CS233718B2

CS233718B2 - Způsob přípravy acyloxypolyhydronaftylderivátů 2H-pyran-2-onu

Info

Publication number: CS233718B2
Application number: CS79781A
Authority: CS
Inventors: Alvin K Willard; Robert L Smith; William F Hoffman
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1980-02-04
Filing date: 1981-12-03
Publication date: 1985-03-14
Also published as: PL133813B1; PL237929A1; PL131423B1; PL229513A1

Abstract

Způsob přípravy acyloxypolyhydronařtylderivátů 2H-pyran-2-onu obecnétiQ vzorce I a odpovídajících dihydroxykyaelin obecnáho vzorce II při němž se zahřívá sloučenina obecného vzorce III s hydroxidem alkalického kovu v protickám rozpouštědle, načež se okyselením a laktónisací získá sloučeni- ' na obecného vzorce IV, která se nechá reagovat a terc.butyldimethylchlorailanem v inertní atmosféře při teplotě místnosti v přítomnosti akceptoru kyseliny, vzniklá 4-terc.-butyldlmethylsilyloxyeloučenina se acyluje Odpovídajícím acylačním činidlem obsahujícím zbytek ve významu R, ve vzniklá alóúSenině se silýlová skupina odstraní při teplotě místnosti v tetrahydrofuranu v přítomnosti 3 ekvivalentů tetrabutylamoniumfluoridu a 4 ekvivalentů kyseliny octová na ekvivalent silylslouSeniny. Sloučeniny podle vynálezu jsou silnými inhibitory blosynthesy cholesterolu.

Description

Vynález se týká skupiny 6(R)-[2-(8*-aeylocy-2'-methyl-6'-methyl(nebo hydrogeno)-polyhydronaftyl-1')-ethyl]-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyren-2-onů a hydroxykyselinová formy těchto pyranonů a' farmaceutických vhodných solí těchto hydroxykyselin a nižěím alkylem a fenylem, dimethylaminoskupinou nebo acetylaminoakupinou substituovaných alkylesterů těchto hydroxykyselin.

Přesněji se vynález týká sloučenin obecného vzorce 1 uvedených v tabulce I, kde čárkované linie X, Y a Z představují možná dvojná vazby, přiěemž tyto dvojná vazby v případě, že jsou přítomná, jsou bud X a Z dohromady nebo samotná X, X nebo Z, Rje nerozvětvený nebo rozvětvený alkyl s 1 áž 10 atomy uhlíku (kromě (S)-2-butylu), cykloalkyl a 3 až 10 atomy uhlíku, alkenyl s 2 až 10 atomy uhlíku, skupinou CFj substituovaný alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenfenyl, a volných hydroxykyselin vzorce II vzniklých otevřením laktonováho kruhu vzorce I v tabulce I.

Vynález se taká týká 6(R)~ [2-(8 '-hydroxy-2 *, 6 '-dimethylpolyhydroaaftyl-l ')-ethyl]-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onů jako meziproduktů pro výže popsaná 8*-acyloxysloučeniny.

Je známo, že určitá deriváty kyseliny mevalonová inhibují biosynteeu cholesterolu viz F.M. Singer aj., Proč. Soc. Exper. Biol. Med., 102. 370 (1959) a F.H. Hulcher, Arch. Biochem. Biophys., 146. 422 (1971). 1 když aktivita těchto známých sloučenin není vždy dostatečná, mají tyto sloučeniny praktická uplatnění.

V USA patentech č. 4 049 495, 4 137 322 a 3 983 140 se uvádí příprava fermentačních produktů, která jsou zcela aktivní při inhibici bioeyntesy cholesterolu. Nejaktivnějším členem této skupiny přírodních látek nyní nazývaných Compactin (lila) byl uveden .Bromem aj. [j; Chem. Soc. Perkin I, 1165 (1976)] a tato sloučenina má strukturu derivátu mevalolaktonu,

V USA patentu č. 4 231 938 je uveden inhibitor, označený MK-803 struktury lila v tabulce I, který byl izolován z úplně odlišná fermentace.

Dále se popisují dihydro MK-803 označený vzorcem IIl_a v tabulce I, který má stejný účinek jeko. MK-803 izolovaný ze etejné fermentace jeko MK-803. Kromě toho jsou známé dihydro- a tetrahydroderiváty MK-803 struktur III_b θ (tabulka I), které se připraví katalytickou hydrogenaci MK-803.

Nyní bylo nalezeno, že «-methyl-butyrylekupina ve sloučenině vzorce III_a · v hydrogenovaných derivátech vzorce III_b__e ae může snadno odštěpit za vzniku skupiny 6(R)-[2-(8-hydroxy-2,6-dimethylpolydyhronaftyl)-1-ethyl]-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onů, která jsou taká hypocholesteremická činidla a která jaou použitelné jako meziprodukty pro přípravu nových esterů, které jaou jeětě účinnější při tomto použití.

Bylo nalezeno, že 8'-hydroxyeloučeniny strukturního vzorce IV je možno acylovat za vzniku nové skupiny 8-acyloxyalouěanin vzorce I a II níže uvedených definici. Tyto nová sloučeniny jaou inhibitory eynthesy cholesterolu in vivo.

Předmětem vynálezu je způsob přípravy acyloxypolyhydronaftylderivátů 2H-pyran-2-onu obecného vzorce I

kde S je popřípadě rozvětvený alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, s výjimkou 2-(S)-butylu, cykloalkyl a 3 áž 10 atomy uhlíku, alkenyl a 2 až 10 atomy uhlíku, skupinou CF^ substituovaný alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenfenyl, symboly X, X a Z představují možné dvojné vazby, přičemž jestliže jsou tyto dvojné vazby přítomné, pak jsou bud v kombinaci X a Ž nebo samotné vazby X, X nebo Z a odpovídajících díhydroxykyaelin obecného vzorce II

kde symboly R, X, X a Z mají výěe uvedený význam nebo farmaceuticky vhodných solí těchto kyselin, alkylesterů a 1 až 4 atomy uhlíku těchto kyselin nebo fenylděimethylemino- nebo ácetylaminoaubstituovaných alkylesterů a 1 až 4 atomy uhlíku těchto kyselin, který se provádí tak, že se zahřívá sloučenina obecného vzorce III

r kde symboly X, X * Z mají výěe uvedený význam, a hydroxidem alkalického kovu v protickém rozpouštědle, načež se okyselením a laktonisací získá sloučenina obecného vzorce IV

kde symboly X, X s Z mají výše uvedený význam, která se nechá reagovat s terc.butyldimethylchlorailanem v inertní atmosféře při teplotě místnosti v přítomnosti akceptoru kyseliny, vzniklá 4-terc.-butyldimethylailyloxyslouSenlna se acyluje odpovídajícím acylačním činidlem obsahujícím zbytek ve významu R, ve vzniklé sloučenině sa silylová skupina odstraní při teplotě místnosti' v tetrahydrofuranu v přítomnosti 3 ekvivalentů tetrabutylamoniumfluoridu a 4 ekvivalentů kyseliny octové na* ekvivalent silylsloučeniny.

Absolutní konfigurace těchto sloučenin je známá ze struktury stanovená difrakcí X-papreky. Tabulka I znázorňuje tyto struktury a jejich etereochemické vztahy. Vztahová čís- la různých sloučenin, včetně sloučenin různých sérií polyhydronaftylových struktur zůstávají stejná během celého popisu a jeko taková as používají. Každý z esterů vzorce I_a__etohoto vynálezu obsahuje sedm ež osm chirálních center. Relativní a absolutní konfigurace těchto asymetrických center je znázorněna v tabulce X. Přesněji pro ester vzorce X_a, Cahn, Xngold, Prelogovo označení absolutní konfigurace je 4(R), 6(R), 1 *(S), 2*(S), 6*(R), 8*(S) a 8a'(R) fs.S. Cahn, C. Ingold a V. Prelog, Angew. Chem. Int. Ed., 5, 385 (1966)].

