CN218629828U - 一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条及检测卡 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种检测α、β、γ‑鹅膏毒肽的试纸条及检测卡，包括底板和底板上沿层析方向依次连接的样品垫、结合垫、反应膜以及吸水垫；所述反应膜上沿层析方向依次设有用于检测γ‑鹅膏毒肽的T3检测线、用于检测β‑鹅膏毒肽的T2检测线、用于检测α‑鹅膏毒肽的T1检测线和质控线。本申请可以同时检测并区分样品中的α‑鹅膏毒肽、β‑鹅膏毒肽以及γ‑鹅膏毒肽，具有检测时间短、检测效率高的优点。

Description

一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条及检测卡

技术领域

本申请涉及食品安全检测技术领域，尤其涉及一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条及检测卡。

背景技术

在我国南方地区，由于地形、气候等条件，孕育了丰富的可食用野生菌资源，但由于有些毒蘑菇和可食用野生菌没有明显的形态特征差别，也缺乏快速可靠的毒蘑菇鉴别方法，导致因误食毒蘑菇而中毒死亡的事件频繁发生。因此，蘑菇食物中毒一直以来是我国重点关注的食品安全问题之一。

据统计，在误食毒蘑菇导致的中毒死亡事件中，高达70％的事件是因为误食剧毒鹅膏菌引起的。鹅膏菌的致死性毒素是鹅膏肽类毒素，根据其氨基酸组成和结构可以分为鹅膏毒肽、鬼笔毒肽和毒伞肽三类。其中，鹅膏毒肽是一种双环八肽，其化学性质十分稳定，一般的烹调加工无法破坏其毒性。因此，对鹅膏毒肽的检测尤为重要。

目前，鹅膏毒肽的检测方法主要有仪器分析方法和免疫学检测法；仪器分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)等，其具有灵敏度高、检测限低、重复性好等优点，但是上述方法存在检测时间长、操作繁琐以及仪器昂贵等问题，限制着其应用。免疫学检测法主要是基于抗原抗体之间的特异性反应原理而建立，其具有快速、操作简单、直观等特点适合现场的初步检测。

试纸条作为一种操作简单、检测时间短的免疫检测方法，可用于检测样品中的鹅膏毒肽；目前的试纸条只能检测样品中是否含有鹅膏毒肽，但是无法对检测出来的鹅膏毒肽的种类进行区分；然而目前已分离鉴定的鹅膏毒肽有9种，其中，α-鹅膏毒肽(α-AMA)、β-鹅膏毒肽(β-AMA)、γ-鹅膏毒肽(γ-AMA)是导致死亡的主要毒素；在对样品中的鹅膏毒肽进行检测时，快速、准确的判断出鹅膏毒肽的类型，对于后续的救治具有重要意义。因此，急需开发一种能检测并区分出α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽的检测试剂。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本申请提供一种检测α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽的试纸条及检测卡，本申请的试纸条以及检测卡可以同时检测样品中的α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽以及γ-鹅膏毒肽，具有检测时间短、检测效率高的优点。

第一方面，本申请提供的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条，采用如下的技术方案：

一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条，包括底板和底板上沿层析方向依次连接的样品垫、结合垫、反应膜以及吸水垫；

所述反应膜上沿层析方向依次设有用于检测γ-鹅膏毒肽的T3检测线、用于检测β-鹅膏毒肽的T2检测线、用于检测α-鹅膏毒肽的T1检测线和质控线。

通过采用上述技术方案，本申请的试纸条的反应膜上设有T1检测线、T2检测线以及T3检测线，可以同时对α-AMA、β-AMA以及γ-AMA进行检测，具有检测时间短、检测效率高的优点。

可选的，所述T1检测线为将α-鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白的偶联物喷涂在所述反应膜表面形成的膜层；

