CS211215B1 - Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels - Google Patents

Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels Download PDF

Info

Publication number
CS211215B1
CS211215B1 CS609480A CS609480A CS211215B1 CS 211215 B1 CS211215 B1 CS 211215B1 CS 609480 A CS609480 A CS 609480A CS 609480 A CS609480 A CS 609480A CS 211215 B1 CS211215 B1 CS 211215B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
proteins
goal
concentration
liter
polyacrylamide
Prior art date
Application number
CS609480A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Matthias Otto
Original Assignee
Matthias Otto
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Matthias Otto filed Critical Matthias Otto
Priority to CS609480A priority Critical patent/CS211215B1/cs
Publication of CS211215B1 publication Critical patent/CS211215B1/cs

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

1 211215
Vynález sa týká spdsobu kvantitativnéj izolácie bielkovin z polyakrylamidových gélov.
Po detekeii bielkoviny na polyakrylamidovom géle sa doteraz bielkovina izolovala budchemickým spdsobom (depolymerizácia pomoou peroxidu vodíka) alebo elektroforézou s opačnoupolaritou. Pri chemickom spdsobe izolácie sa vo vzorke vyskytuje značné množstvo depolyme-rizovaného materiálu z nosiča (gélu). Pri elektroforéze s opačnou polaritou bolo potřebnépoužit Speciálně konstruované trubičky, alebo modifikované elektroforetické zariadenie,ktoré používají! na zachytenie bielkoviny napr. dialyzačné membrány, alebo hydroxylapatit.Použitie týchto metod izolácie je spojené s náročnou manipuláciou a zložitou přípravoujednotlivých trubičiek obsahujúcich gélové řezy. Použitie dialyzačných membrán a hydroxyl-apatitu vedie k nespecifickéj absorpci bielkovin na týchto materiáloch, čo spdsopuje ne-kvantitatívnu izoláciu bielkovin. Okrem toho sa bielkovina vo vačéine metod zachytává v znač-nom objeme, čo zvyčajne vyžaduje ďalší krok, spočívajúci v koncentrácii bielkoviny. Apliká-cia spomenutých špeciálnych trubičiek zabraňuje rutinnému spracovaniu vzoriek.
Tieto nevýhody sú odstraněné spdsobom podl’a vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom,že před elektroforézou sa na gélový rez uložený na polyakrylamidovom nosiči přidá pufro-vací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácii 0,02 až 0,2 mól/liter v množstve minimálněrovnom objemu gélového řezu, výhodné tris/hydroxymetyl/aminometán s prídavkom glycerolu,nad ktorý sa navrství roztok anorganickej soli o koncentrácii 1 až 2 mól/liter v množstveminimálně rovnom objemu gélového řezu.
Vzostupný diskontinuálny gradient vodivosti nachádzajúci sa nad gélovým rezom zabrániúniku bielkoviny do elektroforetického média a zostupný gradient hustoty, nachádzajúci sanad gélovým rezom udržuje vzestupný gradient vodivosti.
Vynález umožňuje rýchlu, rutinnú, techniky nenáročná kvantitatívnu elúciu bielkovinz gélových rezov v štandardných elektroforetických aparatúrach. Eluovaná kvapalina sa zachy-tává v malom objeme - menej ako 0,2 ml. Příklad
Postup je vysvětlovaný v súvislosti s připojeným výkresom. Gélový rez obsahujúci príslušnú bielkovinu, napr. myoglobín, hovadzí sérum albuminalebo inzulín (úsek B), sa uloží do bežnej trubičky, ktorá je naplněná do 3/4 svojho obje-mu polyakrylamidovým gélom, napr. polymerizát z 10 % akrylamidu (úsek A). Nad gélový rezsa napipetuje roztok o nízkej vodivosti, napr. 0.15 ml 0,025 M tris/hydroxymethylZaminome-tánu, 0,075 M glycínu, 30 % objemových glycerolu (pH = 8,8) (úsek C). Nad úsek C sa opatrnépipetuje roztok 2 chloridu sodného (úsek D) o vysokej vodivosti a nižšej hustoty oprotiroztoku v úseku C až do horného okraja trubičky. Prevedie sa elektroforéza s opačnoupolaritou po dobu 1 až 3 hodiny (1 hodina za nepřítomnosti dodecylsulfátu sodného). Apli-kuje sa prúd 4 mA na jednu trubičku. DÍžka elúcie je závislá od druhu izolovanej bielkovi-ny, hrůbky gélového řezu a přítomnosti dodecylsulfátu sodného. Eluovaná bielkovina sa nachád-za v malom objeme v úseku C. Výtažok pri testovaných bielkovinách bol priemerne napr.při myoglobíne 95 %. V případe použitia gélových rezov, ktorých hustota je nižšia ako hus-tota roztoku v úseku C sa može hustota řezu zvýšit inkubáciou tohoto řezu v riedenom rozto-'ku izopropylalkoholu.
Vynález má uplatněnie na kvantitatívnu elúciu bielkovin z gélových rezov v aplikovanomvýskume, v biochémii, v imunologii a hematologii.