Jak je uvedeno ve vzorcích X_a__e věechny tyto sloučeniny mají stejnou prostorovou orientaci skupin na každém z chirálních atomů uhlíku a tudíž přísluší ke stejné stereochemické sérii. R-S označení pro každé centrum nemusí být identické s označením nalezeným pro ester vzorce X_a vzhledem k detailům sekvenčního pravidle použitého pro stanovení tohoto označení.

U dvou esterů vzorce a I*, které mají dalěí chirálni atom uhlíku, který nebyl přítomen v esteru vzorce I_a, atom vodíku u 4a* je orientován pod rovinu (nebo ar), jak je znázorněno v tabulce I a má tudíž trans spojení kruhůr.

Tabulka I podl. ,

Stereochemie hydronaftylové série

Pří tomná

	dvojná vazba	Struktura
a	X a Z	po·»»·»·^ ch₃AX/
b	X	CH3
c	Y	f****T^zv*^Ml ch/-^
d	Z	CHj _s

H žádná

8'-acyloxysloučeniny podle vynálezu jsou použitelné jako antlhypercholesterolemlcká činidla vhodná pro léčeni atherosklerosy, hyperlipemie a podobných nemoci u lidí. Mohou se aplikovat orálně nebo parenterálně ve formě kapsli, tablet, injikovatelných preparátů apod. Obvykle je žádoucí použiti orálního způsobu. Dávky mohou být různá a závisí na věku, vážnosti onemocnění, tělesné hmotnosti a ostatních stavech pacienta, ale denní dávka pro dospělého je v rozmezí od 2 do 2 000 mg (s výhodou 10 až 100 mg) ve třech až čtyřech rozdělených dávkách. V případě potřeby se mohou aplikovat i vyěěí dávky.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou také používat, jako činidla proti plísním. Například se mohou použit pro kontrolu růstu kmenů Fenicillium sp·, Aspergillus nlger, Cladosporium sp., Cochliobolus miyabeanus a Helminthosporlum cynodnotis. Pro takové použiti se smlsl, s vhodným formulačním činidlem, jako jsou popraSe, emulgačnl činidla nebo rozpouštědla (například vodný ethanol) a stříkají se jím nebo popreSují rostliny, které mají být chráněny.

Příprava sloučenin podle vynálezu je znázorněna ve schématu A.

Schéma A

III —iv--* a-e a-e ch₃ch₃

a-e a-e.

a-e

VI ©

II

I

Označení - X, ϊ, 2 a H mají význam uvedený v popisu a sérii a-e, jak je definováno v tabulce 1.

Reakce - 1)

Lithium hydroxid, zahřívání, okyselení a laktonisace.

2) Terc.butyldimethylchlorsilan a imidazol v dimethylformamidu při teplotě místnos ti v inertní atmosféře.

3) Reakce s RCOC1 a 4-dimethylaminopyridinem v pyridinovém roztoku, s výhodou v inertní atmosféře.

4) Reakce e RCOCH a ΐί,Κ'-dicyklohexylkerbodiimidem a 4-pyrrolidinopyridinem v dichlormethanu, a výhodou v inertní atmosféře.

5) Tři ekvivalenty tetrabutylamoniumfluoridu a čtyři ekvivalenty kyseliny octové na ekvivalent esteru v tetrahydrofuranu, s výhodou v inertní atmosféře.

6) Vodný hydroxid alkalického kovu a následující opatrné okyselení zředěnou ky-. aelinou.

7) Viz reakce, reakční činidla a schéma pro synthesu sloučenin vzorce III_h

D|b| β

Příprava nových alkoholů podle vynálezu se provádí zahříváním esterů vzorce HI_a__es hydroxidem alkalického kovu, jako je hydroxid lithný, hydroxid draselný nebo hydroxid aodný v protickém rozpouštědle, jako jsou voda nebo alkoholy za varu po dobu 50 až 72 hodin nebo za tlaku při vyééích teplotách 120 až 180 °C po kratěl dobu 8 až 24 hodin.

Pyranonový kruh se snadno otevírá, ale odstranění podetranní acylové skupiny neprobíhá snadno. Zahříváni ee musí provádět dlouho a/nebo se musí použít tlak. Rovněž tak je výhodné použití inertní atmosféry. Je zcela neočekávané, že molekula s tak mnoha citlivými funkčními centry může vydržet podmínky nutné pro odstranění vysoce bráněného cr-methylbutyryleateru. Zcela neočekávané je, že sloučenina se získá ve vysokém výtěžku.

Produkty ae isolují okyselením a extrakcí organickými rozpouštědly a získá se tak forma trihydroxykyseliny sloučeniny vzorce ΐν*_*. Tyto trihydroxykyseliny se mohou relaktonisovat zahříváním roztoku kyseliny ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je toluen nebo benzen v aparatuře umožňující kontinuální oddělování vzniklé vody.

Alkoholy, které tvoří část předloženého vynálezu zahrnují struktury vzorců IV*__e, jakož i trihydroxykyseliny vznikající otevřením laktonových kruhů.

Alternativní syntetická cesta ke sloučeninám vzorců IV_{b c} * zahrnuje stupně hydrolysy sloučenin vzorců 1X1* až IV*, jak bylo popsáno výěe a následující hydrogenací sloučeniny vzorce XV*, ze podmínek popsaných dříve pro přípravu sloučenin vzorce III_{b 0} *, za vzniku sloučenin vzorců IV_b, IV* nebo IV*, a to v závislosti na reakčních podmínkách.

Příprava sloučenin vzorců IV*_*

Výchozí materiály, 8o-hydroxysloučeniny vzorců IV_a__e popsané Willardem se připravují z různých 8*-esterů popsaných Uonaghanem aj. (III*), Albers-Schonbergem aj. (III^) a Patchettem aj. (IH_{b c e}) zahříváním s roztokem hydroxidu sodného po delSí dobu. Pyranový kruh se snadno otevírá, ale odstranění postranní skupiny není snadné. Zahřívání se musí provádět delSí dobu a/nebo se musí použít tlak. Rovněž tak je vhodné použití inertní atmosféry.

2337,8

V případě sloučenin vzorců III_a__e zmýdelnění 8'-esterů probíhá snadněji, a to asi během 20 hodin je zmýdelnění úplné.

8'-hydroxyprodukty se isolují okyselením a extrakcí organickými rozpouštědly, které poskytnou sloučeniny ve formě hydroxykyseliny, ve které pyranonový kruh je stále otevřen.

Tyto hydroxykyseliny se relaktonisují zahříváním roztoku kyseliny ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je benzen nebo toluen v aparatuře, která dovoluje kontinuální oddělování vzniklé vody.

Ve formě lektonu jsou tyto alkoholy sloučeninami vzorce IV_a__e uvedeny v tabulce I a , připravují se podle následujících příprav:

Příprava 6(R)-[2-8'(S)-hydroxy-2'(S), n'(R)-dimethyl-1 ' ,2' ,6 ' ,7 ' ,8', 8a (R)-hexahydronaftyl-l '(S))-ethyl -4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu, IV_g

Směs 8,0 g (19,78 mmol) MK-803 (IU,) a 8,31 g O97*,8 mmol) LiOH . HgO v 600 ml vody se míchá a zahřívá k varu 56 hodin v atmosféře dusíku. Reakční směs se ochladí na 0 °C a za míchání se smísí s 20 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se pak extrahuje třemi 250 ml dávkami etheru a spojené extrakty se postupně promyjí třemi 200 ml dávkami vody a pak 200 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Po vysuěení síranem hořečnatým se roztok filtruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu za vzniku olejovitého zbytku. Odparek se znovu rozpustí v 200 ml toluenu a zahřívá se k varu dvě hodiny za kontinuálního oddělování, které umožní relaktonisaci. Odpařením toluenu a rozmělněním odparku v hexanu se získá 5,15 g (81 %) sloučeniny uvedené v nadpisu vzorce IV., (R' = CH^) ve formě bílé pevné látky, která nevyžaduje dalěí čištění.

