CS209382B1 - A method for preparing an antifungal antibiotic Mucidermin - Google Patents
A method for preparing an antifungal antibiotic Mucidermin Download PDFInfo
- Publication number
- CS209382B1 CS209382B1 CS75880A CS75880A CS209382B1 CS 209382 B1 CS209382 B1 CS 209382B1 CS 75880 A CS75880 A CS 75880A CS 75880 A CS75880 A CS 75880A CS 209382 B1 CS209382 B1 CS 209382B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- amount
- weight
- mucidermin
- culture
- millet
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Způsob přípravy protihoubového antibiotika Muciderminu Spofa pro povrchovou therapii kožních mykóz, které jsou vyvolávány vláknitými a kvasinkovými houbovými mikroorganismy, jako např. kandidóz, trichofycií, keratomykóz, epidermofycií apod. Podstatou vynálezu je, že ze submersní kultury basidiomycety Oudemansiella mucida (Schrad. ex Fr.) Hohn. se připraví kultura na prose (prosná konzerva), kterou se přímo bez dalšíchmezistupňů očkují očkovací fermentory a z těchto dále produkční fermentory s živným médiem, obsahujícím jako zdroj uhlíku glukózu anebo glycerol v množství do 20 % hmot. počítáno na hmotnost média a jako zdroj dusíku řepnou případně třtinovou melasu v množství 0,5 až 2 % hmot., nebo kukuřičnou máčecí vodu v množství od 1 až 3 % hmot. v kombinaci s kyselým hydrolysátem kaseinu v množství od 0,2 do 2 % hmot. a dále síran hořečnatý v množství od 1 % hmot. a stopová množství minerálních solí, přičemž fermantace probíhá při teplotě 27 až 29 °C při počátečním pH 5 až 6 po dobu 200 až 300 hodin, načež se z media izoluje známým postupem protihoubové antibiotikum. Ve srovnání s postupem dle základního čs. patentu č. 136 495 postup dle vynálezu zkrácení výrobního procesu přináší větší výtěžnost’ a lepší stabilitu produkce Muciderminu.Method of preparing the antifungal antibiotic Mucidermin Spofa for surface therapy of skin mycoses caused by filamentous and yeast-like fungal microorganisms, such as candidiasis, trichophytosis, keratomycosis, epidermophytosis, etc. The essence of the invention is that a culture on millet (millet preserve) is prepared from a submerged culture of the basidiomycete Oudemansiella mucida (Schrad. ex Fr.) Hohn., which is directly inoculated without further intermediate stages into inoculating fermenters and from these into production fermenters with a nutrient medium containing glucose or glycerol as a carbon source in an amount of up to 20% by weight calculated on the weight of the medium and beet or cane molasses as a nitrogen source in an amount of 0.5 to 2% by weight, or corn steep liquor in an amount of 1 to 3% by weight in combination with acid hydrolysate of casein in an amount of 0.2 to 2% by weight. and further magnesium sulfate in an amount of 1% by weight and trace amounts of mineral salts, while fermentation takes place at a temperature of 27 to 29 °C at an initial pH of 5 to 6 for 200 to 300 hours, after which the antifungal antibiotic is isolated from the medium by a known procedure. Compared to the procedure according to the basic Czechoslovak patent No. 136 495, the procedure according to the invention, shortening the production process, brings a higher yield and better stability of Mucidermin production.
Description
(54) Způsob přípravy protihoubového antibiotika Muciderminu(54) A method for preparing the antifungal antibiotic Mucidermin
Způsob přípravy protihoubového antibiotika Muciderminu Spofa pro povrchovou therapii kožních mykóz, které jsou vyvolávány vláknitými a kvasinkovými houbovými mikroorganismy, jako např. kandidóz, trichofycií, keratomykóz, epidermofycií apod.Process for the preparation of the anti-fungal antibiotic Mucidermin Spofa for topical therapy of cutaneous mycoses caused by filamentous and yeast fungal microorganisms such as candidiasis, trichophycia, keratomycosis, epidermophycia and the like.
