isolation of cystatins-cystatins are natural inhibitors of proteinaceous cysteine proteinases of 10 to 15 kD, stable in solutions of pH 2 to 12, stable in aqueous solutions at temperatures above 80 G, capable of binding to both active and for inactivated cysteine proteinase derivatives, utilizing active or inactivated cysteine proteinases immobilized on polymeric carriers based on modified agarose gels, such as cyanogen bromide-activated Sepharose 4B gel, supplied by Pharmacia Sweden, or Reacti-gel from Pierce, USA, by column affinity chromatography . These gels are characterized by low mechanical resistance, do not allow pressure filtration or intensive mixing with rotating stirrers, without damaging the carrier.
Podstata vynálezu spočívá v isolaci cystatinů pomocí cysteinových proteináz imobilizovaných polymeraci glutaraldehydem na polyetylentereftalét. Vzniklá suspenze imobilizované proteinázy na rigidních částicích pevné fáze lze filtrovat a míchat běžnými technickými prostředky, čehož se s výhodou využije pro izolaci cystatinů.The present invention is based on the isolation of cystatins by cysteine proteinases immobilized by polymerization of glutaraldehyde to polyethylene terephthalate. The resulting immobilized proteinase suspension on the rigid solid phase particles can be filtered and mixed by conventional techniques, which is preferably used for the isolation of cystatins.
Suspenze imobilizované cysteinové proteinázy se připraví vaz bou z roztoku na polyetylentereftalát podle postupu čs. patentu č. 195 568.An immobilized cysteine proteinase suspension is prepared by binding from solution to polyethylene terephthalate according to the procedure of U.S. Pat. No. 195,568.
242 391242 391
Pro izolaci cystatinů se suspenze imobilizované cystěinové proteinázy smíchá s roztokem obsahujícím aktivní cystatin. Ve vzniklé suspenzi se upraví pH roztoku v rozmezí 5 až 8.To isolate cystatins, the immobilized cystein proteinase suspension is mixed with a solution containing active cystatin. The pH of the solution is adjusted in the range of 5-8 in the resulting suspension.
Po dosažení postačující vazby cystatinů na pevnou fázi se tato oddělí ze suspenze filtrací nebo sedimentací, volně nebo v odstředivce a promyje se od nespecificky sorbovaných složek výchozího roztoku cystatinů. Pro dosažení vhodného promytí se osvědčila destilovaná voda v nejméně šesti dávkách v množství 200 násobku suché hmotnosti nosiče, při proraývání odstřelováním, dekantací nebo filtrací.After sufficient solid phase binding of cystatins is achieved, it is separated from the suspension by filtration or sedimentation, freely or in a centrifuge, and washed from the non-specifically sorbed components of the starting cystatin solution. Distilled water in at least six portions in an amount of 200 times the dry weight of the carrier has proven to be suitable for a suitable wash, by blasting, blasting, decanting or filtering.
Po promytí se cystatin z pevné fáze eluuje roztokem o pH menším než 5,5 nebo větším než 10,0 a oddělí se filtrací přes papírový filtr nebo sedimentací v odstředivce, či dekantací. Počet možných použití pevné fáze závisí na kvalitě promytí před elucí a podmínkách eluce.After washing, the cystatin from the solid phase is eluted with a solution of pH less than 5.5 or greater than 10.0 and separated by filtration through a paper filter or by centrifugation or decantation. The number of possible uses of the solid phase depends on the quality of washing prior to elution and elution conditions.
