CN218973959U - 一套用于动物组织器官的免疫染色工具包 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一套用于动物组织器官的免疫染色工具包，其包括I硅胶包埋模具和II漂染工具盒或者免疫组化湿盒。硅胶包埋模具包含上模具与下模具，上模具与下模具的内侧分别开设有上凹槽、下凹槽，二者围成与动物组织器官形状一致的空腔结构；漂染工具盒包括漂染盒体、漂染过滤套板、漂染盒盖，漂染盒体的上表面向下延展形成为多个独立的漂染盒体凹槽，漂染过滤套板上设有能被漂染盒体凹槽容纳的漂染套板凹槽，其底面设有漂染滤网；免疫组化湿盒包括湿盒盒体、湿盒过滤套板、湿盒盒盖，湿盒盒体的上表面向下延展形成为多个独立的玻片槽，湿盒过滤套板上设置有能被玻片槽容纳的湿盒套板凹槽，其底面设有湿盒滤网。

Description

一套用于动物组织器官的免疫染色工具包

技术领域

本实用新型属于生物实验设备技术领域，具体涉及一套用于动物组织器官的免疫染色工具包。

背景技术

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及相对定量的研究。免疫染色方法包括漂染和贴片染，相关的实验工具包括组织包埋模具(组织前处理用)、细胞培养板(漂染用)、免疫组化湿盒(贴片染用)。

商业化的组织包埋模具有不同尺寸可选，但形状均为立方体构造。当使用冰冻切片包埋剂OCT对动物组织器官进行包埋时，由于组织包埋模具并非针对组织器官的形状设计的，会存在部分组织器官包被不均匀以及不同样本间组织器官包被角度的差异，需要在上机切片时，反复调整角度和修剪包被剂，才能获取效果好的切片，浪费包埋剂。且商业化的包被盒通常是透明塑料材质，无法进行保湿长期存放，无法对带有荧光信号的组织避光保护。

漂染的传统方法是使用细胞培养板，根据样本的数量选择不同规格的细胞培养板来进行抗体的孵育和洗脱。在每一次抗体孵育与洗脱的过程中，组织切片会被反复转移，不仅耗时而且容易对组织切片造成不可逆的机械损伤，影响后期的数据处理，而且由于每张组织切片之间有被挑取的时间差，因此在染色样本较多时容易出现染色不均的现象。而且，如果多张组织切片放入一个细胞培养板中进行染色，需要后期区分不同组织切片中目标组织区信号所在空间位置，极大地增加了后期数据统计分析的难度，尤其是在需要获取连续性的、高度完整的切片染色数据时，使用商业化的细胞培养板无法满足。因此，需要一种集成化的，解决组织器官切片高通量、连续性、完整性和特殊性的染色需求、易操作、可反复使用的漂染用染色装置。

贴片染时，实验人员根据样本的数量选择不同规格的免疫染色缸或免疫组化湿盒，当使用商业化的染色缸时，由于放置载玻片的角度问题，在经历反复洗脱后，会出现组织切片从载玻片脱落的情况，造成样本的丢失，多数抗体相当昂贵，所以更多选择湿盒。商业化的免疫组化湿盒由盖子和底座组成，底座里有两条水槽，使用湿盒前需要根据经验加入适量的去离子水来保证抗体孵育过程中的环境湿度，避免抗体蒸发。当使用湿盒进行抗体孵育和洗脱时，需要先借助免疫组化笔在贴片四周画上疏水圈，将洗脱液滴加在疏水圈内进行操作，因此不能随意晃动，无法使用摇床来加速抗体与贴片组织中抗原的结合，贴片染常常出现染色不均匀的现象，染色效果相比漂染差别很大，且贴片染色的方式只适合较薄(5-30μm)切片的染色工作。不仅如此，现有免疫组化湿盒在使用时，每一次抗体与试剂的洗脱和孵育，都需要反复使用移液器手动操作，而且操作要十分小心避免破快疏水笔的痕迹，一旦疏水笔迹破损需要重新涂擦，实验操作繁琐耗时，且疏水笔有挥发性刺鼻气味，需要在通风橱内进行操作。