所述T2检测线为将β-鹅膏毒肽与牛血清白蛋白的偶联物喷涂在所述反应膜表面形成的膜层；

所述T3检测线为将γ-鹅膏毒肽与人血清白蛋白的偶联物喷涂在所述反应膜表面形成的膜层。

利用试纸条检测鹅膏毒肽时，通常一个试纸条仅能检测一类鹅膏毒肽，而不能很好的区分不同类型；这是因为抗体的特异性低，存在较大的交叉反应率。通过采用上述技术方案，将α-鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白进行偶联得到的偶联物即α-AMA-KLH人工抗原，将β-鹅膏毒肽与牛血清白蛋白进行偶联得到的偶联物即β-AMA-HSA人工抗原，将γ-鹅膏毒肽与人血清白蛋白进行偶联得到的偶联物即γ-AMA-HAS人工抗原；将得到的人工抗原经过稀释处理后涂在反应膜上形成相应的膜层；将得到的人工抗原免疫动物后制备特异性细胞株，由特异性细胞株分泌得到相应的抗体，经过测试可知，α-AMA抗体对于β-AMA和γ-AMA的交叉反应率小于0.2％；β-AMA抗体对于α-AMA和γ-AMA的交叉反应率小于0.2％；γ-AMA抗体对于α-AMA和β-AMA的交叉反应率小于0.2％；说明人工抗原通过特定的载体蛋白的选择，由此得到的三种抗体之间具有较小的交叉反应率，三种抗体具有很好的特异性，采用本申请的试纸条同时检测样品中的α-AMA、β-AMA、γ-AMA具有较高的准确度。

可选的，所述质控线为将羊抗鼠IgG喷涂在所述反应膜表面形成的膜层。

可选的，所述结合垫上包被有α-鹅膏毒肽单克隆抗体、β-鹅膏毒肽单克隆抗体、γ-鹅膏毒肽单克隆抗体。

可选的，所述结合垫为胶体金垫或微球垫。

可选的，所述样品垫、所述结合垫、所述反应膜以及所述吸水垫之间相互搭接，搭接长度为1-2mm。

可选的，所述质控线与T1检测线、所述T1检测线与T2检测线、所述T2检测线与T3检测线之间的距离为4-5mm。

通过采用上述技术方案，T1检测线、T1检测线与T2检测线、T2检测线与T3检测线之间的距离为4-5mm，可以避免所检测的三种毒素之间的相互干扰。

可选的，所述吸水垫靠近质控线的一端与质控线的距离为5-6mm。

第二方面，本申请提供一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，采用如下的技术方案：

一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，包含α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条和设于所述试纸条外的卡壳，所述卡壳包括上壳体和下壳体；

所述上壳体与所述反应膜对应的位置上设有用于观察T1检测线、T2检测线、T3检测线以及质控线的观察窗；

所述上壳体与所述样品垫对应的位置上设有加样孔。

可选的，所述下壳体的内表面沿其长度方向依次设有第一定位单元、第二定位单元和第三定位单元；

所述样品垫部分覆盖于所述结合垫的一端，形成第一重叠部；所述反应膜部分被所述结合垫的另一端覆盖，形成第二重叠部；所述反应膜远离所述结合垫的部分被所述吸水垫覆盖，形成第三重叠部；

所述第一定位单元对应所述第一重叠部设置，所述第二定位单元对应所述第二重叠部设置，所述第三定位单元对应所述第三重叠部设置。

通过采用上述技术方案，第一定位单元、第二定位单元以及第三定位单元可以起到指示作用，在将试纸条安装到下壳体时，将试纸条靠近样品垫和结合垫的一端抵接在挡板处，此时第一定位单元位于第一重叠部处，第二定位单元位于第二重叠部处，第三定位单元位于第三重叠部处，便于快速且正确地安装试纸条。并且，通过定位单元与试纸条重叠部的对应位置，还可以对试纸条的组装起到检验的作用，提高产品质量的合格率。

可选的，所述第一定位单元、第二定位单元以及第三定位单元分别包括两个定位柱，两个定位柱分别设置在试纸条的两侧，两个定位柱之间的间距与试纸条的宽度匹配，用于对试纸条进行卡接定位。

可选的，所述下壳体的内表面的底部固设有呈“U”形的挡板，所述挡板中的两条竖档沿所述下壳体的竖直方向设置，两个竖挡之间的距离与试纸条的宽度匹配。

可选的，上壳体的内表面固设有插接杆，下壳体的内表面设有与插接杆相配合的插接孔。

通过采用上述技术方案，在对卡壳进行组装时，将上壳体的插接杆插入下壳体的插接孔中，可以将上壳体与下壳体相互扣合。

优选的，插接杆以及插接孔的数量设置为四个，分别位于上壳体和下壳体的边缘。

可选的，所述上壳体的内表面设置有定位块，用于压在试纸条的上方。

通过采用上述技术方案，上壳体的定位块可以压在试纸条的上方，从而避免试纸条在卡壳中上下晃动。

可选的，所述挡板上开设有用于卡接定位块的凹槽，所述凹槽的凹面处不高于试纸条的上表面。

通过采用上述技术方案，定位块上开设有用于卡接定位块的凹槽，在将上壳体与下壳体扣合时，定位块可以卡接在挡板的凹槽中，以限制定位块的位置，同时可以检验上壳体与下壳体的匹配度。并且，由于凹槽的凹面不高于试纸条的上表面，定位块卡接在凹槽中后，定位块的下表面仍可压在试纸条上，起到限制试纸条移位的作用。

