CS229094B1 - Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy - Google Patents

Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy Download PDF

Info

Publication number
CS229094B1
CS229094B1 CS39183A CS39183A CS229094B1 CS 229094 B1 CS229094 B1 CS 229094B1 CS 39183 A CS39183 A CS 39183A CS 39183 A CS39183 A CS 39183A CS 229094 B1 CS229094 B1 CS 229094B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
sulfo
blue
amino
anilino
hydroxyethyl starch
Prior art date
Application number
CS39183A
Other languages
Czech (cs)
English (en)
Inventor
Peter Gemeiner
Danica Mislovicova
Original Assignee
Peter Gemeiner
Danica Mislovicova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peter Gemeiner, Danica Mislovicova filed Critical Peter Gemeiner
Priority to CS39183A priority Critical patent/CS229094B1/cs
Publication of CS229094B1 publication Critical patent/CS229094B1/cs

Links

Landscapes

  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

Vynález sa týká trojsodnej soli 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino )J anilino-4-(x-sulfoaniIino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a spfisobu jeho přípravy.
Trojsodná sol’ 6- [2-sulf o-4-( 4-amino-3-sulfo-1 -antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-! ,3,5--triazín-2-yl-dextránu je vodorozpustná látka a slúžila v afinitnej chromato grafii ako prostriedok na štúdium afinity enzýmov a proteínov vfibeo k antrachinón-triazínovým farbivám,, ktoré sú jeuným z typov generálnych afinantov (E. Stellwagen: Accounts Chem. Res. 10, 92 /1977/)· Chromolytioké dextrány o priemernej molekulovej hmotnosti 5.10^ až 2.10^ sa vyznačovali výraznou afinitou k enzýmom, ktorá je závislá nielen od typu chromofóru, ale aj od molekulovej hmotnosti polysacharidu. Zo skúšaných antrachlnón-triazínových farbív najvačšiu účinnost vykazovala trojsodná sol’ 2-chlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antraehinón-amino)]anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu (P. Gemeiner,
D. Mislovičová, J. Zemek, t. Kuniak: Collect. Czeoh. Chem. Commun. 46, 419 /1981/). Vplyv charakteru polysacharidu na afinitu jeho chromolytického derivátu ku enzýmom a albuminu bol zatial’ dokázaný z rozpustných polysaoharidov iba u dextránu, rozpustného škrobu a glykogénu a z nerozpustných polysaoharidov u sieťovaných dextránov, sieťovanej agarózy a celu lózy (S. Angal, P. D. G. Dean: Biochem. J. 167, 301 /1977/).
Hydroxyetylškrob je ňalší typ vodorozpustríého polysacharidu vhodného na tieto účely. Je to vetvený alfa-glukán (99 % amylopektín) vo formě jeho hydroxyetylderivátu so stupňom substitúcie 0,63 až 0,67. Frakcionáciou tohto vodorozpustného polysacharidu sa získali frakcie hydroxyetylškrobu s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzl 5.10^ až 2.10^. Pri vypracovaní podmienok reakcie hydroxyetylškrobu s trojsodnou sol’ou 2-chlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínom sa vychádzalo z podmienok farbenia dextránov (P. Gemeiner a kol.: Collect. Czech. Chem. Com229094 mun., 46, 4)9 /1981/). Aby sa dosiahol jednotný stupeň substitdeie dextránov s trójaodnou soTou 2-chlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)J anilino-4-Cx-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu (65 umól/g), používali sa hmotnostně poměry trojsodná sol’ 2-chlór-6- 2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino) anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu : dextrán : uhličitén sodný = 0,5:1:2 s tým, že reakcia prebiehala po dobu 2 h pri teplote 80 °G. Za týchto podmienok sa viazalo len 10 % trojsodnej soli 2-chlór-6- 2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1 -antrachinón-amino) anilino-4-(x-sulf'oanilino)-1,3,5-triazínu, So je ekonomicky nákladné.
Uvedenú nevýhodu odstraňuje v podstatnej miere tento vynález. Podstatou vynálezu je trojsodná sol’ 6-[^2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antraohinón-amino)J anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylěkrobu, kde x je poloha substituenta 2 alebo 4 vzorca I