Podle poměru, v němž je objem eluátu k objemu výchozího roztoku cystatinů, lze dosáhnout různého stupně nakoncentrování cystatinu v eluátu proti výchozímu roztoku, za současného odstranění většiny balastních složek z roztoku cystatinů. Po zahuštění roztoku cystatinů mrazovou sublimací a gelové filtraci na vhodném nosiči lze získat použitím cysteinových proteináz zmobilizovaných na polyetylentereftalát, preparáty cystatinů, které vykazují homogenitu na elektroforéze v 15% gelu polyakrylamidu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného v uspořádání podle Laemmliho. /U.K. Laemmli: Nátuře, /London/, 227» str. 680 A97O//.Depending on the ratio of the eluate to the volume of the starting cystatin solution, a different degree of concentration of cystatin in the eluate to the starting solution can be achieved, while removing most of the ballast components from the cystatin solution. After concentration of the cystatin solution by freeze-sublimation and gel filtration on a suitable support, cysteine proteinases mobilized to polyethylene terephthalate can be obtained, cystatin preparations which exhibit homogeneity by electrophoresis in a 15% polyacrylamide gel in the presence of sodium dodecyl sulfate in the Laemmli arrangement. /U.K. Laemmli: Nature, / London /, 227 »p. 680 A97O //.
Použití polymerního nosiče, polyetylentereftalátu, s navázanými cystěžňovými proteinázami pro izolaci cystatinů jež je předmětem tohoto vynálezu představuje proto nový přístup k řešení otázky izolace cystatinů a jeho hlavní výhody tkví ve vysoké mechanické pevnosti částic s zmobilizovanou proteinázou, což zajišťuje dobrou filtrovatelnost a umožňuje, intenzivní míchání suspenze, ve snadném oddělování pevné fáze sedimentací, možnosti recyklování jež snižuje nevýhodu vsádkového procesu ve srovnání s ko242 391 lonovým uspořádáním, tedy nižší výtěžnost, dále ve vyšší rychlosti provedení afinitního kroku, která se projeví především při zpracování velkých objemů roztoka o nízké koncentraci cystatinů, v dovozní nenáročnosti a nízké cené polymerního nosiče pro imobilizaci proteináz. Nevýhodou předmětu tohoto vynálezu je nutnost používat pro zajištění dobré čistoty výsledného preparátu cystatinů větších objemů promývacích roztoků, jejichž cena je ovšem nízká a dostupnost dobrá.The use of a polymeric carrier, polyethylene terephthalate, with attached cysteine proteinases for the isolation of cystatins of the present invention therefore presents a novel approach to the problem of cystatin isolation and its main advantages lie in the high mechanical strength of the proteinase mobilized particles, ensuring good filterability and suspension, in easy separation of the solid phase by sedimentation, the possibility of recycling which reduces the disadvantage of the batch process compared to the ko242 391 ion arrangement, thus lower yield, further higher affinity step execution speed, which is manifested especially in processing large volumes of low cystatin solution, low import price and low cost polymeric carrier for proteinase immobilization. A disadvantage of the present invention is the need to use larger volumes of wash solutions to ensure good purity of the resulting cystatin preparation, but of low cost and good availability.
Podstatnou předností předmětu tohoto vynálezu je možnost použití proteinázy imobilizované na polyetylentereftalát pro izolaci cystatinů i z roztoků, které nejsou prosty koloidních částic, které jsou pro kolonovou afinitní nepoužitelné, stejně jako roztoky s vysokou viskozitou /například 3x koncentrovaný bílek/.An essential advantage of the present invention is the possibility of using a proteinase immobilized to polyethylene terephthalate for the isolation of cystatins even from solutions which are not free from colloidal particles which are unusable for column affinity, as well as solutions of high viscosity (e.g. 3x concentrated white).
Výtěžnost kolonových chromátogra.fií cystatinů na afinitních nosičích udávají autoři v rozmezí 20 až 40 %. Při použití předmětu tohoto vynálezu se výtěžnost pohybuje v konkrétním případě vaječného bílku, kde je znám přibližný obsah cystatinů v intaktním materiálu kolem 10 % v prvním cyklu, lze ji však zvýšit recyklováním, nehledě na to, že bílek ze slepičích vajec je levnou surovinou, přístupnou ve velkých množstvích vznikající jako odpad při výrobě majonézy.The yields of cystatin column chromatography on affinity carriers are reported by the authors in the range of 20 to 40%. Using the present invention, the yield in the particular case of egg white is known to have an approximate cystatin content of intact material of about 10% in the first cycle, but can be increased by recycling, despite the hen egg white being a cheap raw material accessible in large quantities generated as waste in the production of mayonnaise.