实用新型内容

为了解决上述问题，本实用新型提供了一套用于动物组织器官的免疫染色工具包，可以保护组织样本原始荧光信号，节约抗体，保护实验人员，提高染色效果、提升实验效率。

为了至少实现上述目的之一，本实用新型采用的技术方案为：

一套用于动物组织器官的免疫染色工具包，所述免疫染色工具包包括I硅胶包埋模具和II漂染工具盒或免疫组化湿盒。

所述硅胶包埋模具包含上模具与下模具，所述上模具的内侧开设有上凹槽，所述下模具的内侧开设有下凹槽，所述上凹槽与所述下凹槽围成空腔结构，所述空腔结构与动物组织器官形状一致，所述模具的内侧开设有与所述空腔结构连通的进样口，可用于注入包埋剂。

所述漂染工具盒包括漂染盒体，所述漂染盒体的上侧可拆卸式连接有漂染过滤套板与漂染盒盖，所述漂染盒体的上表面向下延展形成为多个，独立的漂染盒体凹槽，所述漂染过滤套板上设有能被所述漂染盒体凹槽容纳的漂染套板凹槽，所述漂染套板凹槽的底面设有漂染滤网。

所述免疫组化湿盒包括湿盒盒体，所述湿盒盒体的上侧可拆卸式连接有湿盒过滤套板与湿盒盒盖，所述湿盒盒体的上表面向下延展形成为多个、独立的容纳载玻片的玻片槽，所述湿盒过滤套板上设置有能被所述玻片槽容纳的湿盒套板凹槽，所述湿盒套板凹槽的底面设有湿盒滤网，所述漂染盒体的周边开设有水槽。

进一步地，所述漂染盒体凹槽的数量为60-360个，或者所述湿盒盒体的玻片槽的数量为6-36个。

更进一步地，所述漂染盒体凹槽的数量为上述范围内的任意范围或者数值，例如60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300个，或者所述湿盒盒体的玻片槽的数量为上述范围内的任意范围或者数值，例如6、8、10、12、15、18、20、22、24、28、32、36个等等，优选地，上述漂染盒体凹槽以阵列的形式进行设置，例如6×10、8×10、10×12、12×12、14×16、15×15、18×10、20×16。或者所述发湿盒盒体的玻片槽以阵列的形式进行设置，例如2×3、2×4、2×5、4×3、5×3、4×5、6×6等等。

进一步地，所述上模具的内表面设有模具卡扣，所述下模具的内侧开设有与所述模具卡扣对应的模具扣位，更优选地，所述模具卡扣的数量足以使得将模具密封的作用，例如1-4个。

所述湿盒盒体的上表面开设有湿盒扣位，所述湿盒盒盖的底部设有与所述湿盒扣位对应的湿盒卡扣，所述湿盒扣位的数量足以使得将湿盒密封的作用，例如2-12个。更进一步地，所述湿盒扣位的数量为6个。

进一步地，所述漂染盒盖的上表面设有漂染盒提手，或者所述湿盒盒盖的上表面设有湿盒提手。

进一步地，漂染盒体凹槽的大小适合容纳组织切片。优选地，所述漂染盒体凹槽为圆形，更为优选地，所述圆形凹槽的直径为10-50mm，可以是上述数值范围的任意值或者任一范围，例如10、11、16、22、35、42、48、50mm等等，或者10-15、14-25、10-30、10-35、20-50mm等等。

进一步地，所述硅胶包埋模具的空腔结构形状与动物组织器官一致，优选地，所述啮齿类动物包括小鼠或者大鼠。进一步优选地，所述的组织器官包括脑组织、肺、心脏、肝脏、胃、胰腺、胆囊、肾脏、膀胱、子宫、卵巢或睾丸等等。

