CS201752B1 - Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320 - Google Patents

Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320 Download PDF

Info

Publication number
CS201752B1
CS201752B1 CS122379A CS122379A CS201752B1 CS 201752 B1 CS201752 B1 CS 201752B1 CS 122379 A CS122379 A CS 122379A CS 122379 A CS122379 A CS 122379A CS 201752 B1 CS201752 B1 CS 201752B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
strain
ccm
streptomyces galilaeus
pyrromycinone
agar
Prior art date
Application number
CS122379A
Other languages
English (en)
Inventor
Emanuela Kralovcova
Margita Blumauerova
Zdenko Vanek
Certraud Bradler
Rosemarie Fuegner
Original Assignee
Emanuela Kralovcova
Margita Blumauerova
Zdenko Vanek
Certraud Bradler
Rosemarie Fuegner
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Emanuela Kralovcova, Margita Blumauerova, Zdenko Vanek, Certraud Bradler, Rosemarie Fuegner filed Critical Emanuela Kralovcova
Priority to CS122379A priority Critical patent/CS201752B1/cs
Publication of CS201752B1 publication Critical patent/CS201752B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Vynález se týká nového průmyslového mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947, CCM 3320 produkujícího ε-pyrromycinon, který lze využít pro synthesu protinádorových anthracyklinových antibiotik.
Standardní kmen Streptomyces galilaeus JA 3043 (ZIMET, Jena) produkuje směs biologicky aktivních glykosidů ε-pyrromycinonu a aklavinonu. U mutantního kmene Streptomyces galilaeus 947 došlo genetickým. zásahem k bloku v glykosidačním stupni biosynthesy těchto látek vedoucím k akumulaci volných aglykonů. Jako hlavní metabolit je produkován ε-pyrromycinon; v minoritním množství jsou tvořeny aklavinon, ει-pyrromycinon a 7-deoxy- a bisanhydroderiváty ε-pyrromycinonu a aklavinonu.
Kmen Streptomyces galilaeus 947 byl získán ze standardního kmene Streptomyces galilaeus JA 3043 pětistupňovým selekčním postupem za použití přirozené selekce a účinku mutagenů. Kmen byl isolován z populace po účinku kyseliny dusité a jeho variabilita byla snížena přirozenou selekcí. Kyselina dusitá byla aplikována jako 0,05 M NaNO2 v 0,2 M acetátovém pufru (pH 4,0) po dobu 25 min. Při této dávce mutagenu bylo usmrceno 99,93 % konidií v suspensi. Změněná biosynthetická aktivita mutantního kmene byla zjištěna tenkovrstevnou chromatografií metabolitů submersní kultury.
Dále je uvedena charakteristika vlastností mutantního kmene Streptomyces galilaeus 947, jehož vzorek kultury je uložen ve Sbírce kultur mikroorganismů University J. E. Purkyně v Brně pod-číslem CCM 3320.
1. Morfologická charakteristika
