CS211215B1 - Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels - Google Patents
Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels Download PDFInfo
- Publication number
- CS211215B1 CS211215B1 CS609480A CS609480A CS211215B1 CS 211215 B1 CS211215 B1 CS 211215B1 CS 609480 A CS609480 A CS 609480A CS 609480 A CS609480 A CS 609480A CS 211215 B1 CS211215 B1 CS 211215B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- proteins
- goal
- concentration
- liter
- polyacrylamide
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 211215
Vynález sa týká spdsobu kvantitativnéj izolácie bielkovin z polyakrylamidových gélov.
Po detekeii bielkoviny na polyakrylamidovom géle sa doteraz bielkovina izolovala budchemickým spdsobom (depolymerizácia pomoou peroxidu vodíka) alebo elektroforézou s opačnoupolaritou. Pri chemickom spdsobe izolácie sa vo vzorke vyskytuje značné množstvo depolyme-rizovaného materiálu z nosiča (gélu). Pri elektroforéze s opačnou polaritou bolo potřebnépoužit Speciálně konstruované trubičky, alebo modifikované elektroforetické zariadenie,ktoré používají! na zachytenie bielkoviny napr. dialyzačné membrány, alebo hydroxylapatit.Použitie týchto metod izolácie je spojené s náročnou manipuláciou a zložitou přípravoujednotlivých trubičiek obsahujúcich gélové řezy. Použitie dialyzačných membrán a hydroxyl-apatitu vedie k nespecifickéj absorpci bielkovin na týchto materiáloch, čo spdsopuje ne-kvantitatívnu izoláciu bielkovin. Okrem toho sa bielkovina vo vačéine metod zachytává v znač-nom objeme, čo zvyčajne vyžaduje ďalší krok, spočívajúci v koncentrácii bielkoviny. Apliká-cia spomenutých špeciálnych trubičiek zabraňuje rutinnému spracovaniu vzoriek.
Tieto nevýhody sú odstraněné spdsobom podl’a vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom,že před elektroforézou sa na gélový rez uložený na polyakrylamidovom nosiči přidá pufro-vací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácii 0,02 až 0,2 mól/liter v množstve minimálněrovnom objemu gélového řezu, výhodné tris/hydroxymetyl/aminometán s prídavkom glycerolu,nad ktorý sa navrství roztok anorganickej soli o koncentrácii 1 až 2 mól/liter v množstveminimálně rovnom objemu gélového řezu.
Vzostupný diskontinuálny gradient vodivosti nachádzajúci sa nad gélovým rezom zabrániúniku bielkoviny do elektroforetického média a zostupný gradient hustoty, nachádzajúci sanad gélovým rezom udržuje vzestupný gradient vodivosti.
Vynález umožňuje rýchlu, rutinnú, techniky nenáročná kvantitatívnu elúciu bielkovinz gélových rezov v štandardných elektroforetických aparatúrach. Eluovaná kvapalina sa zachy-tává v malom objeme - menej ako 0,2 ml. Příklad
Postup je vysvětlovaný v súvislosti s připojeným výkresom. Gélový rez obsahujúci príslušnú bielkovinu, napr. myoglobín, hovadzí sérum albuminalebo inzulín (úsek B), sa uloží do bežnej trubičky, ktorá je naplněná do 3/4 svojho obje-mu polyakrylamidovým gélom, napr. polymerizát z 10 % akrylamidu (úsek A). Nad gélový rezsa napipetuje roztok o nízkej vodivosti, napr. 0.15 ml 0,025 M tris/hydroxymethylZaminome-tánu, 0,075 M glycínu, 30 % objemových glycerolu (pH = 8,8) (úsek C). Nad úsek C sa opatrnépipetuje roztok 2 chloridu sodného (úsek D) o vysokej vodivosti a nižšej hustoty oprotiroztoku v úseku C až do horného okraja trubičky. Prevedie sa elektroforéza s opačnoupolaritou po dobu 1 až 3 hodiny (1 hodina za nepřítomnosti dodecylsulfátu sodného). Apli-kuje sa prúd 4 mA na jednu trubičku. DÍžka elúcie je závislá od druhu izolovanej bielkovi-ny, hrůbky gélového řezu a přítomnosti dodecylsulfátu sodného. Eluovaná bielkovina sa nachád-za v malom objeme v úseku C. Výtažok pri testovaných bielkovinách bol priemerne napr.při myoglobíne 95 %. V případe použitia gélových rezov, ktorých hustota je nižšia ako hus-tota roztoku v úseku C sa može hustota řezu zvýšit inkubáciou tohoto řezu v riedenom rozto-'ku izopropylalkoholu.
