CS211113B1

CS211113B1 - Method of preparing a vaccine against enzootic sheep abortion

Info

Publication number: CS211113B1
Application number: CS173080A
Authority: CS
Inventors: Stefan Schramek; Eugen Sadecky
Original assignee: Stefan Schramek; Eugen Sadecky
Priority date: 1980-03-13
Filing date: 1980-03-13
Publication date: 1982-01-29

Abstract

Vynález rieši spósob přípravy očkovacej látky proti enzootickému potratu oviec. Podstata vynálezu spočívá v tom, že sa suspenzia žítkových vakov kuřácích zárodkov infikovaných kmenom Chlamydia psittaci, spósobujúcim enzootický potrat oviec, v roztoku chloridu sodného obsahujúcom formaldehyd odstreauje, usadenina sa resuspenduje v roztoku chloridu sodného pufrovanom na pH 7,2, přidává sa trypsin a suspenzia sa inkubuje při teplote 35 až 38 °C po dobu 15 až oO minút, po nasledujúcom odstředění sa usadenina resuspenduje v alkalickom roztoku, v ktorom sa inkubuje pri teplote 25 až 37 °C po dobu ,5 až 30 minút, po zneutralizovaní sa suspenzia extrahuje éterom, pričom vodné fáza odstreauje, usadenina sa resuspenduje a vystaví pósobeniu ultrazvuku. Popísaný spósob zabezpečuje získanie neinfekčnej imunogénnej očkovacej látky použitelnej vo veterinárnej praxi na ochranu oviec před infekciou póvodcom nákazy Chlamydia psittaci.The invention provides a method for preparing a vaccine against enzootic abortion in sheep. The essence of the invention lies in the fact that a suspension of yolk sacs of chicken embryos infected with the Chlamydia psittaci strain, which causes enzootic abortion in sheep, is centrifuged in a sodium chloride solution containing formaldehyde, the sediment is resuspended in a sodium chloride solution buffered to pH 7.2, trypsin is added and the suspension is incubated at a temperature of 35 to 38 °C for 15 to 00 minutes, after subsequent centrifugation, the sediment is resuspended in an alkaline solution in which it is incubated at a temperature of 25 to 37 °C for .5 to 30 minutes, after neutralization, the suspension is extracted with ether, while the aqueous phase is centrifuged, the sediment is resuspended and exposed to ultrasound. The described method provides for obtaining a non-infectious immunogenic vaccine usable in veterinary practice for protecting sheep from infection with the causative agent of the disease Chlamydia psittaci.

Description

Vynález rieši spdsob přípravy očkovacej látky proti enzootickému potratu oviec použiteTnej vo veterínárskej praxi na ochranu oviec před infekciou pdvodcom nákazy Chlamydia psittaci.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides a method for the preparation of a vaccine against enzootic abortion of sheep usable in veterinary practice for the protection of sheep against infection by a Chlamydia psittaci infection.

Pdvodca enzootičkého potratu oviec Chlamydia psittaci zapříčiňuje infekčně ochorenie prejavujúce sa predovšetkým hromadnými potratmi spravidla v poslednom mesiaci brezivosti. Nákaza je zoonóza vyskytujúca sa v krajinách s vyspělým chovom oviec a jej prevenciu umožňuje ochranné očk·-.rentě. PodTa údajov v odbornej literatúre sa při príprave očkovacej látky nevěnovala dostatočná pozornost pdvodu a spracovaniu chlamýdiového kmena používaného na přípravu vakcíny. Dnej je známe, že účinnosť ochranného očkovania je zvyšovaná použitím homologných kmenov na přípravu vakcín, čo má osobitný význam pri núdzovom očkovaní.The cause of enzootic abortion of Chlamydia psittaci sheep causes infectious diseases manifested mainly by mass abortions, usually in the last month of pregnancy. The disease is a zoonosis occurring in countries with advanced sheep breeding and is prevented by protective eyes. According to the literature, insufficient attention has been paid to the origin and processing of the chlamydial strain used to prepare the vaccine when preparing the vaccine. It is well known that protective vaccine efficacy is enhanced by the use of homologous strains for the preparation of vaccines, which is of particular importance in emergency vaccination.