Při kultiváci na ovesném agaru (ISP 3), na půdě s anorganickými solemi a škrobem (ISP 4) a na půdě s kvasinkovým a sladovým výtažkem (ISP 2) tvořil mutantní kmen 947 vzdušné mycelium se sporofory monopodiálně větvenými, s otevřenými spirálami se 4—6 závity. Vzdušné mycelium kmene 947 bylo méně vyvinuto než u standardního kmene JA 3043. Na asparaginové půdě s glycerolem (ISP 5), na tyrosinovém agaru (ISP 7), na Benettově agaru (Waksman S. A. The Actinomycetes. Chronica Botanica, Waltham, Mass., USA, 1950) a na substrátu s minerálním zdrojem dusíku (Gause G. F. et al., Zur Klassifizierung der Actinomyceten. VEB G. Fischer, Jena, 1958) tvořil standardní kmen dobře vyvinuté vzdušné mycelium, zatímco u mutantního kmene byly jen stopy vzdušného mycelia.
Ve tvaru a v povrchu spor nebyly podstat201752
Tabulka I: Zbarvení substrátového mycelia, vzdušného mycelia a difundujících pigmentů u mutantního kmene Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320 a standardního kmene Streptomyces galilaeus JA 3043 po 21 dnech kultivace při 28 °C.
Difundu- jící pig- menty Zbarvení světle hnědý 1 1 oranžový světle hnědý 1 I 1
«
eo •F* rvení -šedé -šedé -šedé
o 8 9 ‘fl) 'fl) ‘fl) O bíle- 'fl) bílé-
w s Zb Ό 0) >05 šed Ό fl) >05 Ό fl) >05 bílé 24 £3
05 fl)
3 o
3 a <9 -g £ tupni 2-5 2-5 T 03 2-5 1-5 1 7 fM 7 w
bfi OT
05
fl)
'fl)
s g Ό > o Ί
e - 5 > 9 >fl) o
·*» fil 0) U •5 > I 1> '8 £ tí Ά) 43 > P vé orai >N •2 § 1>
>> 43 1 ’S o mo nžc O tí mo tle o o
CO s N g g £ g krém sytě žlutoi g
kré ora kré kré ora '2 Η οι je >u 'fl) >φ a .& kré kré
O
fl) Ui Tť
05 u o
A .9 fí Q< ce e “» 9 ra 43 a A ra 3 9 ra g
CO 9 co CO rji lO co fr- CO w to
M Ul - O o -y O Q Ui A) O 0 fl) Ui
O 0 u U 0 o o o o u u o u
I , 2 ie ř» ení , ivý
íftí 0) '>? anžc ú) '>>
3 ... « a « g 9 43 §>g 45 t3 S>§
.fl'” N > s 05 £3 1 1 Ui O ►> « «43 1 l 1
·>>-( tí Ό) ‘fl)
g Ό Ό fl)
3 >05 X/5
£ m fl)
fr· 05 Cfl g Ό ! Zba: světí £ >fl) 05 bílé* šedé bílé* ! 1 I | bílé* ί
9
V 0
9 u
*3 3 CO <0 tft
bo *9 £ tupí 1 1 03 T I co 1 1 I 1
05 8 ω
>>
§ '4) 1 '4)
•W fil υ h i rvení >fl) tí 43 tnědé X? fl) é nědé >N C 9 Ui Ό) 1
CO o 9 O .a, « > £3 O >
I 'ř 43 N Červen olivoví světle žlutoh krémo tmavo červen světle krémo žlutooi šedool
o
s 8
*3 a s S Ui 6 u _ 9 9 g
co 3 lO fr· CO CO w ® £ t* fM fl)
4-> o tfi Ui Ui Ui O O 0 Ui
CO 0 o o ϋ u o o 0 ϋ o ϋ
•rd I
•1 g agar slado 3 agar !? §
anorgi nový 9 vý ag nový zdroj
9 XJ 05 H 5b 9 1 ráto ragii SŠ tí
•9 9 9 9
a c3 Oi w 3 •g a E
s? 9 o 3 co
>□ 9 £· Jd E > 05 1
> •M 3 ; Ovesný o 3 2 § Λ o «1 w , Glycero j Agar s 1 výtažke Benettů 1 Sacharc Glukose Substrá
vzdušné mycelium málo vyvinuto né rozdíly mezi mutantním a standardním kmenem. Oba kmeny tvořily spory s hladkým povrchem.
2. Zbarvení kultur
Pigmentace vzdušného a substrátového mycelia byla hodnocena podle Prauserovy stupnice (Z. Allg. Mikrobiol., 4:95, 1964) po 2, 4, 7, 14 a 21 dnech kultivace.
a) Zbarvení vzdušného mycelia
Vzdušné mycelium standardního i mutantního kmene bylo zbarveno v různých odstínech šedé barvy. Bílé mycelium bylo pozorováno jen u mladých dosud nevyvinutých kultur.
b) Zbarvení substrátového mycelia
Výsledky získané po 21 dnech kultivace u obou kmenů jsou uvedeny v tabulce I.
c) Zbarvení difunduj ících pigmentů
Mutantní kmen 947 a standardní kmen JA
