CS231146B1 - Sposob výroby subcelulárnej parenterálnej látky proti neonatálnej kolienteritide a kolihnačke teliat a prasiat - Google Patents

Description

1 231 148

Vynález sa týká spóeobu účinnéj subcelulárnej parejs-terálnej látky proti neonatálnej kclienterxtíde a kolihnačketeliat a prasiat, podávanéj matkám $ týždnov před pórodominjekčne do svalu alebo podkožně·

Kolienteritida a kolihnačka teliat a prasiat je vážnýmproblémom velkochovov* Jej příčinou sú enteropatogénne baktérieEscherichia coli, nesúce na povrchu svojho těla aj pilusovýantigén K 99, ktorý umožňuje ich adherenciu na črevnú stenunovorodených teliat a najnovšie aj prasiat a tým epos obuj®enteritídu, ktorej následkem sú úporná hnačky a hynutie zvieratdo desiatich dni po maroděni· Jej zdolaníe je velni náročné azdíhavé, zriedka úšpešné. Doteraz najúčinnejšxm spósobom jejlikvidácie je imunizácia novorodených teliat a prasiat autoch-tonnou perorálnou vakeínou, obsahujúceu umrtvené baktérie Esche-richia colx, s pilusovým amfcigénom £ 99» alebo imunizácia tej-ných kráv a prašných prasnic před pórodom pareoterálnou vakcí-neu ebsahujúcou buď umrtvené baktérie E. coli £ 99+, aleboizolovaný antigén £ 99· Perorálna vakclna má viaoero nevýhod·Vyžaduje neustále dopínanie vakcíhy novými kmenmi, podávanievelkých kvánt vakclny dennemanuálně, éo stažuje prácu vovelkochove· Paranterálna celulárna, alebo subceluláma vakcí-ua imunizuje telné krávu, alebo prasnú prasaicu a následná *· 2 ·** 231 148 po napiti kol astra sa přenesu protilátky a matky na novo rod en-ca. Doteraz vyrábané parenterálne suhcelulárne vakcímy súpřipravovaná náročnými* viacstupňovými chemickými izoláciami,vyžadujúcimi nákladná zariadenia a komplikovaný post op*

Uvedená nedostatky v pod statné j miere odstraňuje spósob·· výroby subcelulámej pereterálnej látky proti neonatálnejkolienteritíde a kolihnačke teliat a prasiat podlá vynalezu,ktoréhe podstata spočívá v tom* že sa palašový antigén K 99 zpovrchu těla baktérií Escherichia coli separuje homegenizácioua izoluje izoelektrickou autofokusáciou do takej koncentrácie,že vykazuje Jasná percipitačnú líniu pri difúzi! v agare vočiantisáru anfci K 99 až do riedenia'1 : 128. Výhodou uvedeného spó sobu výroby antigénu K 99 je jedno·»duchosť, energetická nenáročnost* vylúčenie trvalej obsluhyaparatúry a potřeby akýchkelvek chemikálií* protože separéciaprebieha jedine v apyrogénnej sterilně j deštilovanej vodo. Příklad

Enteropatogénne baktérie Escherichia coli K 99*» nesúcepilusový antigén K 99 sa pe bežnej kuitivácii, zaručujúcejprodukciu uvedeného antigénn edatredia a bakteriu bez super-natantu sa resuspemdtije v 4 °C chladnej sterilnej destilováno jvodě pomoc o u homogenizára 5 až, 10 min pri 3 000 1/min ateploto 4 °C. Tak nastane odseparovanie pilusov obsahujúcichantigén K 99. Potom sa homogenit odstředí pri 70 000 m.s~2 p®dobu 20 min a pri teploto á °G· Supernatant, ktoréhe vodivostsa upraví na hodnoty do 800/uS přidáním sterilnej destilova-né j vody* alebe dalším přidáním antigénn K 99, sa apikuje do 231 146

horizontálněj izoelektrofokusačnej velkokapacitněj aparaturys mechanicky stabilizovaným deleaým roztokám· Do aparatérysa aplikuje jednosměrný elektrický prúd maximálně 3 VA aroztok fokusuje pri teplete 4 °C kým prúd neklesne pod 3 mApri rrapátí i 000 V· Po fokasaci i sa zmeria vo všetkých prie-hradkách aparatury pH· Pilusový antigén K 99 fokusuje k pB 9,5 až 10,8 automaticky· Z priehradok s pffi v tomto rozmedzísa zhromažduje fimbriálny pilusový antigén S 99· Jeho pH saupraví na 7 až 7,5 a koncentrácia sa upraví tak, aby vykazo-val pri sledovaní precipitácie v agar® jasnú precipiiaénúlíniu vo&L aatiséru anti K 99 až do riedenia 1 s 128· Po do*siahnuti tejto koncentrácie sa k roztoku antigénu přidá vhodnéadjuvans, napr· olejové a podává sa paremterálne injekčne vdávko 2 až 3 b! podkožně alebe intramuskulárne matkám asi6 týidnov před pcrodom· Táto dávka a doba pestačujú k tomu,aby sa u matiek vytvořili protilátky voéi K 99 antigénu a ponapiti kolestra sa preniesli do ériev novorodencov. Tietoprotilátky zabra&ujú pafcogánnym baktériám B. co li K 99*adherovat sa na črevnú stená a tým sposobovať kolienterití-du a kolihnačku.

Vynález može nájst? široké praktické využitie vživočíšnej velkovýroba·

Claims (1)

1. Ρ R Ε D Μ Ε Τ YYIÍLEIS 231 148 Spósob výroby subeelulárnej pareožerálnej látky protiBeouu&áinej koliosteritide a kolilaa&ke taliat a praaiatvyznafcujúci sa tým, i© sa pilusový aa&igám K 99 i povrchutel a baktérii Eecherichia ooli separuje hesiogeuizáoion aizoluje izeolektriokow autotfokuaáciou do takej koncentrácie»že vykazuje jasná predpitaěauá XŽu&u pri difúzii v agar©voéi autiaáru auti K 99 až do riedeuia 1 : 198; v