Predmetom vynálezu je spdsob ktorým třeba postupovat aby sa zo Zítkových vakov kuřácích zárodkov infikovaných pdvodcom nákazy, homológnym kmenom Chlamydia psittaci, získala účinná a neškodná očkovacia látka vhodná na špecifickú prevenciu oviec před infekciou Chlamydia psittaci a na núdzové očkovanie v čase hromadného zmetania bahníc.It is an object of the present invention to provide an effective and harmless vaccine suitable for the specific prevention of sheep against Chlamydia psittaci infection and for emergency vaccination at times of mass sweeping from poultry seed bags infected with the pathogen, the homologous strain of Chlamydia psittaci.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že sa suspenzia Sítkových vakov kuřácích zárodkov infikovaných kmeňom Chlamydia psittaci, spdsobujúcim enzootický potrat oviec, v roztoku chloridu sodného obsahujúceho 0,2 až 0,4 % formaldehydu odstreďuje, usadenina sa resuspenduje v roztoku chloridu sodného pufrovanom na pH 7,2, přidává sa trypsin a suspenzia sa inkubuje pri teplote 35 až 38 °C po dobu 15 až 60 minút, po následnom odstředění sa usadenina resuspenduje v alkalickom roztoku, v ktorom sa inkubuje pri teplote 25 až 37 °C po dobu 1 5 až 30 minút, po zneutralizovaní sa suspenzia extrahuje éterom, pričom vodná fáza sa odstreďuje, usadenina sa resuspenduje a vystaví sa pdsobeniu ultrazvuku.SUMMARY OF THE INVENTION The invention is based on the centrifugation of a suspension of sieve bags of smoking germs infected with the chlamydia psittaci strain causing enzootic abortion in sodium chloride solution containing 0.2 to 0.4% formaldehyde, and the pellet is resuspended in sodium chloride buffered to pH 7 2, trypsin is added and the suspension is incubated at 35-38 ° C for 15-60 minutes, after centrifugation, the pellet is resuspended in an alkaline solution in which it is incubated at 25-37 ° C for 15-60 ° C. 30 minutes, after neutralization, the suspension is extracted with ether, the aqueous phase is centrifuged, the pellet is resuspended and subjected to sonication.

Popísaný spdsob zabezpečuje získanie neinfekčnej imunogénnej suspenzie chlamidií s dobrým preventivným ochranným účinkom po dvojrázovom podkožnom podaní vo vhodnej koncentrácii, a naviac umožňuje podstatné znížiť počty potratov pri jej použití ako núdzového očkovania v priebehu hromadných zmetaní.The method described provides for obtaining a non-infectious immunogenic suspension of chlamidias with a good preventive protective effect after two-subcutaneous subcutaneous administration at a suitable concentration, and furthermore allows a significant reduction in the number of abortions when used as emergency vaccination during mass sweeping.

Fyzikálně a chemické pdsobenie použité v postupe odstraňuje možnost kontaminácie konečného preparátu živými mikroorganizmami, ktorými mdžu byť spontánně infikované kuracie zárodky.The physical and chemical treatment used in the process eliminates the possibility of contamination of the final preparation with living microorganisms, which may be spontaneously infected with chicken embryos.

Účinnosť očkovacej látky bola experimentálně overená na zvieratách v terénnych pokusech. V chovoch postihnutých enzootickým potratom oviec sa po vakcinácii znížili počty potratov u bahníc napr. při preventívnom očkovaní zamořeného chovu (170 oviec) nedošlo v ďalšej graviditě k hromadnému zmetaniu. Pri núdzovom očkovaní (395 kusov), z ktorých do času vakcinácie zmetalo 61 zvierat, nechádzajúcich sa v 4. a 5.mesiaci brezivosti po převedení vakcinácie došlo iba k ojedinělým zmetaniam nedosahujúcim ani 2 % celkového počtu brezivých zvierat.The efficacy of the vaccine has been experimentally verified in animals in field trials. In farms affected by enzootic abortion of sheep, the number of abortions in ewes e.g. preventive vaccination of contaminated breeding (170 sheep) did not result in mass confusion in another pregnancy. Emergency vaccinations (395 animals), of which 61 animals left in the 4th and 5 months of gestation after vaccination had only been isolated by isolated sweeping, less than 2% of the total number of pregnant animals.