Podstatou vynálezu je, že ze submersní kultury basidiomycety Oudemansiella mucida (Schrad. ex Fr.) Hohn. se připraví kultura na prose (prosná konzerva), kterou se přímo bez dalších mezistupňů očkují očkovací fermentory a z těchto dále produkční fermentory s živným médiem, obsahujícím jako zdroj uhlíku glukózu anebo glycerol v množství do 20 % hmot. počítáno na hmotnost média a jako zdroj dusíku řepnou případně třtinovou melasu v množství 0,5 až 2 % hmot., nebo kukuřičnou máčecí vodu v množství od 1 až 3 % hmot. v kombinaci s kyselým hydrolysátem kaseinu v množství od 0,2 do 2 % hmot. a dále síran hořečnatý v množství od 1 % hmot. a stopová množství minerálních solí, přičemž fermantace probíhá při teplotě 27 až 29 °C při počátečním pH 5 až 6 po dobu 200 až 300 hodin, načež se z media izoluje známým postupem protihoubové antibiotikum. Ve srovnání s postupem dle základního čs.It is an object of the invention that from the submersible culture of the basidiomycetes Oudemansiella mucida (Schrad. Ex Fr.) Hohn. a prosa culture (millet can) is prepared which inoculates inoculum fermenters directly without further intermediate steps and from these further producing fermenters with a nutrient medium containing glucose or glycerol as a carbon source in an amount of up to 20% by weight. calculated on the weight of the medium and, as a nitrogen source, beet or cane molasses in an amount of 0.5 to 2% by weight, or corn steeping water in an amount of from 1 to 3% by weight. in combination with acid casein hydrolyzate in an amount of from 0.2 to 2 wt. and magnesium sulfate in an amount of from 1 wt. and trace amounts of mineral salts, wherein the fermantization is carried out at a temperature of 27 to 29 ° C at an initial pH of 5 to 6 for 200 to 300 hours, after which the antifungal antibiotic is isolated from the medium by a known method. In comparison with the procedure according to the basic MS.
patentu č. 136 495 postup dle vynálezu zkrácení výrobního procesu přináší větší výtěžnost’ a lepší stabilitu produkce Muciderminu.No. 136,495, the process of the invention shortening the manufacturing process results in greater yield and improved stability of Mucidermin production.
Vynález se týká způsobu přípravy protihoubového antibiotika.The invention relates to a process for preparing an antifungal antibiotic.
Protihoubové antibiotikum (Mucidermin, Spofa) dle vynálezu sé používá pró povrchovou terapii kožních mykóz, vyvolávaných kvasinkovými i vláknitými houbovými mikroorganismy jako například kandidos, trichoíycií, keratomykóz a epidermofycií.The anti-fungal antibiotic (Mucidermin, Spofa) according to the invention is used for topical treatment of skin mycoses caused by yeast and filamentous fungal microorganisms such as candidiasis, tricholycia, keratomycoses and epidermophycia.
Je to antibiotikum vyráběné fermantačním postupem pomocí myceliální kultury basidiomycety Oudemansiella mucisa (Schrad. ex Fr.) Hóhn. (dále jen Oudemansiella múcida) podle čs. patentu č. 136 492, s navazující extrakcí a izolací antibiótické substance podle č. patentu č. 136 495.It is an antibiotic produced by the fermentation process using a mycelial culture of the basidiomycetes Oudemansiella mucisa (Schrad. Ex Fr.) Hohn. (Oudemansiella múcida) according to MS. No. 136,492, with the subsequent extraction and isolation of the antibiotic substance of No. 136,495.
Dosavadní způsob přípravy tohoto antibiotika má některé nevýhody pokud jde ó fermantační přípravu. Jsou to zejména:The prior art method of preparing this antibiotic has some disadvantages in terms of fermant preparation. These are in particular:
a) nemožnost dlouhodobějšího uchovávání submersního vegetativního inokula bez ohrožení výtěžnosti produkční fermentace; inokulum je nutno nově připravovat před každou fermentací, což při pomalém nárůstu mycelia přenášeného z agarové kultury přináší značné časové ztráty(a) the impossibility of long-term storage of submersible vegetative inoculum without compromising the yield of the production fermentation; the inoculum has to be newly prepared before each fermentation, which results in considerable time losses when the mycelium transferred from the agar culture is slowly increased
b) relativní variabilita produkce aňtibiotika v závislosti na kvalitě vegetativního inokula a ná kvalitě kukuřičného výtěžku, používaného při dosavadní průmyslové výrobě jako hlavního zdroje dusíku, dále na teplotních vlivech ápód.(b) the relative variability in the production of antibiotics depending on the quality of the vegetative inoculum and the quality of the maize yield used in previous industrial production as the main source of nitrogen, as well as on the temperature effects of the ground.