3043 tvořily na ovesném agaru a na Benettově agaru světle hnědý pigment a na agaru s kvasinkovým a sladovým výtažkem oranžový pigment.
3. Fysiologické charakteristiky
a) Produkce melaninových pigmentů
Na peptonové půdě se železem a na tyrosinovém médiu tvořil mutantní kmen stejně jako standardní kmen intensivní černohnědý pigment.
b) Asimilace zdrojů uhlíku
Výsledky získané u oboň kmenů po 14 dnech kultivace na různých zdrojích uhlíku jsou uvedeny v tabulce II.
Tabulka II: Asimilace zdrojů uhlíku u mutantního kmene Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320 a u standardního kmene Streptomyces galilaeus JA 3043 po 14 dnech kultivace
Zdroj uhlíku Streptomyces galilaeus
947 JA 3043
glycerin 4++! +++
d-mannitol + (+)
d-sorbitol + +'
1-arabinosa +++ +++
rhamnosa ++ +++
d-xylosa +++ H—1—h
d-fruktosa +++ +++
d-galaktosa +++. +++
d-mannosa +++; +++
glukosa +++ _|—|—1_
i-inositol +++· +++.
laktosa +++ +++
maltosa +++
sacharosa +++ +++
rafinosa ++ +++
škrob +++ +++
inulin +++ +++'.
celulosa (+) (+)
dextrín ++ +++
U-) ¥ŮSt + slabý růst +-(- dobrý růst 4--j-+ velmi dobrý růst
c) Ztekucování želatiny, redukce nitrátů, tvorba redukujících cukrů a odbourávání škrobu.
Mutantní i standardní kmen ztekucovaly želatinu, redukovaly nitráty, štěpily sacharosu na redukující cukry a odbourávaly škrob.
4. Produkce sekundárních metabolitů
Jako dalšího kritéria pro charakteristiku mutantního kmene Streptomyces galilaeus 947 se použila chromatografické analysa produkce sekundárních metabolitů v submersních kulturách, která je nej průkaznějším ukazatelem rozdílu mezi mutantním a standardním kmenem.
a) Kultivace
Submersní kultivace byly prováděny na reciproké třepačce (frekvence 1,6 Hz, amplituda 80 mm) při 28 °C v 500 ml varných baňkách, plněných 60 ml půdy. Inokulační baňky byly očkovány sporovým inokulem z kultury na agaru s kvasinkovým a sladovým výtažkem a kultivovány 24 h na půdě následujícího složení:
sojová mouka glukosa corn-steep
CaCO3
NaCl
2,0 % 1,0 % 0,25 «/ /0
0,3 %
0,5% pH: 6,5 Fermentační baňky byly očkovány 5 % inokula a kultivovány 96 h na půdě stejného složení se zvýšeným obsahem glukosy (2,5 %).
b) Chromatografie
Produkce sekundárních metabolitů byla sledována tenkovrstevnou chromatografii na silikagelu impregnovaném NaHCO3 (10 : 1) v systému chloroform-methanol (49 :1).
Mycelium bylo odfiltrováno a extrahováno methanolem okyseleným HC1 (pH 2,5-3,5), extrakt byl neutralizován amoniakem, zfiltrován a odpařen za vakua. Odparek byl rozpuštěn v chloroformu a použit pro chromatografii.
U standardního kmene Streptomyces galilaeus JA 3043 byl detegován komplex glykosidů ε-pyrromycinonu a aklavinonu spolu se 7-deoxy- a bisanhydroderiváty těchto aglykonů. Mutantní kmen Streptomyces galilaeus 947 neprodukuje glykosidy, jako hlavní metabolit akumuluje volný ε-pyrromycinon a v minoritním množství produkuje aklavinon, εί-pyrromycinon, 7-deoxy- a bisanhydroderiváty ε-pyrromycinonu a aklavinonu.