综上所述，本申请包括以下有益技术效果：

1.本申请的三种抗体之间具有较小的交叉反应率，采用本申请的三种抗体在同时检测并区分样品中的α-AMA、β-AMA、γ-AMA时，具有检测效率高以及检测准度高的优点。

2.采用胶体金免疫层析试纸条对于α-鹅膏毒肽的灵敏度为1.8ppb，对于β-鹅膏毒肽的灵敏度为1.1ppb，对于γ-鹅膏毒肽的灵敏度为2.1ppb；采用荧光微球免疫层析试纸条对于α-鹅膏毒肽的灵敏度为0.5ppb，β-鹅膏毒肽的灵敏度为0.2ppb，对于γ-鹅膏毒肽的灵敏度为0.6ppb。说明本申请的试纸条具有灵敏度高的优点。

附图说明

图1是本申请实施例1的试纸条的剖面结构示意图。

图2是本申请实施例4的检测卡内部结构示意图示意图。

图3是图3中A部放大图。

图4是本申请实施例4的检测卡的上壳体的结构示意图。

图中：1、试纸条；11、底板、12、样品垫；121、第一重叠部；13、结合垫；131、第二重叠部；14、反应膜；141、质控线；142、T1检测线；143、T2检测线；144、T3检测线；15、吸水垫；151、第三重叠部；2、卡壳；21、上壳体；211、插接杆；212、定位块；213、加样孔；214、观察窗；215、指示线；22、下壳体；221、挡板；2211、凹槽；222、第一定位单元；2221、定位柱；223、第二定位单元；224、第三定位单元；225、插接孔。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本申请作进一步的描述。

实施例

除特别说明外，实施例中的原料均可通过市售获得。其中，底板采用PVC胶板；反应膜采用硝酸纤维膜(NC膜)；样品垫采用玻璃纤维膜。

实施例1：一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的胶体金免疫层析试纸条

参照图1，试纸条1包括底板11以及底板11上沿层析方向依次连接的样品垫12、结合垫13、反应膜14和吸水垫15。样品垫12部分覆盖于结合垫13的一端，形成第一重叠部121，反应膜14部分被结合垫13的另一端覆盖，形成第二重叠部131，反应膜14远离结合垫13的部分被吸水垫15覆盖，形成第三重叠部151；第一重叠部121、第二重叠部131、第三重叠部151沿层析方向的长度为2mm。

反应膜14上沿层析方向依次设有用于检测γ-鹅膏毒肽的T3检测线144、用于检测β-鹅膏毒肽的T2检测线143、用于检测α-鹅膏毒肽的T1检测线142和质控线141。质控线141与T1检测线142、T1检测线142与T2检测线143、T2检测线143与T3检测线144之间的距离为4mm，吸水垫15靠近质控线141的一端与质控线141的距离为5mm。

T1检测线142为将α-鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白的偶联物喷涂在反应膜14表面形成的膜层；T2检测线143为将β-鹅膏毒肽与牛血清白蛋白的偶联物喷涂在反应膜14表面形成的膜层；T3检测线144为将γ-鹅膏毒肽与人血清白蛋白的偶联物喷涂在反应膜14表面形成的膜层；质控线141为将羊抗鼠IgG喷涂在反应膜14表面形成的膜层。

