CS199124B1 - Ion exchanger for the isolation of nucleic acids and proteins and method of preparing the same - Google Patents
Ion exchanger for the isolation of nucleic acids and proteins and method of preparing the same Download PDFInfo
- Publication number
- CS199124B1 CS199124B1 CS145778A CS145778A CS199124B1 CS 199124 B1 CS199124 B1 CS 199124B1 CS 145778 A CS145778 A CS 145778A CS 145778 A CS145778 A CS 145778A CS 199124 B1 CS199124 B1 CS 199124B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- nucleic acids
- proteins
- isolation
- ion exchanger
- cellulose
- Prior art date
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 title claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 10
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 10
- 229920002873 Polyethylenimine Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 claims description 7
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 3
- -1 polydextran Polymers 0.000 claims 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 8
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 8
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 8
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010065042 Immune reconstitution inflammatory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031709 bromination Effects 0.000 description 1
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU
ČESKOSLOVENSKÁSOCIALISTICKÁREPUBLIKA< 19 ) 199124 I") (Bl)
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (61) (23) \<stavná priorita (22) Přihlášené 08 03 78 (21) PV 1457-78 (40) Zveřejněné 17 09 79(45) \ vdané 30 09 82 (51) Int. C1.3 C 07 H 21/00 (75)
Autor vynálezu SlMOTH JOZEF ing.CSc.
ZELINKA JÁN doc.ing.DrSc.TURŇA JÁN, BRATISLAVA (54) Iontomenič pře lzoláclu nukleových kyselin a bielkovín a sposob jeho přípravy
Vynález ea týká lontomeniča pře lzoláclu nukleových kyselin a bielkovín. Při jehopřípravě sa využívá sehopnosl karboxymetylovej skupiny vlazanej na celulózový dextranovýalebo polyakrylamldový nosič vytvářel s polyetylániminom anexový Iontomenič, na ktorý samčže v 3alěom kroku navlazal nukleová kyselina, čím sa vytvoří chromátografleká médiumpre kolonová afinitná chromatografiu enzýmov metabolismu nukleových kyselin.
Doteraz pre lzoláclu enzýmov a nukleových kyselin sa používájá rožne ehromatograflckémédia, vyvinuté v zahraničí. Využlvajá rozdiely v ionogenných vlaatnostiach bielkovín anukleových kyselin. Ide o iontomenlče typu katexor karboxymetylcelulóza, karboxymetylaephadex, fosfocelulóza a 1., a anexov dietylaminoetylcelulóza, dietylaminoetylsephadexa i.
Tieto ehromatograflcké média aa používájá ako náplň do kolon pre kolonová chromato-grafiu enzýmov, nukleových kyselin,a ich zložiek.
Spoločnou nevýhodou týchto lontomeničov je leh malá selektivita* protože nedokážurozdělit navzájem nukleové kyseliny a bielkoviny, hocl sa značné odliáujd v tónovýchvlastnostiach. V doeledku tohoto ea při purifikádl enzýmov a nukleových kyselin mueiapoužíval aj iné deliace metody (gelová flltrácia, gradientově centrifugácia, preparátIvna 199 124 2 198124 elektroforéza a pod.}. Ida o výrobky zahranlčných firiem, ktorých dovoz k nám představujenemalá položka v devizových proetriedkoch. Vzhladom na súčasné vývojové triedy v moleku-lárno-blologickom výekume, dá aa očekával, že spotřeba chromatografických médií bodedalej vzrastal, najma vSak takých, které majd Specifické deliaee schopnosti. SoteraJSiespoeoby přípravy chromatograflckých médií obaahujúclch nukleové kyseliny sd bu& značnénáročné čo do přípravy základného noalča (bromácla celulózy, vazba ligendov, at8.),alebo sd založené na člstej empirii - vazba nukleových kyselin ako vysokomolekulárnejlátky s celulózou, alebo agarózou. Reprodukovatelnosl týchto metod Je nízká, pretoževyžadujd okrem velkej laboratórnej rutiny značné nároky na homogenitu použitého média,čo u celulózy a agarózy sa nle vždy dá dosiahnul. Ileto nedostatky odstraňuje chromato-graflcké médium, ktoré vznikne navlazaním nukleovej kyseliny na lontomenlč typu polyety-lénimln - karboxymetyl - celulóza. Nakolko při tejto reakci! dochádza k vazbě volnýchkladných /-NH-/+ skupin polyetylénlmlnu so zápornými skupinami /PO^Z" nukleových kyselinostávajd bázy nukleových kyselin dostupné pre Specifická Interakclu a enzýmaml. TýmtoJednoduchým spósobom sa dá připravil chromatografleká médium, ktoré Je schopné viazallen tle látky zo živých syatémov, ktoré majd afinitu k nukleovým kyselinám.
Spósob přípravy lontomeniča zahrnuje tieto operácie: 1. aktlváela karboxymetyl celulózy 100 g práSkoveJ karboxymetyl celulózy sa zmieSa a 1,5 1 0,5 N NaOH. Po 30 mlndtovomstatí prl izbovej teplota sa dekantuje destilovanou vodou do pH 8,0. Potom sa karboxy-metylcelulóza premleSa s 1,5 1 0,5 N HC1 a po 30 mindtach státia při Izbovej teplota sadekantovalo vodou do pH 5,5. 2. Úprava polyetylénlmlmu.