Příklad 1Example 1
Suspenze obsahující 1,25 g polyetylentereftalátu ve 25 ml fyziologického roztoku byla po přídavku 12,5 ml 25% roztoku glutaraldehydu a promíchání umístěna do termostatu a polymer aktivován při 37 °C po dobu 14 hodin. Polymer byl oddělen filtrací na Buchnerově nálevce přes papírový filtr a přenesen bez promytí do roztoku papainu obsahujícího 300 mg papainu ve 30 ml 0,1 M fosfátového tlumicího roztoku obsahujícího 0,002 M kyselinu etylendiamin tetráoctovou /dále EDTA/, o pH 6,3· Po kapkách bylo k suspenzi přidáno, za stálého míchání magnetickým michadlem, 3,3 ml 1% roztoku glutaraldehydu. Po třech hodinách míchání suspense při 22 °C byl polymer s navázaným papainem oddělen filtrací na Buchnerově nálevce přes papírový filtr a promyt postupně 2 dm? destilované vody, na filtru. Takto připravený imobilizovaný papain, bylA suspension containing 1.25 g of polyethylene terephthalate in 25 ml of saline was placed in a thermostat after addition of 12.5 ml of a 25% glutaraldehyde solution and mixed, and the polymer was activated at 37 ° C for 14 hours. The polymer was separated by filtration on a Buchner funnel through a paper filter and transferred without washing to a papain solution containing 300 mg papain in 30 ml 0.1 M phosphate buffer containing 0.002 M ethylenediamine tetraacetic acid (hereinafter EDTA), pH 6.3. 3.3 ml of a 1% glutaraldehyde solution was added to the suspension under stirring with a magnetic stirrer. After three hours of stirring the suspension at 22 ° C, the papain-bound polymer was separated by filtration on a Buchner funnel through a paper filter and washed successively for 2 dm? distilled water on filter. The immobilized papain thus prepared was
- 4 242 391 skladován v 1# roztoku NaCl okyseleném přídavkem HC1 na pH 3,0 při 4 °c několik měsíců bez ztráty vazebné kapacity.4,242,391 were stored in 1 N NaCl solution acidified with HCl to pH 3.0 at 4 ° C for several months without loss of binding capacity.
Extrakt obsahující cystatin byl připraven z hovězích ledvin. 800 g zmrazených hovězích ledvin bylo rozmraženo, mechanicky zbaveno tukové tkáně a rozemleto na masovém mlýnku, poté smícháno seCystatin-containing extract was prepared from bovine kidney. 800 g of frozen bovine kidneys were thawed, mechanically defatted and ground in a meat mincer, then mixed with
I 600 ml destilované vody a homogenizováno v mixeru běžného kuchyňského typu po dobu 5ti minut. Po deseti minutách stání byly hrubé zbytky tkáně odstraněny z homogenátu odstředěním 6 000 x g po dobu 10 minut a supernatant byl dále odstředěn při 25 000 x g po dobu 30 minut, přídavkem 5M NaOH bylo pH v supernatantu ustaveno na 11,0 a roztok byl ponechán stát po. dobu 2 hodin. Všechny operace byly provedeny při 4 °C.I 600 ml of distilled water and homogenized in a conventional kitchen mixer for 5 minutes. After standing for 10 minutes, coarse tissue debris was removed from the homogenate by centrifugation at 6,000 xg for 10 minutes and the supernatant was further centrifuged at 25,000 xg for 30 minutes, the pH of the supernatant was adjusted to 11.0 by addition of 5M NaOH and allowed to stand. after. for 2 hours. All operations were performed at 4 ° C.