优选地，所述动物包括各种实验用动物，包括啮齿目、鼠科、鼠属；豚鼠科、豚鼠属；兔形目、兔科、真兔属；犬科；猪科；非人灵长类；例如小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、犬；猪、猴、狒狒。

进一步地，所述漂染滤网为微米级别滤网，以防止动物组织从漂染套板凹槽进入到漂染盒体凹槽，同时允许液体从漂染盒体凹槽进入到漂染套板凹槽。

类似的，所述湿盒滤网为微米级别滤网，以防止组织从湿盒过滤套板凹槽进入到湿盒盒体的玻片槽，同时允许液体从玻片槽进入到湿盒过滤套板凹槽，可以降低实验过程中组织切片的损耗。

更优选地，所述微米级别滤网的孔径为50-200μm，可以是上述数值范围的任意值或者任一范围，例如50、55、60、68、73、80、92、100、110、120、135、150、168、180、200μm等等，或者50-100、60-150、80-150、80-120、90-150μm等等。

进一步地，所述湿盒过滤套板嵌套在所述漂染盒体上时，其周边覆盖住所述水槽。以防止湿盒中无菌水的挥发，保持盒内的环境湿度。

进一步地，所述水槽成环形，开设在所述湿盒盒体上表面的四周。

进一步地，所述漂染盒体或者湿盒盒体上设置有编号，编号可以是大写或者小写字母、阿拉伯数字、文字、图形或者其他简单的标识。

进一步地，所述免疫染色工具包还包括适配无线振动器，所述免疫组化湿盒、漂染工具盒均能与适配无线振动器配套使用。

本实用新型与现有技术相比的有益效果如下：

1)硅胶包埋模具能够对组织器官进行均匀包被，易于操作和获取优质切片，并且可以最大程度保护和保存组织样本原始荧光信号。

2)漂染工具盒设有多个漂染盒体凹槽，满足了一次性处理组织器官连续切片的需求，且巧妙地设置有漂染过滤套板，能够极大的提升实验的效率，不仅极大减少了反复挑取组织切片所带来的不可逆的机械损伤，而且保证了每张切片之间实验参数(洗脱和孵育过程中时间上)的一致性，避免造成染色效果不均匀的现象，而且得益于单个凹槽适配一张组织切片的设计，在最终获取染色结果时，也能区分出组织切片内信号的空间位置关系，极大地节约了后期数据分析的时间。

3)免疫组化湿盒同样设置有湿盒过滤套板和湿盒盒体，融合了染色缸和现有湿盒的技术优点，有效地保护了湿盒中无菌水的挥发以及保持盒内的环境湿度，改变了传统贴片染色的方式，摆脱了使用疏水笔带来的限制，不仅能够结合适配无线振动器使用，极大地提升染色效果、高效便捷，还能够使实验人员免受疏水笔的挥发性试剂对身体带来的伤害。

4)优选方案中，无论是组织切片染色工具盒还是组织切片用湿盒，两者的过滤套板均采用微米级别的滤网，降低实验过程中组织切片的损耗。

5)优选方案中，适配无线振动器无线充电设计，极大地提升了实验的可操作性，以及与商业化温控设备配套使用的舒适度，同时，适配无线振动器同组织切片用湿盒的联用极大的改善了贴片染色的效果。

附图说明

图1为本实用新型中脑组织硅胶包埋模具的内侧结构示意图；

图2为本实用新型中心脏硅胶包埋模具的内侧结构示意图；

图3为本实用新型中肾脏硅胶包埋模具的内侧结构示意图；

图4为本实用新型中漂染工具盒的结构示意图；

图5为本实用新型中免疫组化湿盒的结构示意图；

图中各部件标记如下：1-硅胶包埋模具、101-上模具、102-下模具、103-上凹槽、104-下凹槽、105-进样口、106-模具卡扣、107-模具扣位、2-漂染工具盒、201-漂染盒体、202-漂染盒体凹槽、203-漂染过滤套板、204-漂染套板凹槽、205-漂染滤网、206-漂染盒盖、207-漂染盒提手、3-免疫组化湿盒、301-湿盒盒体、302-水槽、303-玻片槽、304-湿盒扣位、305-湿盒过滤套板、306-湿盒套板凹槽、307-湿盒滤网、308-湿盒盒盖、309-湿盒卡扣、310-湿盒提手。

