CS202789B1 - Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby - Google Patents

Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby Download PDF

Info

Publication number
CS202789B1
CS202789B1 CS638678A CS638678A CS202789B1 CS 202789 B1 CS202789 B1 CS 202789B1 CS 638678 A CS638678 A CS 638678A CS 638678 A CS638678 A CS 638678A CS 202789 B1 CS202789 B1 CS 202789B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
virus
vaccine
myxomatosis
rabbit
rabbits
Prior art date
Application number
CS638678A
Other languages
English (en)
Inventor
Vratislava Krupka
Eduard Jiran
Ladislav Dedek
Original Assignee
Vratislava Krupka
Eduard Jiran
Ladislav Dedek
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vratislava Krupka, Eduard Jiran, Ladislav Dedek filed Critical Vratislava Krupka
Priority to CS638678A priority Critical patent/CS202789B1/cs
Publication of CS202789B1 publication Critical patent/CS202789B1/cs

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

(54) Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby
Vynález se týká vakcíny proti myxomatóze králíků živé MXT a způsobu její přípravy z patogenního kmene a je určena k vakcinaci králíků všech kategorií.
Myxomatóza králíků po svém rozšíření na evropském kontinentě po roce 1950 působí stále velké ztráty na domácích i divokých králících. V minulosti byla propracována úspěšná cesta imunizace a v některých zemích byla i zavedena ochrana na základě interferenční imunity proti myxomatoze pomocí Shopeho fibromu. /Jacotot, A., Vallee, A. a Virat, B·, 1955, Ann. Inst. Pasteur, 88, s. 381 - 383; Rowe, B., Mansi, W. a Hudson, J.R., 1956, J. Comp. Path. Therap., 66, s. 290 - 298/.
Rovněž v Československu se k prevenci myxomatózy používá vakeína, připravená z orgánové suspenze králíků, obsahující Shopeho virus fibromatózy. /Médr, V., Macura, B.,
Petlach, J., 1967, Immunoprofylaxia, ČSSR, 2, s. 90 - 96/.
Řada zahraničních experimentálních prací, věnovaných aktivní imunizaci králíků proti myxomatóze, prokázala nevhodnost použití vakcín, vyrobených z inaktivovaného viru nebo chemickou cestou oslabeného. /Mc Kerchner, D.G., 1952, Amer. J. Vet. Res., 13, s. 425 - 429f Sanchis-Bayarri, V., Resende, M. a Garcia-Martines, A., 1953, Bull. Acad. Vet. France, 26, s. 361 - 365/
202 789
202 780
Podrobnou práci o modifikaci viru myxomatózy a jeho vlastnostech zveřejnil Saito, J.
K., Mc Kerchner, D.G. a Castrucci, O., 1964, J. Inf. Dis., 114, s. 417 - 428, kde uvádí dobrou účinnost a neškodnost modifikovaného kmene. Jacotot, A., Virat, B., Reculard, P,, a Vallee, A., 1967, Ann. Inst. Pasteur, 113, s. 221 - 237 zjistili u Saitova kmene, že nebyl zcela neškodný pro králíky.
Jiran, E., Sladká, M., KunŠtýř, I., 1970, Zbl. Vet. Med·, B 17, s. 418 - 428 zjistili u Saitova kmene, že není rovněž zcela neškodný. Podařilo se jim však po 12 pasážích na buněčných liniích oslabit jej natolik, že nezpůsoboval konjunktivální reakce a po 35 pasážích ani reakce po i.d. aplikaci králíkům. Virus nebylo možné použít k výrobě vakcíny proto, že nebylo možné jej dokonale stabilizovat a nebyly rovněž dostatečné podklady o jeho dokonalé neškodnosti a o formách aplikace.
Virus v 55. pasáži byl lyofilizován a pak skladován při +4 °C po dobu 8 let. Z takto skladovaného viru pak bylo provedeno 7 pasáží ha buněčných kulturách kory králičí ledviny. Tímto postupem byl získán plně apatogenní virus při zachování imunizačních vlastností. Lyofilizací stabilizovaný a vlivem nového prostředí změněný virus se stává součástí tohoto vynálezu a je uložen v Čs. sbírce mikroorganismů - Sbírce zoopatogenních mikroorganismů Výzkumného ústavu veterinárního lékařství, Hudcova 60, Brno - Medlánky.
Uvedené nedostatky odstraňuje vakcína připravená podle tohoto vynálezu. Tato vakcína je představována apatogenním vakoinačním virem myxomatózy kmene CAPM V-219, ke kterému se přidává protektivní médium a je v lyofilizovaném stavu, čímž je zajištěna vysoká stabilita preparátu po dlouhou dobu skladování. Vakcína je expedována tak, že v 1 balení je lyofilizováný vakcinační virus a v jedná lákovce je zřeúovač. Před vlastní aplikací se lyofilizovaný virus rozpustí ve zřeSovači. Vakcínou se imunizují králíci s.c. v dávce 1 cm·^ nebo perorálně v dávce 2 cm\
K přípravě vakcíny se používá apatogenní vakcinační kmen viru myxomatózy sbírkové číslo CAPM V-219 o titru 10* až IQ7 TKID^q v 1 cm^ v lyofilizovaném stavu, který se před použitím rozpouští ve zřeúovači, který je představován pufrovaným fyziologickým roztokem.
Vakcinační virus se pomnožuje na buněčných kulturách králičích tkáni při teplotě 32 až 34 °C po dobu 36 až 96 hodin, pokud ee cytopatogenní efekt nerozšíří na 80 - 100 % plochy buněčného porostu. Pro pomnožování viru je možno použít primární, diploidní i liniová j buňky králičí, zpravidla odvozená z kory ledviny zpravidla po dobu 36 až 48 hodin po infekci kultur.
Vakcínu představuje suspenze apatogennlho viru, minimální esenciální médium, lyofilizační médium a zřeúovač.
1/ Apatogenní vakcinační virus myxomatózy CAPM V-219
2/ Monolayer buněk kory králíka
3/ Minimální esenciální médium
4/ Antibiotika
202 789
