CS242221B1 - Sposob navázovania vysokomoíekulových biologicky aktívnych látok na polytetrafluóretylénový povrch fyzikálnou adsorpciou - Google Patents

Description

2 4 2 2 2 1

Vynález sa týká sposobu navazovania vy-sokomolekulových biologicky aktívnych lá-tok (VBAL), akými sú například specificképrotilátky gama globulínovej povahy na po-lytetrafluóretylénový povrch (PTFE) fyzikál-nou adsorpciou s dalším použitím v rádio-imunoanalýze alebo v enzýmoimunoanalýze(EIA). Důležitým krokom pri RIA alebo EIA je se-parácia vol'ne] a viazane] frakcie stanovova-né]' látky s jej protilátkou. K tomuto účelusa využívá vačšinou precipitačných činidielna bielkovinovú frakciu, akými sú síran a-mónny a polyetylénglykol, ďalej sa využíváimunoprecipitácie s druhou protilátkou. I-ným separačným postupom je možnost vy-užitia sorpcie nízkomolekulových látok naaktívnom uhlí potiahnutom dextranom. Tie-to postupy sú nevýhodné v tom, že pro při-daní separačného činidla je potřebné viaza-nú a vofnú frakciu oddělit centrifugáciou,čo značné komplikuje postup a predlžujejednotlivé stanovenia. Preto sa k separáciistále vo vačšej miere používá tzv. pevnej fá-zy, t.j. protilátka je před samotnou imuno-fáze vačšinou fyzikálnou sorpciou. Protilát-ka maže byť naviazaná například na skú-mavke alebo gufke z polypropylénu, polysty-rénu a pod. Vlastná separácia je po přeběh-nutí imunochemickej reakcie velmi jedno-duchá — naviazaná stanovovaná látka naprotilátku zostáva na pevnej fáze. Tento po-stup má výhodu oproti predchádzajúcim vovačšej rýchlosti vlastnej analýzy, nevýhodouže vazba VBAL na PTFE povrch nie je přílišstabilná a naviazaná VBAL je potřebné chrá-nit skladováním pri nízkej teplote (problé-my pri transporte), alebo robit naviazanietesne před iminochemickou reakciou. Dalšímmožným typom separácie pomocou pevnejfázy je naviazanie VBAL v tlmivom roztokuna jemné suspenzie, například hydroxilova-ného dextranu. Táto pevná fáza sa do reak-cie přidává vo formě suspenzie a nevýhodoutohoto postupu je opat zaradenie centrifugá-cie, respektive volnej sedimentácie pevnejfázy do postupu RIA alebo EIA. Okrem to-ho chemikálie na přípravu suspenzie sú do-vozové.

Uvedené nedostatky rieši postup podlá vy-nálezu, ktorého podstatou je, že PTFE. po-vrch sa aktivuje v roztoku amoniaku vo vo-dě s koncentráciou 5 — 42 % obj. prídavkomkovového sodíka od 0,01 do 15,00 mol. dm"3pri teplote —40 až + 25 °C s následným pre-mytím destilovanou vodou a vnesením taktoaktivovaných povrchov do roztokov VBAL vkoncentračnom rozmedzí od 10"3 do 150.. dm-3 v destilovanej vodě s pH od 4,5 do8,0 alebo vodnom tlmivom roztoku s pH vrozmedzí od 4,0 do 9,6 a ich ponecháním vklude po dobu 30 min. až 24 hodin pri teplo-te od 2 °C do 50 °C s následným vybratím zroztoku, opláchnutím destilovanou vodou sobsahom 10 ~2 až 1 % hmot. chloridu sodné-ho a osušením pri teplote od 5 °C do 45 °C.