Po 2 hodinách stání při pH 11,0 bylo pH roztoku upraveno přídavkem 11 M HC1 na 7,5 a vzniklá sraženina byla odstředěna při 6 000 x g po dobu 10 minut. Poté bylo pH roztoku upraveno na 2,8After standing for 2 hours at pH 11.0, the pH of the solution was adjusted to 7.5 by the addition of 11 M HCl and the resulting precipitate was centrifuged at 6000 x g for 10 minutes. The pH of the solution was then adjusted to 2.8
II M HG1 a roztok byl v průběhu 20 minut zahřát na vodní lázni na teplotu 90 °C. Po deseti minutách stání při této teplotě byl roztok rychle ochlazen pod tekoucí vodou na 25 °C a přídavkem 5 M NaOH bylo pH upraveno na 5,4· Vzniklá sraženina byla odstředěna při 6 000 x g, 10 minut.II M HG1 and the solution was heated to 90 ° C in a water bath over 20 minutes. After standing at this temperature for 10 minutes, the solution was quenched under running water to 25 ° C and the pH was adjusted to 5.4 by the addition of 5 M NaOH. The resulting precipitate was centrifuged at 6000 x g for 10 minutes.
150 ml takto získaného vyčeřeného extraktu bylo smícháno se smspenzí obsahující 1 g papainu zmobilizovaného na polyetylentereftalótu v 50 ml 0,1 M fosfátového tlumivého roztoku.obsahujícího 0,002 M EDTA a 0,002 M L-cysteinhydrochloriď o pH 6,3· Suspenze byla intenzívně míchána magnetickým míchadlem po dobu 30 minut při teplotě 25 °G a poté byla pevná fáze oddělena filtrací přes papírový filtr na Buchnerově nálevce, promytá 1 dm^ destilované vody a suspendována ve 150 ml destilované vody. V suspenzi bylo přídavkem 11 M HC1 upraveno pH na 2,8 a po 10 minutách míchání při 25 °C byla pevná fáze oddělena filtrací. Roztok obsahující uvolněný cystatin byl zahuštěn mrazovou sublimací.150 ml of the clarified extract thus obtained was mixed with a suspension containing 1 g of polyethylene terephthalate-mobilized papain in 50 ml of 0.1 M phosphate buffer containing 0.002 M EDTA and 0.002 M L-cysteine hydrochloride, pH 6.3 · The suspension was vigorously stirred with a magnetic stirrer. The solid was collected by filtration through a paper filter on a Buchner funnel, washed with 1 dmL of distilled water, and suspended in 150 mL of distilled water. In the suspension, the pH was adjusted to 2.8 by the addition of 11 M HCl, and after stirring at 25 ° C for 10 minutes, the solid phase was separated by filtration. The solution containing the released cystatin was concentrated by freeze-drying.
Příklad 2Example 2
Postupem jako v příkladu 1 byly připraveny 4 g imobilizováného papainu /hmotnost nosiče s navázaným enzymem/. Z 30 kusů čerstvých slepicích vajec B /Pražské drůbežářské závody n.p., závod Libuš/ bylo odděleno 900 ml bílku a rozmixováno s 900 ml 0,25 M NaCl v kuchyňském mixeru. Vzniklý roztok měl pH 8,7· PřídavkemUsing the procedure of Example 1, 4 g of immobilized papain (weight of enzyme-linked support) were prepared. From 30 pieces of fresh chicken eggs B / Prague Poultry Plant n.p., plant Libuš /, 900 ml of egg white was separated and mixed with 900 ml of 0.25 M NaCl in a kitchen mixer. The resulting solution had a pH of 8.7
- 5 242 391- 5 242 391
5M mravenčanu sodného o pH 5,0 bylo pH v roztoku bílku upraveno na 6,2 a vzniklé sraženina ovomucínu byla odstředěna při 6 000 x g po dobu 10 minut»5M sodium formate, pH 5.0, the pH in the white solution was adjusted to 6.2, and the resulting ovomycin precipitate was centrifuged at 6000 x g for 10 minutes »
Supernatant byl smíchán se suspenzí obsahující 4 g polyetylentereftalátu s navázaným paparnem ve 100 ml 0,1 M fosfátového tlumivého roztoku s 0,002 M EDTA o pH 6,5> který neobsahoval L-cystein hydrochlorid. Suspenze byla míchána přes noc magnetickým míchadlem. Pevná fáze byla oddělena odstředováním při 1 000 x g a promyta 6x11 destilované vody odstředováním při 1 000 x g po dobu 1 minuty.The supernatant was mixed with a suspension containing 4 g of papyrate-bound polyethylene terephthalate in 100 ml of 0.1 M phosphate buffer with 0.002 M EDTA, pH 6.5, which did not contain L-cysteine hydrochloride. The suspension was stirred overnight with a magnetic stirrer. The solid phase was separated by centrifugation at 1000 x g and washed with 6x11 distilled water by centrifugation at 1000 x g for 1 minute.
