CS230288B1 - Method of preparing mono-clonal antibodies - Google Patents
Method of preparing mono-clonal antibodies Download PDFInfo
- Publication number
- CS230288B1 CS230288B1 CS799182A CS799182A CS230288B1 CS 230288 B1 CS230288 B1 CS 230288B1 CS 799182 A CS799182 A CS 799182A CS 799182 A CS799182 A CS 799182A CS 230288 B1 CS230288 B1 CS 230288B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- antibodies
- clone
- administered
- inactivated
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 8
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 claims description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Substances CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 3
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 2
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 claims 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000010211 hemagglutination inhibition (HI) assay Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
ČESKOSLOVENSKA SOCIALISTICKÁ U ř U I L 1 K A (M) POPIS VYNALEZU K Nmtsxe· OSVEDÚNIU 230288 (11) (»1 (51) Int. Cl.’ A 61 K 39/42// C 12 R 1/445 (22) Přihlášené 10 11 82(21) (PV 7991-82) (40) Zverejnené 23 11 83 OSAD PRO VYNÁLEZY A OBJEVY (45) Vydané 15 10 86 (75)
Autor vynálezu GREŠÍKOVÁ MILOTA MUDr. DrSc. člen korespondent SAV,
NOVÁK MICHAL MVDr. CSC., SEKEYOVÁ MAGDALÉNA PhMr.,BIELIKOVÁ VALÉRIA, BRATISLAVA (54) Spůsob přípravy monoklonálnych protilátok 1
Vynález rieši spůsob přípravy manoklo-nálnych protilátek ku kliešťovej encefaliti-dě.
Prvé monoklonálne protilátky bolí připra-vené v roku 1975 [O. Kohler, C. Milsteln:Nátuře 256, 495, (1975)]. Pri přípravě hyd-rldómov ku kliešťovej eincefalitíde (fúziamyelomových buniek so slezinovými buňka-mi imunizovaného zvieraťa pomocou poly-etylénglykolu) sa získavajú klony, ktoréprodukujú protilátky. Po reklómovaní bu-niek sa fiinálna propagácia robí v peritoneál-nej dutině histokompatibiiných zvierat, kto-rým sa aplikuje Freundovo adjuvans, resp.Přistane (2, 6, 10, 14 — tetramethylpentade-cane, K-och Light Lab. Ltd. Anglia) za úče-lom vytvorenia ascitickej tekutiny [M. No-vák, M. Grešíková, M. Sekeyová, G. Russ, J.Zikán, M. Pospíšil, F. Ciampor: Acta virol.,(1983)].
Podstata vynálezu spočívá v spósobe pří-pravy monoklonálnych protilátok, ktorá savyznačuje tým, že do peritoneálnej dutinyimbrednej linii myši sa podá inaktivovanýStaphylococcus aureus, ktorý sa inokulujedo ústojného bujónu, inkubuje sa po dobu18 hodin pri teploto 37 °C a potom sa inak-tivuje pri teplote 60 °C po dobu 30 minut,udržuje sa po dobu 18 hodin pri teplote 4 °C;materiál sa opať teplom inaktivuje, scentri- 230288 2 fuguje sa a v pokusech sa používá sedi-ment. Výhoda navrhovaného spQsobu přípravymonoklonálnych protilátok proti kliešťovejencefalitidě je, že protilátky specificky re-agujú v hemaglutinačno-inhibičnom teste.Získané monoklonálne protilátky umožňujúoddiferencovať virus kliešťovej encefaliti-dy od vírusov čelade Togaviridae. Vynálezumožňuje kultiváclu hybridómových buniekv peritoneálnej dutině histokompatibiinýchmyší. Výhoda tejto metody spočívá aj vo vy-sekej koncentrácii monoklonálnych protilá-tok. Přiklad
Inokuluje sa 1000 ml ústojného bujónu soStaphylococcus aureus; inkubuje sa infiko-vaný bujón po dobu 18 hodin pri teplote37 °C. Po ínaktivácii Staphylococcus aureuspri teplote 60 °C po dobu 30 minut se nechástáť po dobu 18 hodin pri 4 °C. Opátovnesa inaktivuje pri 60 °C po dobu 30 minút.Po centrifugách sa získá 2 g sedimentu. Se-diment sa resuspenduje v 30 ml bujónu. 1mililiter preparátu obsahuje 60 000 000 bu-niek. Imbredná línia myší BALB/C sa použí-vá v pokusoch. Myšiam sa podá 1,5 ml in-aktivovaného Staphylococcus aureus 54 dní
Claims (1)
- 230288 před imunizáciou. Myši sa imunizujú viru-sem kliešťovej encefalitidy, kmeňom Skali-ca, ktorý je uložený v Cs. zbierke arbovíru-sov Virologického ústavu SAV v Bratislavěpod označením Clgl a číslom 53 Skalica, po-množenom na kuřácích embryonálnych buň-kách a purifikovanom diferenciálnou centri-fugáciou. Prvá dávka virusu, podaná intra-peritoneáline obsahuje 5120 hemaglutinač-ných jednotiek; druhá dávka podaná po 35dňoch obsahuje 320 hemaglutinačných jed-notiek. Hybridómové linie (myelómová lí-nia PgNSl/1 Ag 4-1) a slezinové lymfoidnébuňky, ktoré produkujú moinoklonálne pro-tilátky in vitro sa zisťujú pomocou hemaglu-tinačno-inhibičného testu s aintigénom klieš-ťovej encefalitidy, kmen Skalica. Po klono-vaní a reklónovaní sa získajú hybridómovélinie s trvalou schopnosťou produkovat mo-noklonálne protilátky. Ďalej sa udržujú lentie, ktoré sú schopné produkovat monoklo-nálne protilátky. V snahe získat velké kvan-tum monoklonálnych protilátok, myelómovéhybridně buňky sa aplikujú BALB/C mýšiam,ktorým sa 54 dní vopred podá inaktivova-ný Staphylococcus pyogenes aureus. Asci-Klón číslo Skalica Protilátky opracovanéacetónom tícká tekutina, obsahujúca