Použitím postupu pódia vynálezu sa dosa- hujú následovně účinky. Je vytvořená po-měrně pevná vazba VBAL na PTFE plochu,tepelne málo labilná, takže sa výrazné pre-dlžuje exspirácia tejto pevnej fázy. Protilát-ka na pevnej fáze je vnášaná do reakčnejzmesi a po přeběhnutí imunochemickej reak-cie je možné vofnú a viazanú frakciu od se-ba oddělit vybratím pevnej fázy z reakčnejzmesi, čo značné zjednodušuje celý postup.Urýchlenie celého postupu pri RIA má zanásledok, že pracovník, ktorý vlastnú analý-zu robí, je kratšiu dobu vystavený rádioak-tívnemu žiareniu. Ďalej sa šetria dovozovésuroviny. Příklad 1

Gufky z PTFE boli vnesené do kadičky, vktorej bol roztok amoniaku vo vodě s kon-centráciou 11 % obj. Do kadičky sa potom počastiach přidával kovový sodík s výslednoukoncentráciou 7 mol. dm-3 pri teplote —10stupňov Celsia. Po přeběhnutí reakcie boligufky z PTFE premyté destilovanou vodou avnesené do roztoku protilátky proti tyroxínus koncentráciou gama globulínu 65.10-3 g .. dm-3 v destilovanej vodě s pH = 6,5 a tamponechané v kfude po dobu 30 minút pri tep-lote 22 °C. Potom boli gufky z PTFE oplách-nuté destilovanou vodou s obsahom 0,05 °/ochloridu sodného. Gufky boli vysušené priteplote 22 °C a ďalej boli použité pre RIA aEIA tyroxínu. Příklad 2

Postupovalo sa ako v příklade 1. Koncen-trácia amoniaku vo vodě bola 42 % obj. aprídavok sodíka 15 mol. dm"3. Pevná fázabola vnesená do roztoku protilátky protiprogesterónu s koncentráciou 150.10"3 vofosfátovom tlmivom roztoku s koncentráciou0,1 mol. dm-3 a pH = 7,6. Pevná fáza bolaponechaná v kfude 20 hodin pri 6 °C. Potombola prepláchnutá 1%-ným vodným rozto-kom chloridu sodného a vysušená pri 45 °C. Příklad 3

Postupovalo sa ako v příklade 2. Na pev-ná fázu bola naviazaná protilátka proti alfa-toxínu Bi s koncentráciou 10"3 g. dm"3 vdestilovanej vodě s pH = 4,5. Příklad 4

Postupovalo sa ako v příklade 1. Na PTFEpovrch bola naviazaná protilátka proti digo-xínu s koncentráciou 37.10“3 g . dm-3 vofosfátovom tlmivom roztoku (zloženie ako vpříklade 2). Příklad 5

Postupovalo sa ako v příklade 4. Koncen- trácia kovového sodíka však bola 0,1 mol. . dm-3.

Claims (1)

1. 242221 PREDMET Spůsob navazovania vysokomolekulovýchbiologicky aktívnych látok na polytetra-fluóretylénový povrch fyzikálnou adsorpcioupre následné použitie v rádioimunoanalýzea enzýmoimunoanalýze, vyznačený tým, žepolytetrafluóretylénový povrch sa aktivujev roztoku amoniaku vo vodě s koncentráciou5 až 42 % obj. prídavkom kovového sodíkaod 0,01 do 15,00 mol. dm-3 pri teplote —40až + 25 °C s následným premytím destilova-nou vodou a vnesením takto aktivovaných VYNALEZU povrchov do roztoku vysokomolekulovej bio-logicky aktívnej látky v koncentračnom roz-medzí od 10“3 do 150.10-3 g. dm-3 v des-tilovanej vodě s pH od 4,5 do 8,0, alebo vovodnom tlmivom roztoku s pH v rozmedzíod 4,0 do 9,6 a ich ponecháním v kl'ude podobu 30 minut až 24 hodin pri teplote od2 °C do 50 °C a následným vybratím z rozto-ku, opláchnutím destilovanou vodou s ob-sahom 10~2 až 1 % hmot. chloridu sodnéhoa osušením pri teplote od 5 °C do 45 °C.