c) relativní dlouhodobost celého fermentačního postupu v důsledku složité přípravy inokula, která je ovlivňována pomalejší růstovou rychlostí produkční houby a uvedenou dosavadní nutností přípravy prvního pomňožovacího stupně s použitím mycelia z agarové uchovávací kultury, s navazujícími dalšími pomnožovacúni stupňi v rozsahu úměrném objemu produkčního fermentačního stupně.c) the relative longevity of the entire fermentation process due to the complex preparation of the inoculum, which is influenced by the slower growth rate of the production fungus and the hitherto need to prepare a first propagation step using mycelium from an agar storage culture.
Výhodou zlepšeného způsobu přípravy antibiotika podle vynálezu je možnost přímého očkování velkých fermentačních objemů bez inokulačních mezistupňů, čímž se celková doba kultivace zkrátí nejméně o 300 hodin, dále snadná manipulace a dlouhodobá skladovatelnóst inókulačního materiálu ve formě prosné konzervy.The advantage of the improved method of preparing the antibiotic according to the invention is the possibility of direct inoculation of large fermentation volumes without inoculation intermediate steps, thereby shortening the total cultivation time by at least 300 hours, easy handling and long-term storage of the inoculating material in the form of millet.
Důsledkem průmyslového zavedení tohoto fermentačníha postupu je podstatné zvýšení výtěžnosti účinné látky.The industrial introduction of this fermentation process results in a substantial increase in the yield of the active ingredient.
Podstatou způsobu přípravy protihoubového antibiotika Mucidermiňu dle vynálezu je, že ze submersní kultury basidiomycety Oudemansiella ; mucida (Schrad. ex Fr.) Hóhn. se připraví kultura ,na prose (prosná konzerva), kterou se přímo bez dalších mezistupňů očkují očkovací fermentory a z těchto dále produkční feřmentory s živným .médiem, obsahujícím jako zdroj uhlíku glukózu anebo glycerol v množství do 20 % hmot. (počítáno na hmotnost média) a jako zdroj dusíku řepnou nebo třtinovou melasu v množství od 2 do 8 % hmot., v kombinaci s peptonem v množství 0,5 až 2 % hmot., nebo kukuřičnou máčecí vodu v množství od 1 do 3 % hmot. v kombinaci s kyselým hydrolysátem kaseinu v množství od 0,2 do 2 % hmot. a dále síran hořečnatý v množství do 1 % hmot., případně uhličitan vápenatý v množství do 10 % hmot. a stopové množství minerálních solí jako chloridy, fosforečnany, jodidy, boritany anebo uhličitany, a to vápenaté, sodné, draselné, hořečnaté, zinečnaté, měďnaté, kobaltnaté, manganaté, železnaté nebo železité, přičemž feťmentace probíhá při teplotě 27 až 29 °C při počátečním pH 5 pž 6 po dobu 200 až 300 hod., načež se z medih izoluje známým postupem protihoubové antibiotikum.The essence of the process for the preparation of the anti-fungal antibiotic Mucidermin according to the invention is that of a submersible culture of Oudemansiella basidiomycetes; mucida (Schrad. ex Fr.) Höhn. A culture is prepared on a prose (millet), which is used to inoculate inoculum fermenters directly without further intermediate stages and from these further producing fermenters with nutrient medium containing glucose and / or glycerol in an amount of up to 20% by weight. (calculated on the weight of the medium) and as a nitrogen source, beet or cane molasses in an amount of 2 to 8% by weight, in combination with a peptone in an amount of 0.5 to 2% by weight, or corn steeping water in an amount of 1 to 3% wt. in combination with acid casein hydrolyzate in an amount of from 0.2 to 2 wt. and magnesium sulfate in an amount of up to 1 wt.%, optionally calcium carbonate in an amount of up to 10 wt. and trace amounts of mineral salts such as chlorides, phosphates, iodides, borates and / or carbonates of calcium, sodium, potassium, magnesium, zinc, copper, cobalt, manganese, ferrous or ferric, and the fermentation takes place at 27-29 ° C at the initial pH of 5 to 6 for 200 to 300 hours, and then the antifungal antibiotic is isolated from the spirits by a known method.