Analytický vzorek se připraví rekrystalisací části tohoto materiálu z butylchloridu za vzniku drůz t.t. 128 až 131 °C, HwLR (CDClj) δ 0,87 (d, 3, J = 7 Hz, CH^), 1,16 (d, 3,

J = 7 Hz, , 2,64 (m, 2, pyran C^H' s), 4,27 (brm, 1, naftalen CgH), 4,37 (m, 1, pyran G^H), 4,71 (m, 1, pyran C^H), 5,56 (m, 1, naftalen C^H), 5,79 (dd, 1 , J = 6,10 Hz, naftalen, C'₃H), 6,03 (d, 1, J = 10 Hz, naftalen C₄H). IČ (CHCl-j) 3 400 (OH), 1 725 (0=0), 1 240, 1 120, 1 080 cm“'.

Analysa pro ^5^28^4 . 0,1 C^H^Cl:

vypočteno: C 70,67 % . H 8,84 % nalezeno: C 70,77 % . H 8,75 %.

Alternativní příprava 6(R)-[2-(8 '(S)-hydroxy-2 '(S)-6 '(R)-dimethyl-l , 2', 6', 7', 8', 8*a(R)-hexahydronaftyl-1 '(S)-ethyl]-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on, IV_a

Suspense 188 mg (0,463 mmol) MK-803 (III_a) v 5 ml (5 mmol) vodného 1 N roztoku hydroxidu lithného se třepe 12 hodin při 135 °C v 30 ml tlakové nádobě z nerez oceli. Ochlazená reakční směe ae okyselí 1 M kyselinou fosforečnou a extrahuje ae ethylacetátem. Ethylacetátový roztok se vyauSí síranem hořečnatým a po filtraci se odpaří rozpouštědlo. Odparek se rozpustí v 20 ml toluenu a zahřívá se 4 hodiny k varu v Dean-Starkově aparatuře a proběhne relaktoniaace. Odpařením toluenu se získá sloučenina uvedená v nadpisu.

V novém postupu podle vynálezu se 4-hydroxylová skupina pyranonového kruhu, alkoholů vzorce IV_a__e nejprve chrání terc.butyldimethylsilylskupinou reakcí s terc.butyldimethylchlorsilanem v inertní atmosféře při teplotě místnosti v přítomnosti akceptorů kyseliny, jako je imidazol a získají se chráněné alkoholy, vzorce V_a__ei 8-hydroxyl na polyhydronaftylovém kruhu se pak acyluje jedním ze dvou způsobů. Prvý zahrnuje reakci s chloridem kyseliny požadované acylové skupiny v pyridinu v přítomnosti 4-dimethylaminopyridinu jako katalyzátoru. Druhý zahrnuje reakci 8'-hydroxypolyhydronaftolu s volnou kyselinou požadované acylové skupiny a karbodiimidem, jako je Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid, s 4-pyrrolidinopyridinem jako katalyzátorem v dichlormethanu. Tento postup poskytuje chráněné estery vzorce ^{V VI}a__e·

Odstranění silylové chránící skupiny z 4-hydroxylu pyranonového kruhu ae pak provádí použitím tří ekvivalentů tetrabutylamoniumfluoridu a čtyř ekvivalentů kyseliny octová na ekvivalent esterů vzorce VI_a__# a získají ae požadované sloučeniny vzorce I_a__e· Poměr reakčních činidel v této reakci není rozhodující pro výtěžek postupu a čistotu produktů.

Acylové skupiny, které se připojují na 8'-hydroxylovou skupinu jsou ty, kde R ve sloučeninách vzorců I. „ jsou:

“•“β

1) nerozvětvený nebo rozvětvený alkylový řetězec a 1 až 10 atomy uhlíku s výjimkou (S)-2-butylu,

2) cykloalkyl s 3 až 10 atomy uhlíku,

3) alkenyl s 2 až 10 atomy uhlíku,

4) CFj skupinou substituovaný alkyl a 1 až 10 atomy uhlíku,

5) hylogenfenyl, kde atom halogenu je atom chloru, fluoru, bromu nebo jodu.

Výhodnými substituenty R jeou:

alkyl s nerozvětveným řetězcem s 2 až 5 atomy uhlíku, alkyl a rozvětveným řetězcem s 3 až to atomy uhlíku a výjimkou (S)-2-butylu, cykloalkyl s 3 až tO atomy uhlíku, alkenyl a 3 až 10 atomy uhlíku, ve kterém dvojná vazba není v konjugaci a karbonylem, a zejména výhodné jsou alkyl s rozvětveným řetězcem s výjimkou (S)-2-butylu.

Výhodné jednotlivé skupiny R jsou 1,1-diethylpropyl nebo 1-ethyl-1-methylpropyl. Dále výhodnými sloučeninami jsou ty, kde žádný ze symbolů X, X nebo Z nepředstavuje dvojnou vazbu.

Sloučeniny vzorce I_a__e se mohou hydrolysovat basemi, jako je NaOH za vzniku solí, jako je sodná sůl sloučenin vzorce H_a__e· Použitím basí s ostatními farmaceuticky vhodnými kationty se získají soli těchto kationtů. Opatrným okyselením solí se získají hydroxykyseliny vzorce ΙΙ_#__β, které se převedou při kyselém pH na sloučeniny vzorce I_a__e· Reakcí sloučenin vzorce I_a__e za kyselé nebo basické katalyay s methanolem, ethanolem, propanolem nebo butanolem nebo s fenyl-, dimethylamino-, nebo acetylaminoalkanoly ae získají odpovídající estery sloučenin vzorce H_a__e, které také spadají do rozsahu tohoto vynálezu.

Farmaceuticky vhodné soli podle vynálezu zahrnuji ty, které vznikají z kationtů sodí- ku, draslíku, hliníku, vápníku, lithia, hořčíku, zinku a tetramethylamoniováho kationtů, jakož i soli odvozené od aminů, jako je amoniak, ethylendiamin, N-methyl-glukamin, lysin, arginin, ornithin, cholin, Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin, chlorprokain, diethanolamin, prokain, N-benzylfenethylamin, 1-p-chlorbenzyl-2-pyrrolidin-1'-yl-methylbenzimidazol, diethylamin, piperazin a tria-(hydroxymethyl)aminomethan.

Příprava výchozích materiálů vzorce III se provádí fermentací kmenu Aspergillus terreua ATttC č. 20542, označeného MF-4845 ve sbírce kultur Merck & Co. Inc., Rahway, New Jersey.

Příprava sloučenin vzorců III_a *

A. Fermentace

Zkumavka lyofilisované kultury MF-4845 se v 250 ml Erlenmeyerově baňce (očkovací baňka) složení:	i asepticky otevře obsahující asi 10	a obsah sa suspenduje ml média následujícího
Médium:
kukuřičné výluhy	5 g
tomatové pasta	40 g
ovesná mouka	10 g
glukosa	10 g
roztok stopových prvků	10 g
destilovaná voda	1 000 ml
pH 6,8 upraveno HaOH
Roztok stopových prvků
FeSO₄.7 H₂0	1 000 mg
MnSO^.4 H₂0	1 000 mg
CuC1₂.2 H₂0	25 mg
CaCl₂.2 H₂0	1 00 mg
^h3bo₃	56 mg
(ΝΗ₄)₆Μο_γ0₂₄.4 H₂0	19 mg
ZnS0₄.7 HgO	200 mg
destilovaná voda deionisované	1 000 ml
Naočkované baňka se inkubuje 24 hodin při 28 °C na rotační	třepačce s 220 otáčkami

za minutu (posun 5,4 cm). Dvoulitrová Erlenmeyerova baňka bez přepážek obsahující 500 ml média se naočkuje 10 ml fermentačního media ae vzrostlou očkovací směsi. Obě baňky se třepou 24 hodin při 28 °C.

Fermentační tank z nerezová oceli objemu 910 litrů ae naplní 485 litry media obsahujícího cerelosu peptonisovaná mléko autolysované kvasnice polyglykol P 2000 ♦,5 SS hmot./obj. 2,5 % hmot./obj. 0,25 % hmot./obj. 0,25 % hmot./obj., jehož pH ae upraví na 7,0. Médium ae stariliauje 15 minut při 121 °C. Přidá se jeden litr výěe připraveného druhého stupně a aměs ae inkubuje > 2 hodin při 85 otáčkách za mintítu a pak 84 hodin při 28 °C a 130 otáčkách za minutu, za průtoku vzduchu 0,14 m^/min po dobu 12 hodin a pak 0,28 m^/min po dobu 84 hodin.