Vynález má uplatněnie na kvantitatívnu elúciu bielkovin z gélových rezov v aplikovanomvýskume, v biochémii, v imunologii a hematologii.
Claims (2)
- 211215
- 2 PREDMET VYNALEZU SpSsob kvantitativné;) izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov elektroforézous opačnou polaritou, vyznačujúoi sa tým, že před elektroforézou sa na gélový rez uloženýna polyakrylamidovom nosiči přidá pufrovací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácii 0,02až 0,2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu, výhodné tris/hydroxy-metyl/aminometán s prídavkom glycerolu, nad ktorý sa navrství roztok anorganickej solio koncentrácii 1 až 2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu. 1 list výkresov Severografia. n. p., závod 7, Most
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS609480A CS211215B1 (en) | 1980-09-09 | 1980-09-09 | Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS609480A CS211215B1 (en) | 1980-09-09 | 1980-09-09 | Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS211215B1 true CS211215B1 (en) | 1982-02-26 |
Family
ID=5407176
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS609480A CS211215B1 (en) | 1980-09-09 | 1980-09-09 | Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS211215B1 (cs) |
-
1980
- 1980-09-09 CS CS609480A patent/CS211215B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guzman | Improved solid‐phase microextraction device for use in on‐line immunoaffinity capillary electrophoresis | |
| Axelsen | Quantitative immunoelectrophoretic methods as tools for a polyvalent approach to standardization in the immunochemistry of Candida albicans | |
| Takács | Electrophoresis of proteins in polyacrylamide slab gels | |
| Doyle et al. | Enzyme-linked immunoadsorbent assay with electrochemical detection of. alpha. 1-acid glycoprotein | |
| WO1996022524A1 (en) | Capillary electrophoresis of glycosylated proteins | |
| EP0345782A3 (en) | Fluid analysis with particulate reagent suspension | |
| Shiba et al. | Thin-layer potentiometric analysis of lipid antigen-antibody reaction by tetrapentylammonium (tpa+) ion loaded liposomes and tpa+ ion selective electrode | |
| Eriksson et al. | Preparative capillary electrophoresis based on adsorption of the solutes (proteins) onto a moving blotting membrane as they migrate out of the capillary | |
| Ölvecká et al. | Direct determination of valproate in serum by zone electrophoresis–isotachophoresis on a column‐coupling chip | |
| Van Staden et al. | Amperometric biosensor based on D-aminoacid oxidase for the R-perindopril assay | |
| Chmelik et al. | Separation of two components of horse myoglobin by isoelectric focusing field-flow fractionation | |
| US4925545A (en) | Method of generating pH functions in electrophoresis and isoelectric focusing | |
| CS211215B1 (en) | Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels | |
| JPS5853745A (ja) | ２次元電気泳動装置 | |
| Ferslew et al. | Capillary ion analysis of potassium concentrations in human vitreous humor | |
| Raacke | Heterogeneity studies on several proteins by means of zone electrophoresis on starch | |
| KR900016760A (ko) | 당 알코올 정량측정방법과 그에 이용되는 컬럼 및 키트 | |
| WO2010017109A1 (en) | Systems and methods for quantitative analyte transfer | |
| ATE53912T1 (de) | Verfahren zur konzentrierung und bestimmung von biomolekuelen und zellen. | |
| Westwood et al. | Group-specific component: A review of the isoelectric focusing methods and auxiliary methods available for the separation of its phenotypes | |
| CA1126203A (en) | Method and apparatuses for electrophoretic immunoassay | |
| ES535553A0 (es) | Un metodo para detectar un anticuerpo o un antigeno contenido en una muestra de fluido de origen biologico. | |
| Vesterberg | Isoelectric Focusing of Acidic Proteins | |
| Krøll | Immunoelectrophoretic quantitation of trace proteins | |
| US20090314639A1 (en) | Means and devices for electro-filtration of molecules |