! Způsob přípravy základního inokulačního materiálů] tj. prosné konzervy, je založen na použití vjhčeného sterilního prosa stacionárně prorostlého myceliem produkční houby, pocházejícím z udržovací agarové kultury s prověřenou produkční sehopností. V případě produkčního kmene basidjonaycety Oudemansiella mucida nejde o materiál snorulující, nýbrž o vegetativní mycelium prorostlé zrnky prosa. Prosných konzerv lze používat jako zyróje inokulačního materiálu pro fermentace ! The process for preparing the basic inoculum materials], i.e., canned millet, is based on the use of a moistened sterile millet stationary overgrown with mycelium of a production fungus originating from a maintenance agar culture with proven production efficiency. In the case of the Oudemansiella mucida basidjonayceta production strain, this is not a scorch material but a vegetative mycelium of overgrown millet grains. Millet cans can be used as zyroses of inoculation material for fermentation
Í bó k dalšímu přeočkování na proso nebo na vnou půdu (přes submersní inokulum). Kulturu ódukční houby na prose lze dlouhodobě uchováJat (až 6 měsíců při +4 °C) bez negativního vlivnění její produkční schopnosti, Dále ji lze římo použít k očkování dalších submersních inokulačních stupňů, což vzhledem k většímu počtu růstových center je spojeno s rychlejším nárůstem a výsledným relativním zkrácením výrobního procesu. S ohledem ňa možnost jejího dlouhodobého uchovávám lze prosné konzervy hromadně připravovat z prověřeného myceliálního materiálu a postupně je používat pro očkování příslušných fermentačních šarží, což zaručuje průběžnou stabilitu produkce antibiotika a odpomáhá kolísání výtěžku z jednotlivých ferrhentací.Ó bó to further re-inoculate millet or external soil (via submersible inoculum). The culture of the ooducous fungus on prose can be kept for long periods (up to 6 months at +4 ° C) without adversely affecting its production ability. It can also be used directly to inoculate other submersive inoculation stages, which is associated with faster growth due to more growth centers. resulting relative shortening of the production process. Due to the possibility of its long-term preservation, millet cans can be prepared in bulk from proven mycelial material and gradually used for inoculation of the respective fermentation batches, which ensures continuous stability of antibiotic production and helps to fluctuate yield from individual ferrhentations.
Přesný teplotní režim při fermentační produkciExact temperature regime in fermentation production
Mucidermiňu v rozsahu udržované kultivační teploty 27 až 29 °C vede k průkaznému zvýšení maximální úrovně produkce antibiotika o 30 až, 140 %, v závislosti na složení použité fermentační půdy, ve srovnání s dřívějšími fermentacemi prováděnými při teplotě kolem 25 °C.Muciderin over the maintained culture temperature of 27-29 ° C results in a significant increase in the maximum level of antibiotic production by 30-140%, depending on the composition of the fermentation broth used, compared to earlier fermentations carried out at a temperature of about 25 ° C.
Kvalitativní a kvantitativní změny inokulačního a fermentačního živného média zahrnují, zejména zvýšenou koncentraci glukosy, nebo použití glycerolu a použití kombinace řepňé nebo třtinové melasy a peptonu místo kukuřičné máčecí vody, jejíž kvalita silně ovlivňuje fermentační výtěžky antibiotika, případně přídavek kyselého hydrolysátu kaseinu do půdy s kukuřičnou máčecí vodou. Též v inokulační půdě lze kukuřičnou máčecí vodu nahradit kombinací melasy s peptonem.Qualitative and quantitative changes to the inoculation and fermentation nutrient media include, in particular, increased glucose concentration, or the use of glycerol and the use of a combination of beet or cane molasses and peptone instead of maize steeping water whose quality strongly affects fermentation yields of the antibiotic. soaking water. Also in the inoculation soil, corn steeping water can be replaced by a combination of molasses and peptone.