B. Isolace

1. Extrakce

Dvě násady 454,6 litrů celkového média se apojí, okyselí za míchání na pH 4,1 opatrným přidáním 800 ml koncentrovaně kyseliny chlorovodíkové a extrahují aa přidáním 341 litrů ethylacetátu a aměs aa míchá dalěí dvě hodiny.

Pak se přidá asi 11,3 kg křemičité pomocné filtrační hmoty a celková suapenae sa čerpá přes 61 cm filtrační lis. DalSích 341 litrů ethylacetátu ae použije pro promytí lisovaného ko láče a jeho extrakce se provádí Čtyřnásobným opakovaným čerpáním v obrácených směrech. Pak se veškeré promývací rozpouštědlo z koláče odstraní a spojí se s prvým filtrátem. Dvoufázový filtrát se nechá usadit a vodná’fáze se odstraní. Ethylacetátová fáze se promyje 45,5 litry deionisovaná védy, fáze se nechají oddělit a ethylacetátová extrakty se zahustí ve vakuu na zbytek asi 45,5 litrů.

2. Laktonisace

Ethylacetátová extrakty z další ci. 1 3o4 litrů f ermentační ho média se přidají k výše připravenému extraktu a objem se destilací ve vakuu zmenší asi na 136 litrů. Přidá se 227 litrů toluenu a násada se zahustí ve vakuu na 145 litrů. Tento stupeň se opakuje a pak ae přidá dostatečné množství čerstvého toluenu, aby se získal objem 341 litrů. Bez vakua se pak směs zahřívá k varu pod zpětným chladičem dvě hodiny a teplota se udržuje nad 106 °C.

Roztok se pak zahustí ve vakuu na malý objem, který se dále nahustí na olejovitý odparek ve velkém rotačním odpařováku ve vakuu.

3. Chromatografie na sillkagelu

Extrakt získaný výše uvedeným způsobem se zbaví ostatních rozpouštědel přidáním 9,1 litru methylenchloridu a zahuštěním na olejovitý zbytek.

Odparek se rozpustí v 22,7 litrech směsi ethylacetát-methylenehlorid (30/70 obj./obj.) a přidáním 2,8 kg sillkagelu se připraví suspense, které se nanese na vršek kolony 30,5 x x 127 cm naplněné silikagelem ve stejné směsi rozpouštědel.

Eluce se provádí směsí ethylacetát-methylenehlorid (40 : 60 obj./obj.) rychlostí 800 ml/min. Jímá se předek 45 litrů a pak se odebírají frakce po 18 litrech.

Frakce 6 až 10 včetně se zahustí ve vakuu a olejovitý odparek se rozpustí v horkém ethylacetétu, zpracuje s aktivním uhlím, za horka zfiltruje a ochladí. Krystaly sloučeniny vzorce ΙΙΙ_# ae odfiltrují a matečné louhy se zahustí na olej, který se znovu chromatografuje. Čistá sloučenina vzorce lll_a má t.t. 170 až 171 °C.

4. Rechromatografie na sillkagelu

Matečné louhy z obdobných extraktů ekvivalentní zpracování dalších 2 700 litrů fermentačního média ae spojí s výše získaným methylenchloridovým roztokem. Jedna polovina tohoto roztoku ae odebere pro další chromatografii na sillkagelu. Malý alikvotní podíl ukazuje, že celkový obsah pevných látek je 325 g. Roztok se zpracuje s 40 g aktivního uhlí, přefiltruje ee a filtrační koláč se propláchne methylenchloridem. Spojená filtráty a promývací roztoky sa zahustí ve vakuu na olejovitý zbytek. Ten se znovu rozpuetí v 800 ml eměsi ethylacetétu a methylenchloridu (30/70 obj./obj.) a smísí se s 225 g sillkagelu. Suspenze se nanese na vršek kolony 14 x 36 cm obsahující siliksgel ve stejné směsi rozpouštědel. Kolona se eluuje směsí ethylacetétu a methylenchloridu (40/60 obj./obj.) Předek tří litrů se odebere a vyleje a pak ee jímají frakce po 800 ml.

5. Chromatografie na obrácených fázích ml z frakce 22 výše provedené chromatografie se zahustí na olej hmotnosti 500 mg s olej ee znovu rozpuetí v 5 ml acetonitrilu. Acetonitrilový roztok se nanese na kolonu 1,5 x 180 cm z nerezové oceli naplněnou preparativní fází pro kapalinovou chromatografii na obrácených fázích (Bondapak C18/Poraail B, oktadekasilanem modifikovaný silikagel/silikagel). Kolona se eluuje směsí sestávající z (obj./obj.) 55 % acetonitrilu a 45 % 0,05 M fosforečnanu amonného pH 3. Eluční objemy mezi 1 360 ml a 1 700 ml se spojí podle detekce indexu lomu. Organické rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbylý vodný roztok se extrahuje ethylacetátem. Odstraněním ethylacetátu ve vakuu se získá 120 mg sloučeniny, která krystaluje ze zahuštěného acetonitrilového roztoku a získají se krystaly sloučeniny vzorce III_a, t.t. ,29 až ,31 °C.

Příprava sloučenin vzorců lilu . .

u, c, e

Výchozí materiály vzorců 111^, III₀ ^{a Se} P^IP^ravI podle následujícího schématu a uvedených prepaaativních metod.

Pro přípravu sloučeniny vzorce ΙΙΙθ je výhodné redukovat sloučeninu vzorce III^ pokud žádoucí trans spojení perhydronaftalenového kruhu, které je přítomné ve výchozích materiálech, se zachovává v konečném produktu. Tím není nutné oddělovat iaomery.

(1)

ch₃

III,

III, .o ch₃'

III c

2337,8

z U (i)

CHj-CHj-CH-C, <

*

H

III

^IIJd

Reakce a reakční činidla

1. Hydrogenace při teplotě 20 až 75 °C za atmosférického tlaku až asi 0,4 MPa ae provádí na tris-(trifenylfoafin)chlorrhodiu v aromatickém rozpouštědle, jako je benzen, toluep nebo xylen, a výhodou v toluenu. S výhodou se hydrogenace provádí při 40 °C a si 0,2 až 0,7 MPa v toluenu.

2. Hydrogenace při teplotě 20 až 25 °C za atmosférického tlaku se provádí na 5 % paladiu na uhličitanu vápenatém v nižSim alkanolu, jako je alkanol s 1 až 3 atomy uhlíku, zejména ethanol.

3. Hydrogenace při teplotě 20 až 25 °C a za atmosférického'tlaku se provádí na kysličníku platičitém v ethylacetátu.

4. Hydrogenace při teplotě 2b až 25 °C a za atmosférického tlaku se provádí na 1 0 % paladiu na uhlí v ethylacetátu.

Příprava 6a[2-(8'P-2-(S)-aethylbutyryloxy-2'β ,6 a .dimethyl-1', 2', 3’, 4', 6', 8', 8'a-oktahydronaftyl-1)ethyl] -4p-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu III&

Směs 50 mg (0,1236 mmol) sloučeniny vzorce III_B a ekvivalentního molárního množství (114,35 mg, 0,1236 mmol) tris-(trifenylfosfin)chlorrhodia v 10 ml bezvodého toluenu se hydrogenuje při teplotě místnosti 6 dnů, přičemž se celkem spotřebuje 14,6 ml vodíku.

Směs se odpaří ve vakuu k suchu, červený odparek se chromatografuje na tenké vrstvě sillkagelu impregnovaného dusičnanem stříbrným a desky se dvakrát vyvíjejí 10 % ethylacetátu v etheru. Výtěžek sloučeniny vzorce III_b je 22,3 mg.

