CS231796B1 - The method of freezing the boar semen - Google Patents

The method of freezing the boar semen Download PDF

Info

Publication number
CS231796B1
CS231796B1 CS83527A CS52783A CS231796B1 CS 231796 B1 CS231796 B1 CS 231796B1 CS 83527 A CS83527 A CS 83527A CS 52783 A CS52783 A CS 52783A CS 231796 B1 CS231796 B1 CS 231796B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
diluent
insemination
prepared
tubes
freezing
Prior art date
Application number
CS83527A
Other languages
Czech (cs)
Slovak (sk)
Other versions
CS52783A1 (en
Inventor
Ambroz Horvarh
Juraj Bocz
Original Assignee
Ambroz Horvarh
Juraj Bocz
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ambroz Horvarh, Juraj Bocz filed Critical Ambroz Horvarh
Priority to CS83527A priority Critical patent/CS231796B1/en
Publication of CS52783A1 publication Critical patent/CS52783A1/en
Publication of CS231796B1 publication Critical patent/CS231796B1/en

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Podstatou spcisobu zmrazovania podta vynálezu je, že odobratý ejakulát sa po ekvilibračnej době odstraňuje pri otáčkách 2800 až 3000 min.-1 po dobu 5 min., po kterých sa semenná plazma oddělí, predriedi riedidlom a ochladí sa na 5 °C. Do riedidla sa pridajú 2 °/o glycerínu a týmto sa po vychladení predriedenej spermy doriedi. Po doriedení sa zmrazuje v' suchom 1'ade a v tekutom dusíku, pričom před insemináciou sa rozpustí v rozmrazovacej tekutině. Vynález je možné využit na pehovanie kančej spermy pre insemináciu ošípaných bez časového a priestorového obmedzenia tak, ako je to u hovadzieho dobytka.The essence of the freezing procedure according to the invention is that after the equilibration period, the collected ejaculate is removed at a speed of 2800 to 3000 min.-1 for 5 min., after which the seminal plasma is separated, diluted with a diluent and cooled to 5 °C. 2 °/o glycerin is added to the diluent and the prediluted sperm is further diluted with this after cooling. After dilution, it is frozen in dry ice and in liquid nitrogen, while before insemination it is dissolved in a thawing liquid. The invention can be used for breeding boar sperm for the insemination of pigs without time and space limitations, as is the case with cattle.

Description

Vynález rieši sposob konzervácie a uskladnenia kančej spermy pre neobmedzené časové a priestorové použitie.The invention solves the method of preservation and storage of boar semen for unlimited time and space use.

Doterajšie spracovanie a konzervácia kančej spermy sa uskutočňuje pri běžných fyziologických teplotách, čo neumožňuje jeho konzerváciu a uskladnenie pre neobmedzené časové použitie. Tieto metody v podstatě predstavujú len riedenie čerstvej kančej spermy s možnostou použitia do 5 dní po jeho odobratí od plemenníkov. Sú známe pokusy zmrazovania kančieho spermatu prispósobením metody zmrazovania býčieho spermatu. Pri tomto sposobe sa dosiahli dost dobré výsledky v motilite 25 až 30 %, avšak zabrezávanie bolo velmi nízké 20 až 25 %. Je známa i metoda zmrazovania kančieho spermatu v polyamidových trubičkách. Pri tejto metóde sa získalo zabrezávanie 38 %, motilita 30 až 35 %, a 55 až 60 percent normálnych akrozomov. Uvedené metódy konzervácie kančej spermy majú nevýhody v nízkej prašnosti a plodnosti prasnic, čoho dósledkom je nízká efektivnost pri zabezpečovaní reprodukcie v chove ošípaných, čo bráni využívaniu v širokej plemenárskej praxi.Previous processing and preservation of boar semen is carried out at normal physiological temperatures, which does not allow its preservation and storage for unlimited time use. Basically, these methods represent only dilution of fresh boar semen, with the possibility of use within 5 days after collection from the breeders. Attempts have been made to freeze boar semen by adapting the method of freezing bull semen. In this manner, quite good results were obtained at a motility of 25-30%, but the incision was very low 20-25%. A method for freezing boar semen in polyamide tubes is also known. In this method, an incision of 38%, a motility of 30 to 35%, and 55 to 60 percent of normal acrosomes were obtained. The methods of preservation of boar semen have the disadvantages of low dustiness and fertility of the sows, which results in low efficiency in ensuring reproduction in pig breeding, hindering use in wide breeding practice.

