CS240043B1 - Akceptor elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b£ - Google Patents
Akceptor elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b£ Download PDFInfo
- Publication number
- CS240043B1 CS240043B1 CS846744A CS674484A CS240043B1 CS 240043 B1 CS240043 B1 CS 240043B1 CS 846744 A CS846744 A CS 846744A CS 674484 A CS674484 A CS 674484A CS 240043 B1 CS240043 B1 CS 240043B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cytochrome
- lactate concentration
- determination
- electron acceptor
- lactate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Použití tetrazoliové soli jako akceptoru elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b2 má za následek významné zvýšení citlivosti reakce, dosažení pozitivní změny absorbance a v neposlední řadě i možnost měřit výsledné zabarvení ve viditelné oblasti spektra. Využití řešení je vhodné zejména pro laboratoře klinické biochemie a jiná pracoviště, kde se provádí stanovení koncentrace laktátu při hodnocení tíže laktátové acidózy u nemocných v těžkém stavu při určeni anaerobního práhu u pacientů po infarktu myokardu a u sportovc
Description
Vynález se týká použití tetrazoliové soli jako akeeptoru elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochrómu b2·
Kýselina mléčný resp. laktát je důležitý metabolit, vznikající jako konečný produkt anaerobní glykolýzy. Stanovení koncentrace laktátu v plazmě má zásadní význam u nemocných v těžkém stavu, zejména v šoku, kdy pomáhá určit nejen diagnózu laktátové acidózy, ale uplatňuje se i jako ukazatel úspěšnosti léčby a prognózy onemocnění. U pacientů po infarktu myokardu se využívá stanovení koncentrace laktátu v krvi k určení velikosti zátěže, kterou pacient ještě dokáže zvládnout aerobní oxigenací, tj. lze určit vhodnou zátěž pro rehabilitační cvičení. U sportovců dovoluje stanovení koncentrace laktátu v krvi po fyzické zátěži posoudit stupeň trénovánosti.
Ke stanovení koncentrace laktátu v plazmě se obvykle užívá jedné ze dvou specifických enzymových metod. Prvá spočívá v oxidaci laktátu na pyruvát nikotinamidadenindinukleotidem za katalýzy živočišnou laktótdehydrogenasou. Vznik redukované formy nikotinamidadenindinukleotidu se projeví nárůstem absorbance v ultrafialové oblasti spektra. Protože reakční rovnováha je nepříznivá pro uvedený směr reakce, je třeba odčerpávat jeden z produktů, obvykle pyruvát. K tomu lze např. využít transaminační reakce s glutamátem za katalýzy alaninaminotransferasou. Tento princip je užit v práci Nolla (in: Bergmeyer, H. U., ed.: Methoden der enzymatischen Analyse, 2. vyd., díl 2, Akademie Verlag, Berlin 1970, s. 1433 eě 1437) a je na něm založeno i u nás užívané stanovení koncentrace laktátu pomocí soupravy Lactat vollenzymatisch firmy Boehringer Mannheim. Nutnost přítomnosti dvou enzymů, koenzymu a dalšího pomocného substrátu prodražuje stanovení. Další nevýhodou je nezbytnost užití fotometru s možností měřit v ultrafialové oblasti spektra; tento fotometr je
- 2 240 043 drahý a v menších laboratořích klinické biochemie nedostupný·
Druhá metoda využívá cytochrom b2, obvykle izolovaný z aerobních kvasinek, např. z pekařského droždí. Tento enzym působí také jako laktátdehydrogenasa a katalyzuje přeměnu laktátu na pyruvát. Enzym nepotřebuje žádný koenzym a jako umělý akceptor elektronů je využíván ferrikyanid draselný. Tuto metodu poprvé popsal Wieland (Biochem. Z. 329, 1958, č. 7, s. 568« 576) a užili ji později i jiní autoři, např. Durliat a spol. (Clin. Chem. 22, 1976, δ. 11, s. 1802 « 1805). Průběh reakce je sledován jako pokles absorbance v krátké oblasti viditelného světla, způsobený přeměnou žlutého ferrikyanidu na bezbarvý ferrokyanid. Nevýhodou stanovení je malá citlivost a obtížný způsob automatizace při záporné změně absorbance.
Podstata akceptoru elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b2 spočívá v použiti tetrazoliové soli. Tato sloučenina, obvykle užívaná jako redoxní indikátor k průkazu redukované formy nikotinamidadenindinukleotidu nebo sulfhydrylových skupin, je v tomto případě redukována laktétem za katalytického působení cytochromu b2 na barevný formazan; nárůst absorbance je měřen ve viditelné oblasti spektra.