Hmotová spektrum (m/e) 406 (M⁺)

304 (M-,02)

286 (m-102-18)

MMR (CDClp 300 MHz) δ

4,37 (m, ,H) 4,60 (m, ,H)

4

5,34 (d, t, J = 2,5 Hz, 1H) 5,41 (m, 1H).

Příprav· 6α [2-(8'β-2-(S)-methylbutyryloxy-2 % 6 á-diaethyl-1',23 *, 5’,6', 7',8 *, 8'a-oktahydronaftyl-1)ethyl]-4p-hydroxy-3,4,5,6-tatrahydro-2H-pyran-2-onu, III_C

Roztok 80,91 mg (0,2 mmol) sloučeniny vzorce IIÍj v 10 ml absolutního ethanolu se hydrogenuje v přítomnosti stejné hmotnosti 5 % Pd na CaCO^ za tlaku 0,1 MPa tak dlouho, ni se spotřebuje 1 molární ekvivalent vodíku. Katalyzátor se pak odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu (81 mg). Po čištění preparativní chromatografii na tenké vrstvš ee odstraní malé množství vedlejšího produktu, tetrahydrosloučeniny a získá se 72 mg produktu vzorce ΙΙΙθ, který vzniká 1,4-redukcí.

Hmotové spektrum (m/e)

NMR (CfiCl₃, 300 MHz)8

406	(M⁺)
304	(M-102)
286	(304-H₂O).
4,38	(m,	1H)
4,64	(m,	1H)
5,28	(d,	t_ř J
5,48	(m,	1H).

Příprava 6α- [2-(8'β-2-(S)-methylbutyryloxy-2 *u ,ό'β-dimethyl-l *,2',3',4',4' aa,5',6',7',

8',8'a-dekahydroaaftyl-1-)ethyl] -4P-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu, III*

Roztok 80,91 mg (0,2 mmol) sloučeniny vzorce III_a v 10 ml ethylacetátu se hydrogenuje v přítomnosti stejné hmotnosti kysličníku platičitého za tlaku 0,1 MPa, Během jedné hodiny se spotřebují 2 molární ekvivalenty vodíku. Katalyzátor se odfiltruje, filtrát ee zahustí k suchu a získá se olejovitý odparek. Cis- a trana-isomery se oddělí preparativní chromatografii na silikagelových deskách (10 % ethylacetátu v etheru a pásy se detegují postřikem vodou. Trans-isomer vzorce III* ae vyskytuje jako polárnější skvrna va srovnání s cis-isomerem. Isoluj· se 60 mg produktu.

Hmotové spektrum (m/e) 408 (M⁺)

323 (M-85)

306 (M-102).

NMR (CDC1₃, 300 MHz)6 4,36 (široký singlet, 1H)

4,59 (m, 1H)

5,19 (d, t, J = 2,5 Hz,' 1H).

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech, které jej však žádným zp&eobem neomezují:

Příklad 1

6(R)~ [2-(8 '(S)-2,2-dimethylpropanoyloxy-2 '(S)-6'(R)-dimethyl-l ',2 ',6 ',7',8',8’a(R)-hexahydronaftyl-1 '(S) )ethyl]-4(R)-hydroxy-»3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-oa

Stupeň A: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)hydroxy-2 '(S)—6 '(R)-dimethyl-l ' ,2 ' ,6 ',7 ' ,8' ,8 'a(R)-hexahydronaftyl-1 ' (S))ethylJ-4(R)-(dimethyl-terc,butylsilyloxy)-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on ^Va

Směs alkoholu vzorce IV* (18,3 g, 57,1 mmol), 21,5 g (142,8 mmol) terč.butyldimethylchlorsilanu a 19,4 g (265,6 mmol) imidazolu v 200 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se míchá 18 hodin při 20 °C v atmosféře dusíku. Reakční směs se pak zředí 1 500 ml etheru a postupně aa promyje vodou, 2% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou a nasyceným roztokem hydro15 genuhličitanu sodného. Etherický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje se a zahustí na obj·· 1 litru. Fo přidání 600 ml hexanu es objem zmenší na 600 ml destilací z parní lázní. Produkt krystaluje při teploté místnosti a po isolaci a sušení na vzduchu se získá 13,7 g bílé, vstovité pevné látky. Matečné louhy se zahustí na 250 ml a druhý podíl krystalického produktu se isoluje po stání tohoto roztoku přes noc při teplotě 0 °C. Spojené výtěžky 17,13 g (69 56) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bílé vstovité pevné látky t.t. 142 sž 144 °C. NMR (CDClj) 6 0,10 (s, 6, (CH.j)₂Si), 0,90 (s, 9, (CH^CSi)

1,19 (d, 3, <J ³ 7 Hz, CH-^), 2,58 (d, 2, J = 4 Hz, pyranové protony), 4,3 (m, 2, pyran, a neftalenový CgH), 4,70 (m, 1, pyranový CgH), 5,57 (m, 1, naftalenový C^H), 5,58 (dd, 1, J = 6,10 Hz, naftalenový C^H), 6,03 (d, 1, J = 10 Hz, neftalenový C^H).

Analysa pro ^C25^H42°4^Si: vypočteno: C 69,08 K>, H 9,74 %, nalezeno: C 69,46 56, H 9,83 %.

Stupeň B: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)-2,2”-dimethylpropanoyloxy-2'(S),6'(R)-dimethyl-1',2*,6', 7 *,8 *,8*a(R)-hexahydronaftyl-1*(S))ethyl]-4 (R)-(dimethyl-terč.butylsilyloxy)-3,4,5,6-tetra hydro-2H-pyran-2-onu, VI&

Roztok 6,0 g (13,8 mmol) alkoholu vzorce ze stupně A a 200 mg 4-dimethylaminopyridinu v 50 ml pyridinu se ochladí v atmosféře dusíku na 0 C. K tomuto míchanému roztoku se přidá během 15 minut 6,8 ml (6,65 g, 55,2 mmol) pivaloylchloridu. Reakční směs se míchá jednu hodinu při 0 °C » pak 4 dny při 20 °C. Reakční směs se zředí 750 ml etheru a promývá se 2% kyselinou chlorovodíkovou sž je promývací roztok kyselý, načež se promyje nasýoeným roztokem hydrogenuhličitánu sodného. Po vysušení síranem hořečnatým se roztok filtruje a odpařením se získá 7,81 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě světle oranžového oleje.

NMR (CDClj) 6 0,09 (s, 6 (CH^Si), 0,88 (s, 9, (CH₃)₃CSi), 1,28 (s, 9, (CH-j^CCC^-),

2,57 (d, 2, J = 4 Hz, pyranové C₃ protony), 4,32 (m, 1, pyranový C^H), 4,63 (m, 1, pyranový CgH), 5,34 (m, 1, naftalenový ΟθΗ), 5,54 (m, 1, naftalenový C^H), 5,78 (dd, 1, J =

6,10 Hz, naftalenový C₃H), 6,03 (d, 1, J = 10 Hz, naftalenový C^H).

Použitím postupu popsaného v příkladu 1 stupni B, ale záměnou tam použitého pivaloylchloridu za ekvimolámí množství chloridu kyseliny struktury R-COC1 popsaného v tabulce II ae připraví estery vzorce VI* popsané v tabulce II.

Tabulka II

R - C - O

CH,

MNR (CDC1₃,8)

7,10 (t, 2, J = 8 Hz, p-FPh-) 8,03 (dd, 2, J = 5,8 Hz, p-FPh)

2,02 (s, 3, CH₃CO₂-)

1,19 (d, J = 7 Hz,e-CH₃ ester), 1,21 (d, J = 7 Hz, ^a-CH₃ ester) celkem 3H

Ιό (CH₃)₂CHCH2C0₂(CH₃)₂CHCO₂CHýCHjPjCC^tj3_co₂0,83 (a, 6, J = 6 Hz, (CH₃)₂CH-)

1,13 (d, 6, J => 6 Hz (CH₃)₂CH) 0,95 (t, 3, J = 7 Hz, CH₃-(CH₂)₃·

1,00-2,08 (m, 15, adamantyl)

0^Η3(^θΗ2)6002^C6^H11^CO20¾ = CH-CO2

CP₃(CH2)₂C0₂4-ClC₆H₄CO₂2,4-F₂ ^c6^H3^C°₂CP₃

Ch/h-C^COjj.