Sediment byl přenesen do 200 ml destilované vody a cystatin byl uvolněn okyselením suspenze 11M HCl na pH 1,8. Po*deseti minutách míchání magnetickým míchadlem při 25 °C byl roztok obsahující uvolnění cystatin oddělen od pevné fáze filtrací přes skládaný papírový filtr a zahuštěn mrazovou sublimací.The sediment was transferred to 200 mL of distilled water and cystatin was released by acidifying the slurry of 11M HCl to pH 1.8. After stirring for ten minutes with a magnetic stirrer at 25 ° C, the solution containing the release of cystatin was separated from the solid phase by filtration through a pleated paper filter and concentrated by freeze-drying.
Kromě eluce proběhly všechny operace při 4 °C.Except for elution, all operations were performed at 4 ° C.
Příklad 3Example 3
Vaječný bílek jež byl jednou použit a oddělen od pevná fáze před promýváním v příkladu 2 byl opětovně smíchán se suspenzí imobilizovaného papainu oddělenou po eluci v příkladu 2 a za podmínek stejných jako v příkladu 2 byla provedena vazba cysratinu zbyléno v roztoku bílku na zmobilizovaný papain a eluce navázaného cystatinu. Výtěžek cystatinu v eluátu byl o 21 % nižší než v příkladu 2.The egg white, once used and separated from the solid phase prior to washing in Example 2, was re-mixed with the immobilized papain suspension separated after elution in Example 2 and under conditions similar to Example 2 the cysratin remaining in the white solution was coupled to the mobilized papain and eluted. bound cystatin. The yield of cystatin in the eluate was 21% lower than in Example 2.
Příklad 4Example 4
27,5 g sušeného slepičího vaječného bíl&u /pražské drůbežářské závody/ bylo rozmícháno a 80 ml destilované vody. Vzniklá pěna byla odstraněna odstředěním, 1 000 x g 10 minut nebo stáním po dobu 1 hodiny. Odstranění ovomucínu, vazba cystatinu a promyti suspenze zmobilizovaného papainu s navázaným cysteinem bylo provedeno jako v příkladu 2. V suspenzi bylo přídavkem 5 M NaOH ustaveno pH 11,5 a po míchání při 25 °C po dobu 10 minut byla pevná fáze oddělena odstředěním při 1 000 x g po dobu 1 minuty a v supernatantu upraveno pH na 7,0 přídavkem HCl. Supernatant obsahující uvolněný Cystatin byl zahuštěn mrazovou sublimací.27.5 g of dried hen egg white (Prague poultry factory) were mixed and 80 ml of distilled water. The resulting foam was removed by centrifugation, 1000 x g for 10 minutes or standing for 1 hour. Removal of the ovomycin, binding of cystatin and washing of the suspension of mobilized cysteine-bound papain was performed as in Example 2. The pH of the suspension was adjusted to 11.5 by the addition of 5 M NaOH and after stirring at 25 ° C for 10 minutes the solid was collected by centrifugation at 1. The pH was adjusted to 7.0 by addition of HCl in the supernatant. The supernatant containing the released Cystatin was concentrated by freeze-sublimation.
