CS231238B1 - 9-(RS)-[3(2)-(3-Aminopropylamino-2(3)-hydroxypropyl]-8-hydroxyadeniny a způsob jejich přípravy - Google Patents

Description

Vynález se týká 9- (BS)-f3 (2 )- (3^-aminopropylamino-2 (3 )-hydroxypropyl] -8-hydroxyadeninů a způsobu jejich přípravy.

Předmětné látky jsou nové sloučeniny, které mají neočekávané vlastnosti: jako ligandy vázané na polymerní nosiče prostřednictvím jejich alifatické 3-aminoskupiny mají schopnost pevně a reversibilně vázat enzym S-adenosyl-L-homocystein-hydrolasu z živočišných a rostlinných zdrojů a jsou proto klíčovými sloučeninami pro účinné čištění tohoto enzymu afinitní chromatografii (a.o. 231 239).

K tomuto účelu se dosud používal 8-(3-aminopropylamino)aóenosirt (E. 0. Kajander,

A. M. Raina: Bioch. J. Í21, 503 /1981/); účinnost nosičů připravených z této látky (pevnost afinitní vazby enzymu) není dostatečná.

Tuto nevýhodu odstraňuje předmět vynálezu, kterým jsou nové létky - isomerní 9-(RS)- 3(2) -(3-aminopropylamino)-2(3)-hydroxypropyl -8-hydroxyadeniny vzorce I kde R¹ a R^ jsou střídavě OH a NHÍCHg)^ NHg skupina.

(I)

Dále' je předmětem vynálezu způsob jejioh přípravy, spočívající v tom, že se 9-(SS)-(2,3-dihydroxypropyl)-8-bromadenin Vzoroe II

(II)

CHjCHCHjOH

OH uvádí do reakce s 1,3-diaminopropanem s obsahem až 30 % objemových vody při teplotách 80 až 100 °C, a látky vzorce I se isolují chromatografií, s výhodou na oelulose.

Klíčovou sloučeninu pro přípravu obou isomerních látek vzorce I je derivát 8-bromadeninu vzorce II, který se snadno Získá bromací (a.o. 231 237 9-(RS)-(2,3-dihydrojtypropyl)adenlnu (DHPA) (a»o. 191 656j· Působením silné báze 1,3-diaminopropanu vznikají nejprve isomerhí 2,8- a 3,8-anhydroderiváty vzorců III nebo IV nh₂

N

I ch₂ ch₂oh (III)

(IV) které se dále Štěpí tímtéž aminem, takže se současně zavádějí 3-aminopropylskupiny do postranního řetězce a 8-hydroxylové funkce do polohy 8 adeninu. Vedle látek I při této reakci současně vzniká 9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyl)-8-(3-arainopropylamino)adenin vzorce V

NH₂

LnŤ^N>-^NHteH2l3^NH2 ch₂chch₂oh

OH (V) všechny tři látky je možno rozdělit např. rozdělovači chromatografií na celulose v soustavě 2-propanol-konc. vodný amoniak-voda (7:1:2, v/v/v) nebo v téže soustavě na silikagelu. Takto se získají ehromatograficky čisté volné báze sloučenin vzorce I, které reagují pozitivně s ninhydrinem a mají typická spektra derivátů 8-hydroxyadeninu.

Směs obou isomerů může být rovněž použita přímo k vazbě na afinitní nosiěe. V dalěím je vynález osvětlen na příkladech provedení přípravy látek vzorce I, aniž se tím jakkoliv omezuje.

Příklad,

Ke směsi 25 ml 1,3-diaminopropanu a 5 ml vody předehřátě na 100 °C se přidá 7,2 g 9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyl)-8-bromadeninu a směs se míchá při ,00 °C pod zpětným chladičem s uzávěrem z natronového vápna 5 h. Pak se odpaří při 40 °C/,3 Pa a odparek se kodestiluje 3x25 ml dimethylformamidu za stejných podmínek. Odparek směsi v 50 ml vody se vnese na sloupec 250 ml středně kyselého katexu (Amberlitu IRC 50 /H⁺-forma/), promyje se vodou (3 ml/min) do ztráty ultrafialové absorpce při 260 nm a sloupec se poté eluuje 5% roztokem triethylaminu v 50* vodném methanolu.

Frakce absorbující v ultrafialovém světle se odpaří a odparek chromatografuje na sloupci (100x4 cm) mikrokrystšlické celulosy v soustavě 2-propanol-konc. vodný amoniak-voda (7:1:2, v/v/v); rychlost slunce 20 ml/h, detekce v ultrafialovém světle (viz výěe). Jednotil vé frakce se analyzují chromatografií na papíře Vfhatman No 1 v téže soustavě. Frakce obsahující látku Rj, 0,41 (látka vzorce V) se nezpracovávají; frakce látek Rj, 0,36 (I) a Rj, 0,27, které představují oba isomery, se odděleně spojí, odpaří, vysuSí ve vakuu (13 Pa) a jejich odparky se rozpustí v methanolu (5 ml). Přidáním etheru (200 ml) se vyloučí sraženiny, které se odsají, promyjí etherem a vysuší ve vakuu. Získá se 1,4 g látky vzorce I, (kde R *0H a R^NHÍCHgi^NH^) o t.t. ,44 °C (monohydrát). Fro C, (299,4) vypočteno 44,13 * C,

7,07 * H, 32,76 * Nj nalezeno 43,83 * C, 6,91 * H, 32,88 * N. UV-Spektrum (pH 2):

^Amax ^{278 nm}> ⁽P^{H 7): A}max ^{276 (}P^H ’^2)u max ^{286 ηπ}·

Déle se získá 1,8 g látky vzorce I (kde R²=0H a R^NHÍCHjíjNHg) o t.t. 138 °C (monohydrát). Pro C, ,^21^7^3 (299,4) vypočteno 44,13 * C, 7,07 * H, 32,76 * N:, nalezeno 44,35 * C, 7,15 * H, 33,02 * N. UV-Spektrum je shodné ae spektrem předchozí látky vzorce I.

Přiklad 2

Reakce se provede stejně jako je uvedeno v příkladu 1 s polovičním množstvím věech složek.* Po odpaření směsi ve vakuu se zbytek v 20 ml směsi 2-propanol-konc. vodný amoniam-voda nanese na sloupec (50x4 cm) silikagelu podle Pitry a eluuje se toutéž směsí (2 ml/min, frakce ,0 min). Průběh chromatografie se sleduje stejně jako v příkladu 1. Frakce obsahující látky vzorce I se spojí, odpaří a odparky rozpustí v 25 ml vody. Zfiltruje se přes křemelinu od nerozpustného zbytku, znovu odpaří, vysuší kodestilaci ethanolem (3x25 ml) při 40 °C/2 kPa a sráží z methanolu (5 ml) etherem (100 ml). Dalěí zpracováni se provede stejně jako v přikladu 1. Získá se 1,56 g směsi isomeru látky vzorce I, shodných a preparáty podle příkladu 1.

Claims (2)

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

1. 9-(RS)-[3(2)-(3-aminopropylamino)-2(3)-hydroxypropyl]-8-hydroxyadeniny obecného vzorce I kde R¹ a R^ jsou střídavě OH a NHÍCHgJ^NHg skupina.

2. Způsob přípravy látek vzorce I podle bodu 1, vyznačený tím, že ae 9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyl)-8-bromadenin vzorce II ch₂chch₂oh

OH (II), uvádí do reakce s 1,3-diaminopropanem s obsahem až 30 % objemových vody při teplotách 80 °C až 100 °C, a látky vzorce I se isolují chromatografií, s výhodou na celulose.