Claims (1)

  1. Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947, produkující ε-pyrromycinon, jehož vzorek kultury je uložen ve Sbírce kultur mikroorganismů University J. E. Purkyně, Brno (CCM) pod číslem CCM 3320.
CS122379A 1979-02-23 1979-02-23 Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320 CS201752B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS122379A CS201752B1 (cs) 1979-02-23 1979-02-23 Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS122379A CS201752B1 (cs) 1979-02-23 1979-02-23 Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS201752B1 true CS201752B1 (cs) 1980-11-28

Family

ID=5346078

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS122379A CS201752B1 (cs) 1979-02-23 1979-02-23 Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS201752B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Maskey et al. Himalomycin A and B: isolation and structure elucidation of new fridamycin type antibiotics from a marine Streptomyces isolate
US4970198A (en) Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
Takiguchi et al. Milbemycins, a new family of macrolide antibiotics: fermentation, isolation and physico-chemical properties
US5108912A (en) Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
Tomita et al. Tetrocarcins, Novel Antitumor Antibiotics I. Producing Organism, Fermentation and Antimicrobial Activity
NO148959B (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av tumor-motvirkende antracyklinglykosidantibiotika, betegnet ma 144
US4713371A (en) Anthracycline derivatives and their use as cytostatics
Cassinelli et al. Preparation and biological evaluation of 4-O-demethyldaunorubicin (carminomycin I) and of its 13-dihydro derivative
Yoshimoto et al. New anthracycline metabolites from mutant strains of Streptomyces galilaeus MA144-M1 I. Isolation and characterization of various blocked mutants
Blumauerová et al. Studies on the production of daunomycinonederived glycosides and related metabolites in Streptomyces coeruleorubidus and Streptomyces peucetius
JOHDO et al. Anthracycline metabolites from Streptomyces violaceus A262 I. Isolation of antibiotic-blocked mutants from Streptomyces violaceus A262
Blumauerova et al. Biotransformations of anthracyclinones in Streptomyces coeruleorubidus and Streptomyces galilaeus
US4383037A (en) Process to produce anthracycline glycosides
CS201752B1 (cs) Kmen mikroorganismu Streptomyces galilaeus 947 CCM 3320
NAGASAWA et al. SAKYOMICINS A, B, C AND D: NEW QUINONE-TYPE ANTIBIOTICS PRODUCED BY A STRAIN OF NOCARDIA TAXONOMY, PRODUCTION, ISOLATION AND BIOLOGICAL PROPERTIES
Cooper et al. Macrolactams: two novel homologous series of compounds produced by Actinomadura sp. SCC 1778
Blumauerová et al. Intra-and interspecific cosynthetic activity of mutants of Streptomyces coeruleorubidus and Streptomyces galilaeus impaired in the biosynthesis of anthracyclines
EP0187049B1 (en) Micromonospora microorganisms and macrolide antibiotic production therewith
Blumauerová et al. Mutants of Streptomyces coeruleorubidus impaired in the biosynthesis of daunomycinone glycosides and related metabolites
HOSHINO et al. Microbial conversion of anthracycline antibiotics III. Glycosidation of natural and chemically synthesized anthracycline aglycones
Blumauerová et al. Effect of DL-ethionine on the biosynthesis of anthracyclines in Streptomyces coeruleorubidus
Omura et al. PRODUCTION OF MYCAROSYL PROTYLONOLIDE BY A MYCAMINOSE IDIOTROPH FROM THE TYLOSINPRODUCING STRAIN STREPTOMYCES FRADIAE KA-427
Králavcová et al. The effect of 5, 5-diethylbarbituric acid on the biosynthesis of anthracyclines in Streptomyces galilaeus
Blumauerová et al. Improved yields of daunomycinone glycosides in developmental mutants of Streptomyces coeruleorubidus
US6878535B2 (en) Process for producing soyasapogenol B and novel microorganisms