CS199124B1 - Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy - Google Patents
Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS199124B1 CS199124B1 CS145778A CS145778A CS199124B1 CS 199124 B1 CS199124 B1 CS 199124B1 CS 145778 A CS145778 A CS 145778A CS 145778 A CS145778 A CS 145778A CS 199124 B1 CS199124 B1 CS 199124B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- nucleic acids
- proteins
- isolation
- ion exchanger
- cellulose
- Prior art date
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 title claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 10
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 10
- 229920002873 Polyethylenimine Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 claims description 7
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 3
- -1 polydextran Polymers 0.000 claims 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 8
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 8
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 8
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010065042 Immune reconstitution inflammatory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031709 bromination Effects 0.000 description 1
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
Vynález ea týká Iontoměniče pre Izolácia nukleových kyselin a bielkovín. Pri jeho príprave sa využívá schopnost karboxymetylovej skupiny viazanej na celulózový dextranový alebo polyakrylamldový nosič vytváraí a polyetyléniminom anexový iontomenič, na ktorý aa mčže v 3alšom kroku naviazat nukleová kyselina, čím sa vytvoří ehromatograflcké médium pre kolonová afinitnú chromatografiu enzýmov metabolismu nukleových kyselin.
Doteraz pre izoláciu anzýmov a nukleových kyselin sa používajú rožne ehromatograflcké média, vyvinuté v zahraničí. Využlvajú rozdiely v ionogenných vlaatnostiach bielkovín a nukleových kyselin. Ide o iontoměniče typu katexor karboxymetylcelulóza, karboxymetyl aephadex, fosfocelulóza a 1., a anexov dietylaminoetylcelulóza, dietylaminoetylsephadex a i.
Tieto ehromatograflcké média aa používajú ako náplň do kolon pre kolonová chromatografiu enzýmov, nukleových kyselin,s ich zložiek.
Spoločnou nevýhodou týchto lontomeničov je leh malá selektivita* pretože nedokážu rozdělit navzájom nukleové kyseliny a bielkoviny, hocl sa zmačne odlišujú v tónových vlastnostiach. V dosledku tohoto sa při purlflkácil enzýmov a nukleových kyselin musia používat aj iné deliace metody (gelová flltrácia, gradientově centrifugácia, preparátívna
199 124
198124 alektroforéza a pod.}. Ide o výrobky zahraničných firiem, ktorých dovoz k nám představuje nemalú položku v devizových proetriedkoch. Vzhladom na súčasné vývojové triedy v molekulárno-biologickom výskume, dá ea očekával, že spotřeba chromatograflckých médií bude ďalej vzrastal, najma vSak takých, ktoré majú Specifické deliace schopnosti. Doterajšie sposoby přípravy chromatograflckých médií obsahujúcich nukleové kyseliny ad buď značné náročné čo do přípravy základného noaiča (bromácia celulózy, vazba ligendov, atď.), alebo sú založené na čistej empirii - vazba nukleových kyselin ako vyeokomolekulárnej látky β celulózou, alebo agarózou. Reprodukovatelnosl týchto metod je nízká, pretože vyžadujú okrem velkej laboratórnej rutiny značné nároky na homogenitu použitého média, čo u celulózy a agarózy sa nie vždy dá doaiahnul. Tieto nedostatky odstraňuje chromatograflcká médium, ktoré vznikne naviazaním nukleovej kyseliny na iontomenič typu polyetylénimin - karboxymetyl - celulóza. Nakolko při tejto reakci! dochádza k vazbě volných kladných /-NH-/*’ skupin polyetylániminu ao zápornými skupinami /PO^Z nukleových kyselin ostávajú bázy nukleových kyselin dostupné prs Specifická interakciu a enzýmami. Týmto jednoduchým spósobom sa dá připravil chromatografické médium, ktoré je schopné viazal lan tla látky zo živých ayatémov, ktoré majú afinitu k nukleovým kyselinám.
Spóeob přípravy lontomeniča zahrnuje tieto operácie:
1. aktlváela karboxymetyl celulózy
100 g práSkovej karboxymetyl celulózy sa zmieSa a 1,5 1 0,5 N NaOH. Po 30 minútovom statí prl izbovej teplota sa dekantuje destilovanou vodou do pH 8,0. Potom sa karboxymetylcelulóza prémiaSa e 1,5 1 0,5 N HC1 a po 30 minútach atátia při izbovej teplote sa dekantovalo vodou do pH 5,5.
2. Úprava polyetylénimlmu.
Rotok polyetylániminu výrobok firmy BASF Ludwlgehaffen /NSR/ označený ako Polymín P (číslo 34 - 1460} aa připravil následovně:
ml Polymínu F sa zmleSalo β 80 ml tlmivého roztoku obaahujúeeho 0,02 M TRIS (hydroxymetyl «mlnameten) pH 7,4 m B chlorid horečnatý a 0,1 m H ehela^ón III. Nerozpustný podiel aa odatránil centrlfugáclou pri 3 000 x g. Sediment aa zahodil a supernatant sa dlalyzoval 20 hodin oproti 2 lltrom tlmivého roztoku obsahujúceho 0,02 M TRIS (hydroxymatyl amlnometan) pH 7,4 a 0,1 m H chalaton III.