Tyto specifické úpravy složení kultivačního média v případné kombinaci s dalším přídavkem živin během fermentace a upraveným teplotním režimem vedou ke zvýšeným produkcím Mucidenňinu, na úrovni cca 1000 až 2000 pg/ml. 1 These specific adjustments in the composition of the culture medium in combination with the additional nutrient addition during fermentation and the adjusted temperature regime result in increased production of Mucidene, at a level of about 1000 to 2000 pg / ml. 1
Prakticky lze zlepšený postup fermentační produkce Mucidermiňu provádět podle následujících , příkladů, aniž se na tyto výlučně omezuje. Úroveň produkce Muciderminu byla stanovena plotnovou difusní mikrobiologickou metodou s použitím Candida pseudotropicalis jako citlivého mikroorganismu nebo kvantitativní plynovou chromatografií, a je vyjadřována v mikrogramech Muciderminu na 1 ml fermentačního vzorku.In practice, the improved process for fermentative production of Mucidermin can be carried out according to the following examples, without being limited thereto. The level of Mucidermin production was determined by the plate diffusion microbiological method using Candida pseudotropicalis as a susceptible microorganism or by quantitative gas chromatography, and is expressed in micrograms of Mucidermin per ml of fermentation sample.
Příklad 1Example 1
Inokulační materiál na prose (tzv. prosné konservy) se připraví následovně:Inoculation material on the prosa (so-called millet cans) is prepared as follows:
Na 500 g vodou promytého prosa se přidá 200 ml vody a vaří se do odpaření. Pak se proso ponechá 30 min. přikryté, načež se rozprostře na filtrační papír a po vychladnutí rozplní po cca 25 ml do 250 ml Erlenmayerových baněk (prosná konzerva I). Lze připravovat i prosné konzervy II o dvojnásobném objemu 50 ml prosa v 500 ml Erlenmayerově baňce. Sterilizuje se autoklávováním frakcionovaně dvakrát po 30 min. při 120 °C. Po roztřepání se proso naočkuje 2,5 ml resp. 5 ml (prosná konzerva I resp. II) narostlého submersního vegetativního inokula a inkubuje se za občasného protřepání (jednou za 24 hod.) po dobu 7 až 10 dní při 25 °C. Prosná zrnka musí být dobře prorostlá a obalená bílým vatovitým myceliem. Při kultivaci je nutno dbát na přiměřenou vlhkost vzduchu; materiál má být sypký, ale ne příliš suchý. Skladovací teplota je +5 °C. Přibližně 1/10 obsahu prosné konzervy I sa naočkuje do 1000 ml inokulační půdy o složení 6 % glukózy, 4 % řepné melasy, 1 % peptonu, 0,2 % MgSO4.7 H2O, 0,02 % chloramfenikolu (pro vyloučení případné bakteriální kontaminace) a kultivuje se ve skleněném laboratorním fermentoru o obsahu 2 1 při teplotě 25 °C, vzdušnění 0,5 1/min. a míchání 600 obr./min. po dobu 168 hod. Obsahem skleněného laboratorního fermentoru (cca 1000 ml) se naočkuje 10 1 produkční půdy o složení 12 % glukózy, % řepné melasy, 1 % peptonu, 4 % CaCO3, 0,2 % MgSO . 7 H2O a 0,02 % chloramfenikolu. Kultivace probíhá ve fermentoru z nerezavějící oceli o obsahu 20 1 při teplotě 28 °C ± 0,5 °C, vzdušnění 51 vzduchu/min. a míchám 400 obr./min. Ve 100. a 144. hodině kultivace se přidá vždy po 2 % glukózy a 1 % řepné melasy ve formě sterilního vodného roztoku. V 264. hodině kultivace byl zjištěn obsah účinné látky 1760 pg/ml. Kultivace byla ukončena a izolace provedena postupem podle čs. patentu 136 495. Příklad 2Add 200 ml of water to 500 g of water-washed millet and boil until evaporated. The millet is then left for 30 min. covered, then spread on filter paper and, after cooling, fill to approx. 