CH ch₃

CHj

CH,

A>°2ch₃(ch₂)₈co₂“CC

H CH₃

Stupán C: Příprav* 6(R)-[2-(8'(S)-2,2-dimethylpropanoyloxy-2'(S),6'(R)-dimethyl-1 ',2', ',8 ',8 *a(R)-hexahydronaftyl-1 '(S) )-ethyl] -4(R)-hydroxyv3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyren-2-onu,

K roztoku 10,0 g (31 »7 mmol) Bu^N+F^-. 3 HgO a 2,4 ml (2,5 g, 42,3 mmol) kyseliny octové v 50 ml tetrahydrofuranu a· přidá 7,81 g (13,8 mmol) ailyletheru vzorce VI_a ze stupně B v 50 ml tetrahydrofuranu. Tato směs se míchá 18 hodin v atmosféře dusíku při 20 °C. Reakění směs ae zředí 700 ml etheru a postupně se promyje 2 % vodné kyseliny chlorovodíková, vodou a nasyceným roztokem hydrogenuhllěltanu sodného. Organický nasycený roztok ae vyeuěí (MgSO^) e přefiltruje. Odpařením rozpouštědla ee získá 6,45 g téměř bílá pevná látky. Tento materiál ae krystaluje z 100 ml butylchloridu a isolovaná krystaly se auií 4 hodiny při 35 °C/1,3 Pa. Výtěžek 4,0 g (72 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě téměř bílých jehlic: t.t. 167,5 až 170,5 °C, MÍR (CDCl-j) δ 0,88 (d, 3, J - 7 Hz, CHý, 1,08 (d, 3, J = 7 Hz, CH₃), 1,19 (a, 9, (CH₃)₃C), 2,67 (d, 2, J * 4 Hz.pyranová C₃ protony), 4,39 (m, 1, pyranový C^H),

4,65 (m, .1, pyranový C_gH), 5,36 (m, 1, naftalenový C₀H), 5,55 (m, 1, naftalenový C^H),

5,80 (dd, 1, J » 6 Hz, naftalenový C₃H), 6,04 (d, 1, J » 10 Hz, naftalenový C^H), vysokotlaká kapalinová chromatografie (4,6 mm x 25 cm Partie11 10 PAC, 10 % isopropylalkohol/he17 xan, 4 ml/min) retenční čas 4,4 min.

Analysa pro :

vypočteno: C 71,25 %, H 8,97 %, nalezeno: C 71,40 %, H 8,93 %·

Použitím postupu podle příkladu 1, stupně C, ale záměnou 2,2-dimethylpropanoyloxysilyletheru sloučeniny vzorce VI& za ekvivalentní množství ostatních esterů vzorce VI_a, popsané v tabulce II se připraví estery vzorce I_a popsané v tabulce III.

Tabulka III _ftC0₂~_ vzorec t.t. (°C)

^G24^H36°5

139 - 148 ch₃

^G26^H31^PO5

119,5 - 120,5 (CH₃)₂CHCH₂CO₂(CH₃)₂CHCO₂CH₃(CH₂)₃CO₂CH₃CO₂CH₃(CH₂)₆CO₂C₆H_nCO₂CH₂=CH-CO₂CP₃(CH₂)₂C0₂4-ClC₆H₄CO₂2,4-F₂C_óH₃CO₂cp₃

CH^H-CHgCOg^C24^H36°5 ^C23^K34°5 ^C24^H36°5 ^C21^H30°5·⁰’^{1 C}4^H9 ^C3O^H42°5- °’^{05 G}6^H12

126 - 128

144 - 147

153 - 156

155 - 158 vzorec

t.t. (°C) rco₂CH,

CH r~ ch₃ ch,

X/^C°2CH₃(CH₂)₈CO₂CHfX ^2_ ³ H CH₃

Příklad 2 ’6(R)-[2-(8'(S)-fenylacetoxy-2*(S), 6'(R)-dimethyl-l ',2',6',7',8',8'a(R)-hexahydronaftyl-1 ' (S)ethyl]-4-(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on

Stupeň A: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)-fenylaeetoxy-2 '(S)-6'(R)-dimethyl-1 ',2',6',7',8',8'a(R)-hexahydronaftyl-1'(S))ethyl] -4(R) -dimethyl-terc.-butylsilyloxy)-3,4,5,6-tetrehydro-2H-pyran-2-onu, VI_a

Roztok 434 mg (0,1 mmol) alkoholu vzorce V_a z příkladu 1, stupeň A, 204 mg (1,5 mmol) fenyloctové kyseliny a 309 mg (1,5 mmol) Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu v 10 ml dlchlormethanu se nechá reagovat s 22 mg (0,15 mmol) 4-pyrrolidinopyridinu a reakění směs se míchá při 20 °C.v atmosféře dusíku. Po 3 dnech se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a odparek se suspenduje v 25 ml etheru a přefiltruje se. Odpařením filtrátu se získá viskozní olej, který se chromatografuje na 3 x 15 cm koloně silikagelu (230 až 400 ok). Elucí (za tlaku vzduchu) směsí etheru a hexanu (1:1 obj./obj.) ae získá 460 mg (83 %) slouěeniny uvedená v nadpisu ve formě viskosního oleje. NMR (COCl^) S 0,10 (s, 6, (CH^IgSi), 0,90 (s, 9, (CH₃)₃CSi), 3,58 (s, 2, PhCH₂-), 5,34 (m, 1, naftalenový CgH), 7,30 (s, 5, Ph).

Použitím postupu podle příkladu 2, stupně A, ale záměnou použité fenyloctové kyseliny za ekvimolární množství organické kyseliny vzorce RCOOH popsané v tabulce IV se získají estery vzorce VI _a popsané v tabulce IV.

I a b u 1 k a IV

NMR (CDC1₃, S) [>-co₂0,78-1,02 (m, 4, cyklopropan)

NMR (CDCl-p S ) ^3

CH,CH-<

CI^CH-CHgC^-	1,04	(a, 3, J = 7 Hz, ch₃chcf.
	1,88	(e, 3, CH₃C=C)
Γ	2,17	(a, 3, j = 2 Hz, CH₃C=C)
ch₃	5,68	(Široký, β, 1, C=CH-)
ch₂	1,80	(s, 3, CH₃C=C)
Jk/CO₂-	4,86,	, 4,92 (s, 2, 0^=0
CH₃
CH₃(CH₂) co₂-	0,87	(m, 3» CH₃ (CH₂)₈CO₂~)

1,25 (a, 14, CH₃(CH₂5₇CH2CO₂-S

C0₅-

(CH^gCHCHgCOg(CH₃)₂CHCO₂CH₃(CH2)₃C0₂-

2337’β

II

R - C - O

NMR (CPC1₃, 6 )

C-COj— —c-co₂CH₃(CH₂)₆CO₂c₆h,,co₂CHjXJH-COg^CF3^(CH2)2^C024-cic₆h₄co₂2,4-F₂ ^c6^h3C°₂- .

Stupeň 3: Příprava 6(R)-[2-(8*(S)-fenylacetoxy-2'(S),6*(R)-rdimethyl-1 ',2’,6',7',8*,8'a(R)-hexahydronaftyl-1'(S))ethyl]-4(R)-hydroxy-3, 4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu, I_a

Použitím postupu popsaného v příkladu 1, stupni C, záměnou propanoyloxyslouSenlny za ekvimolární množství fenylacetoxysloučenlny z příkladu 2, stupně A, se získá sloučenina uvedené v nadpisu, t.t. 109 ež 112 °C.

Použitím ostatních esterů vzorce VI_a popsaných v příkladu 2, stupni A (tabulka IV) a provedením postupu podle příkladu 2, stupeň 3, ee připraví estery vzorce I_& popsané v tabulce V.