3. Příprava Polyetylániminu - carboxymetylcelulozy (v ďalSom FBI - Cli - celulózy). Karboxymetylcelulóza a Polymín P upravené uvedeným spósobom ea zmiaSali v pomere 1 : 1 až 1 : 100 a za občasného mieSania aa suspenzia zahrlevala prl teplote od 25 až 45 °C dva hodiny a nakonlec sa zmieSala pri izolovanéj teplote 15 hodin. Potom ea PSI - CM - celulóza naniesla na kolonu emX cm a premývaía aa pri izbovej teplote 1,5 1 tlmivým roztokom, který obsahoval: 0,01 V IRIS (hydroxymetyl amlnometan) pH 8,0; 1 m H 2 mercaptoetanol; 0,1 m M ohelatón III; 1 M chlorid draselný a glycerín v množstve, aby vznikol 5 % roztok glycerínu v tlmlvom roztoku. Takto připravené ohromatografické médium má ,89124 kapacitu: maximálně 50 mg hovadzleho sérum albuminu na 1 ml vlhkého chromatografického média, pričom pri pH 8,0 sa hovádzie sérum albumin naviaže na karboxymetylcelulózu.
4. Příprava dezoxyribonukleová kyselina - polyetylenimín - karboxymetylcelulózy (3alej DNA - EEI - CM - celulóza).
K auspenzii 5 g EEI - CM - celulózy v 20 ml tlmivého roztoku obsahujúceho 0,01 M TRIS (hydroxymetyl metan) pH 8,0 a 0,1 m M chelatón III. sa přidala 250 mg dezoxyribonukleová kyselina Izolovaná z calf thymusu v 10 ml tlmivéhp roztoku hoře uvedeného zloženia. Dezoxyribonukleová kyselina sa před zmiešaním s celulózou tepeine denaturovala zahriatím na 100 °C počas 5 minút. Po desalminútovom miešaní suspenzie PEI - CM - celulózy s DNA. sa centrlfugovalo pri 3 000 x g. K sedimentu sa po vysušení pri 50 °C počas 6 hodin a homogenizácll v trecej miske přidá 15 ml tlmivého roztoku vyššie uvedeného zloženia obsahuJúci 2 M chlorid horečnatý. Po premiešaní sa suspenzie nanesla na kolonu 2 x 10 cm a premýva sa do nulovéj absorbancie pri 260 nm. Potom sa kolona premýva 200 ml tlmivého roztoku uvedeného zloženia obsahujúci 0,1 M chlorid draselný a je připravená pre lzoláciu enzýmov metabolismu nukleových kyselin.
Připravené iontomeniče sa móžu použil pre izoláciu bielkovín a nukleových kyselin afinitnou chromatografiou biologických materiálov.
Claims (2)
- PREDMET VYNÁLEZU1. Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín vyznačujúci aa tým, že sa skládá z nukleovej kyseliny, polyetyléniminu a karboxy-metylovej skupiny viazanej na inertný nosič, například celulózu, polydextran, polyakrylamid.
- 2. Sposob přípravy iontomeniče podía bodu 1, vyznačujúci aa tým, že sa nukleové kyselina, alebo polynukleotid viaže na chromatografické médium připravené reakciou polyetyléniminu s karboxymetylovou skupinou naviazanou na inertný nosič, například celulózu, polydextran, polyakrylamid vo váhovom pomere 1 : 10 až 1 : 100 pri pH 7 až 9.0 a teplote 45 °C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145778A CS199124B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145778A CS199124B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199124B1 true CS199124B1 (sk) | 1980-07-31 |
Family
ID=5348995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS145778A CS199124B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199124B1 (sk) |
-
1978
- 1978-03-08 CS CS145778A patent/CS199124B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Er-el et al. | Hydrocarbon-coated sepharoses. Use in the purification of glycogen phosphorylase | |
| Wilchek | Affinity chromatography | |
| Colowick | [11] Separation of proteins by use of adsorbents | |
| CA1238626A (en) | Phase supports for the partition chromatography of macromolecules, a process for their preparation and their use | |
| US4579661A (en) | Process in the purification of biologically active substances | |
| EP3546066B1 (en) | Amphoteric dissociation ion exchange medium, its use, and separation capacity calibration method | |
| Erickson et al. | T4 bacteriophage-specific dihydrofolate reductase: purification to homogeneity by affinity chromatography | |
| Harris et al. | A simple chromatographic procedure for the preparation of rabbit-muscle myosin A free from AMP deaminase | |
| EP0153763B1 (en) | Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator | |
| EP0423938A1 (en) | Ligand-containing medium for chromatographic separation, process for preparing the medium, and use of the medium for isolating synthetic or natural molecules from a fluid mixture | |
| Mattiasson et al. | Efforts to integrate affinity interactions with conventional separation technologies: Affinity partition using biospecific chromatographic particles in aqueous two-phase systems | |
| Zimmermann | [44] Protein-RNA interactions in the bacterial ribosome | |
| US4207200A (en) | Soluble complex former for the affinity specific separation of macromolecular substances, its preparation and its use | |
| Sii et al. | Bioseparation using affinity techniques | |
| GB2221466A (en) | Biologically reactive particles with biological, therapeutic and chromatographic applications | |
| Šafaříková et al. | One-step partial purification of Solanum tuberosum tuber lectin using magnetic chitosan particles | |
| US20240158777A1 (en) | Magnetic bead suspension reagent, method for purifying nucleic acid and method for sorting nucleic acid | |
| JP2000146911A (ja) | 核酸を分離する方法 | |
| US5276146A (en) | Liquid perfluorocarbon supports useful as liquid affinity supports | |
| CS199124B1 (sk) | Iontomenič pre izoláciu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy | |
| Denburg et al. | Purification of a specific tRNA by Sepharose-bound enzyme | |
| US5395856A (en) | HPLC avidin monomer affinity resin | |
| EP0246103B1 (en) | Bioaffinity and ion exchange separations with liquid exchange supports | |
| Doonan | General strategies | |
| Burton | Affinity chromatography |