CS228431B1 - Způsob dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze - Google Patents
Způsob dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze Download PDFInfo
- Publication number
- CS228431B1 CS228431B1 CS318682A CS318682A CS228431B1 CS 228431 B1 CS228431 B1 CS 228431B1 CS 318682 A CS318682 A CS 318682A CS 318682 A CS318682 A CS 318682A CS 228431 B1 CS228431 B1 CS 228431B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- phenylalanine
- ethylphenylalanine
- phenylacetyl
- substituted
- phenylalaninederivates
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 150000002993 phenylalanine derivatives Chemical group 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 1
- 150000002994 phenylalanines Chemical class 0.000 claims 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- -1 β-substituted phenylalanine Chemical class 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- DQLHSFUMICQIMB-VIFPVBQESA-N (2s)-2-amino-3-(4-methylphenyl)propanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C1 DQLHSFUMICQIMB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- AWKDBHFQJATNBQ-JTQLQIEISA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-ethylphenyl)propanoate Chemical compound CCC1=CC=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C1 AWKDBHFQJATNBQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- AWKDBHFQJATNBQ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-(4-ethylphenyl)propanoate Chemical compound CCC1=CC=C(CC(N)C(O)=O)C=C1 AWKDBHFQJATNBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CC1=CC=CC=C1 VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INWFAPOVRXATBG-UHFFFAOYSA-N 3-(4-chlorophenyl)-2-[(2-phenylacetyl)amino]propanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1CC(=O)NC(C(=O)O)CC1=CC=C(Cl)C=C1 INWFAPOVRXATBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 108010008292 L-Amino Acid Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000007070 L-amino-acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 150000008547 L-phenylalanines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze. Tyto deriváty fenylalaninu jsou součástí syntetických peptidů, které mohou sloužit např. jako selektivně natriureticky působící látky a pro tento účel je nutno je připravit v opticky jednotné fůrmě.
Již dříve bylo zjištěno, že pomocí penicilin-amidohydrolázy (E. C. 3.5.1.11.) je možno odštěpit acylovou skupinu z L-formy aminokyseliny (Lucente 6., Romeo A., Rosel S.: Experientie 2i, 317 (1965); Sovětské a.o. 487940; Britský patent 1 369 462; čsl. a.o. 209 633 a Vojtíšek V., Slezák J.: Folia Microbiologica 20. 224 (1975); Simek P. e kol.: Collect. Czech. Chem. Commun. 46. 2 263 (1981). Dále bylo zjištěno, že speciřita enzymu není zcela absolutní a že i D-forma aminokyseliny je uvolňována z acylovaného derivátu. Pro deriváty fenylalaninu substituované v p-poloze však tato metoda enzymatického štěpení nebyla dosud ověřena.
Předmětem vynálezu je způsob enzymatického dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze obecného vzorce (I),
XCH„-CH-COOH 2 I
NH„ (I), kde X je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo halogen, jehož podstatou je, Se D,L-N-fenylacetylderivát fenylalaninu, zejména D,L-N-fenylacetyl-p-ethylfenylalanin, se inkubuj s enzymy s penicilinamidohydrolázovou aktivitou, s výhodou a jejich nerozpustnými formami, a to diskontlnuálním nebo kontinuálním způsobem v rozmezí teplot 15 až 45 °C, při hodnotách pH 7,0 až 8,5, s výhodou 7,6 až 7,8, a vzniklá směs derivátu L-fenylalaninu a D-N-fenyl228431 acetylderivátu fenylalaninu, zejména L-p-ethylfenylelanin a D-N-fenylacetyl-p-ethylfenylalanin, ae děli, s výhodou pomocí měniče iontů. Enzymovou reakci je výhodné vzhledem k optimálnímu složení produktu zastavit, když je dosaženo konverze, při které ještě nedochází ke štěpení acylu z D-formy aminokyseliny. Postup využívající penioilinamidohydrolázy (E.C. 3.5.1.11) nebo nerozpustné formy tohoto enzymu, např. enzymu zakotveného na buňkách Β» megaterium (Čs. AO č. 208 931), navzájem vázaných buněk E. coli (čs. AO č. 203 607) majících zachovanou pěnicilinamidohydralézovou aktivitu, zesítěných a permeabilizovaných produkčních buněk mikroorganismů (čs. AO č. 201 621) nebo agregovaných buněk (čs. AO č. 197 101) je zvláště výhodný z hlediska snadnosti izolace produktu a možnosti práce v kolonovém uspořádání. Pro získání opticky jednotného produktu je nezbytné sledovat průběh reakce vhodnou metodou např. kapalinovou nebo plynovou chromatografii a reakci zastavit při vhodném stupni konverze, s výhodou 50 %, nebot jinak dojde k postupnému odštěpení acylu i z D-formy substrátu.