具体实施方式

下面结合附图来进一步描述本实用新型的技术方案，本实用新型的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应当理解，实施例仅是示例性的，不对本实用新型的范围构成限制。

需要说明的是，本申请文件的权利要求书、说明书中的术语“侧”、“上”、“下”等所指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，而不必理解为所指的装置或部件必须具有特定的方位、以特定的方位构造或操作。

在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，“固定”、“连接”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

本实用新型包括硅胶包埋模具1和漂染工具盒2或免疫组化湿盒3。

图1至图3示出了本实用新型免疫染色工具包中三种组织器官硅胶包埋模具的结构示意图。

如图1，以脑组织进行示例：硅胶包埋模具1包含上模具101与下模具102，上模具101的内侧开设有上凹槽103，下模具102的内侧开设有下凹槽104，上凹槽103与下凹槽104围成空腔结构，空腔结构与小鼠脑组织形状相一致，上模具101的内表面设有模具卡扣106，下模具102的内侧开设有与模具卡扣106对应的模具扣位107，模具1的内侧开设有与空腔结构连通的进样口105，以便于包埋剂等试剂进样。所述进样口105可以设置在上模具101上，也可以设置在下模具102上，或者上模具101和下模具102卡合时围成进样口105。

在本实施例中，模具卡扣106及其对应的模具扣位107的数量均为2个，能够保证上模具101与下模具102贴合时是完全密闭的，最大程度保护了脑组织样本原始荧光信号。

图2和3分别显示出小鼠心脏组织器官和肾脏组织器官的空腔结构示意图。

当然，可以将空腔结构设置成和动物的其它组织器官相一致，例如肺、肝脏、胃、胰腺、胆囊、膀胱、子宫、卵巢或睾丸等等，在此不再进行穷举。也可以是除啮齿类动物之外的其它动物。动物组织器官的形状是公知的，例如，可参考《格氏解剖学图谱》、《Grant解剖学图谱》等。

图4示出了本实用新型免疫染色工具包中漂染工具盒的结构示意图。

漂染工具盒2包括漂染盒体201，漂染盒体201的上侧可拆卸式连接有漂染过滤套板203与漂染盒盖206，漂染盒体201的上表面向下延展形成为多个，独立的漂染盒体凹槽202，漂染过滤套板203上设有能被漂染盒体凹槽202容纳的漂染套板凹槽204，漂染盒体凹槽202为圆形，直径大小适合容纳组织切片，其底面设有漂染滤网205，漂染滤网205为微米级别滤网。漂染盒体201上设置有阿拉伯数字和大写字母编号。漂染盒体201、漂染过滤套板203、漂染盒盖206均为一体成型，便于生产制造。

在本实施例中，漂染盒体凹槽202的数量为120个，满足了一次性处理组织器官连续切片的需求，提升了实验效率，减少了反复挑取切片所带来的不可逆的机械损伤，有效解决了传统染色工具通量低、换液繁琐、抗体孵育不均等问题。漂染滤网205的孔径为100μm，圆形漂染盒体圆形凹槽202的直径为11mm。