结合垫13为胶体金垫，结合垫13上包被有α-鹅膏毒肽单克隆抗体、β-鹅膏毒肽单克隆抗体、γ-鹅膏毒肽单克隆抗体。

实施例1的试纸条采用如下步骤进行组装：

①贴吸水垫15：撕去底板11上面的覆膜，在靠近反应膜14的质控线141一端的底板11上贴吸水垫15，吸水垫15压反应膜14的长度为2mm；

②贴结合垫13：在远离吸水垫15一端的底板11上贴结合垫13，结合垫13压反应膜14的长度为2mm；

③贴样品垫12：在靠近结合垫13一端的底板11上贴样品垫12，样品垫12压结合垫13的长度为2mm；

④切条：采用切条机进行切割，得到宽度为3.5mm的试纸条。

实施例2：一种胶体金免疫层析试纸条

本实施例与实施例1的不同之处在于：

质控线141与T1检测线142、T1检测线142与T2检测线143、T2检测线143与T3检测线144之间的距离为5mm。

吸水垫15靠近质控线141的一端与质控线141的距离为6mm。

实施例3：一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的微球免疫层析试纸条

本实施例与实施例1的不同之处在于，结合垫13为微球垫，微球可以为羧基化彩色微球、时间分辨荧光微球、荧光量子点微球，本实施例中的微球选用时间分辨荧光微球。

实施例4：一种检测α-AMA、β-AMA和γ-AMA的检测卡

参照图2，一种检测卡，包括卡壳2和实施例1中的试纸条1。

卡壳2包括相互卡合的上壳体21和下壳体22。下壳体22的内表面的底部固设有呈“U”形的挡板221，挡板221中的两条竖档沿下壳体22的长度方向设置，两个竖挡之间的距离与试纸条1的宽度匹配，挡板221用于对试纸条1进行卡接定位。

参见图2和图3，挡板221的竖挡处开设有凹槽2211，凹槽2211的凹面处略低于试纸条1的上表面。上壳体21的内表面设置有定位块212，定位块212的宽度略小于凹槽2211的宽度。在将上壳体21与下壳体22扣合时，上壳体21的定位块212可以卡入挡板221的凹槽2211中，并压在试纸条1的上方，从而避免试纸条1在卡壳2中上下晃动。

参见图2，壳体22的内表面沿其长度方向依次设有第一定位单元222、第二定位单元223和第三定位单元224。第一定位单元222对应第一重叠部121设置，第二定位单元223对应第二重叠部131设置，第三定位单元224对应第三重叠部151设置。由于本申请的试纸条1上有三条检测线以及一条质控线141，在将试纸条1安装到卡壳2的过程中，需要确认检查安装位置，以避免将试纸条1装反而影响检测结果。通过本申请的上述设置，第一定位单元222、第二定位单元223以及第三定位单元224可以起到指示作用，在将试纸条1安装到下壳体22时，将试纸条1靠近样品垫12和结合垫13的一端抵接在挡板221处，此时第一定位单元222位于第一重叠部121处，第二定位单元223位于第二重叠部131处，第三定位单元224位于第三重叠部151处，便于快速且正确地安装试纸条1。并且，通过定位单元与试纸条1重叠部的对应位置，还可以对试纸条1的组装起到检验的作用，提高产品质量的合格率。

第一定位单元222、第二定位单元223以及第三定位单元224分别包括两个定位柱2221，两个定位柱2221分别设置在试纸条1的两侧。两个定位柱2221之间的间距与试纸条1的宽度匹配，用于对试纸条1进行卡接定位。

上壳体21的内表面固设有插接杆211，下壳体22的内表面设有与插接杆211相配合的插接孔225。在对卡壳2进行组装时，将上壳体21的插接杆211插入下壳体22的插接孔中225，可以将上壳体21与下壳体22相互扣合。优选的，插接杆211以及插接孔225的数量设置为四个，分别位于上壳体21和下壳体22的边缘。

参见图2和图4，上壳体21对应样品垫12以及反应膜14的位置分别设有加样孔213以及观察窗214。上壳体21的上表面位于观察窗214处，对应质控线141、T1检测线142、T2检测线143、T3检测线144的位置设有指示线215，用于指示试纸条1上的质控线141、T1检测线142、T2检测线143以及T3检测线144。

实施例5：一种检测α-AMA、β-AMA和γ-AMA的检测卡

本实施例与实施例4的不同之处在于，试纸条1为由实施例3制备而得的微球免疫层析试纸条。

性能测试

1.实施例4的检测卡定性检测

向卡壳2的加样孔213中滴加100μL样品，室温孵育10min。当T线颜色和C线颜色一样深，此标准品浓度即为该试纸条的灵敏度。当T线颜色比C线颜色深，判断为阴性，当T线颜色比C线颜色浅，判断为阳性，T线颜色越浅，表明样品中含有的AMA浓度越高。经过检测，胶体金免疫层析试纸条对于α-AMA灵敏度为1.8ppb，对于β-AMA灵敏度为1.1ppb，对于γ-AMA灵敏度为2.1ppb。

