CS205306B1

CS205306B1 - Manufacturing process of alpha-amylase enzyme

Info

Publication number: CS205306B1
Application number: CS286977A
Authority: CS
Inventors: Jozef Augustin; Juraj Zemek; Ludovit Kuniak; Ludmila Marvanova
Original assignee: Jozef Augustin; Juraj Zemek; Ludovit Kuniak; Ludmila Marvanova
Priority date: 1977-05-03
Filing date: 1977-05-03
Publication date: 1981-05-29

Description

Vynález aa týká epósobu produkcie enzýmu A-amylézy.

Na priemyseínú produkciu enzýmu «t-amylázy sa používajú v súčasnej době spóaoby produkcie, ktoré využívájú niektoré druhy baktérií napr. Streptomycee aureofacies resp. Bacillus subtilis, alebo niektoré druhy plesní rodov Aspergillus a Penicillium. Nevýhodou produkcie ot-amylézy u uvedených kmeňov je nevýhodný poměr oligosacharidov maltózového typu a D-glukózy ako reakčnýeh produktov amylolytickej reakcie, resp. ťažkosti pri separácii biomasy z kultivačného média.

Uvedené nevýhody odstraňuje spósob produkcie et-amylézy na tekutej živnej póde obsahujúcej zdroje asimilovatelného uhlíka a dusíka a mierálne živné soli, ktorého podetata spočívá v tom, že kmene

Trichoderma harianum		CCM	P - 340
«	koningii		CCM	P - 10
w	longibrachiatum		CCM	F - 342
«	sp.		CCM	P - 521
	harzianum		CCM	P - 470
»	sp.		CCM	P - 522
•	hamatum		CCM	P - 541
»	vlride		CCM	F - 486
•	viride		CCM	P - 534

205 306

208 300

Trichoderma	sp.	CCM	F - 556
*	aureoviride	CCM	F - 559
β	longibrachlatum	CCM	P - 560
	saturniaporum	CCM P - 561
w	sp.	CCM	P - 571
	piluliforum	CCM	P - 573
	polysporum	CCM	P - 542
N	polysporum	CCM	F - 572
N	sp.	CCM	P - 591
*	sp.	CCM	P - 592
»	sp.	CCM	F - 593
W	ps eudokoningii	CCM	F - 563
. *	koningii	CCM	F - 341
H	koningii	CCM	P - 544

sá jednotlivo alebo v zmesi kultivujú na živnej pftde obsahujúcej 0,1 až 3 hmot. % rozpustného škrobu při teplote 20 až 40 °C po dobu 48 až 120 hodin pri pH 4,2 až 6,5, pričom oč-amyláza sa získá odpařením rastovej pddy alebo zrážaním síranom amonným alebo afinitným přečištěním na sieťovanom e6-l,4-<glukáne.

Uvedené kmene sú uložené v čs. zbierke mikroorganizmov, Univerzita J. S, Purkyne, Brno, Obranéov míru 10.

Výhodou uvedeného spdsobu produkcie oí.-amylázy je jednoduchá separácia od kultivačnej pddy, zdravotně nezávadnost biomasy oproti plesnovým fermentáciam a poměrně vysoká Specifická aktivita produkcie, ktorá je až 2,3 U/mg biomasy. Výhodou je tiež využitie biomasy soperované j z produkčného médie napr. pri výrobě antibiotik.

Příklad 1

Z vypratého gélu amylózy /AO č. 186 059 /1978// sa vyrežú trojúhelníkové profily o straně 4 cm, vložia sa do Petrlho misky a zalejú sa roztokom kultivačnej pddy Czepek-Dox s gélom amylózy ako jediným zdrojom uhlíka bez agaru a sacharózy tak, aby polovice gélu na výšku vyčnievala nad hladinou kultivačného roztoku. Po sterllizácii pri 100 °C sa očkuje na povrchu gélu kultúra Trichoderma harzianum CCM F - 470 a kultivuje sa pri 37 °C. Amylózový gél stekutený v priebehu 16 hodin spolu s pomnoženou biomasou Trichoderma harzianum /0,38 g/ sa použil ako Inokulum na produkčnú pddu /2 1/ obsahujúcu 30 g kukuřičného škrobu, 2,3 g síranu amónneho a 2,0 g dihydrogenfosforečňanu draselného, upravenú na pH 5,3. Kultivácia Trichoderma harzianum prebiehala po dobu 116 hodin pri 18 °C. Po ukončení kultivačného procesu sa biomasa Trichoderma harzianum odfiltrovala a filtrát sa spracoval zahuštěním na odparke. Získal sa surový enzýmový preparát s aktivitou oC-amylázy 46 U a Specifickou aktivitou 0,116 U/mg.

Příklad 2

Tak ako je uvedené v příklade 1, s tým rozdielom, že kultivačná pdda obsahuje 1 g škrobu na 1 1 živnej pddy a kultivuje sa pri teplote 40 °C po dobu 48 hodin pri pH « 6,5 a získaný filtrát po oddělení biomasy Trichoderma harzianum CCM P - 340 sa apracuje za využitia

205 300 sletovaného škrobu afinitnou metodou. Získaný přečištěný enzym et-amyláza mal Specifická aktivitu 29,2 U/mg.

Příklad 3

Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa kultivuje zmesná kultúra trichoderma viride CCM F - 486, Trichoderma hamatum CCM F - 541 a Trichoderma koningii CCM F - 341 pri teplote 25 °C po dobu 96 hodin při pH 5,0 s enzým et-amyláza sa získal z produkčněj pfidy zrážaním síranom amonným /700 g/1/. Získaný surový enzýmevý preparát mal Specifická aktivitu 0,25 U/mg.

Claims

PREDMET VYNÁLEZU

Sp6sob produkčie enzýmu ot-amylézy na tekutej živnej pdde obsahujácej zdroje asimilovateTného uhlíka a minerálně Živné sóli, vyznačujúci sa tým, že kmene

harzianum CCM ř - 340 koningii CCM F - 10 longibrachiatum CCM F - 342 sp. CCM F - 521 harzianum CCM F - 470 sp. CCM F - 522 hamatum CCM F - 541 viride CCM F - 486 viride CCM F - 534 sp. CCM F - 556 aureoviride CCM F - 559 longibrachiatum CCM F - 560 saturnisporum CCM F - 561 sp. CCM F - 571 piluliforum CCM F - 573 polysporum CCM F - 542 polysporum CCM ř - 572 sp. CCM F - 591 sp. CCM F - 592' sp. CCM F - 593 pseudokoningii CCM F - 563 koningii CCM F - 341 koningii CCM F - 544

aa kultivujá jednotlivo alebo v zmesi na živnej pfide obsahujácej 0,1 až 3 hmot. % rozpustného škrobu pri teplote 20 až 40 °C po dobu 48 až 120 hodin pri pH 4,2 až 6,5, pričom et-amyláza sa získá odpařením rastovej pOdy alebo zrážaním síranom amonným alebo afinitným přečištěním ne s ieťovanom et-1,4-glukáne.