Uvedené nedostatky odstraňuje sposob zmrazovania kančej spermy podlá vynálezu, ktorého podstatou je, že přefiltrovaný a odštáty ejakulát sa odstředí pri otáčkách 2800 až 3000 min.-1 po dobu 5 min., po ktorých sa oddělí semenná plazma a čistá koncentrovaná sperma sa predriedi riedidlom, připraveným homogenizáciou vaječného žítka, TES — N — TRIS pozostávajúceho z hydroxymetylu, metyl-2-aminoetanu, kyseliny sírovej, THIS pozostávajúceho z aminoetanu a hydroxymetylu, glukózy, glycerínu a natriumlaurylsulfátu s redestilovanou vodou, riedidlo sa odstředí pri otáčkách 10 000 min.-1 a přidává sa v množstve 5 ml na 1 inseminačnú dávku, ochladí sa na 5 °C, pričom sa do riedidla přidá glycerín s podieloim 2 % hm. a týmto sa dorieďuje po kvapkách v množstve 5 ml na 1 inseminačnú dávku za stálého miešania, po ktorom sa zmrazuje v suchom lade a tekutom dusíku.These drawbacks are eliminated by the method of freezing boar semen according to the invention, which is based on the fact that the filtered and ejaculate leaves are centrifuged at 2800 to 3000 min. -1 for 5 min after which the seminal plasma is separated and pure concentrated semen is diluted with a diluent prepared by homogenizing the egg yolk, TES-N-TRIS consisting of hydroxymethyl, methyl-2-aminoethane, sulfuric acid, THIS consisting of aminoethane, and hydroxymethyl, glucose, glycerine and sodium lauryl sulfate with redistilled water, the diluent is centrifuged at 10,000 min. -1 and added in an amount of 5 ml per 1 insemination batch, cooled to 5 ° C, with glycerine containing 2% w / w to the diluent. and is then added dropwise at a rate of 5 ml per insemination batch with constant stirring, after which it is frozen in dry ice and liquid nitrogen.

Množstvo riedidla na predriedenie koncentrovanej spermy sa vypočítá podlá vztahu π (O X A X K) — PThe amount of diluent for pre-concentrating semen is calculated according to π (OXAXK) - P

R - g pričomR - g where

R — počet dávokR - number of doses

O — objem čerstvého ejakulátu použitého na odstredenieO - volume of fresh ejaculate used for centrifugation

Á — aktivita v % čerstvého ejakulátu K — koncentrácia v tis. spermií čerstvého ejakulátuÁ - activity in% of fresh ejaculate K - concentration in thous. sperm of fresh ejaculate

P — percento pathologických spermiíP - percentage of pathological sperm

Zmrazovanie sa vykonává na suchom lade, v ktorom sa predtým vyhlbili jamky na pilulky, pričom nakvapkávanie sa vykonává na velkost 0,2 ml. Po zmrazení sa pilulky presypú do tekutého dusíka, kde móžu byť skladované neobmedzene dlhú dobu.Freezing was carried out on dry ice, in which the pellet wells had previously been drilled, dropping to a size of 0.2 ml. After freezing, the pills are poured into liquid nitrogen, where they can be stored indefinitely.

Před použitím sa pilulky rozmrazia v rozmrazovacej tekutině, ktorá sa připraví rozpuštěním chelatonu IV, glukózy, hydrouhličitanu sodného a citrátu sodného v redestilovanej vodě pri 38 °C. Na rozmrazenie jednej inseminačnej dávky, t. j. 50 piluliek sa použije 70 ml rozmrazovacej tekutiny 50 °C teplej.Before use, the pills are thawed in a thawing liquid which is prepared by dissolving chelatone IV, glucose, sodium bicarbonate and sodium citrate in redistilled water at 38 ° C. To thaw a single insemination batch, i. j. 50 pellets were used with 70 ml of thawing liquid 50 ° C warm.