2.实施例5的检测卡的定性检测

向卡壳2的加样孔213中滴加100μL样品，室温孵育10min。用紫外手电筒照射，可以看到C和T线。当T线颜色和C线颜色一样深，此标准品浓度即为该试纸条的灵敏度。当T线颜色比C线颜色深，判断为阴性，当T线颜色比C线颜色浅，判断为阳性，T线颜色越浅，表明样品中含有的AMA浓度越高。经过检测，荧光微球免疫层析试纸条对于α-AMA灵敏度为0.5ppb，对于β-AMA灵敏度为0.2ppb，对于γ-AMA灵敏度为0.6ppb。

以上均为本申请的较佳实施例，并非依此限制本申请的保护范围，故：凡依本申请的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条，其特征在于，包括底板(11)和底板(11)上沿层析方向依次连接的样品垫(12)、结合垫(13)、反应膜(14)以及吸水垫(15)；

所述反应膜(14)上沿层析方向依次设有用于检测γ-鹅膏毒肽的T3检测线(144)、用于检测β-鹅膏毒肽的T2检测线(143)、用于检测α-鹅膏毒肽的T1检测线(142)和质控线(141)。

2.根据权利要求1所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条，其特征在于，所述T1检测线(142)为将α-鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白的偶联物喷涂在所述反应膜(14)表面形成的膜层；

所述T2检测线(143)为将β-鹅膏毒肽与牛血清白蛋白的偶联物喷涂在所述反应膜(14)表面形成的膜层；

所述T3检测线(144)为将γ-鹅膏毒肽与人血清白蛋白的偶联物喷涂在所述反应膜(14)表面形成的膜层。

3.根据权利要求1所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条，其特征在于，所述质控线(141)为将羊抗鼠IgG喷涂在所述反应膜(14)表面形成的膜层。

4.根据权利要求1所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的试纸条，其特征在于，所述质控线(141)与T1检测线(142)、所述T1检测线(142)与T2检测线(143)、所述T2检测线(143)与T3检测线(144)之间的距离为4-5mm。

5.一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，其特征在于，所述检测卡包括权利要求1-4任意一项所述的试纸条(1)和设于所述试纸条(1)外的卡壳(2)，所述卡壳(2)包括上壳体(21)和下壳体(22)；

所述上壳体(21)与所述反应膜(14)对应的位置上设有用于观察T1检测线(142)、T2检测线(143)、T3检测线(144)以及质控线(141)的观察窗(214)；

所述上壳体(21)与所述样品垫(12)对应的位置上设有加样孔(213)。

6.根据权利要求5所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，其特征在于，所述下壳体(22)的内表面沿其长度方向依次设有第一定位单元(222)、第二定位单元(223)和第三定位单元(224)；

所述样品垫(12)部分覆盖于所述结合垫(13)的一端，形成第一重叠部(121)；所述反应膜(14)部分被所述结合垫(13)的另一端覆盖，形成第二重叠部(131)；所述反应膜(14)远离所述结合垫(13)的部分被所述吸水垫(15)覆盖，形成第三重叠部(151)；

所述第一定位单元(222)对应所述第一重叠部(121)设置，所述第二定位单元(223)对应所述第二重叠部(131)设置，所述第三定位单元(224)对应所述第三重叠部(151)设置。

7.根据权利要求6所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，其特征在于，所述第一定位单元(222)、第二定位单元(223)以及第三定位单元(224)分别包括两个定位柱(2221)，两个定位柱(2221)分别设置在试纸条(1)的两侧，两个定位柱(2221)之间的间距与试纸条(1)的宽度匹配，用于对试纸条(1)进行卡接定位。

8.根据权利要求5所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，其特征在于，所述下壳体(22)的内表面的底部固设有呈“U”形的挡板(221)，所述挡板(221)中的两条竖档沿所述下壳体(22)的竖直方向设置，两个竖挡之间的距离与试纸条(1)的宽度匹配。

9.根据权利要求8所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，其特征在于，所述上壳体(21)的内表面设置有定位块(212)，用于压在试纸条(1)的上方。

10.根据权利要求9所述的一种检测α、β、γ-鹅膏毒肽的检测卡，其特征在于，所述挡板(221)上开设有用于卡接定位块(212)的凹槽(2211)，所述凹槽(2211)的凹面处不高于试纸条(1)的上表面。

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