Claims (2)

  1. 211215
  2. 2 PREDMET VYNALEZU SpSsob kvantitativné;) izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov elektroforézous opačnou polaritou, vyznačujúoi sa tým, že před elektroforézou sa na gélový rez uloženýna polyakrylamidovom nosiči přidá pufrovací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácii 0,02až 0,2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu, výhodné tris/hydroxy-metyl/aminometán s prídavkom glycerolu, nad ktorý sa navrství roztok anorganickej solio koncentrácii 1 až 2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu. 1 list výkresov Severografia. n. p., závod 7, Most
CS609480A 1980-09-09 1980-09-09 Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels CS211215B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS609480A CS211215B1 (en) 1980-09-09 1980-09-09 Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS609480A CS211215B1 (en) 1980-09-09 1980-09-09 Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS211215B1 true CS211215B1 (en) 1982-02-26

Family

ID=5407176

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS609480A CS211215B1 (en) 1980-09-09 1980-09-09 Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS211215B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Guzman Improved solid‐phase microextraction device for use in on‐line immunoaffinity capillary electrophoresis
Axelsen Quantitative immunoelectrophoretic methods as tools for a polyvalent approach to standardization in the immunochemistry of Candida albicans
Takács Electrophoresis of proteins in polyacrylamide slab gels
Doyle et al. Enzyme-linked immunoadsorbent assay with electrochemical detection of. alpha. 1-acid glycoprotein
WO1996022524A1 (en) Capillary electrophoresis of glycosylated proteins
EP0345782A3 (en) Fluid analysis with particulate reagent suspension
Shiba et al. Thin-layer potentiometric analysis of lipid antigen-antibody reaction by tetrapentylammonium (tpa+) ion loaded liposomes and tpa+ ion selective electrode
Eriksson et al. Preparative capillary electrophoresis based on adsorption of the solutes (proteins) onto a moving blotting membrane as they migrate out of the capillary
Ölvecká et al. Direct determination of valproate in serum by zone electrophoresis–isotachophoresis on a column‐coupling chip
Van Staden et al. Amperometric biosensor based on D-aminoacid oxidase for the R-perindopril assay
Chmelik et al. Separation of two components of horse myoglobin by isoelectric focusing field-flow fractionation
US4925545A (en) Method of generating pH functions in electrophoresis and isoelectric focusing
CS211215B1 (en) Method of quantitative isolation of the proteins from the polyacrylamide gels
JPS5853745A (ja) 2次元電気泳動装置
Ferslew et al. Capillary ion analysis of potassium concentrations in human vitreous humor
Raacke Heterogeneity studies on several proteins by means of zone electrophoresis on starch
KR900016760A (ko) 당 알코올 정량측정방법과 그에 이용되는 컬럼 및 키트
WO2010017109A1 (en) Systems and methods for quantitative analyte transfer
ATE53912T1 (de) Verfahren zur konzentrierung und bestimmung von biomolekuelen und zellen.
Westwood et al. Group-specific component: A review of the isoelectric focusing methods and auxiliary methods available for the separation of its phenotypes
CA1126203A (en) Method and apparatuses for electrophoretic immunoassay
ES535553A0 (es) Un metodo para detectar un anticuerpo o un antigeno contenido en una muestra de fluido de origen biologico.
Vesterberg Isoelectric Focusing of Acidic Proteins
Krøll Immunoelectrophoretic quantitation of trace proteins
US20090314639A1 (en) Means and devices for electro-filtration of molecules