25 ml in 250 ml Erlenmeyer flasks (canned I). It is also possible to prepare canned millet II with a double volume of 50 ml millet in a 500 ml Erlenmayer flask. Sterilize by autoclaving fractionated twice for 30 min. at 120 ° C. After shaking, the millet is inoculated with 2.5 ml. 5 ml (canned I and II, respectively) of the grown submersible vegetative inoculum and incubated with occasional shaking (once every 24 hours) for 7-10 days at 25 ° C. The millet grains must be well grown and covered with white cotton mycelium. Adequate air humidity must be ensured during cultivation; the material should be loose but not too dry. The storage temperature is + 5 ° C. Approximately 1/10 of the canned I content is inoculated into 1000 ml of inoculum medium containing 6% glucose, 4% beet molasses, 1% peptone, 0.2% MgSO 4 .7H 2 O, 0.02% chloramphenicol (to eliminate bacterial contamination) and cultured in a 2 L glass laboratory fermenter at 25 ° C, aeration of 0.5 L / min. and stirring 600 rpm. The laboratory glass fermenter (ca. 1000 ml) was seeded with 10 L of 12% glucose,% molasses, 1% peptone, 4% CaCO 3 , 0.2% MgSO. 7 H 2 O and 0.02% chloramphenicol. Cultivation is carried out in a 20 L stainless steel fermenter at a temperature of 28 ° C ± 0.5 ° C, an aeration rate of 51 air / min. and stir 400 ipm. At 100 and 144 hours of culture, 2% glucose and 1% beet molasses are added each as a sterile aqueous solution. The active ingredient content was found to be 1760 pg / ml at 264 hours of culture. The cultivation was terminated and the isolation was carried out according to the procedure of MS. No. 136,495. Example 2
Inokulační materiál na prose (tzv. prosné konzervy) se připravují jako u příkladu 1. Obsahem prosných konzerv II se naočkuje 150 1 inokulační půdy o složení 6 % glukózy, 2 % kukuřičné máčecí vody, 1 % peptonu, 0,2 % MgSO4.7 H2O á 0,02 % chloramfenikolu ve fermentoru z nerezavějící oceli o obsahu 300 1 a kultivuje se při teplotě 25 °C, vzdušnění 75 1 vzduchu/min. a míchám 190 obr./min. po dobu 168 hod. Postup se provede současně ve dvou stejných fermentorech. 300 litry takto získaného submersního vegetativního inokula se naočkuje 3000 1 produkční půdy o složení % glukózy, 1 % peptonu, 3 % řepné melasy, 0,2 % MgSO4.7 H2O a 0,02 % chloramfenikolu ve fermentoru z nerezavějící oceli o obsahu 5000 1. Kultivuje se při 28 °C ± 0,5 °C, vzdušnění 1500 1 vzduchu/min. a míchání 200 obr./min. Ve 100. a 144. hodině kultivace se přidá vždy po 2 % glukózy a 1 % řepné melasy ve formě sterilního vodného roztoku. V 240. hodině kultivace obsahovala fermentační půda 1280 pg účinné látky/ml. Izolace byla provedena postupem podle čs. patentu 136 495.Inoculation material to simple (ie. Millet canned) were prepared as in Example 1. The content of canned prosných II is inoculated with 150 1 of inoculation broth of the composition 6% glucose, 2% corn steepwater, 1% peptone, 0.2% MgSO4. 7 H 2 O 0,0 0.02% chloramphenicol in a 300 L stainless steel fermenter and cultured at 25 ° C, aeration 75 L air / min. and I stir 190 ipm. The process is carried out simultaneously in two identical fermenters. 300 liters of the submersible vegetative inoculum thus obtained were inoculated with 3000 l of a production medium containing% glucose, 1% peptone, 3% beet molasses, 0.2% MgSO 4 .7H 2 O and 0.02% chloramphenicol in a stainless steel fermenter. content 5000 1. Cultivated at 28 ° C ± 0.5 ° C, aeration 1500 l air / min. and stirring at 200 rpm. At 100 and 144 hours of culture, 2% glucose and 1% beet molasses are added each as a sterile aqueous solution. At 240 hours of culture, the fermentation broth contained 1280 pg of active ingredient / ml. The isolation was carried out according to the procedure of Art. No. 136,495.
