CS224156B1 - Spósob přípravy chromogénneho škrobu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy - Google Patents
Spósob přípravy chromogénneho škrobu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy Download PDFInfo
- Publication number
- CS224156B1 CS224156B1 CS366380A CS366380A CS224156B1 CS 224156 B1 CS224156 B1 CS 224156B1 CS 366380 A CS366380 A CS 366380A CS 366380 A CS366380 A CS 366380A CS 224156 B1 CS224156 B1 CS 224156B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- starch
- weight
- alpha amylase
- calculated
- detection
- Prior art date
Links
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 title claims description 26
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 title claims description 26
- 239000008107 starch Substances 0.000 title claims description 26
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims description 14
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title claims description 13
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title claims description 13
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 title claims description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims description 5
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 claims description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- URPBSRQSVAMQRT-UHFFFAOYSA-N 4-amino-9,10-dioxo-1-[3-(2-sulfoethylsulfonyl)anilino]anthracene-2-sulfonic acid Chemical class NC=1C=C(C(=C2C(C=3C=CC=CC3C(C12)=O)=O)NC1=CC(=CC=C1)S(=O)(=O)CCS(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O URPBSRQSVAMQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- -1 3- (sulfoethylsulfonyl) anilino Chemical group 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000016222 Pancreatic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000020450 carbohydrate metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000017745 inborn carbohydrate metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000006855 networking Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
1 224 156
Vynález sa týká spósobu přípravy chromogénneho škrobu vhod-ného pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy.
Chromogenné substráty stali se v posledných rokoch velmidobrými pomooníkmi pri stanovení úrovně róznych enzýmových akti-vit v biologických tekutinách, čím je možné spolahlivo potvrditalebo vylúčit niektorá druhy intemých ochorení. Sú teda nepo-strádatelné v modemej diagnostické^ klinickej praxi {PharmaciaAB: Clinical and technical Information (1972), J. Kenedy: Advan-ce in carbihydrate chemistry and biochemistry, 29, 350, (1974)J·Tak napr, velmi rozšířeným klinickým testom je stanovenie úrovněalfa amylázy v krvnom sére a v moči pacienta. Hodnota aktivityalfa amylázy v biologických tekutinách umožňuje stanovit funkčnéporuchy pankreasu připadne niektoré infekčně choroby fkuniak I.,Zemek J.: A.O. č. 192210, 192202, Kuniak £·, Zemek J., Gergel J.:A.O. č. 20276lJ
Pri niektorých chorobách najma v ich počiatočných štádiáchmožno využit výsledky hodnót stanovenia poměru izoenzýmov alfaamylázy v biologických tekutinách. Izoenzýmy alfa amylázy sa vsúčasnej době stanovujú elektroforetickým delením na vhodnom gé-le a po elektroforéze sa prevedie detekcia rozdělených izoenzý-mov vhodným detekČným činidlom.
Jedným z možných spósobov detekcie izoenzýmov alfa amylázyje detekcia pomocou farebného škrobu so Specificky velmi vysokoucitlivostou ku enzýmovej aktivitě izoenzýmov alfa amylázy. Přípravu takéhoto chromogénneho substrátu na báze škrobus velmi vysokou citlivostou rieši táto přihláška vynálezu. 2 224 156
Podstata vynálezu spóšobu přípravy chromogénneho škrobu predetekciu izoenzýmov alfa amylázy spočívá v tom, že zemiakovýškrob sa v prvom stupni sletuje v 0,1 mol hydroxide sodnom priteplote 15 až 25 °C po dobu 18 až 24 h za použitia epichlorhyd-rínu v množstve 0,03 až 0,1 % počítané na hmotnost suchého škro-bu a za súčasného použitia elektrolytu s výhodou síranu sodnéhoa/alebo octanu sodného v množstve 30 až 50 % počítané na hmotnostsuchého škrobu, načo sa v druhom stupni na zosietovaný škrob ko-valentne naviaže farbivo s výhodou dvojsodná sol kyseliny 8-amino--5-^3-(sulfoetylsulfonyl)anilino)-6-antrochinonsulfonovej v množ-stve 10 až 15 % počítané na hmotnost suchého škrobu v alkalickomprostředí pri teplote 15 až 25 °C po dobu 1 až 3 h, pri koncen-trácii hydroxidu sodného 0,7 až 1,0 % hmot. a koncentrácii po-mocného elektrolytu a zemiakového škrobu 3 až 7 % počítané nahmotnost reakčného roztoku a v tretom stupni sa chromogénny škrobkvantitativné zbaví volného farbiva premývaním vodným roztokomalkoholu a/alebo acetonu s výhodou zriedeného v pomere 1 :1.