图5示出了本实用新型免疫染色工具包中免疫组化湿盒的结构示意图。

免疫组化湿盒3包括湿盒盒体301，湿盒盒体301的上侧可拆卸式连接有湿盒过滤套板305与湿盒盒盖308，湿盒盒体301的上表面向下延展形成为多个独立的，容纳标准载玻片的玻片槽303，湿盒过滤套板305上设置有能被玻片槽303容纳的湿盒套板凹槽306，湿盒套板凹槽306的底面设有湿盒滤网307，漂染盒体301的周边开设有水槽302，湿盒过滤套板305嵌套在漂染盒体301上时，其周边覆盖住水槽302。湿盒盒盖308的上表面设有湿盒提手310，湿盒盒体301的上表面开设有湿盒扣位304，湿盒盒盖308的底部设有与湿盒扣位304对应的湿盒卡扣309。湿盒盒体301、湿盒过滤套板305、湿盒盒盖308均为一体成型，便于生产制造。

在本实施例中，湿盒扣位304与湿盒卡扣309的数量均为6个，玻片槽303的数量为20个。湿盒盒体301上也可以设置有编号，玻片槽303与湿盒套板凹槽306配套的设计摆脱了使用疏水笔带来的限制，有效地保护了湿盒中无菌水的挥发以及保持盒内的环境湿度，不仅高效便捷，还能够保护实验人员免受疏水笔的挥发性试剂对身体带来的伤害。湿盒滤网307的孔径为100μm，降低了实验过程中组织切片的损耗。

为了更好地理解本实用新型的技术方案，以下以对成年小鼠脑组织进行连续切片的染色工作为例说明本实用新型的使用方法：

1)将完成固定和脱水的小鼠脑组织放进脑组织硅胶包埋模具中，将两半模具扣紧，从进样口输入OCT，然后转移至-20℃冷冻，如果需要接着进行实验，只需要冷冻15-20min，就可以达到非常均匀的包被效果，如果不是立刻进行实验，可以在-20℃长期保存，例如保存6个月后，将完成包被的脑组织使用OCT粘接在冰冻切片机的冻头上，调整切片厚度为50μm进行切片，无需反复修片，即可获取平整优质的切片。

2)如果选择漂染工具盒使用进行漂染，首先将漂染过滤套板套在漂染盒体上，每个漂染盒体凹槽加入100微升的PBS溶液，将脑片按照切片顺序依次放入漂染盒体凹槽的孔洞中，根据漂染盒体上的字母和数字进行记录顺序。收片结束后将漂染盒盖盖好，放置于适配无线振动器上进行OCT的洗脱，一共进行三次洗脱每次10分钟，每次换液只需要取下漂染盒盖，将漂染过滤套板取出放置于吸水纸上方，弃去漂染盒体中用过的PBS，加入新的PBS溶液后将漂染过滤套板再次嵌套在漂染盒体中，盖上漂染盒盖后放置于适配无线振动器上进行OCT的洗脱，以此方式重复操作，并依次进行：封闭(封闭液的配方为5％BSA溶解于0.3％PBST溶液中，封闭液的体积每孔50微升，室温1小时)、一抗孵育(以cfos抗体染色为例，一抗稀释浓度1:1000，每孔50微升，4摄氏度20h)、一抗洗脱(PBS洗3遍，每遍15分钟，每孔100微升)、二抗孵育(二抗稀释浓度1:1000，每孔50微升，室温2小时)、二抗洗脱(PBS洗3遍，每遍15分钟，每孔100微升)，最后进行封片。

3)如果选择使用免疫组化湿盒进行贴片染，首先将脑片按照切片的顺序依次贴在粘性载玻片上，室温放置24h，然后将湿盒过滤套板套在湿盒盒体上，每个孔加入800微升的PBS溶液，将贴有脑片的载玻片按照顺序依次放置于湿盒过滤套板凹槽中，盖好湿盒盒盖，放置于适配无线振动器上进行OCT的洗脱，一共进行三次洗脱每次15分钟，每次换液只需要取下湿盒盒盖，将湿盒过滤套板取出放置于吸水纸上方，弃去湿盒盒体玻片槽中用过的PBS，加入新的PBS溶液后将湿盒过滤套板再次套上，盖上湿盒盒盖后放置于适配无线振动器上进行洗脱，以此方式重复操作，并依次完成封闭、一抗孵育、一抗洗脱、二抗孵育、二抗洗脱，最后进行封片。