Výhodou navrhovaného spósobu podlá vynálezu je, že umožňuje spracovanie, konzerváciu a uskladnenie kančej spermy s možnostou rozmrazovania pri výkone inseminácie prasnic, čo umožňuje využívat insemináciu ošípaných bez časového a priestorového obmedzenia tak, ako je to u hovadzieho dobytka. Přitom dosiahnuté výsledky plodnosti zmrazenou spermou predstihujú výsledky plodnosti dosiahnuté čerstvou spermou. Zmrazovanie spermy umožňuje podstatné zdokonalenie reallzácle priparovania a tým i uplatnenie dosial' nemožných metod plemenltby a šlachtenia ošípaných.An advantage of the proposed method according to the invention is that it allows the processing, preservation and storage of boar semen with the possibility of thawing in the performance of the insemination of sows, thus allowing the use of pig insemination without time and space constraints, as is the case with bovine animals. The results of the fertility achieved by frozen semen outnumber the results of fertility achieved by fresh semen. Freezing of the semen makes it possible to substantially improve the real-time evaporation and hence the application of hitherto impossible methods of breeding and breeding pigs.

V nasledujúcej časti je vynález objasněný príkladom přípravy ejakulátu před zmrazovaním a insemináciou, ktorým sa samozřejmé jeho rozsah nevyčerpáva, ani inak neobmedzuje.In the following, the invention is illustrated by way of example of preparation of the ejaculate prior to freezing and insemination, which, of course, is not exhaustive or otherwise limited.

Příklad prevedeniaExecution example

Ejakulát odobratý ručnou metodou do 500 ml skleněného odběrného valca umiestneného v umelej vagíně vytemperovanej teplou vodou v plášti vagíny na 37 °C sa preleje cez dvojitý filter sterilnej gázy do odmerného valca o obsahu 500 ml.The ejaculate collected by manual method into a 500 ml glass sampling cylinder placed in an artificial vagina tempered with warm water in the vagina jacket at 37 ° C is passed through a sterile gauze double filter into a 500 ml graduated cylinder.

Z množstva získaného ejakulátu sa odoberie 10 ml pre účely laboratórneho vyšetrenia. Sperma v odmernom válci sa ponechá odstát 30 až 60 min., čo je ekvilibračná doba, pri laboratórnej teplote. Počas tejto doby sa prevedie laboratorně vyšetřeme ejakulátu. Zistí sa pH acidimetrom, pričom hodnoty majú byť v rozmedzí 6,8 až 7,2. Aktivita sa zistí mikroskopicky, najnižšia hodnota 70 %. Koncentrácia sa zistí fotokolorimetricky, alebo na Burgerovej komórke; najnižšia hodnota 250 tis. na ml. Morfologické změny sa zistia metodou podlá Farellyho, přípustné morfologické změny sú do 20 %, z toho nezrelých spermií s protoplazmatickou kvapkou do 10 °/o.10 ml of the obtained ejaculate is collected for laboratory examination. The semen in the measuring cylinder is allowed to stand for 30 to 60 min, which is the equilibration time, at room temperature. During this time it will be performed by laboratory examination of the ejaculate. The pH is measured with an acidimeter, and the values should be in the range of 6.8 to 7.2. Activity is detected microscopically, the lowest value being 70%. The concentration is determined by photo-colorimetry or on a Burger chamber; the lowest value of 250 ths. per ml. Morphological changes are detected by the Farelly method, permissible morphological changes are up to 20%, of which immature sperm with protoplasmic drop to 10 ° / o.