Chromogénny škrob připravený podl’a postupu přihlášky vynále-zu má velmi vysoký napúčací objem vo vodě (12 až 20 ml/g), čo jeprvým nevyhnutným predpokladom vysokej citlivosti substrátu k en-zýmovej aktivitě. Obsah viazaného farbiva sa pohybuje okolo 12 až16 % hmot., čo je rovnako optimálně množstvo pre zachovanie maxi-málnej citlivosti substrátu k aktivitě izoenzýmov alfa amylázy.
Použitie pomocného elektrolytu zabezpečuje vyššiu účinnostsieťovacej reakcie epichlórhydrínu a rovnako vyššiu účinnost ko-valentného viazania farbiva ža použitých reakčných podmienok.
Pri premývaní farebného škrobu sa móže použit jednak priamepremývanie na vhodnom filtri, taktiež sa móže premývat dekantá-ciou, alebo pomocou kontinuálněj odstředivky.
Po dokonalom vymytí nezreagovaného farbiva sa z premytého škrobu vytěsní voda premývaním etanolom alebo acetonom za použitiakoncentračného gradientu aby sa nevytvořili zo škrobu tvrdé agre-gáty, ale jemný prášok.
Pri technologických operáciách je velmi dóležité aby nedoš-lo ku kontaktu chromogénneho škrobu s prstami lebo aj nepatrnéstopy alfa amylázy přítomné na pokožke móžu viest ku enzymatic-ké j bydrolýze chromogénneho substrátu. 3 224 156
Taktiež je doležité, aby aa připravený produkt počas výroby ne-kontaminoval mikroorganizmami, ktoré sú schopné degradovat</ (1—>4) glukány. Výhodou navrhovaného spósobu přípravy chromogénneho škrobo-vého gelu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy je, že poskytujevysoko citlivý gél s homogennou distribúciou kovalentne viazané-ho farbiva, je energeticky nenáročný, lebo všetky reakcie i tech-nologické operácie prebiehajú pri laboratómej teplote, pričomzabezpečuje vysoká účinnost sieťovacej reakcie a kovalentného viazania farbiva na škrobový substrát. Příklad 1
Do 1000 ml vody sa rozpustí 4,5 g hydroxidu sodného a 250 goctanu sodného. Po dokonalom rozpuštění sa za stálého miešaniapřidá 0,4 ml epichlórhydřínu a roztok sa mieša asi 5 min. kedyje epichlorhydrín rozpuštěný. Potom sa za stálého miešania při-dá 560 g zemiakového škrobu (sušina 89 %) a reakčná zmes samieša 2 h pri laboratómej teplote. Po dvoch h sa miešanie zas-taví a nechá sa staticky reagovat 24 h pri laboratómej teplote.Po 24 h sa zapne miešanie a přidá sa 6,5 litra vody v ktorej sapredom rozpustilo 100 g farbiva dvojsodná sol kyseliny 8-amino--5-{3-(sulfoetylsulfonyl)anilino^-6-antrachinonsulfonovej a 70 ghydroxidu sodného a nechá sa reagovat 2 h pri laboratómej tep-lote· Po ukončení reakcie sa reakčná zmes neutralizuje so 100 mlkonc. kyseliny octovej zriedenej s vodou v pomere 1:1 a reakčnázmes sa mieša aspoň 5 min.
Potom sa do reakčnej zmesi přidá 7,5 1 etanolu a filtruje sa cezsklenný filter a na filtri sa premýva tak dlho zriedeným etano-lom (1:1) až je filtrát bezfarebný.
Potom sa na koniec premýva postupné stále koncentrovanějším eta-nolom až nakoniec bezvodým a chromogénny škrob sa po dokonalomodsátí etanolu suší volné na vzduchu alebo v sušiami pri 60 °C.Výsledný produkt má napúčací objem 15 ml/g a obsah viazaného far·biva 15,2 % hmot. Příklad 2
Postup podlá příkladu 1, s tým rozdielom, že na sietovanie 4 224 156 sa použije len 1»33 ml epichlórhydrínu. Výsledný produkt mel napúčací objem 22 ml/g a obsah farbiva15»5 % hmot. Příklad 3
Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že sa použilo nafarbenie Škrobu 75 g farbiva. Výsledný produkt mal napúčací objem 14 ml/g a obsah viazanéhofarbiva 11,5 % hmot.