Způsob dělení optických antipodů je déle objasněn v příkladech provedení:
Příklad 1
L-p-ethylfenylalanin
K suspenzi D,L-p-ethylfenylalaninu (2 g) v 214 NaOH (7 ml) byl při 10 °C po částech během 30 min. přidáván fenylacetylchlorid (3 ml) a další 214 NaOH, tak aby pH směsi bylo 12. Poté byla suspenze míchána ještě 2 h při teplotě místnosti. Reakční směs byla okyselena koncentrovanou kyselinou solnou na pH 2 a uložena přes noc do lednice. Produkt byl odsát, promyt vodou, vysušen a překrystálovén z 30% ethanolu. Bylo získáno 2,65 g (82 %) látky o t. t.
146 až 149 °C.
Rp 0,93 (S 1), 0,50 (S 2), 0,86 (S 3), 0,61 (S 4).
Pro C,9H2)N03 (311,4) vypočteno: 73,29 % C, 6,80 % H, 4,50 % N;
nalezeno: 72,98 % C, 6,67 % H, 4,32 % N.
Vzniklý meziprodukt (fenylacetyl-DL-p-éthylfenylalanin 1,1 g) byl suspendován ve vodě (40 ml) a pH bylo upraveno na hodnotu 7,5 přídavkem 0,1 14 NaOH (3,1 ml). K vzniklému rozto-r ku byl přidán 0,2 14 fosfátový pufr (13 ml) o pH 7,5 a navzájem vázané buňky E. coli získané podle čs. AO č. 203 607 v množství 1 g a směs byla míchána při 40 °C.
Pomocí kapalinové chromatografie byl sledován průběh štěpení MeOH-0,05% kyselina trifluoroctová 80:20): hodnoty k': kyselina fenyloctová - 1,19, fenylacetyl-p-ethylfenylalanin - 2,11, p-ethylfenylalanin - 2,84. Po 3 h byla reakční směs zfiltrována, okyselena 114 HG1 (10 ml), zfiltrována a nanesena na sloupec sulfonátového latexu (60 ml). Po promytí vodou byl produkt eluován 15% pyridinem a odpařen. Bylo získáno 234 mg (68,5 %) L-p-ethylfenylalaninu dle tenkovrstvé chromatografie ve čtyřech rozpouštědlových systémech a dle elektroforézy při dvou rozdílných pH shodného se standardem. Optická čistota zjištěná pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie s chirální mobilní fází (0,008 mol.l-' L-fenylalanin a 0,004 mol.l-' CuSO^ - methanol; (55:45) byla >99% a tato hodnota byla potvrzena i inkubací vzorku s oxidázou L-aminokyselin. Produkt byl překrystalován z 1M HC1; t. t.
206 až 208 °C, - 23,9° (c 0,12; voda). Literatura (Zhuze A. L., Jošt K., Kasafírek E.,
Sudinger J.: Collect. Czech. Chem. Gommun. 29. 2 648: 1964) udává {«] -23,1° (c 0,12; voda). ® >
Příklad 2
L-p-me thylfenylalanin
Fenylacetyl-D,L-p-methylfenylalanin byl inkubován stejným způsobem jako v příkladu 1, s výjimkou toho,, že byl použit enzym zakotvený na buňkách Bacillus megaterium (čs. AO δ. 20Θ 931). Po izolaci byl získán ve výtěžku 65 % čistý L-p-methylfenylalanin shodný svými vlastnostmi se standardem (Zhuze A. L. a spol.: Gollect. Czech. Chem. Commun. 29. 2 648 /1964/). Optická čistota byla ověřena stejným způsobem jako v příkladu 1.
