CS197095B1 - Process for preparing antibiotic citrine from microorganism penicillium janthinellum biourge - Google Patents

Description

POPIS VYNÁLEZU

K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU 197 095 (11) |B1) ČESKOSLOVENSKÁSOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 )

(61) (23) Výstavná priorita (22) Přihlášené 19 06 78(21> pv 4019-78 (51)lnt.ČI.C 12 i-z / . í :

ÚŘAD PRO VYNÁLEZY

A OBJEVY (40) Zverejnené 31 07 79(45) Vydané 30 04 82 (75)

Autor vynálezu BETINA VLADIMÍR, dOC., dr., DrSc, BRATISLAVA

Sposob přípravy antibiotika citrinínu z mikroorganizmu Penicillium janthinellumBiourge 1

Predmetom vynálezu je sposob přípravy antibiotika citrinínu z nového produkčnéhomikroorganizmu Penicillium janthinollum Biourge.

Medzi biologicky aktivně sekundárné metabolity mikroorganizmov patria antibiotiká,alkaloidy, mykotoxíny, inhibitory enzýmov, stimulátory rastu a pod. Citrinín je metaboli-tom viacerých mikroskopických húb z rodu Penicillium, jeho produkcia druhom Penicilliumjanthinellum sa v prehíadoch producentov antibiotik neuvádza (napr. J.S. Glasby: Encyclo-paedio of Antibiotics. John Wiley and Sons, London, 1976, s. 134 - 135). Jeho antibakte-riálne vlastnosti boli už dávnéjšie známe, ale nedávno bola spoznaná jeho protihubová aprotihmyzová aktivita. Předmětný vynález prispieva k riešeniu potřeby nových biologicky účinných zlúčenína uvádza sposob přípravy citrinínu v krystalickom stave,

Sposob přípravy citrinínu z mikroorganizmu Penicillium jenthinellum S-52, ktorý jedeponovaný pod číslom CCM P-391 v Ss. zbierke mikroorganizmov University J.E.Purkyně vBrně, Tř. obránců míru 10, rieSi vynález, ktorého podstata je v tom že sa za submerznýchpodmlenok v tekutom živnom roztoku obsahujúcem zdroje uhlíka v podobě sacharidov, organic-ky viazaného dusíka a minerálnych látok kultivuje mikroorganizmus Penicillium janthinellumS-52 v rOzmedzí teplot od 24 do 30° C a pri mierne kyslých hodnotách pH, filtrát fermen- 197 095 197 095 2

tačného média alebo zrazenina získaná okyslením filtrátu kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 až 2 sa extrahuje organickým činidlem obmedzene miešateíným s vodou, výhodné chlorofor-mom alebo estermi kyseliny octovej, extrakt sa po odpaření rozpustí v metanole, aoetonealebo benzéne a podrobí sa kryětalizácii, čím sa získá kryštalický oitrlnín, V dalšom je vynález bližšie objasněný v příkladech postupov bez toho, že by sa natleto akokoívek obmedzoval. Příklad 1

Vysporulovaná kultúra Penioilllum janthinellum S-52 na sladinovom agare v 1000 ml Rouxovejkultivačnej nádobě sa zaleje 40 ml sterilnej vody a uvoínia sa spory, 10 ml spórovejsuspenzie sa přidá do 1000 ml kultivačnej banky se 150 ml sterllného živného roztoku tohtozloženia: pitná voda 1000 ml, glukóza 45 g, saoharóza 45 g, dusičnan sodný 2 g, sekundár-ný fosforečnan draselný 1 g, síran horečnatý 0,5 g, chlorid draselný 0,5 g, síran železna-tý 0,01 g, zahuštěný kukuřičný extrakt (50% sušina) 10 g, pH před sterilizáciou upravenána hodnotu 6,5. Kultivuje sa na rotačnej trepačke s 220 obrátkami min**1 a polomerom kruž-nice 5 om pri 38^ C 24 až 30 hodin, Z takto vyrastenej kultúry sa ako vegetativně inoku-lum použijú objemy 5 ml na naočkovanle dávok 150 ml živného roztoku toho istého zloženiav 1000 ml kultivačnýoh nádobách. Kultivuje sa na rotačnej trepačke za uvedených podmienok5 až 6 dní, ke 5 sa dosahuje maximum produkcie oitrinínu. Příklad 2 Příprava suspenzie spor a vegetatívneho inokula Penicillium janthinellum S-52 sú takéisté ako v příklade 1. Rovnaké sú aj podmienky fermentácie ale v živnom roztoku tohtozloženia: pitná voda 1000 ml, sacharóza 40 g, zahuštěný kukuřičný extrakt (50% sušiny) 20 g, sekundárný fosforečnan draselný 4 g, pH před sterilizáciou sa neupravuje. Kultivá-oia trvá 10 až 11 dní, keá sa dosahuje maximálna produkcia oitrinínu. V tomto případe jeprodukcia antibiotika asi trojnásobná v porovnání s produkoiou v živnom roztoku pódiapříkladu 1, Příklad 3

Myoélium kultúry Penioillium janthinellum po skončení fermentácie podía příkladu 1 alebo 2 sa oddělí od kultlvačného roztoku filtráclou a filtrát sa eštš přefiltruje cez vrstvukremeliny. K 5 1 filtrátu sa přidá třetinový objem chloroformu a před premieěaním obidvoohfáz sa pH zníži na hodnotu 1,5 přidáním kyseliny chlorovodíkovéj. Pázy sa dokladné premie-šajú mlešadlom a potom sa oddelia. Extrakcia ohloroformom sa ešte zopakuje dvakrát. Spojenéchloroformové extrakty sa zbavia vody flltráoiou cez vrstvu bezvodého síranu sodného azískaný filtrát sa odpaří do sucha, Z kultlvácle podía příkladu 2 sa získá 5 g surovéhopreparátu oitrinínu. Příklad 4 5 g surového preparátu, získaného podía příkladu 1, sa rozpustí v 50 ml tetrachlórmetáne,roztok sa přefiltruje a důkladné sa premieša s 20 ml etylénglykolu, do ktorého prejdú

Claims (1)

1. 3 197 095 sprievodné hnědé pigmenty. Po oddělení fáz sa žltofluoreskujúci roztok citrininu v tetra-ohlórmetáne odpaří do sucha, zvySok sa rozpustí v acetone a podrobí kryStalizáoii. Získása 500 mg krystalického citrininu. PREDMET VYNÁLEZU Spósob přípravy antibiotika citrininu z mikroorganizmu Penicillium janthinellumBiourge vyznačený tým, že sa za submerzných podmienok v tekutom živnom roztoku obsahujú-oom zdroje uhlíka v podobě sacharidov, organicky viazaného dusíka a minerálnych látokkultivuje mikroorganizmus Penicillium jenthinellum S-52 CCM P-391 pri teplotách 24 až30° C a pri mierne kyslýoh hodnotách pH, filtrát fermentačného média, alebo zrazeninazískaná okyslením filtrátu kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 až 2 sa extrahuje organic-kým činidlem obmedzene mieSateíným s vodou, výhodné chloroformom alebo estermi kyselinyootovej, extrakt sa po odpaření rozpustí v metanole, acetone alebo benzene a podrobí sakryštalizácii.