Výhodou tohoto stanovení je jednoduchost a vysoká citlivost, téměř desetkrát vyšší než při užití ferrikyanidu. Protože dochází k nárůstu absorbance, lze výsledky snadno automaticky vyhodnocovat. Vzniklé zabarvení je měřeno ve viditelné oblasti spektra, čímž je stanovení zpřístupněno i těm laboratořím, které nejsou vybaveny spektrofotometrem pro měření v ultrafialovém světle. Izolace cytochromu b2 je levné a pro jednoduchost postupu snadno realizovatelná.
Příklad 1
Při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b2 ee jako akceptor elektronů užije 3,3’-dianisol-4,4’-bis[2-(4-nitrofenyl)-5-fenyltetrazoliumehlorid] v konečné koncentraci 0,4 mrnol/1 a jako přenašeč elektronů N-metylfenaziniummetylsulfát v konečné koncentraci 0,15 mmol/1. Vzniklé zabarvení se měří při vlnové délce 530 nm.
- 3 Příklad 2 240 «43
Po elektroforéze v gradientovém polyakrylamidovém gelu následuje inkubace v roztoku obsahujícím laktát v koncentraci 50 mmol/1, 3-(4-, 5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid v koncentraci 2,0 mmol/1 a N-metylfenaziniummetylsulfát v koncentraci 0,2 mmol/1. Postup slouží k charakterizaci laktátdehydrogenasy po její izolaci z kvasinek.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU240 043Použití tetrazoliové soli jako akceptoru elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu bg·
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS846744A CS240043B1 (cs) | 1984-09-07 | 1984-09-07 | Akceptor elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b£ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS846744A CS240043B1 (cs) | 1984-09-07 | 1984-09-07 | Akceptor elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b£ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS674484A1 CS674484A1 (en) | 1985-06-13 |
| CS240043B1 true CS240043B1 (cs) | 1986-02-13 |
Family
ID=5415156
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS846744A CS240043B1 (cs) | 1984-09-07 | 1984-09-07 | Akceptor elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b£ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS240043B1 (cs) |
-
1984
- 1984-09-07 CS CS846744A patent/CS240043B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS674484A1 (en) | 1985-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1218704A (en) | Assay systems using more than one enzyme | |
| Williamson et al. | D-(–)-3-hydroxybutyrate | |
| Huang et al. | Detection of serum uric acid using the optical polymeric enzyme biochip system | |
| Durliat et al. | Spectrophotometric and electrochemical determinations of L (+)-lactate in blood by use of lactate dehydrogenase from yeast. | |
| CA1223638A (en) | Assay systems utilising more than one enzyme | |
| Fiol et al. | Sigmoid kinetics of purified beef heart mitochondrial carnitine palmitoyltransferase. Effect of pH and malonyl-CoA. | |
| Moser et al. | Rapid liver enzyme assay with miniaturized liquid handling system comprising thin film biosensor array | |
| Racek et al. | Biosensor for lactate determination in biological fluids. I. Construction and properties of the biosensor | |
| CS240043B1 (cs) | Akceptor elektronů při stanovení koncentrace laktátu pomocí cytochromu b£ | |
| US4086142A (en) | Decarboxylation of endogenous serum glutamate in transaminase assays | |
| Gilbert et al. | Development of an amperometric assay for phosphate ions in urine based on a chemically modified screen-printed carbon electrode | |
| Wevers et al. | A bioluminescent assay for enolase (EC 4.2. 1.11) activity in human serum and cerebrospinal fluid | |
| US4675281A (en) | Quantification of hydroperoxides using prostaglandin H synthase | |
| Zhou et al. | Enzyme-based NAND gate for rapid electrochemical screening of traumatic brain injury in serum | |
| US20050069970A1 (en) | Detection of potassium ions using ion-sensitive enzymes | |
| FR2540137A1 (fr) | Procede tres sensible d'analyse quantitative enzymatique | |
| Marzouk et al. | Amperometric flow injection determination of putrescine and putrescine oxidase | |
| Stephens et al. | Effect of starvation and diabetes on the sensitivity of carnitine palmitoyltransferase I to inhibition by 4-hydroxyphenylglyoxylate | |
| Ijlst et al. | A simple spectrophotometric assay for long-chain acyl-CoA dehydrogenase activity measurements in human skin fibroblasts | |
| Fonong | Immobilized enzyme assay of creatine kinase with amperometric detection | |
| Minoura et al. | Determination of lactate dehydrogenase in serum by using a pyruvate sensor | |
| Nagy et al. | Wet and dry chemistry kits for total creatine kinase activity using a microfabricated, planar, small-volume, amperometric cell | |
| Özkan et al. | Thermostable amperometric lactate biosensor with Clostridium thermocellum L-LDH for the measurement of blood lactate | |
| JP3036711B2 (ja) | 乳酸またはピルビン酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
| JP3586737B2 (ja) | 生体物質の測定方法 |