Příklad 3
L-p-chlorfenylalanin
Fenylacetyl-D,L-p-chlorfenylalanin byl inkubován jako v příkladu 1 s výjimkou toho, že bylo použito zesitěných a permeabilizovaných buněk (čs. AQ č. 201 621). Obvyklým zpracováním byl získán L-p-chlorfenylalanin ve výtěžku 52 %, jehož optická čistota byla ověřena stejně jako v příkladu 1.
Claims (2)
1. Způsob enzymatického dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze obecného vzorce (I),
X· (I) kde X je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo halogen, vyznačený tím, že DřL~N~fenylacetylderivát fenylalaninu, zejména D,L-N-fenylacetyl-p-ethylfenylalanin, se inkubuje s enzy my s penicilinamidohydrolázovou aktivitou, s výhodou s jejich nerozpustnými formami, a to diskontinuálním nebo kontinuálním způsobem v rozmezí teplot 15 až 45 °C, při hodnotách pH 7,0 až 8,5, s výhodou 7,6 až 7,8, a vzniklá směs derivátu L-fenylalaninu a D-N-fenylacetylderivátu fenylalaninu, zejména L-p-ethylfenylalaninu a D-N-fenylacetyl-p-etbylfenylalaninu se dělí, s výhodou pomocí měniče iontů.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že enzymová reakce je zastavena, když je dosaženo konverze, při které jeětě nedochází ke Štěpení acylu z D-formy aminokyseliny.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS318682A CS228431B1 (cs) | 1982-05-04 | 1982-05-04 | Způsob dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS318682A CS228431B1 (cs) | 1982-05-04 | 1982-05-04 | Způsob dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS228431B1 true CS228431B1 (cs) | 1984-05-14 |
Family
ID=5371219
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS318682A CS228431B1 (cs) | 1982-05-04 | 1982-05-04 | Způsob dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS228431B1 (cs) |
-
1982
- 1982-05-04 CS CS318682A patent/CS228431B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yamada et al. | Production of L-phenylalanine from trans-cinnamic acid with Rhodotorula glutinis containing L-phenylalanine ammonia-lyase activity | |
| Robinson et al. | Porous glass as a solid support for immobilisation or affinity chromatography of enzymes | |
| RU1806201C (ru) | Способ получени S(+) энантиомера 2-арилпропионовой кислоты | |
| EP0178106B1 (en) | Enzymatic process | |
| CA1052716A (en) | Process for the enzymatic resolution of dl-phenyl glycine amide into its optically active antipodes | |
| EP0295724A2 (en) | Biosynthesis of unnatural cephalosporins | |
| US4389488A (en) | Process for the enzymatic preparation of L-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| US4389489A (en) | Optically pure heterocyclic aminoacid compounds, a process for their use for the synthesis of medicaments | |
| US5756800A (en) | Process for the enzymatic resolution of 2-amino-4-methyl-phosphinobutyric acid derivatives | |
| US3880713A (en) | Cephalosporin compounds | |
| RU2270869C2 (ru) | Способ получения l-аминокислот из их рацемических n-ацетил-d, l-производных посредством ферментативного расщепления | |
| CS228431B1 (cs) | Způsob dělení optických isomerů derivátů fenylalaninu substituovaných v p-poloze | |
| Itoh et al. | Application of inverse substrates to trypsin-catalyzed peptide synthesis | |
| Tsuji et al. | Enzymatic preparation of D-p-trimethylsilylphenylalanine | |
| EP0512848B1 (en) | Enzymatic resolution of alpha-tertiary carboxylic acid esters | |
| JPS5922516B2 (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| WO1991005870A1 (en) | Enzymatic production of d-amino acids | |
| JPH03187398A (ja) | 一工程セフアロスポリンｃアミダーゼ酵素、これをコードする遺伝子及び適切な宿主におけるその発現 | |
| CA1187432A (en) | Microorganism and its use for the preparation of glutathione | |
| US5723321A (en) | Process for preparing D-lysine | |
| JP3078599B2 (ja) | Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルセリン誘導体の製造法 | |
| US4579818A (en) | Biosynthesis of unnatural cephalosporins | |
| US5043279A (en) | DNA encoding a bacillus creatinase | |
| JPH02276586A (ja) | Ｄ‐ホモフエニルアラニンの製造法 | |
| Jones et al. | Rhizopterin biosynthesis in Staphylococcus epidermidis |