Příklad 3Example 3
Inokulační materiál na prose (tzv. prosné kon-í zervy) se připraví jako u příkladu 1. Přibližně 1/10 obsahu prosné konservy I se naočkuje do 1000 ml inokulační půdy o složení 6 % glukózy, 2 % kukuřičné máčecí vody, 0,2 % MgSO4.7H2Ó a 0,02 % chloramfenikolu a kultivuje se ve skleněném laboratorním fermentoru o obsahu 2 1 pri teplotě 25 °C, vzdušnění 0,5 1 vzduchu/min. a míchání 600 obr./min. po dobu 168 hod. 100 ml takto připraveného Submersního vegetativního inokula se použije k očkování 900 ml produkční půdy o složení 6 % glukózy, 6 % glycerolu, 4 % kukuřičné máčecí vody (CSL), 0,2 % MgSO4 .7H2O, 0,02 % chloramfenikolu a 0,5 % kyselého hydrolyzátu kaseinu. Kultivace probíhá za stejných podmínek jako u inokula s tím rozdílem, že kultivační teplota je 28 °C ± 0,5 °C. Pri ukončení kultivace v 264. hodině byl nalezen obsah účinné látky 1485 pg/ml. Kontrolní systém, odlišný pouze nepřítomností kyselého hydrolyzátu kaseinu, poskytl pouze 1100 pg/ml účinné látky. Izolace byla provedena postupem podle čs. patentu 136 495. Příklad 4The inoculum material on the prosa (so-called millet canned) is prepared as in Example 1. Approximately 1/10 of the millet canned content I is inoculated into 1000 ml of inoculum medium containing 6% glucose, 2% corn steeping water, 0.2 % MgSO 4 .7H 2 O and 0.02% chloramphenicol and cultured in a 2 L glass laboratory fermenter at 25 ° C, 0.5 L air / min. and stirring 600 rpm. For 168 hours, 100 ml of the Submerged vegetative inoculum thus prepared is used to inoculate 900 ml of 6% glucose production medium, 6% glycerol, 4% corn steep water (CSL), 0.2% MgSO 4 .7H 2 O, 0.02% chloramphenicol and 0.5% acid hydrolyzate casein. The cultivation is carried out under the same conditions as the inoculum, except that the cultivation temperature is 28 ° C ± 0.5 ° C. At the end of the culture at 264 hours, an active substance content of 1485 pg / ml was found. The control system, differentiated only by the absence of an acid hydrolyzate casein, yielded only 1100 pg / ml of active ingredient. The isolation was carried out according to the procedure of Art. No. 136,495. Example 4
Inokulační materiál na prose (tzv. prosné konzervy) byl připraven jako u příkladu 1. Obsahem 1 prosné konzervy I sa zaočkuje 10 1 inokulační půdy o složení 6 % glukózy, 2 % kukuřičné máčecí vody (CSL), 0,2 % MgSO4.7H2O a 0,02 % chloramfenikolu a kultivuje se ve fermentoru z nerezavějící oceli o obsahu 10 1 pri teplotě 25 °C, vzdušnění 5 1 vzduchu/min. a míchání 400 obr./min. po dobu 168 hod. 1 litr takto připraveného submersního vegetativního inokula se použije k očkování 101 produkční půdy o složení 12 % glukózy, 4 % kukuřičné máčecí vody (CSL), 0,2 % MgSO4 . 7H2O, 0,02 % chloramfenikolu a 0,5 % kyselého hydrolyzátu kaseinu (ve 100. hodině kultivace se přidají další 2 % glukózy ve formě sterilního vodného roztoku). Kultivace probíhá opět ve fermentoru z nerezavějící oceli o obsahu 20 1 za stejných podmínek jako kultivace inokula s tím rozdílem, že kultivační teplota je 28 °C ± 0,5 °C. V 264. hodině kultivace byl nalezen obsah účinné látky 1692 pg/ml, kultivace byla ukončena a účinná látka izolována postupem podle čs. patentu 136 495.Inoculum material on prosa (so-called millet cans) was prepared as in Example 1. A content of 1 millet canned I was inoculated with 10 L of inoculum broth containing 6% glucose, 2% corn steeping water (CSL), 0.2% MgSO 4 . 7H 2 O and 0.02% chloramphenicol and cultured in a 10 L stainless steel fermenter at 25 ° C, aeration 5 L air / min. and stirring at 400 rpm. for 168 h. 1 l of the prepared submersního vegetative inoculum is used to inoculate the production of land 101 of the composition of 12% glucose, 4% corn steepwater (CSL), 0.2% MgSO 4. 7H 2 O, 0.02% chloramphenicol and 0.5% acid casein hydrolyzate (additional 100% glucose in the form of a sterile aqueous solution was added at 100 hours of culture). Cultivation is again carried out in a 20 L stainless steel fermenter under the same conditions as inoculum cultivation except that the cultivation temperature is 28 ° C ± 0.5 ° C. The active ingredient content was found to be 1692 pg / ml at 264 hours of cultivation, the culture was terminated and the active ingredient was isolated according to the procedure of U.S. Pat. No. 136,495.