Potok polyetylénlmlnu výrobok firmy BASF Ludwlgshaffen /NSR/ označený ako Polymín P(číslo 34 - 1460} sa připravil následovně: 20 ml Polymínu P sa zmleSalo s 80 ml tlmlvého roztoku obsahujdeeho 0,02 M TRIS (hydroxy-metyl amlnometan) pH 7,4 a H chlorid horečnatý a 0,1 m H ehela^ón III. Nerozpustnýpodlel sa odstránll centrlfugáclou prl 3 000 x g. Sediment sa zahodil a supernatant sadlalyzoval 20 hodin oproti 2 lltrom tlmlvého roztoku obsahujdeeho 0,02 M IRIS (hydroxy-metyl amlnometan) pH 7,4 a 0,1 m H chelaton III. 3. Příprava Polyetylénlmlnu - carboxymetylcelulozy (v ňaláom PEI - Cli - celulózy).Karboxymetylcelulóza a Polymín P upravené uvedeným spósobom sa zmleSali v pomere 1 : 1až 1 : 100 a za občasného mleSania sa suspenzia zahrlevala prl teploto od 25 až 45 °Cdve hodiny a nakonlec sa zmieSala prl lzolovanej teploto 15 hodin. Potom sa PEI - CM -- celulóza nanlesla na kolonu omX cm a premývaía aa prl Izbovej teploto 1,5 1 tlmlvýmroztokom, který obsahoval: 0,01 V IRIS (hydroxymetyl amlnometan) pH 8,0; 1 a H 2 mercap-toetanol; 0,1 m M ohelatón III; 1 M chlorid draselný a glycerín v množstva, aby vznikol5 % roztok glycerínu v tlmlvom roztoku. Takto připravené chromatograflcké médium má
Claims (2)
1. Iontomenič pře izoláciu nukleových kyselin a bielkovín vyznačnjůci sa tým, Se saskládá z nukleovej kyseliny, polyetyléniminu a karboxy-metylovej skupiny viazanej nainertný nosič, například celulózu, polydextran, polyakrylamid.
2. Sposob přípravy iontomeniče podlá bodu 1, vyznačujúcl sa tým, že sa nukleové kyselina,alebo polynukleotid vlaže na chromatografické médium připravené reakciou polyetylén-imlnu s karboxymetylovou skupinou naviazanou na inertný nosič, například celulózu,polydextran, polyakrylamid vo váhovom pomere 1 : 10 až 1 : 100 prl pH 7 až 9.0 ateplota 45 °C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145778A CS199124B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Ion exchanger for the isolation of nucleic acids and proteins and method of preparing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145778A CS199124B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Ion exchanger for the isolation of nucleic acids and proteins and method of preparing the same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199124B1 true CS199124B1 (en) | 1980-07-31 |
Family
ID=5348995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS145778A CS199124B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Ion exchanger for the isolation of nucleic acids and proteins and method of preparing the same |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199124B1 (cs) |
-
1978
- 1978-03-08 CS CS145778A patent/CS199124B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Er-el et al. | Hydrocarbon-coated sepharoses. Use in the purification of glycogen phosphorylase | |
| Shaltiel | [9] Hydrophobic chromatography | |
| Colowick | [11] Separation of proteins by use of adsorbents | |
| CA1238626A (en) | Phase supports for the partition chromatography of macromolecules, a process for their preparation and their use | |
| JP7111373B2 (ja) | 両性解離型イオン交換媒体、並びに使用方法及び分離容量のキャリブレーション方法 | |
| Erickson et al. | T4 bacteriophage-specific dihydrofolate reductase: purification to homogeneity by affinity chromatography | |
| Harris et al. | A simple chromatographic procedure for the preparation of rabbit-muscle myosin A free from AMP deaminase | |
| EP0153763B1 (en) | Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator | |
| EP0423938A1 (en) | Ligand-containing medium for chromatographic separation, process for preparing the medium, and use of the medium for isolating synthetic or natural molecules from a fluid mixture | |
| Zimmermann | [44] Protein-RNA interactions in the bacterial ribosome | |
| US4207200A (en) | Soluble complex former for the affinity specific separation of macromolecular substances, its preparation and its use | |
| GB2221466A (en) | Biologically reactive particles with biological, therapeutic and chromatographic applications | |
| Šafaříková et al. | One-step partial purification of Solanum tuberosum tuber lectin using magnetic chitosan particles | |
| US20240158777A1 (en) | Magnetic bead suspension reagent, method for purifying nucleic acid and method for sorting nucleic acid | |
| JP2000146911A (ja) | 核酸を分離する方法 | |
| US5276146A (en) | Liquid perfluorocarbon supports useful as liquid affinity supports | |
| CS199124B1 (en) | Ion exchanger for the isolation of nucleic acids and proteins and method of preparing the same | |
| Wilchek | Affinity chromatography | |
| Denburg et al. | Purification of a specific tRNA by Sepharose-bound enzyme | |
| US5395856A (en) | HPLC avidin monomer affinity resin | |
| EP0246103B1 (en) | Bioaffinity and ion exchange separations with liquid exchange supports | |
| Burton | Affinity chromatography | |
| US5306615A (en) | Immunoassays and nucleic acid assays with liquid exchange supports | |
| Hjertén | Fractionation of proteins by hydrophobic interaction chromatography, with reference to serum proteins | |
| Okotore | Basic separation techniques in biochemistry |