以上所述仅为本实用新型的优选实施方式而已，并不用于限制本实用新型，对于本领域的技术人员来说，本实用新型可以有各种更改和变化。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

Claims (10)

1.一套用于动物组织器官的免疫染色工具包，包括I硅胶包埋模具(1)和II漂染工具盒(2)或免疫组化湿盒(3)，其特征在于：

所述硅胶包埋模具(1)包含上模具(101)与下模具(102)，所述上模具(101)的内侧开设有上凹槽(103)，所述下模具(102)的内侧开设有下凹槽(104)，所述上凹槽(103)与所述下凹槽(104)围成空腔结构，所述空腔结构与动物组织器官形状一致，所述模具(1)的内侧开设有与所述空腔结构连通的进样口(105)；

所述漂染工具盒(2)包括漂染盒体(201)，所述漂染盒体(201)的上侧可拆卸式连接有漂染过滤套板(203)与漂染盒盖(206)，所述漂染盒体(201)的上表面向下延展形成为多个、独立的漂染盒体凹槽(202)，所述漂染过滤套板(203)上设有能被所述漂染盒体凹槽(202)容纳的漂染套板凹槽(204)，所述漂染套板凹槽(204)的底面设有漂染滤网(205)；

所述免疫组化湿盒(3)包括湿盒盒体(301)，所述湿盒盒体(301)的上侧可拆卸式连接有湿盒过滤套板(305)与湿盒盒盖(308)，所述湿盒盒体(301)的上表面向下延展形成为多个、独立的容纳载玻片的玻片槽(303)，所述湿盒过滤套板(305)上设置有能被所述玻片槽(303)容纳的湿盒套板凹槽(306)，所述湿盒套板凹槽(306)的底面设有湿盒滤网(307)，所述湿盒盒体(301)的周边开设有水槽(302)。

2.根据权利要求1所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述漂染盒体凹槽(202)的数量为60-360个，或者所述湿盒盒体的玻片槽(303)的数量为6-36个。

3.根据权利要求1或2所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述上模具(101)的内表面设有模具卡扣(106)，所述下模具(102)的内侧开设有与所述模具卡扣(106)对应的模具扣位(107)，或者，所述湿盒盒体(301)的上表面开设有湿盒扣位(304)，所述湿盒盒盖(308)的底部设有与所述湿盒扣位(304)对应的湿盒卡扣(309)，所述湿盒扣位(304)的数量为2-12个。

4.根据权利要求1或2所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述漂染盒盖(206)的上表面设有漂染盒提手(207)，或者，所述湿盒盒盖(308)的上表面设有湿盒提手(310)。

5.根据权利要求1或2所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述漂染盒体凹槽(202)的大小适合容纳组织切片。

6.根据权利要求1所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述硅胶包埋模具(1)的空腔结构形状与动物的组织器官一致，所述动物来源于实验用动物，包括来源于鼠属、豚鼠属、真兔属、犬科、猪科或非人灵长类的实验用动物。

7.根据权利要求1或6所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述的组织器官包括脑组织、肺、心脏、肝脏、胃、胰腺、胆囊、肾脏、膀胱、子宫、卵巢或睾丸。

8.根据权利要求1或2所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述湿盒过滤套板(305)嵌套在所述湿盒盒体(301)上时，所述湿盒过滤套板(305)的周边覆盖住所述水槽(302)。

9.根据权利要求1或2所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述漂染滤网(205)与所述湿盒滤网(307)均为微米级别滤网，所述滤网孔径为50-200μm。

10.根据权利要求1或2所述的免疫染色工具包，其特征在于：所述免疫染色工具包还包括适配无线振动器。

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