kde R představuje hydroxyetylSkrob so stupňom substitúcie 0,63 až 0,67 a o priemernej molekulovej hmotnosti 5.10^ až 2.10^. Dalej podstatou vynálezu je spOsob přípravy týchto derivátov, ktorý sa vyznačuje tým, že jednotlivé frakcie hydroxyetylěkrobu sa po dobu 30 min aktivujú vodným roztokom trojsodnej soli 2-chlór-6-[2-suIfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu vzorca II pri teplote 60 °C a po přidaní chloridu sodného a uhličitanu sodného reaguji! s trojsodnou soTou 2-chlór-6- [2-sulfo -4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)J anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu po dobu 2 h pri teplote 70 °C při hmotnostných poraeroch trojsodná sol’ 2-ohlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino -3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu : hydroxyetylSkrob : uhličitan sodný = 0,18 až 0,25:1:0,2 v prostředí 3,5 % vodného roztoku chloridu sodného.
(II)
Výhodou navrhovaného spOsobu přípravy oproti doterajěiemu spOsobu přípravy chromolytických dextránov je, že pri 2 až 5násobne nižěej spotrebe ti>ojsodnej soli 2-ohlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu, lOnásobne nižgej spotrebe uhličitanu sodného a pri znížení teploty o 10 °C sa dosahuje rovnaký stupeň substitúcie a)co pri farbení dextránov a že uvedený postup je jednoduchý a nenáročný na použité chemikálie a přístroje.
Příklad 1 mg hydroxyetylškrobu (HES) o priemernej molekulovej hmotnosti 53 500 a 4,9 mg trojsodnej soli 2-chlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-aminoj] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu (Cibacron Blue 3G-A Sálej Blue) sa rozpustí v ,,25 ml destiiovanej vody při teplote 60 °C a mieša sa po dobu 30 min. Potom sa přidé 43,75 mg chloridu sodného a zmes sa zohreje na teplotu 70 °G. Po přidaní 5 mg uhličitanu sodného sa reakčná zmes mieša ešte po dobu 2 h. Potom sa reakčná zmes ochladí, zneutralizuje zriedenou kyselinou chlorovodíkovou na pH 7 a přečistí na koloně naplnenej dextránom sieťovaným epichlórhydrínom (Sephadex G-25 fine). Objem náplně kolony je 10C ml, výška 21,5 cm a priemer 2,5 cm. Eluuje sa destilovanou vodou, pri prietoku eluátu kolonou 30 až 35 ml/h.
Prvá modrá frakcia obsahujdca vodný roztok trojsodnej soli 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu (Cibacron Blue-HES, ďalej Blue-HES) sa odpaří na rotačnej vákuovej odparke do sucha pri tlaku 5 kPa; po přidaní a znovu odpaření etanolu a potom acetonu sa získá suchý Blue-HES (23,1 mg) s obsahom 65,4 umólu Blue/g.
Příklad 2
Postup podTa příkladu 1 s tým rozdielom, že sa použije hydroxyetylškrob o priemernej molekulovej hmotnosti ,27 000 a 4,63 mg Cibacron Blue 3G-A. Získá sa Blue-HES (22,5 mg) o obsahu 65,4 umól Blue/g.
Příklad 3
Postup podTa příkladu 1 s tým rozdielom, že sa použije hydroxyetylškrob o priemernej molekulovej hmotnosti 402 000 a 6,23 mg Blue. Suchý Blue-HES (22,2 mg) obsahuje 68,7 Umól Blue/g.
Příklad 4
Postup podTa příkladu 1 s tým rozdielom, že sa použil hydroxyetylškrob o priemernej molekulovej hmotnosti 1 920 000 a 6,23 mg Blue. Suchý Blue-HES (21,7 mg) obsahuje 72,08 umól Blue/g.
Vynález má použitie v enzýmovom inžinierstve a v biochémii, a to pri izoláeii a purifikácii enzýmov alebo ako substráty a inhibitory enzýmami katalyzovaných reakeií.

Claims (2)

1, Trojsodná sol’ 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)J anilino-4-(x-sulfo anilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu, kde x je poloha substituenta 2 alebo 4 vzorca I
SO3Na
229094 4 kde R představuje hydroxyetylškrob so stupňom substitúcie 0,63 ež 0,67 a priemernou molekulovou hmotnosťou 5.10 4 až 2.10®.
2. Spfisob přípravy podTa bodu 1 vyznačujúci sa tým, že frakcionovaný vodorozpustný hydroxyetylškrob sa po dobu 30 min aktivuje vodným roztokom trojsodnej soli 2-chlór-6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu vzorca II pri teplote 60 °C a po přidaní chloridu sodného a uhličitanu sodného reaguje s trojsodnou soTou 2-chlór-6- [2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu po dobu 2 h pri teplote 70 °C pri hmotnostných pomeroch trojsodná sol’ 2-chlór-6-^2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-1-antrachinón-amino)] anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazínu : hydroxyetylškrob : uhličitan sodný = 0,18 až 0,25:1:0,2 v prostředí 3,5 % vodného chloridu sodného.
CS39183A 1983-01-20 1983-01-20 Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy CS229094B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS39183A CS229094B1 (cs) 1983-01-20 1983-01-20 Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS39183A CS229094B1 (cs) 1983-01-20 1983-01-20 Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS229094B1 true CS229094B1 (cs) 1984-05-14