Ďalej sa připraví riedidlo, ktoré pozostáva zNext, a diluent is prepared comprising:

TES—N—TRIS (hydroxymetyl, metyl-2-aminoetan, kyselina sírová) v množstve 1,1 gTES — N — TRIS (hydroxymethyl, methyl-2-aminoethan, sulfuric acid) in an amount of 1.1 g

TRIS (hydroxymetyl, aminoetan) v množstve 2,2 g glukózy 3,2 g glycerolu 3 °/o, t. j. 3,3 g vaječného žítku 22 ml natrium-lauril-sulfátu 0,5 ml natriumlaurylsulfátu 0,5 mlTRIS (hydroxymethyl, aminoethane) in an amount of 2.2 g glucose 3.2 g glycerol 3%, m.p. j. 3.3 g egg yolk 22 ml sodium lauril sulphate 0.5 ml sodium lauryl sulphate 0.5 ml

Riedidlo sa připraví tak, že vaječný žítok po přidaní 10 ml redestilovanej vody sa liomogenizuje mixerom po dobu 5 min. Medzi tým sa ďalšie komponenty: TES—N—TRIS, TRIS a glukóza rozpustia v 50 ml redestilovanej vody 40 °C teplej. Po rozpuštění komponentov a dokladnej homogenizácii sa žítok vleje do rozpuštěných častí riedidla. Po premiešaní sa obsah doplní redestilovanou vodou 35 °C teplou na 100 ml. V dalšom sa přidá 0,5 ml natriumlaurylsulfátu a 3,3 ml glycerínu. Takto připravené riedidlo sa odstreďuje v skúmavkách s obsahom 8 mililitrov na odstredivke po dobu 8 min. pri otáčkách 10 000 min.-1. Po odstředění sa tekutý obsah riedidla preleje do odmerné< ho valca s obsahom 150 ml, sediment sa zo skúmaviek odstráni a v ďalšom sa nepoužívá.The diluent is prepared by liomogenizing the egg yolk after adding 10 ml of redistilled water for 5 min. Meanwhile, the other components: TES — N — TRIS, TRIS and glucose are dissolved in 50 ml of redistilled water at 40 ° C warm. After dissolving the components and documenting homogenization, the rye is poured into the dissolved parts of the diluent. After mixing, make up the contents to 100 ml with distilled water at 35 ° C. Next, 0.5 ml of sodium lauryl sulfate and 3.3 ml of glycerin are added. The diluent thus prepared is centrifuged in 8 ml tubes on a centrifuge for 8 min. at 10,000 min. -1 . After centrifugation, the liquid diluent content is poured into a 150 ml graduated cylinder, the sediment is removed from the tubes and is not used further.

“ Po uplynutí ekvilibračnej doby sa ejakulát v odmernom válci premieša a rozdělí sa do skúmaviek s obsahom 12 ml a odstreďuje sa na odstredivke bežne používanej pri zisťovaní tukovosti mlieka pri otáčkách 1375 min.-1 po dobu 20 min. Můžu sa použit i otáčky 2800 až 3000 min.1 po dobu 5 min. Po odstředění sa semenná plazma zo skúmaviek odsaje a v skúmavke ostane čistá koncentrovaná sperma. Teplote spermy sa prisposobí i teplota riedidla, ktoré sa do jednotlivých skúmaviek přidá po kvapkách za stálého miešania v množstve vypočítanom podlá vzorca (O X A X Kj — P R ~ 5After the equilibration period, the ejaculate is mixed in a graduated cylinder and divided into tubes containing 12 ml and centrifuged on a centrifuge commonly used to determine the fat content of milk at 1375 min. -1 for 20 min. A speed of 2800 to 3000 min can also be used. 1 for 5 min. After centrifugation, the seminal plasma is aspirated from the tubes and pure concentrated semen remains in the tube. The temperature of the semen is also adjusted by the temperature of the diluent, which is added dropwise to the individual tubes with stirring in an amount calculated according to the formula (OXAX Kj - P R ~ 5

Na jednu inseminačnú dávku sa použije 5 ml riedidla.5 ml of diluent is used per insemination dose.