242 391242 391
Eluáty cystatinu obsahovaly 5 až 10 mg aktivního cystatinu, v případě postupů uvedených v příkladech 2, 5, 4 S 0,7 a 2,0 mg cystatinu v případě postupu podle příkladu 1. Množství cystatinů byla stanovena pomocí titrace .roztokem kathepsinu H, o známém obsahu proteinézy, za použiti 4-nitroanilidu L-fenylalaninu jako substrátu.Cystatin eluates contained 5 to 10 mg of active cystatin for the procedures described in Examples 2, 5, 4 S 0.7 and 2.0 mg of cystatin for the procedure of Example 1. Cystatin levels were determined by titration with a cathepsin H 2 O solution. known content of proteinesis, using 4-nitroanilide L-phenylalanine as substrate.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS843779A CS242391B1 (en) | 1984-05-21 | 1984-05-21 | Method of cystathionines,cysteine proteinases' natural inhibitors insulation from solutions won from natural materials by means by means of immobilized cysteine proteinases |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS843779A CS242391B1 (en) | 1984-05-21 | 1984-05-21 | Method of cystathionines,cysteine proteinases' natural inhibitors insulation from solutions won from natural materials by means by means of immobilized cysteine proteinases |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS377984A1 CS377984A1 (en) | 1985-08-15 |
CS242391B1 true CS242391B1 (en) | 1986-04-17 |
Family
ID=5378865
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS843779A CS242391B1 (en) | 1984-05-21 | 1984-05-21 | Method of cystathionines,cysteine proteinases' natural inhibitors insulation from solutions won from natural materials by means by means of immobilized cysteine proteinases |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CS (1) | CS242391B1 (en) |
-
1984
- 1984-05-21 CS CS843779A patent/CS242391B1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CS377984A1 (en) | 1985-08-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1223199A (en) | Partially purified osteogenic factor and process for preparing same from demineralized bone | |
JP2622686B2 (en) | Method for producing k-casein glycomacropeptide | |
US6346245B1 (en) | Procedure for extraction and use of hatching fluid from Atlantic salmon | |
AU684162B2 (en) | A process for separating milk clotting enzymes, and stable rennet compositions | |
Mirsky et al. | The isolation and crystallization of human insulin | |
JPH05125100A (en) | High-purity pepsin soluble scale collagen and its production | |
US5061627A (en) | Method for preparing enzymes from crustaceans | |
EP0110688B1 (en) | Angiogenic factor production | |
CS242391B1 (en) | Method of cystathionines,cysteine proteinases' natural inhibitors insulation from solutions won from natural materials by means by means of immobilized cysteine proteinases | |
US3940317A (en) | Method of isolation of lysozyme | |
KR20190065935A (en) | refining method for mass production of marine collagen | |
US5294681A (en) | Water insoluble cross-linked acid compositions | |
RU2332423C2 (en) | Method of preparation of thymic peptide | |
CA1117879A (en) | T-factor, coa-spc substantially free of proteolytic enzymes and its preparation | |
RU2034028C1 (en) | Method of preparing of proteolytic complex | |
RU2068267C1 (en) | Method of hyaluronidase preparing | |
EP0059182B1 (en) | A process for isolating aminoacylase enzyme from a mammal kidney extract | |
Lundblad et al. | Purification of cathepsin B from oocytes and mature eggs of the sea urchin Brissopsis lyrifera by means of gel filtration | |
RU2225441C1 (en) | Method for preparing collagenase preparation | |
US20220204922A1 (en) | Purified fish proteases with high specific activities and its process of production | |
RU2077537C1 (en) | Method for production of ovomucoid | |
SU508509A1 (en) | Method for isolating enzymes of microbial bee mass | |
RU2091073C1 (en) | Method of immunostimulating agent preparing | |
RU2177997C1 (en) | Method of isolation of carboxypeptidase b | |
SU506595A1 (en) | The method of isolation and purification of pancreatic β-amylase |