Family

ID=5335885

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS39183A CS229094B1 (cs) 1983-01-20 1983-01-20 Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS229094B1 (sk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Graves et al. 15 α-Glucan phosphorylases–Chemical and physical basis of catalysis and regulation
Lee et al. 8-(6-Aminohexyl)-amino-adenine nucleotide derivatives for affinity chromatography
Danenberg et al. Fluorinated pyrimidines. Structures of reversible and irreversible complexes of thymidylate synthetase and fluorinated pyrimidine nucleotides
O'dea et al. The estimation of small amounts of formaldehyde liberated during the oxidation of carbohydrates and other substances with periodate
Lowe et al. High-performance liquid affinity chromatography of proteins on Cibacron Blue F3G-A bonded silica
Atkinson et al. Inhibition of inosine 5′-phosphate dehydrogenase from Ehrlich ascites-tumour cells by 6-thioinosine 5′-phosphate
DK159688B (da) Oploeselig baerer-bundet lever-uricase, fremgangsmaade til dens fremstilling og anvendelse
Fox et al. Biosynthesis of bacterial glycogen. 13. Purification and properties of the Escherichia coli B ADPglucose: 1, 4-α-D-glucan 4-α-glucosyltransferase
Prado et al. A simple and sensitive method for determining reducing sugars in plant tissues. Application to quantify the sugar content in quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) seedlings
Palanisamy et al. Synthesis and evaluation of affinity adsorbents for glycoproteins: an artificial lectin
Sekura [53] Adenosine 3′-phosphate 5′-phosphosulfate
CA1220148A (en) 9-(aminoalkyl)-8-hydroxyadenines and method of their preparation
Hettinger et al. Edeine. III. Composition of the antibiotic peptide edeine B
Simpson et al. Degradation of rutin by aspergillus flavus: The carbon monoxide producing system
Cha et al. Succinic Thiokinase: IV. IMPROVED METHOD OF PURIFICATION, ARSENOLYSIS OF GUANOSINE TRIPHOSPHATE, SUCCINATE-DEPENDENT GUANOSINE TRIPHOSPHATASE ACTIVITY, AND SOME OTHER PROPERTIES OF THE ENZYME
CS229094B1 (cs) Trojsodná sof 6-[2-sulfo-4-(4-amino-3-siilfo-1-antrachinón-amino)]- anilino-4-(x-sulfoanilino)-1,3,5-triazín-2-yl-hydroxyetylškrobu a sposob jeho přípravy
Hurst et al. HYDROLYSIS OF CALF THYMUS DEOXYRIBONUCLEATE BY PANCREATIC DEOXYRIBONUCLEASE: I. A STUDY OF THE OLIGONUCLEOTIDES LIBERATED IN THE PRESENCE OF MAGNESIUM OR MANGANESE IONS
Alonso et al. Binding of N‐acetyl‐L‐glutamate to rat liver carbamoyl phosphate synthetase (ammonia)
Gemeiner et al. Antraquinone-triazine derivatives of polysaccharides. Relation between structure and affinity to lactate dehydrogenase
IE53887B1 (en) Nucleotide-based substrates
Yamazaki et al. A New Method of Chemical Modification of N6‐Amino Group in Adenine Nucleotides with Formaldehyde and a Thiol and Its Application to Preparing Immobilized ADP and ATP
Tikchonenko et al. The secondary structure of bacteriophage DNA in situ: III. Reaction of Sd phage with O-methylhydroxylamine
Naumann et al. Affinity chromatography of bovine heart lactate dehydrogenase using dye ligands linked directly or spacer-mediated to bead cellulose
Berglund et al. [18] ATP-and dATP-substituted agaroses and the purification of ribonucleotide reductases
Moe et al. Isoleucyl transfer ribonucleic acid synthetase. Competitive inhibition with respect to transfer ribonucleic acid by blue dextran