5/ Lyofilizační médium 6/ Zřeáovač k vakcíně ad 1/ Pro výrobu vakcíny proti myxomatóze králíků živé MXT je používán atenuovaný kmen viru myxomatózy, sbírkové číslo CAPM V-219, uložený v Čs. sbírce mikroorganismů - Sbír ce zoopatogenních mikroorganismů Výzkumného ústavu veterinárního lékařství, Hudcova ad ad
2/
3/
Buněčnou kulturu představují primární nebo liniové buňky kory králičí ledviny.
Minimální esenciální médium růstové:
Minimální esenciální médium.........................
Sérum bovinní ultrafiltrované .......................
Zásobní roztok neomycinu............................
Zásobní roztok penicilinu ...........................
Zásobní roztok fungicidinu ..........................
7,5% roztok NaHCO-j ..................................
Uvedené složení je příkladem a obsah 7,5% roztoku NaHCO^ je 20 cm3.
900 cm3 100 cm3 cm3 10 cm3 cm3 10 cm3 možno měnit od 10 do
Minimální esenciální médium udržovací:
Minimální esenciální médium ......................... 1000 cm3
Zásobní roztok neomycinu ............................ 1 cm3
Zásobní roztok penicilinu ........................... 10 cm
Zásobní roztok fungicidinu .......................... 3 cm3
7,5% roztok NaHCO^ .................................. 10 cm3
Uvedené složeni je příkladem, je možno měnit koncentraci antibiotik a množství 7,5% roztoku NaHCO^ od 10 do 30 cm3.
ad 4/ Pro růstová a udržovací média jsou použita antibiotika v těchto konečných koncentracích:
Draselná sůl penicilinu .............................
Síran neomycinu .....................................
Fungicid in ..........................................
Koncentrace penicilinu je možno používat od 100 do 500 m.j
320 m.j./l cm3 50 /Ug /1 cm3 50 /Ug /1 cm3 na 1 cm3 média.
ad 5/ Složení lyofilizačního média:
Želatina............................................
Sacharóza...........................................
Na2HP04 . 12 HgO ....................................
kh2po4 ..............................................
Voda destilovaná ad ................
ad 6/ Složeni zřeáovače:
NaCl ................................................
KC1 .................................................
g 75 g 38,2 g
0,49 g 1000 cm3 g 2 g
202 789
Na.HPO, . 12 H-0 ... í } i kh2po4 .............
Voda destilované ad
2,38 β
0,2 β 1000 cm3
Popis příkladu provedení
Narostlý mor.olsyer buněčné kultury v minimálním esenciálním médiu s 10 % séra bovinní ho ultrafiltrovaného inaktivovanáho se infikují apatogenním vakcinačním kmenem viru myxomatózy CAPM V-219 v udržovacím minimálním esenciálním médiu bez séra v dávce 0,25 až 0,5 TKID^q na buňku tak, že se virus přidá do média a tato směs média a viru se napouětí do kultivační nádoby s buněčným porostem /po předchozím odstranění růstového média/ v množ ství 100 až 120 cm3. Infikované kultury ae inkubujl při 33 °C po dobu 36 až 96 hodin, zpra vidla 36 až 48 hodin až dojde k rozruěení buněčného porostu cytopatogenním působením viru na 80 až 100 % plochy. Pak se provede sklizeň viru, jeho titrace, zkoušky na bakteriologickou sterilitu a do jejich ukončení před zpracováním viru na vakolnu ee skladuje v zamraženém stavu při -20 °C až -70 °C. Sklizený virus musí mít minimální titr viru 10^
TKID50 v 1 cm3.
Před kompletací vakcíny se virus rozmrazí, smíchá s tekutým lyofilizačním médiem v po měru 2 díly viru a 1 díl lyofilizačního média, rozplní se do lékovek, provede se zamražení a lyofilizace. Lyofilizovaná vakcína je pak uzavřena pod gumovou zátkou ve vakuované lé kovce.
K vakcíně se připraví sterilní zřeáovač, který se rozplní do lékovek. Před aplikací vakcíny králíkům se lyofilizét rozpustí ve zřeáovači, protřepe se a vakcína se aplikuje králíkům podkožně nebo per os. U každé vyrobené ěarže vakcíny jsou prováděny kontrolní zkoušky neškodnosti, účinnosti a bakteriální sterility.
Výsledky pokusů:
Tabulka - 1 Zkoušky neškodnosti na králících
Způsob aplikace Dávka vakcíny cm3 Násobek překročeni vakc. dávky Počet zvířat Reakce v průběhu sledování po dobu 21 dnů
Podkožně 2 1 x 2 bez reakcí
Vni tr.oko žně 4 x 0,25 - 2 bez reakcí
Podkožně 1 - 8 bez reakcí
Podkožně 40 rozděleně 40 x 4 bez reakcí
Při zkouškách neškodnosti ani po 40 násobné vakoinační dávce nedošlo u vakcinovanýoh králíků k onemocnění myxomatózou.
202 789
Tabulka - 2 Zkouška účinnosti po podkožní aplikaci
Způsob aplikace Dávka vakcíny 3 cnr Čelenžní dávka viru myx. Počet zvířat Výsledek po Čelenži
přežilo onemocnělo
Podkožně 1 1000 id50 8 8 0
Nevakc. kontroly - 1000 id50 2 0 2
Vakcinační dávka 1 cnr vakcíny zajištuje 100 % ochranu králíkům při čelenži 1000 plně virulentního viru myxomatózy.
Tabulka - 3 Stanovení počtu protekčních dávek v 1 vakcinační dávce
Ředění vakcíny Vakcinační dávka cm3 Doba čelenže Počet králíků Výsledek po čelenži
přežilo onemocnělo
10° 1 em3 podkožně 9. den po Vak- 3 3 0
10'1 příslušného ře- cinaci čelenž 3 3 0
102 dění vakcíny 1000 ID50 plně 3 3 0
103 virulentního 3 0 3
104 viru myxomatózy 3 0 3
10’5 3 0 3
Kontroly 2 0 2
vakcinační dávka obsahuje v 1 cm3 316 ΡΟ^θ /projekčních dávek/ proti 1000 plně virulentního viru myxomatózy.
K pokusům uvedeným v popisu tohoto vynálezu bylo použito vakcíny připravené z viru o titru 10 TKID^q v cm3.
Uvedená vakcína rozšiřuje sortiment přípravků pro prevenci myxomatózy a je jednou z prvních vakcín z apatogenních kmenů myxomatózy.