Po ukončení predriedenia sa predriedená sperma vleje do flakonu určeného pre insemináciu ošípaných a takto připravená sa vloží do vodného kúpela tak, aby teplota kúpela a predriedenej spermy bola rovnaká. Schladzovanie prebieha postupné v chladničke, ktorá je nastavená na teplotu +5 °C. Schladzovanie na uvedenú teplotu trvá 90 až 120 min. Zároveň sa připraví z ostávajúcej časti riedidla množstvo na doriedenie po schladení. Použijú sa tie množstvá riedidla, ktoré boli použité na predriedenie. Do připraveného množstva riedidla sa přidá glycerín podielom 2 % hm, t. j. 3,3 ml a dobré premiešané sa vloží do chladničky k schladeniu na +5 °C.After completion of the pre-dilution, the pre-diluted semen is poured into a flask intended for the insemination of pigs and so prepared is placed in a water bath so that the temperature of the bath and the pre-semen is equal. Cooling is carried out gradually in the refrigerator, which is set to +5 ° C. Cooling to said temperature takes 90 to 120 minutes. At the same time, an amount to be diluted after cooling is prepared from the remaining part of the diluent. Use the amounts of diluent used for the dilution. Glycerin is added to the prepared amount of diluent at 2% w / w. j. 3.3 ml and well mixed are placed in the refrigerator to cool to + 5 ° C.

Po schladení predriedenej spermy a riedidla sa pristúpi k doriedovaniu, ktoré sa robí postupné po dvoch až troch kvapkách pomocou pipety za stálého miešania. Na jednu inseminačnú dobu sa použije 5 ml riedidla na doriedenie. Po doriedení sa ihneď zmrazuje.After the pre-diluted semen and diluent have been cooled, the dilution is carried out in succession, two to three drops in a pipette, stirring continuously. 5 ml dilution diluent is used per insemination period. Freeze immediately after dilution.

Zmrazovanie prebieha v suchom lade, v ktorom sa vyhíbili jamky na pilulky. Nakvapkávanie sa vykonává pipetou na velkost 0,2 ml. Zmrazovanie na suchom lade trvá 7 min. Po zmrazení sa pilulky presypú cez lievik do masťoviek, v ktorých je tekutý dusík. Takto zmrazená sperma sa uskladňuje v kontajneroch, kde může byť skladovaná v tekutom dusíku neobmedzenú dobu.Freezing takes place in dry ice, in which pill wells have been spilled. Drip pipette to 0.2 ml. Freezing on dry ice takes 7 min. After freezing, the pills are poured through a funnel into ointments containing liquid nitrogen. The frozen semen is stored in containers where it can be stored in liquid nitrogen indefinitely.

K rozmrazovaniu piluliek před insemináciou sa použije rozmrazovacia tekutina, ktorá sa připraví rozpuštěním chelatonu IV v množstve 1,2 g, glukózy v množstve 60 g, hydrouhličitanu sodného v množstve 0,40 g a citrátu sodného v množstve 1,5 g v 1000 mililitrov redestilovanej vody pri teplote 38 °C.A thawing liquid is used to thaw the pellets prior to insemination, which is prepared by dissolving 1.2 g of chelatone IV, 60 g of glucose, 0.40 g of sodium bicarbonate and 1.5 g of sodium citrate in 1000 ml of redistilled water at temperature 38 ° C.

Jedna inseminačná dávka představuje 50 piluliek, ktoré sa vyberú z kontajnera a nechajú sa odpařit po dobu 60 až 90 sek. Po odpaření sa pilulky postupné vysypú do rozmrazovacej tekutiny ohriatej na 50 °C a obsahu 70 ml. Rozmrazovacia tekutina je ohrievaná priamo vo flakone vo vodnej kúpeli. Takto připravená inseminačná dávka sa ihned' použije k inseminácii.One insemination dose represents 50 pills which are removed from the container and allowed to evaporate for 60 to 90 seconds. After evaporation, the pills are gradually poured into a thawing liquid heated to 50 ° C and containing 70 ml. The defrosting fluid is heated directly in the vial in the water bath. The insemination dose thus prepared is used immediately for insemination.