Kontrolní systém, odlišný pouze nepřítomností kyselého hydrolyzátu kaseinu, poskytl pouze 1290 pg účinné látky/ml fermentační půdy.The control system, differentiated only by the absence of acid casein hydrolyzate, yielded only 1290 µg active ingredient / ml fermentation broth.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS75880A CS209382B1 (en) | 1980-02-04 | 1980-02-04 | A method for preparing an antifungal antibiotic Mucidermin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS75880A CS209382B1 (en) | 1980-02-04 | 1980-02-04 | A method for preparing an antifungal antibiotic Mucidermin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS209382B1 true CS209382B1 (en) | 1981-11-30 |
Family
ID=5340292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS75880A CS209382B1 (en) | 1980-02-04 | 1980-02-04 | A method for preparing an antifungal antibiotic Mucidermin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS209382B1 (en) |
-
1980
- 1980-02-04 CS CS75880A patent/CS209382B1/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4327181A (en) | Aerobic submerged fermentation of sporulating, ectomycorrhizal fungi | |
| RU2001949C1 (en) | Strain of fungus trichoderma reesei - a producer of cellulolytic enzymes | |
| EP0424384A1 (en) | Improved fermentation process for carboxylic acids. | |
| JPS6339231B2 (en) | ||
| CS217986B2 (en) | Method of making the 2-keto-l-gulonic acid | |
| CS209382B1 (en) | A method for preparing an antifungal antibiotic Mucidermin | |
| US5312742A (en) | Process for making L-phenyl acetyl carbinol (PAC), microorganisms for use in the process, and a method of preparing the microorganisms | |
| NO123096B (en) | ||
| RU2088658C1 (en) | Fungus strain aspergillus niger - a producer of citric acid | |
| Yokota et al. | Conversion of pyruvic acid fermentation to tryptophan production by the combination of pyruvic acid-producing microorganisms and Enterobacter aerogenes having high tryptophanase activity | |
| JPH0823993A (en) | Production of uridine diphosphate n-acetylglucosamine | |
| CA1140878A (en) | Preparation of 2,5-diketogluconic acid | |
| US3483086A (en) | Method for increasing alkaloid production of submerse claviceps cultures | |
| KR100317902B1 (en) | A microorganism producing glutamic acid and a method for producing glutamic acid using said microorganism | |
| SU1411336A1 (en) | Method of producing hydrocortisone | |
| RU2192460C2 (en) | Strain of fungus aspergillus niger as producer of citric acid | |
| SK35794A3 (en) | Microorganism strain of penicillium chrysogenum ccm 8157 | |
| Zouchova et al. | Effect of glucitol on the production of mucidin in Oudemansiella mucida | |
| KR100299544B1 (en) | Production method of erythritol by pichia strain | |
| RU2092557C1 (en) | Method of preparing the sowing material for citric acid production | |
| RU2080372C1 (en) | Strain of fungus aspergillus niger - a producer of citric acid | |
| SU745942A1 (en) | Method of culturing bacillus thuringiensis var. galleriae | |
| US2594283A (en) | Process for the preparation of inoculum for use in the fermentative production of sodium gluconate | |
| WO2004029265A2 (en) | Production of 2-kga | |
| CN120607969A (en) | Culture medium for promoting Sparassis crispa mycelium growth and preparation method and application thereof |