CS239838B1

CS239838B1 - Processing of humen imunoglobuline

Info

Publication number: CS239838B1
Application number: CS844767A
Authority: CS
Inventors: Imrich Banda; Jozef Bulik; Alfred Stachy; Jozef Andrasina; Anton Lucansky
Original assignee: Imrich Banda; Jozef Bulik; Alfred Stachy; Jozef Andrasina; Anton Lucansky
Priority date: 1984-06-22
Filing date: 1984-06-22
Publication date: 1986-01-16
Also published as: CS476784A1

Abstract

Sposob přípravy 1'udských .imunoglobulínov pre intravenóznu aplikáeiu, pri ktorom antikomplementárna aktivita a hypotenzívny účinok imunoglobulínov sa znižuje inkubáclou pri teplote -f-37 CC a kyslom pH za přítomnosti pepsínu v prostředí maltózy. Maltóza má antiagregačný a stabilizačný účinok na 1'udskě bielkoviny, čím zabraňuje nežiadúcim štrukturálnym změnám imunoglobulínov. Přítomnost maltózy tiež priaznivo vplýva na rýchlosť rozpúšťania botového výrobku. Podstata spósobu výroby 1'udských imunoglobulínov- pre intravenóznu aplikáeiu spočívá v -tom, že imunoglobulíny získané etanolovou frakcionáciou sa v prostředí 0,1 až 5 % maltózy pri pH 3,8 až 4,2 a teplote -j-37 stupňov C inkubuje za přítomnosti pepsínu po dobu 18 až 25 hodin. Nízkomolekulárne látky sa odstraňujú dialýzou oproti 0,1 až 5 % roztoku maltózy. Dialyzát po- nastavení příslušných p-arametrov sa sterilizuje filtráciou, rožplňuje a lyofilizuje.A method of preparing human immunoglobulins for intravenous administration anti-complementary activity and hypotensive the effect of immunoglobulins is reduced by incubation at -f-37 ° C and acidic pH presence of pepsin in the maltose environment. Maltose has anti-aggregation and stabilization effect on 1'human protein, thereby preventing undesirable structural changes in immunoglobulins. The presence of maltose also has a favorable effect affects the dissolution rate of the bot product. The nature of the human immunoglobulin production method for intravenous administration rests in that the ethanol-derived immunoglobulins fractionation in an environment of 0.1 to 5% maltose at pH 3.8 to 4.2 and temperature -j-37 incubated in the presence of pepsin for 18 to 25 hours. low molecular weight the substances are removed by dialysis versus 0.1 to 5% maltose solution. Post-dialysis dialysis appropriate p-parameters are sterilized by filtration, fill and lyophilize.

Description

Vynález sa .lýka, sposobu, přípravy Iudských .iinunoglolj ulili ov pre imtravenóznu aplikáciu, pří ktorom ša dosiahne zníženie antikomplěmentárnej aktivity a hypotenzívneho účinku imunoglobulínov.The present invention is directed to methods for preparing human immunoglobulins for use in an intravenous application, which achieve a reduction in the anti-complementary activity and the hypotensive effect of immunoglobulins.

V súčasnej době imunoglobulíiny používané k liíntravenéznej aplikácii sa u nás pripravujú tým spůsobom, že z imunoglobulínov izolovaných etanolovou frakcionáciou sa odstraňujú látky s antikomplementárnou aktivitou a hypoteinzívnym účinkom, buď dialýzou pomocou dialyzačných čriev (ŠtěpánekNowadays, immunoglobulins used for li-intravenous application are prepared in the Czech Republic in such a way that immunoglobulins isolated by ethanol fractionation remove substances with anticomplementary activity and hypoteinsive effect, either by dialysis using dialysis intestines (Štěpánek)

I.: AO 202 180 a AO 208 86Š), alebo pomocou ultrafiltračného zariadenia s definovanými velkosťami pórov.I .: AO 202 180 and AO 208 86Š), or using ultrafiltration equipment with defined pore sizes.

Nedostatkom takto připraveného výrobku je dlhá doba rozpustnosti a možnosť reagregácie molekúl imunoglobulínov v priebehu technologického postupu, resp. počas skladovania.The disadvantage of this product is long solubility time and possibility of reagregation of immunoglobulin molecules during the technological process, resp. during storage.

V zahraničí ,k přípravě imunoglobulínov pre intravenóznu aplikáciu sa používajú technologické postupy štiepenia imunoglobulínov pepsínom (Koch F.: Dtsch. med. Wschr. 88 : 282,, 1963, Schultz Η. E., Schwick. G.: Dtsch. med. Wschr. 87 :1643, 19o2j, popřípadě opíacovaním imuhoglohulínoy, inkubáciou pri kyslom pH za přítomnosti pepslnu (Barandun S., Kistler P., Jeunet F., Istiker H.: Vox Sang. 7, 1962, str. 157 ,až 174).Abroad, to prepare immunoglobulins for intravenous administration, technological procedures for the cleavage of immunoglobulins by pepsin are used (Koch F .: Dtsch. Med. Wschr. 88: 282, 1963, Schultz, E., Schwick. G .: Dtsch. Med. Wschr. 87: 1643, 1922, optionally by repeating the immunoglobulin, by incubating at acidic pH in the presence of pepsin (Barandun S., Kistler P., Jeunet F., Istiker H., Vox Sang. 7, 1962, pp. 157-174).

Nedostatkom takto vyrobených prípravkov sú změněné biologické vlastnosti, ako schopnost opsonizácie a iné biologické aktivity.A disadvantage of the compositions thus produced is altered biological properties, such as opsonization ability and other biological activities.