Claims (1)

Riedidlo sa připraví tak, že vaječný žítokpo přidaní 10 ml redestilovanej vody sa ho-mogenizuje mixerom po dobu 5 min. Medzitým sa ďalšie komponenty: TES—N—TRIS,TRIS a glukóza rozpustia v 50 ml redesti-lovanej vody 40 °C teplej. Po rozpuštěníkomponentov a dókladnej homogenizácii sažítok vleje do rozpuštěných častí riedidla.Po premiešaní sa obsah doplní redestilova-nou vodou 35 °C teplou na 100 ml. V dal-šom sa přidá 0,5 ml natriumlaurylsulfátu a3,3 ml glycerínu. Takto připravené riedidlosa odstreďuje v skúmavkách s obsahom 8mililitrov na odstredivke po dobu 8 min. priotáčkách 10 000 min.-1. Po odstředění satekutý obsah riedidla preleje do odmerné- < ho valca s obsahom 150 ml, sediment sa zo skúmaviek odstráni a v ďalšom sa nepo-užívá. “ Po uplynutí ekvilibračnej doby sa ejaku- lát v odmernom válci premieša a rozdělí sado skúmaviek s obsahom 12 ml a odstreďu-je sa na odstredivke bežne používanej prizisťovaní tukovosti mlieka pri otáčkách1375 min.-1 po dobu 20 min. Můžu sa po-užit i otáčky 2800 až 3000 min."1 po dobu5 min. Po odstředění sa semenná plazma zoskúmaviek odsaje a v skúmavke ostane čis-tá koncentrovaná sperma. Teplote spermysa prisposobí i teplota riedidla, ktoré sa dojednotlivých skúmaviek přidá po kvapkáchza stálého miešania v množstve vypočíta-nom podlá vzorca (O X A X Kj — PR ~ 5 Na jednu inseminačnú dávku sa použije5 ml riedidla. Po ukončení predriedenia sa predriedenásperma vleje do flakonu určeného pre in-semináciu ošípaných a takto připravená savloží do vodného kúpela tak, aby teplotakúpela a predriedenej spermy bola rovna-ká. Schladzovanie prebieha postupné v chladničke, ktorá je nastavená na teplotu+5 °C. Schladzovanie na uvedenú teplotutrvá 90 až 120 min. Zároveň sa připraví zostávajúcej časti riedidla množstvo na do-riedenie po schladení. Použijú sa tie množ-stvá riedidla, ktoré boli použité na predrie-denie. Do připraveného množstva riedidlasa přidá glycerín podielom 2 % hm., t. j.3,3 ml a dobré premiešané sa vloží dochladničky k schladeniu na +5 °C. Po schladení predriedenej spermy a rie-didla sa pristúpi k dorieďovaniu, ktoré sarobí postupné po dvoch až troch kvapkáchpomocou pipety za stálého miešania. Najednu inseminačnú dobu sa použije 5 mlriedidla na doriedenie. Po doriedení sa i-hneď zmrazuje. Zmrazovanie prebieha v suchom lade, vktorom sa vyhíbili jamky na pilulky. Na-kvapkávanie sa vykonává pipetou na vel-kost 0,2 ml. Zmrazovanie na suchom ladetrvá 7 min. Po zmrazení sa pilulky presypúcez lievik do masťoviek, v ktorých je teku-tý dusík. Takto zmrazená sperma sa usklad-ňuje v kontajneroch, kde může byť sklado-vaná v tekutom dusíku neobmedzenú dobu. K rozmrazovaniu piluliek před inseminá-ciou sa použije rozmrazovacia tekutina, kto-rá sa připraví rozpuštěním chelatonu IVv množstve 1,2 g, glukózy v množstve 60 g,hydrouhličitanu sodného v množstve 0,40 ga citrátu sodného v množstve 1,5 g v 1000mililitrov redestilovanej vody pri teplote38 °C. Jedna inseminačná dávka představuje 50piluliek, ktoré sa vyberú z kontajnera a ne-chajú sa odpařit po dobu 60 až 90 sek. Poodpaření sa pilulky postupné vysypú dorozmrazovacej tekutiny ohriatej na 50 °C aobsahu 70 ml. Rozmrazovacia tekutina jeohrievaná priamo vo flakone vo vodnejkúpeli. Takto připravená inseminačná dáv-ka sa ihned' použije k inseminácii. PREDMET Sposob zmrazovania kančej spermy v te-kutom dusíku vyznačujúci sa tým, že sa o-dobratý ejakulát pri teplote 37 °C přefiltru-je, nechá sa odstát na dobu 30 až 60 min,po ktorej sa rozdělí do skúmaviek a odstre-ďuje sa pri otáčkách 2800 až 3000 min"1 podobu 5 min, po ktorých sa semenná plazmaoddělí a čistá koncentrovaná sperma sapredriedi riedidlom, připraveným homoge-nizáciou vaječného žítka, TES—N—TRIS po-zostávajúceho z hydroxymetylu, metyl-2--aminoetanu, kyseliny sírovej, TRIS pozo- VYNALEZU stávajúceho z aminoetanu a hydroxymetylu,glukózy, glycerínu a natriumlaurylsulfátu sredestilovanou vodou, riedidlo sa odstředípri otáčkách 10 000 min"1 a přidává sa vmnožstve 5 ml na jednu inseminačnú dáv-ku, ochladí sa na 5 °C, pričom sa do riedi-dla přidá glycerín s podielom 2 % hm. atýmto sa dorieďuje po kvapkách v množ-stve 5 ml na jednu inseminačnú dávku zastálého miešania, po ktorom sa zmrazuje vsuchom lade a tekutom dusíku.The diluent is prepared by homogenizing the egg yolk by adding 10 ml of redistilled water to the mixer for 5 min. Meanwhile, additional components: TES-N-TRIS, TRIS and glucose are dissolved in 50 ml of redistilled water at 40 ° C. After dissolving the components and thoroughly homogenizing the sample, it is poured into the dissolved parts of the diluent. After mixing, the contents are made up to 100 ° C with 35 ° C redistilled water. 