Využitie vynálezu je možné v odvetviach zaoberajúcich sa výrobou očkovacích látok pre domáce a užitkové zvieratá.Use of the invention is possible in the fields of vaccine production for domestic and commercial animals.

PřikladExample

Zo žítkových vakov kuřácích zárodkov infikovaných pdvodcom enzootickeho potratu oviec Chlamydia psittaci sa připraví 20% suspenzia v molárnom roztoku chloridu sodného obsahujúca 0,2 % formaldehydu. Po 72 hodinách státia pri 4 °C sa suspenzia oentrifuguje pri 30 000 xg 30 minút. Úsadky sa resuspendujú v 1/10 pdvodného objemu 0,05 molárnym fosfátom pufrovanom 0,15 molárnom roztoku chloridu sodného pH 7,2 a přidá sa trypsin do výslednej koncentrácie 0,5 % a inkubuje sa 30 minút při 37 °C.A 20% suspension in a molar sodium chloride solution containing 0.2% formaldehyde is prepared from the rye bags of smoking embryos infected with Chlamydia psittaci. After 72 hours at 4 ° C, the suspension is centrifuged at 30,000 xg for 30 minutes. The slides are resuspended in 1/10 of the original volume of 0.05 molar phosphate buffered 0.15 molar sodium chloride solution pH 7.2 and trypsin is added to a final concentration of 0.5% and incubated for 30 minutes at 37 ° C.

Po skončení inkubácie sa suspenzia centrifuguje pri 30 000 xg 20 minút, úsadok sa resuspenduje v 1/5 pčvodného objemu 0,05 molárneho roztoku hydroxidu sodného, inkubuje sa 30 minút při 37 °C. Alkalické pčsobenie sa ukončí prídavkom kyseliny chlorovodíkovéj, aby pH suspenzie bolo 7,2 a suspenzia sa v deliacom lieviku pretrepe s rovnakým objemom dietyléteru. Vodná fáza sa odoberie, odstráni sa prebytočný éter a suspenzia sa centrifuguje 20 minút pri 30 000 xg. Úsadky sa resuspendujú v 0,15 molárnom roztoku chloridu sodného na koncentráciu 1 mg/ml, vystavia 5 minút účinku ultrazvuku frekvencie 20 kHz na přístroji výkonu 250 W a konzervujú prídavkom 0,05 % formaldehydu. Získaná suspenzia sa používá na očkovanie oviec.After the incubation is complete, the suspension is centrifuged at 30,000 xg for 20 minutes, the pellet is resuspended in 1/5 of the original volume of 0.05 molar sodium hydroxide solution, and incubated for 30 minutes at 37 ° C. The alkaline treatment is terminated by the addition of hydrochloric acid to bring the pH of the suspension to 7.2 and the suspension is shaken in an equal volume of diethyl ether in a separatory funnel. The aqueous phase is collected, excess ether is removed and the suspension is centrifuged at 30,000 xg for 20 minutes. The pellets are resuspended in 0.15 molar sodium chloride solution to a concentration of 1 mg / ml, subjected to ultrasound at 20 kHz for 5 minutes on a 250 W apparatus, and preserved by the addition of 0.05% formaldehyde. The suspension obtained is used to vaccinate sheep.

Claims

Method for preparing an enzootic abortion vaccine, characterized in that the suspension of the throat bags of chick embryos infected with Chlamydia psittaci causing enzootic abortion in the sodium chloride solution containing 0.2 to 0.4% formaldehyde is centrifuged, the pellet is resuspended in the chloride solution sodium buffered to pH 7.2, trypsin is added and the suspension is incubated at 35-38 ° C for 15-60 minutes, after centrifugation, the pellet is resuspended in an alkaline solution in which it is incubated at 25-37 ° C. After 15 to 30 minutes, after neutralization, the suspension is extracted with ether, the aqueous phase is centrifuged, the pellet is resuspended and subjected to ultrasound.