Tabulka V

RCO, · vzorec. t.t. (°C)

J^co₂- ”⁶-”⁹ j^F3

CHjCHCHgCOg^C24^K33^F3°5

110 - 113

2337,8

HCO~ vzorec

t.t. <°C)

CH ^C24^H34°5

113 - 118

CH,

CH

CH,

X—

CojHo ,0_c

34 5

116 - 119

CH₃(CH₂)₈C0₂°29^H46°5 (vosk)

^C24^H36°5

126 - 129 ch₃co₂en< γ Ό—

CH„ <CH₃)₂CHCH₂CO₂» (CH₃)₂CHCO₂CH₃(CH₂)₃CO₂—— CO2—

-COoV-c-co₂233718

BCOg vzorec t.t. (°C) ~1 —c-co₂CH^CHglgCOgC₆H_nCO₂ch₂=ch-co₂CF₃(CH₂)₂CO₂4-C1C_ďH₄CO₂2,4-K₂ ^c6^h3^c°₂Příklad3

6(R)-[2-(8'(S)-2-mathylbutyryloxy-2 *(S)-6'(R)-dimethyl-1 *,2 *,6',7*,8*,8'a(R)-hexahydronaftyl-1'(S)ethyl]-4(R)-hydroxy-3>4,5,6-tatrahydro-2H-pyran-2-on

Stupeň A: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)-2-ethyl-2-methylbutyryloxy-2*(S)-6'(R)-dimethyl-1',2',6*,7',8',8'a(R)-haxahydronaftyl-1'(S))athyl]-4(R)-(dimethyl-terc.butyleilyloxy)-3,4,5,6-tatrahydro-2H-pyran-2-onu, VI*

3,0 g 2-ethyl-2-mathylbutyrylchloridu (20 mmol) se přidá k magneticky míchanému roztoku 2,17 g (5 mmol) alkoholu vzorce V* a 74 mg 4-pyrrolidinopyridinu v 20 ml pyridinu. Tato reakční směs se míchá 9 hodin při 100 °C v atmosféře dusíku. Reakční aměa ae zředí 500 ml etherem, promývá 1 N kyselinou chlorovodíkovou až je promývací roztok kyselý a pak roztokem chloridu sodného (3x50 ml). Po vysugení síranem hořečnatým aa roztok filtruje a odpařením se získá 4,2 g hnědého oleje. Tento olej aa chromatografuje na koloně 6 χ ,5 cm silikagelu (230 až 400 ok). Elucí (za tlaku vzduchu) směsí etheru a hexanu (1:1, obj./obj.) ae získá 2,6 g (95 %) sloučeniny uvedené v nadpisu va formě viakoaního Slutého oleje.

NMR (CDC1₃) δ 0,08 (a, 6, (CH₃)₂Si), 0,9 (a, 9, (CH^CSi), 2,57 (d, 2, J » 4 Hz, pyranové C₃ protony), 4>30 (m, 1, pyranový C^H), 4,63 (m, 1, pyranový CgH), §,42 (m, 1, naftalenový CgH), 5,53 (m, 1, naftalenový C^H), 5,78 (dd, k, J = 6 Hz, naftalenový C₃H), 6,03 (d, 1, J 10 Hz, naftalenový C^H).

Použitím postupu popsaného v příkladu 3, stupni A, ale záměnou 2-ethyl-2-methyl-butyrylchloridu za ekvimolární množství chloridu kyseliny vzorce RCOC1 popsaná v tabulce VI se získají estery vzorce VI* popsaná v tabulce VI.

Tabulka VI

R-CO

co₂NMR (CPC1₃, δ )

0,87 (m, 9, CHjCHgCH^CI^CHpgCCOg)

3

O

II

R-CO_NMR (CflCl₃, )

c-co₂ —c-co₂0,78 (t, 9, J = 7 Hz, (CH₃CH₂)₃CCO₂) 1,48 (q, 6, J = 7 Hz, (ΟΗ^Η^ΟΟΟ^

1,28 (β, 6, (CH₃)₂CCO₂)

2,20 (β, 3, CH₃-C=CH₂)

3,86 Cm, 2, CHg = C)

1,12 (s, 6, (CH₃)₂CCO₂)

0,83 (t, 3, (CHjCHgCCOg)

Stupeň B: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)-2-ethyl-2-methylbutyryloxy-2 '(S)-6'(R)-dimethyl-1 ', , 6',7 ^#,8 *,8*a(R)-hexahydronaftyl-1 *(S))ethyl]-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu

Použitím postupu popsaného v příkladu 1, stupni C, nebo příkladu 2, stupni B, ale použi tím silyletheru sloučeniny z příkladu 3, stupně A, jako výchozího materiálu se připraví sloučenina uvedená v nadpisu, t.t. 111 až 113 °C ίθ26^40°5^’

Obdobně se připraví estery struktury I* popsané v tabulce VII, použitím ostatních esterů vzorce VI* popsaných v tabulce VI, jakožto výchozích materiálů.

Tabulka VII

RCOg^- vzorec t.t. (°C)

3-00,=^co₂>—C—COj— —fA' ^C28^H44°5 ^C27^H42°5 ^C26^H38°5 ^c25^H38°5

83

129 - 132

- 78

135 - 138

Použitím postupů podle příkladu 1, stupně A a následujícího příkladu 1 stupňů B a C nebo příkladů 2 nebo 3, stupně A a B a záměnou diolu vzorce IV* v příkladu 1, stupeň A, sa připraví qdpovídajlcí dioly vzorce IV_{b e} nebo *, vznikají postupně silylethery vzorců V * nové estery vzorců I v souhlase se schématem A, kde H - CO v 8'-alkamoylové skupině je:

CH₃CO₂4-ClC₆H₄C0₂2,4-F₂ ^cďH₃CO₂-

(CH₃)₂CHCú₂CH.j(CH₂)₃CO₂$Lco₂CH₃(CH₂)gCO₂°6^H11^C02ch₂=ch-co₂CF₃(CH₂)₂CO₂-

C-COjI ^3 —-co₂CH₃(CH₂)₈CO₂CH₃CH-CH₂CO₂-

CHj co₂'ch₃

Příklad 4

Připrav· 6(B)-{2-r8(S)-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2 '(S) ,6 '(Š)-<Jitnet,hyl-1 ',2',3',4*,4'a (S) , 5*,6*, 7*,8',8*a(S)-dekahydronaftyl-1 *(S)-J ethyl}-4(H)-hydroxy-3,4,5, ó-tetrahydro-2H-pyran-2-onu, I_# itupeň A: Příprava o(R)-[2-(8^/(S)-hydroxy-2 *(S) ,6 '(S)-dimethyl-l ' ,2 ' ,34', 4 *a(S), 5', 6 ',8',8'a(S)-dekahydronaftyl-1 *(S))ethyl]-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu,

Roztok 2,0 g (6,2 mmol) alkoholu vzorce IV_a v 100 ml ethylacetátu se hydrogenuje přítomnosti kysličníku platičitého (1 g) za tlaku 0,3 MPa až do spotřeby dvou molárních ekvivalentů vodíku. Katalyzátor se pak odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu a získá se bílá pevná látka (1,9 g), která se chromatografuje na koloně 6 x 20 cm silikagelu (230 áž 400 ok). Elucí (za tlaku vzduchu) směsí acetonu a methylenchloridu (3 : 7, obj./obj'.) se získá 1,0 g (50 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky.

Analytický vzorek se připraví krystalizací části materiálu z chloroformu a získá se oílá vatovitá pevná látka t.t. 166 až 168 °C.