monoklonálineprotilátky má hemaglutinačno-inhibičný ti-ter 1: 162.240 u klonu č. 9 a 1 : 80 u klo-nu č. 16 (Tabulka 1). Připravené monoklo-nálne protilátky isa vyznačujú tým, že ob-sahujú identické imunoglobulíny triedy M(včasné protilátky), ktorých izotyp ťažké-ho reťazca je μ a typ 1'ahkého refazcaje κ. Neutralizačný index po přidaní antiIgM protilátok bol 2,4 u klonu č. 9 a 2,1 uklonu č. 16. Monoklonálne protilátky majú velký vý-znam v zdravotníckeij diagnostike i v základ-ném výskume. Umožňuje sa štandardizáciaproduktu a diferenciálna diagnostika. T a b u Γ k a 1 Výsledky hemaglutinačno-inhibičného aneutralízačného testu s monoklonálnymi pro-tilátkami ku kliešťovej encefalitidě, připra-venými v ascitickej tekutině BALB/C myšíza použitia inaktivovaných Staphylococcus aureus Titer hemaglutinačno-inhibičných protilátok Neutralizačný index s antigénom monoklonálnych proti- látok Protilátky opracované Do neutralízačného tels-acetónom . a 2-merkap- tu boli přidané ainti- toethanolom -IgM protilátky 9 162.240 16 80 0 2,4 10 2,1 PREDMET Spósob přípravy monoklonálnych protilá-tok vyznačujúci sa tým, že do peritoneál-nej dutiny imbrednej linii myší sa podá in-aktlvovaný Staphylococcus aureus, ktorý sainokuluje do ústojného bujónu, inkubuje sapo dobu 18 hodin pri teplote 37 °C, potom vynalezu sa inaktivuje pri teplote 60 °C po dobu 30minut, udržuje sa po dobu 18 hodin pri tep-lote 4 °C, materiál sa opať inaktivuje teplom,scentrifuguje sa a v pokusoch sa používásediment.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS799182A CS230288B1 (en) | 1982-11-10 | 1982-11-10 | Method of preparing mono-clonal antibodies |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS799182A CS230288B1 (en) | 1982-11-10 | 1982-11-10 | Method of preparing mono-clonal antibodies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS230288B1 true CS230288B1 (en) | 1984-08-13 |
Family
ID=5429935
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS799182A CS230288B1 (en) | 1982-11-10 | 1982-11-10 | Method of preparing mono-clonal antibodies |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS230288B1 (cs) |
-
1982
- 1982-11-10 CS CS799182A patent/CS230288B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Eshhar et al. | Generation of hybridomas secreting murine reaginic antibodies of anti-DNP specificity. | |
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Lachmann et al. | Three rat monoclonal antibodies to human C3 | |
| Mathews et al. | Role of complement and the Fc portion of immunoglobulin G in immunity to Venezuelan equine encephalomyelitis virus infection with glycoprotein-specific monoclonal antibodies | |
| AU596070B2 (en) | Anti-idiotype antibodies & their use in inducing immulogical response to viruses & tumours | |
| JPS592276B2 (ja) | ウイルス抗体の製造方法 | |
| WO1988003565A1 (en) | Antibodies | |
| RS53239B (sr) | Humana antitela protiv besnila i njihove upotrebe | |
| MX2014014412A (es) | Composiciones y metodos relacionados con la prevencion y el tratamiento de infecciones por rabia. | |
| EP1530579B1 (en) | Recombinant antibodies, and compositions and methods for making and using the same | |
| US4490358A (en) | Screening vaccines and immunization process | |
| Craig et al. | Murine hybridoma-derived antibodies in the processing of antigens for the immunodiagnosis of hydatid (Echinococcus granulosus) infection in sheep | |
| Doherty et al. | Breakdown of the blood-cerebrospinal fluid barrier to immunoglobulin in mice injected intracerebrally with a neurotropic influenza A virus: post-exposure treatment with monoclonal antibody promotes recovery | |
| CN1545551B (zh) | 针对丙型肝炎病毒e2糖蛋白的人单克隆抗体 | |
| Saravolatz et al. | Safety, pharmacokinetics, and functional activity of human anti-Pseudomonas aeruginosa monoclonal antibodies in septic and nonseptic patients | |
| Iwai et al. | Immunoglobulin classes of anti‐Sendai virus antibody detected by ELISA in infected nude mouse serum | |
| CS230288B1 (en) | Method of preparing mono-clonal antibodies | |
| US7071319B2 (en) | Recombinant antibodies, and compositions and methods for making and using the same | |
| CN114805570B (zh) | 一种抗人ace2单克隆抗体及其应用 | |
| HUT72546A (en) | Production of human monoclonal antibodies active against hepatitis b surface antigen | |
| Prabhakar et al. | Monoclonal antibody techniques applied to viruses | |
| EP0581108A2 (en) | Bispecific antibody reactive with sialyl-Lea antigen and CD3 | |
| Shibuta et al. | Differences in bovine parainfluenza 3 virus variants studied by monoclonal antibodies against viral glycoproteins | |
| Opolski et al. | Polymorphic and autoreactive H-2-specific monoclonal antibody isolated after injections of syngeneic Sendai virus-coated lymphocytes | |
| Masuho et al. | Development of a human monoclonal antibody against cytomegalovirus with the aim of a passive immunotherapy |