Claims (5)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    1/ Vakcína proti myxomatóze králíků živá MXT, vyznačující se tím, že obsahuje apatogenni kmen viru myxomatózy králíků /Myxoma virus/ CAPM V-219 o titru 104 až 10? ΤΚΙΟ^θ v 1 cm3 v lyofilizovaném stavu a zřeáovač.
  2. 2/ Vakcína podle bodu 1, se vyznačuje tim, že zřeáovač je tvořen 8 g chloridu sodného,
    2 g chloridu draselného, 2,38 g hydrofosforečnanu sodného do 1 dkg hydrátu NagHPO^ . 12 HgO, 0,2 g dihydrofosforečnanu draselného KHgPO^, doplněném destilovanou vodou na 1 litr.
  3. 3/ ZpŮBOb Výroby vakcíny podle bodu 1, vyznačující se tím, že se kmen viru myxomatózy
    CAPM V-219 pomnožuje na buněčných kulturách z králičích tkání při teplotě 32 až 34 °C po dobu 36 až 96 hodin, pokud se nedosáhne 80 až 100 % cytopatogenní efekt.
    202 780
  4. 4/ Způsob výroby vakclny podle bodu 3 a 4, vyznačujíc! aa tín, Se kmen viru ea pomnožuje na primárních, diploidních a liniových buňkách kory ledviny králíka.
  5. 5/ Způsob výroby vakcíny podle bodu 3» 4, 5, vyznačující ee tím, že doba pomnožení viru je 36 až 48 hodin.
CS638678A 1978-10-03 1978-10-03 Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby CS202789B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS638678A CS202789B1 (cs) 1978-10-03 1978-10-03 Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS638678A CS202789B1 (cs) 1978-10-03 1978-10-03 Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS202789B1 true CS202789B1 (cs) 1981-01-30