, <

Stupeň B: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)-hyčroxy-2'(S),6'(S)-dimethyl-1 ^2^3^4^4^(8), 5',6', ř',8',8'a(S)-dekahydronaftyl-1 '(S)-ethyl]-4(R)-(dimethyl-terc.butylsilyloxy)^3,4,5,6•tetrahydro-2H-pyran-2-onu, V_#

Roztok alkoholu vzorce IV_e (1,0 g, 3,1 mmol), imidazolu (1,05 g, 15,4 mmol) a terč. jutyldimethylchlorsilanu (1,16 g, 7,7 mmol) v 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se míchá 18 íodin v atmosféře dusíku při 20 °C. Reakční roztok se zředí 200 ml etheru a postupně se ir omyje vodou, 2% vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného. Etherický oztok se vysuěí síranem hořečnatým a odpařením se získá bílá pevná látka (1,8 g), která :e chromatografuje na koloně 6 x 20 cm silikagelu (230 až 400 ok). Elucí za tlaku vzduchu eěsí acetonmethylenchlorid (1 : 19, obj./obj.) se získá 1,0 g (74 %) sloučeniny uvedené nadpisu ve formě bílé pevné látky, t.t. 136 až 138 °C.

itupeň C: Příprava 6(R)-(2 [e'(S)-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2'(S),6'(S)-dimethyl-1', ',3 ',4',4'e(S), 5',6',7 ',8',8'a(S)-dekehydronaftyli-1 '(S)Íethyl}-4(R)-dimethyl-terc.butylsi· yl-oxy) -3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyren-2-onu, VI_e

Záměnou ekvimolárního množství alkoholu vzorce V_# za alkohol vzorce vzorce V* ve tupni A, příkladu 3 a provedením postupu pro stupeň A se získá odpovídající množství loučeniny uvedené v nadpisu vzorce VI_# ve formě žlutého oleje. NMR (CDCl^) 0,08 (s, 6, CH₃)₂Si), 0,90 (S, 9, (CH^jyJSi), 1,13 (S, 6, (CH^COg), 2,63 (m, 2, pyranové C₃ protoy), 4,33 (m, 1, pyranový C^H), 4,60 (m, 1, pyranový CgH), 5,23 (m, 1, naftalenový ΟθΗ).

tupeň D: Příprava 6(R)-{2- [8'(S)-(2”-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2 '(S), 6'(S)-dimethyl-l ',2' ',4 ',4 'a(S), 5',6',7»,8',8'a(S)-dekahydronaftyl-1 '(S)]ethyl}-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahyd o-2H-pyran-2-onu, Ιθ

Záměnou ekvimolárního množství silyletheru vzorce VI_e z příkladu 4, stupeň C za silylther ze stupně C, příkladu 1 s provedením postupu stupně C příkladu 1, se získá odpovídají cí množství sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě pevné látky.

Analytický vzorek se připraví rekrystalisací materiálu z hexanu a získají se bílé jehličky t.t. 146 až 147 °C.

Příklad 5

5(R)-{2-[8'(S)-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2'(S),6'(R)-dimethyl-1 ',2',3',4',6*,7',8'a(S) -oktahydronaftyl-1 '(S)] ethylJ-4(R)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on, , 1θ

Stupeň A: Příprava 6(R)-[2-(8'(S)-hydroxy-2'(S),6'(R)-dimethyl-l',2',3',4',6',7',8'a(S),-oktahydronaftyl-1 '(S)] ethyl-4(R)-hydroxy-3,4,5_l6-tetrahydro-2H-pyran-2-onu, IV.

Použitím postupu popsaného pro přípravu výchozího materiálu vzorce IV* hydrolyaou

MK-803 zahříváním s vodným LiOH . HgO po dobu 56 hodin, ale záměnou MK-803 ze ekvimolérní množství sloučeniny vzorce III_b vzniká ve srovnatelném výtěžku sloučenina uvedená v nadpisu vzorce IV^, t.t. 136 až 139 °C.

Postupem podle příkladu 4, stupně B, C a D, ale záměnou sloučeniny vzorce IV* použité ve stupni B zá ekvimolérní množství sloučeniny vzorce IV_b ze stupně A tohoto příkladu, se získají srovnatelné výtěžky, jako v příkladu 4, následujících sloučenin.

Stupeň B: (R)- 2-(8'(S)-hydroxy-2'(S), 6'(R)-dimethyl-l',2 ',3 ',4 ',6 ',1 ',8'a(S)-oktahydronaftyl-1 '(S)-ethyl]-4(H)-(dimethyl^terc.-butylsilyloxy)-3,4,5₎6-tetrahydro^áH-pyran-2-on, V_b, t.t. 140 až 142 °C

Stupeň C: 6(R)-{2-[(8*(S)-(2-ethyl-2^M-methylbutyryioxy)-2'(S),6'(R)-dimethyl-1 *,2',3',4*, 6',7',8'a(S)-oktahydronaftyl-1'(S)J-ethyl}-4(8)-(dimethyl-terč.butylellyloxy)-3,4,5*6-tetrahydro-2H-pyran-2-on, VI^_bj, kde

Stupeň D: 6(R)-{2-[8'(S)-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2'(S),6'(R)-dimethyl-1 ',2*,3*,4*, 6',7',8*a(S)-oktahydronaftyl-1 '(S)]-ethyl}-4(H)-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on, I_b, t.t. 129 až 131 °C, kde

Příkladě

Typické směsi pró plnění tvrdých želatlnových kapslí velikosti 0 obsahují 3,125 mg, 6,25 mg, 12,5 mg, 25 mg nebo 50 mg jedné z nových sloučenin .podle vynálezu jako jsou produkty příkladu 3, stupeň B, příkladu 1, stupeň C, nebo příkladu 2, stupeň B a dostatečné množství jemně rozptýlené laktosy v množství, které doplňuje obsah v kapell ne asi 580 až 590 mg.

Claims

PŘEDMĚT V Ϊ R & L E Z U

1. Způsob přípravy acyloxypolyhydronaftylderívátů 2H-pyran-2-onu obecného vzorce I kde K je popřípadě rozvětvený alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, s výjimkou 2-(S)-butyIu, oykloalkyl s 3 až 10 atomy uhlíku, alkenyl s 2 až 10 atomy uhlíku, skupinou CFj substituovaný alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenfenyl, symboly X, Ϊ a Z představují možné dvojné vazby, přiěemž jestliže jsou tyto dvojné vazby přítomné, pak jsou bu3 v kombinaci X a Z nebo samotné vazby X, Ϊ nebo Z a odpovídajících dihydroxykyselin obecného vzorce II kde symboly R, X, Y a Z mají výše uvedený význam nebo farmaceuticky vhodných solí těchto kyselin, alkylesterů s 1 až 4 atomy uhlíku těchto kyselin nebo fenyldimethylamino- nebo acetylaminosubstituovaných alkylesterů s 1 až 4 atomy uhlíku těchto kyselin, vyznačený tím, že se sloučenina obecného vzorce III kde symboly X, X a Z mají výěe uvedený význam, zahřívá s hydroxidem alkalického kovu v protickém rozpouštědle, načež se okyselením a laktonisací získá sloučenina obecného vzorce IV (IV),

233713
2b kde symboly X, Ϊ a Z mají výše uvedený význam, která se nechá reagovat s tercbutyldimethylchlorstlaném v inertní atmosféře při teplotě místnosti v přítomnosti alcceptoru kyseliny, vzniklé 4-terc.butyldimethylsllyloxysloučenlna se acyluje odpovídajícím acylačním činidlem obsahujícím zbytek ve významu R, ve vzniklé sloučenině se sllylová skupina odstraní při teplotě místnosti v tetrahydrofuranu v přítomnosti 3 ekvivalentů tetrabutylamoniumfluoridu a 4 ekvivalentů kyseliny octové na ekvivalent silylsloučeniny, načež se získaný produkt případně převede na odpovídající dihydroxykyseliny, soli nebo alkylestery.

2. Způsob podle bodu I, vyznačený tím, že se nechají reagovat odpovídající výchozí * * sloučeniny, kde R je rozvětvený alkyl s 3 až 10 atomy uhlíku, s výjimkou 2-(S)-butylu a X,

X a Z.mají význam uvedený v bodě 1. ’
3. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se nechají reagovat odpovídající výchozí sloučeniny, kde aubatituent R - C = 0 je

C=O nebo ^__c=0 a X, Ϊ a Z mají význam uvedený v bodě 1.
4. Způsob podle bodů 1 až 3, vyznačující se tím, že, se nechají reagovat odpovídající výchozí sloučeniny, kde žádný ze symbolů X, X nebo Z nepředstavuje dvojnou vazbu a R má význam uvedený v bodě 1.,