Podstata nového- sposobu přípravy ludských imunoglobulínov pre intravenóznu , aplikáciu spočívá v tom, že 5 až 8 % roztok ’ iihunoglobulínov o-bsahujúci 0,1 -až 5 o/o mal•tózy pri pH 3,8 až 4,2 a teplote 36 až 38 °C sa inkubuje za přítomnosti pepsínu po dobu 18 až 26 hodin. Po ukončení inkubácie pH rožtofcu sa upravuje na hodnotu 6,8 až 7,0 a potom sa roztok dialyzuje oproti 0,1 ažThe essence of the novel process for the preparation of human immunoglobulins for intravenous administration is that a 5-8% solution of immunoglobulins containing 0.1 to 5% maltose at a pH of 3.8 to 4.2 and a temperature of 36 to 36% to 38 ° C is incubated in the presence of pepsin for 18-26 hours. After incubation, the pH of the rhombus is adjusted to 6.8 to 7.0 and then dialyzed against 0.1 to 7.0.

Hodhoténie kvality výrobku Stanovené parametre vzhlad rozpustnost antikom. aktivita hypotenzívny účinok (pokles tlaku)Product quality assessment Specified parameters appearance solubility antique. activity hypotensive effect (pressure drop)

Výrobok připravený stavajúcou techn-ol.A product prepared by an existing technol.

mierna opalesce-ncia 30‘slight opalescence 30 ‘

0,71 j/mg bielk. —5,0 % 0,0-0,1 % roztoku maltózy, Dlalyzát po nastavení, příslušných parametrov sa,,filtru je ,cez_; bakteriologické filtre, rozplňujé, namrazuje ,a lyofilizuje.0.71 j / mg bleach. —5.0% 0.0-0.1% Maltose Solution, Dlalysate after setting, the appropriate parameters of the filter are, via _; bacteriological filters, fill, freeze, and lyophilize.

Navrhnutý sposob přípravy ludských imunoglobulínov pre intravenóznu aplikáciu odstraňuje nežiaduce vlastnosti imunoglobulínov, pričom pri technolo-gickom postupe sa dbá o. to, -aby v čo najmenšej miere .bola narušená štruktúra imunoglobulínov.The proposed process for the preparation of human immunoglobulins for intravenous administration removes undesirable properties of immunoglobulins, with care being taken in the technological process. that the structure of the immunoglobulins is impaired as little as possible.

Příklad 1Example 1

K 100 ml 5 až 8 % roztoku imunoglobulínov obsahujúcich 1,5 % maltózy, ktorých pH sa upraví na hodnotu 3,8 až 4,2, přidá sa 50 miligr-amov pepsínu -o účinnosti 1 : 110 000 a potom sa inkubuje pri teplote. -)-37 °C po dobu 25 hodíp. Po skončení inkubácie pH roztoku sa upraví na hodnotu 6,8 a diallyzuje oproti 0,1 až 5 % roztoku maltózy pri teplotě -)-4 °C po dobu 12 až 48 hodin. Po úpravě obsahu bielkovín na hodnotu 4,5 až 5,5 % sa roztok imunoglobulínov filtruje cez bakteriologické filtre, rozplňujé, namr-azuje a lyofilizuje.To 100 ml of a 5 to 8% solution of immunoglobulins containing 1.5% maltose, whose pH is adjusted to 3.8 to 4.2, add 50 milligrams of pepsin at an efficacy of 1: 110,000 and then incubate at a temperature of . -) - 37 ° C for 25 hours. After the incubation is complete, the pH of the solution is adjusted to 6.8 and dialyzed against a 0.1 to 5% maltose solution at - 1-4 ° C for 12 to 48 hours. After adjusting the protein content to 4.5-5.5%, the immunoglobulin solution is filtered through bacteriological filters, filled, frozen and lyophilized.

P r i k 1 a d 2Example 1 and d 2

K 100 ml 5 až 8 % roztoku imunoglobulínov obsahujúcich 1,0 % maltózy, ktorých pil sa upraví na hodnotu 3,8 až 4,2, přidá sa 50 mg pepsínu o účinnosti 1 : 10 000 a potom sa inkubuje pri teplote -j-37 °C po dobu 18 hcidín. Po -skončení inkubácie sa pH roztoku upraví na hodnotu 6,8 a di-alyzuje oproti 0,1 až 5 % roztoku maltózy pri teplote +4 °C po dobu 12 až 48 hodin. Po úpravě % bielkovín na hodnotu 4,5 až 5,5 sa rozltok imunoglobulínov filtruje cez bakteriologické filtre, rozplňujé, namrazuje a lyofilizuje.To 100 ml of a 5 to 8% solution of immunoglobulins containing 1.0% maltose whose pH is adjusted to 3.8 to 4.2, add 50 mg of pepsin with an efficacy of 1: 10,000 and then incubate at -j- 37 ° C for 18 hcidin. After incubation, the pH of the solution is adjusted to 6.8 and dialyzed against a 0.1 to 5% maltose solution at +4 ° C for 12 to 48 hours. After adjusting the% protein to 4.5-5.5, the immunoglobulin solution is filtered through bacteriological filters, filled, frozen and lyophilized.

Výrobok připravený podlá PV čirý .·Product prepared according to PV clear ·

2‘2 '

0,08 j/mg bielk. .0.08 j / mg bleach. .

Claims

SUBJECT

A process for the production of human immunoglobulins for intravenous administration, characterized in that a 5 to 8% immunoglobulin solution obtained by ethanol fractionation is in the presence of 0.1 to 5% maltose in the presence of

OF THE INVENTION pepsin at acid pH incubates at 36-38 ° C for 18-25 hours.

2. The method according to claim 1, characterized in that the immunoglobulin solution by β-incubation is dialyzed against a 0.1 to 5% maltose solution for 12 to 48 hours.