0.5 ml of sodium lauryl sulfate and 3.3 ml of glycerin are added in the next. Centrifuge thus prepared in 8 ml tubes on a centrifuge for 8 min. 10,000 min.-1. After centrifugation, the absorbent content of the diluent is poured into a 150 ml volumetric cylinder, the sediment removed from the tubes and not used further. After the equilibration period, the ejaculant in the measuring cylinder is mixed and divided into a set of 12 ml tubes and centrifuged on a commonly used milk adherence at 1375 rpm for 20 min. I can use a speed of 2800 to 3000 min. "1 for 5 min. After centrifugation, the seminal plasma of the tubes is aspirated and the tube remains of pure concentrated sperm. The temperature of the diluent, which is added to the droplets of the stable tubes, will also help the sperm temperature. mixing in an amount calculated according to the formula (OXAX K i - PR ~ 5. 5 ml of diluent is used per insemination dose. After dilution, the pre-diluted semen is poured into a flask intended for in-pig sowing and so prepared in a water bath so that the bath and Cooling takes place gradually in a refrigerator which is set at a temperature of + 5 ° C. Cooling to this temperature lasts for 90 to 120 minutes, while the remaining part of the diluent is prepared for dilution after cooling. % of the diluent used for the dilution the glycerin is controlled by 2% w / w, i.e. 3.3 ml, and the coolers are placed in the cooler to + 5 ° C. After the pre-diluted semen is cooled and the diluent is graded, it is graded sequentially with two to three drops using a pipette while stirring. Five diluents are used for one insemination period. Upon completion, it is frozen immediately. Freezing is carried out in dry ice to pellet wells. Dripping is performed with a 0.2 ml pipette. Freezing in dry conditions for 7 min. After freezing, the pill is poured into the ointment in which the nitrogen is liquid. The thus frozen semen is stored in containers where it can be stored in liquid nitrogen for an unlimited period of time. To thaw the pellets before insemination, a deicing fluid is used, which is prepared by dissolving chelatone IV in an amount of 1.2 g, glucose 60 g, sodium bicarbonate 0.40 g and sodium citrate 1.5 g in 1000 ml of redistilled. water at 38 ° C. One insemination dose is 50 pellets which are removed from the container and are not allowed to evaporate for 60 to 90 seconds. The pellets are then spun out and the dessicant fluid heated to 50 ° C and containing 70 ml is gradually emptied. Thawing fluid is heated directly in the flask in the water bath. The thus prepared insemination dose is immediately used for insemination. OBJECTIVE Freezing the spermatozoa in a nitrogen flow characterized by filtering the recovered ejaculate at 37 ° C, allowing it to stand for 30-60 min, after which it is separated into tubes and centrifuged at 2800-2000 rpm for 5 minutes, after which the seed plasma was separated and the pure concentrated semen was diluted with a diluent prepared by homogenizing egg yolk, TES-N-TRIS consisting of hydroxymethyl, methyl-2-aminoethane, acid sulfuric, TRIS EXTRACTED from aminoethane and hydroxymethyl, glucose, glycerin and sodium lauryl sulfate with distilled water, the diluent is centrifuged at 10,000 rpm and 5 ml per insemination dose is added, cooled to 5 ° C, glycerin is added to the diluent with a 2 wt. in this manner, it is added dropwise at a rate of 5 ml per insemination dose of continuous mixing, after which it is frozen in dry ice and liquid nitrogen.
CS83527A 1983-01-26 1983-01-26 The method of freezing the boar semen CS231796B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS83527A CS231796B1 (en) 1983-01-26 1983-01-26 The method of freezing the boar semen

