CS205306B1

CS205306B1 - Manufacturing process of alpha-amylase enzyme

Info

Publication number: CS205306B1
Application number: CS286977A
Authority: CS
Inventors: Jozef Augustin; Juraj Zemek; Ludovit Kuniak; Ludmila Marvanova
Original assignee: Jozef Augustin; Juraj Zemek; Ludovit Kuniak; Ludmila Marvanova
Priority date: 1977-05-03
Filing date: 1977-05-03
Publication date: 1981-05-29

Description

SOCIALISTICKÁ I POPIS VYNÁLEZU

REPUBLIKA

1S> K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU

(61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 03 05 77(21) PV 2869-77 úřad pro vynálezy

A OBJEVY (40) Zverejnené 29 08 80(45) Vydané 01 07 83 |205 306 7Π) (Bl) (51) IntCl.3 C 12 N 9/26 (75)

Autor vynálezu AUGUSTIN JOZBF FhMr., BRATISLAVA, ZEMEK JURAJ ing. CSc., LEHNICA, KUNIAKÍUD0VÍT ing. CSc., BRATISLAVA a MARVANOVÁ ÍUDlíILA RNEr. CSc., BRNO (54) SpOaob produkcie enzýmu oC-amylózy 1

Vynález ea týká apOaobu produkcie enzýmu A-amylézy.

Na priemyselnú produkciu enzýmu A-amylázy sa používají! v súéasnej době spOaoby produkcie,ktoré využívají! niektoré druhy baktérií napr. Streptomycea aureofacies reap. Bacillua aubtilia,alebo niektoré druhy plesní rodov Aspergillue a Penicillium. Nevýhodou produkcie ot-amylézyu uvedených kmeňov je nevýhodný poměr oligosacharidov maltózového typu a D-glukózy ako reakčnýchproduktov amylolytickej reakcie, reap. ťažkoati pri eeparácii biomaay z kultivačného média.

Uvedené nevýhody odstraňuje apOsob produkcie et-amylézy na tekutej živnej pOde obaahujii-cej zdroje aaimilovatelného uhlíka a duaíka a mierálne živné aoli, kterého podstata spo&ívav tom, že kmene

Trichoderma harianum CCM F - 340 « koningii CCM P - 10 w longibrachiatum CCM F - 342 « ap. CCM P - 521 harzianum CCM P - 470 » ap. CCM P - 522 • hamatum CCM P - 541 » vlride CCM P - 486 • viride CCM P - 534 205 306 208 300

Trichoderma sp. CCM F - 556 * aureoviride CCM F - 559 longibrachlatum CCM P - 560 saturnisporum CC1Í P - 561 w sp. CCM P - 571 piluliforum CCM P - 573 polysporum CCM P - 542 N polysporum CCM F - 572 N sp. CCM P - 591 * sp. CCM P - 592 » sp. CCM F - 593 W ps eudokoningii CCM F - 563 . * koningii CCM F - 341 H koningii CCM P - 544 se jednotlivo alebo v zmeai kultivujú na živnej pftde obsahujúcej 0,1 až 3 hmot. % rozpustné-ho škrobu při teplota 20 až 40 °C po dobu 48 až 120 hodin při pH 4,2 až 6,5, pričom oč-amylá-zá se získá odpařením rastovej pddy alebo zráčením síranom amonným alebo afinitným přečiště-ním na sieťovanom e6-l,4-<glukáne.

Uvedené kmene sú uložené v čs. zbierke mikroorganizmov, Univerzita J. S, Purkyne, Brno,Obranoov míru 10. Výhodou uvedeného spdsóbu produkcie oL-amylézy je jednoduchá separácia od kultivačnejpddy, zdravotně nezávadnost biomasy oproti plesnovým fermentáciam a poměrně vysoká Specific-ká aktivita produkcie, ktorá je až 2,3 U/mg biomasy. Výhodou je tiež využitie biomasy separo-vanej z produkčného média napr. pri výrobě antibiotik. Příklad 1 Z vypratého gélu amylózy /AO δ. 186 059 sa vyrežú trojúhelníkové profily o stra- ně 4 cm, vložia sa do Petriho misky a zalejú sa roztokem kultivačnej pddy Czapek-Oox s gélomamylózy ako jediným zdrojom uhlíka bez agaru a sacharózy tak, aby polovice gélu na výšku vy-čnievala nad hladinou kultivačného roztoku. Po sterllizácii pri 100 °C sa očkuje na povrchugélu kultúra Trichoderma harzianum CCM P - 470 a kultivuje sa pri 37 °C. Amylózový gél steku-tený v priebehu 16 hodin spolu s pomnoženou biomasou Trichoderma harzianum /0,38 g/ sa použilako inokulum na produkčnú pddu /2 1/ obsahujúcu 30 g kukuřičného škrobu, 2,3 g síranu amonné-ho a 2,0 g dihydrogenfosforečňanu draselného, upravená na pH 5,3. Kultivácia Trichodermaharzianum prebiehala po dobu 116 hodin pri 18 °C. Po ukončení kultivačného procesu sa bioma-sa Trichoderma harzianum odfiltrovala a filtrát sa spracoval zahuštěním na odparke. Získalsa surový enzýmový preparát s aktivitou oC-amylázy 46 U a Specifickou aktivitou 0,116 U/mg. Příklad 2

Tak ako je uvedené v příklade 1, s tým rozdielom, že kultivačně pdda obsahuje 1 g škro-bu na 1 1 živnej pddy a kultivuje sa pri teplote 40 °C po dobu 48 hodin pri pH « 6,5 a získa-ný filtrát po oddělení biomasy Trichoderma harzianum CCM P - 340 sa opracuje za využltia

Claims

205 300 sletovaného škrobu afinitnou metodou. Získaný přečištěný enzym et-amyláza mal Specifická akti-vitu 29,2 U/mg. Příklad 3 Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že se kultivuje zmesná kultúra tricho-derma viride CCM F - 486, Trichoderma hamatum CCM F - 541 a Trichoderma koningii CCM F - 341pri teplotě 25 °C po dobu 96 hodin při pH 5,0 s enzým et-amyláza sa získal z produkčněj pfidyzrážaním síranom amonným /700 g/1/. Získaný surový enzymový preparát mal Specifická aktivitu0,25 U/mg. PBEDMET VYNÁLEZU Sp6sob produkčie enzýmu et-amylázy na tekutej živnej pdde obsahujácej zdroje asimilova-teTného uhlíka a minerálně Živné sóli, vyznačujúci sa tým, že kmene harzianum CCM ř - 340 koningii CCM F - 10 longibrachiatum CCM F - 342 sp. CCM F - 521 harzianum CCM F - 470 sp. CCM F - 522 hamatum CCM F - 541 viride CCM F - 486 viride CCM F - 534 sp. CCM F - 556 aureoviride CCM F - 559 longibrachiatum CCM F - 560 saturnisporum CCM F - 561 sp. CCM F - 571 piluliforum CCM F - 573 polysporum CCM F - 542 polysporum CCM ř - 572 sp. CCM F - 591 sp. CCM F - 592' sp. CCM F - 593 pseudokoningii CCM F - 563 koningii CCM F - 341 koningii CCM F - 544 sa kultivujá jednotlivo alebo v zmesi na živnej pfide obsahujácej 0,1 až 3 hmot. % rozpustné-ho škrobu pri teplote 20 až 40 °C po dobu 48 až 120 hodin pri pH 4,2 až 6,5, pričom et-amylázasa získá odpařením rastovej pOdy alebo zrážaním síranom amonným alebo afinitným přečištěním nas ieťovanom ot-1,4-glukáne.