Family

ID=5410777

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS638678A CS202789B1 (cs) 1978-10-03 1978-10-03 Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS202789B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9827305B2 (en) Poultry virus vaccines that are liquid stable
US3783098A (en) Highly potent,viable and stable cellfree virus preparations from cells infected with cell-associated viruses and method for obtaining the same
DK162421B (da) Hundeparvovirus-vaccine, fremgangsmaade til fremstilling heraf og virusstamme til brug i vaccinen
HU183765B (en) Process for producing lyophilized vaccine against duck hepatitis
US3520972A (en) Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains
US3501770A (en) Shipping fever vaccine
US3636196A (en) Ethylethyleneimine as an inactivation agent
US3526696A (en) Shipping fever vaccine
US3080291A (en) Serial passage of distemper virus in tissue cultures of chick embryo and canine tissue and vaccine therefrom
US4571386A (en) Feline infectious peritonitis vaccine
EP0253389B1 (en) Live vaccine for contagious diseases of chickens
CS202789B1 (cs) Vakeína proti myxomatóze králíků živá MXT a způsob její výroby
US3925544A (en) Bovine vaccines and methods of making and using same
US3562387A (en) Mink virus enteritis vaccine and method for the production thereof
US4229434A (en) Vaccine for prophylaxis of trichophytosis in horse and method of preparing same
ES2269672T3 (es) Vacuna contra mycoplasma inactivado por saponina.
CA2178553A1 (en) Marek's disease vaccine
US3585108A (en) Transmissible gastroenteritis vaccines and methods of producing the same
EP0011865B1 (en) Feline infectious peritonitis vaccine and process for its preparation
US3704203A (en) Transmissible gastroenteritis vaccines and methods of producing the same
US3725542A (en) Intramuscular vaccination program and vaccine against rhinopneumonitis and process for preparing it
US3226296A (en) Attenuated hog cholera virus vaccine and method of producing same
EP0661059B1 (en) An intranasal bovine trivalent vaccine containing modified live IBRV, PI3V and BRSV
CA1216234A (en) Preparation of modified strains of bovine diarrhoea virus and vaccines containing them
RU2045960C1 (ru) Вакцина для профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза собак