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS83527A CS231796B1 (en) 1983-01-26 1983-01-26 The method of freezing the boar semen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS52783A1 CS52783A1 (en) 1984-05-14
CS231796B1 true CS231796B1 (en) 1984-12-14

Family

ID=5337508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS83527A CS231796B1 (en) 1983-01-26 1983-01-26 The method of freezing the boar semen

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS231796B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS52783A1 (en) 1984-05-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tselutin et al. Comparison of cryoprotectants and methods of cryopreservation of fowl spermatozoa
Johnson et al. Storage of boar semen
Schäfer et al. The use of transmigration and Spermac™ stain to evaluate epididymal cat spermatozoa
Hafez Preservation and cryopreservation of gametes and embryos
Rota et al. Cryosurvival of dog spermatozoa at different glycerol concentrations and freezing/thawing rates.
Abdelhakeam et al. Studies on the presence and absence of glycerol in unfrozen and frozen ram semen: Fertility trials and the effect of dilution methods on freezing ram semen in the absence of glycerol
Cohen et al. In vitro fertilizing capacity of fresh and cryopreserved human spermatozoa: a comparative study of freezing and thawing procedures
Mocé et al. Effect of freezing–thawing protocols on the performance of semen from three rabbit lines after artificial insemination
Ehling et al. Cryopreservation of semen from genetic resource chicken lines
Chen et al. Survival of bull spermatozoa seeded and frozen at different rates in egg yolk-tris and whole milk extenders
Thilak Pon Jawahar et al. Cryopreservation of fish gametes: An overview
Bamba et al. Freezing rabbit semen by the use of BF5 diluent
Tuli et al. The effect of zwitterion buffers on the freezability of boer goat semen
CN105519521A (en) Cryopreservation liquid for horse semen and preparation method of cryopreservation liquid
Stănescu et al. Freezing of dog’s sperm: a review
CS231796B1 (en) The method of freezing the boar semen
CN115191426B (en) Method for improving cryopreservation quality of porcine semen
Polge et al. Possibilities of long-term storage of spermatozoa at low temperatures.
Doležalová et al. Effect of different thawing methods on bull's semen characteristics.
Azam et al. Assessment of post-1haw semen quality of buffalo and sahiw al bulls using new semen assays
Matshaba Characterization and cryopreservation of South African unimproved indigenous goat semen
TORRES-BOGGINO et al. Relationship among seminal characteristics, fertility and suitability for semen preservation in draft stallions
Raseona Comparative evaluation of different extenders of bull semen stored under different conditions
Zavos et al. Preservation of turkey spermatozoa by the use of emulsions and supercooling methods
Ivanova et al. Effect of different cryoprotectants, equilibration time, and warming regimens on canine spermatozoa after vitrification using coconut water extender.