Vynález má použitie v klinickej diagnostike poruch meta-bolismu uhlohydrátov a v základnom výskume pri štúdiu izoenzýmovalfa amylázy. Chromogénny škrob připravený podl’a tejto přihláškyvynálezu spíňa všetky kritériá i pre přípravu testovacích tabletna stanovenie glukoamylázy v biologických tekutinách, ktorá jeindikátorem niektorých nádorových ochorení.
Claims (1)
- 5 PŘED MET VYNÁLEZU 224 156 Spósob přípravy chromogénneho škrobu pra detekciu izoenzý-mov alfa amylázy, vyznačený tým, že zemiakový škrob sav prvom stupni sletuje v 0,1 mol hydroxide sodnom pri teplote15 až 25 °C po dobu 18 až 24 h za použitia epichlórhydrínu v množštve 0,03 až 0,1 % počítané na hmotnost suchého škrobu a za sú-časného použitia elektrolytu s výhodou síranu sodného a/alebooctanu sodného v množstve 30 až 50 % počítané na hmotnost suché-*ho Škrobu, načo sa v druhom stupni na zosietovaný škrob kovalent-ne naviaže farbivo s výhodou dvojsodná sol kyseliny 8-amino-5--^-(sulfoetylsulfonyl)anilinoJ-6-antrachinonsulfonovej v množ-stve 10 až 15 % počítané na hmotnost suchého škrobu v alkalickomprostředí pri teplote 15 až 25 °C po dobu 1 až 3 h, pri koncentracii hydroxidu sodného 0,7 až 1 % hmot· a koncentrácii pomocnéhoelektrolytu a zemiskového škrobu 3 až 7 % počítané na hmotnostreakčného roztoku a v tretom stupni sa chromogénny škrob kvanti-tativné zbaví volného farbiva premývaním vodným roztokom alkoho-lu a/alebo acetónu s výhodou zriedeného v pomere 1:1·
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS366380A CS224156B1 (cs) | 1980-05-26 | 1980-05-26 | Spósob přípravy chromogénneho škrobu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS366380A CS224156B1 (cs) | 1980-05-26 | 1980-05-26 | Spósob přípravy chromogénneho škrobu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS224156B1 true CS224156B1 (cs) | 1983-12-30 |
Family
ID=5377325
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS366380A CS224156B1 (cs) | 1980-05-26 | 1980-05-26 | Spósob přípravy chromogénneho škrobu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS224156B1 (cs) |
-
1980
- 1980-05-26 CS CS366380A patent/CS224156B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5211914A (en) | Test carrier for the determination of ions | |
| EP0058334B1 (en) | Improved system for the determination of glucose in fluids | |
| CN100357449C (zh) | 用于分光光度法测定分析物的染料偶合对 | |
| US4965087A (en) | Method of making a sensor element for fluorescence-optical measurements | |
| JPH024861B2 (cs) | ||
| CN109991409B (zh) | 胃蛋白酶原i/胃蛋白酶原ii检测试剂盒 | |
| Guilbault et al. | An improved electrode for the assay of urea in blood | |
| HU176045B (en) | Diagnostical composition for determining uric acid | |
| US4376197A (en) | Indoxylmaltodextrins, a process for their preparation and their use | |
| Llenado et al. | Ion-electrode based automatic glucose analysis system | |
| CS224156B1 (cs) | Spósob přípravy chromogénneho škrobu pre detekciu izoenzýmov alfa amylázy | |
| US4563421A (en) | Method for determining the presence of endohydrolase in a liquid and composition therefor | |
| CN111455020A (zh) | 一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒及检测方法 | |
| Asp | Improved method for the assay of phenylglycosidase activity with a 4-aminoantipyrine reagent | |
| Melius | Isolation of yeast invertase by sephadex gel chromatography. A biochemistry laboratory experiment | |
| US3792044A (en) | Method for determining glucose with o-toluidine reagent containing an arsenic compound | |
| JP3048672B2 (ja) | 試薬結合ポリマー、該ポリマー膜および該ポリマーを含む担持体 | |
| CN105628700B (zh) | 基于铋-牛血清白蛋白-纳米铂的过氧化氢检测试剂盒 | |
| JPS5913199B2 (ja) | アミラ−ゼ活性測定法 | |
| JPH025400B2 (cs) | ||
| CN108645846A (zh) | 一种基于纸基测定血清α-淀粉酶活性的方法 | |
| CN113030077A (zh) | 一种n-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法 | |
| US3293146A (en) | Composition for detecting guanase and process for diagnosing viral hepatitis therewith | |
| JPH0727766A (ja) | 試薬結合ポリマーおよびその調製方法 | |
| CN109991220A (zh) | 一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法 |