CN216550456U - 一体式数字pcr仪 - Google Patents

Abstract

本实用新型提供一种一体式数字PCR仪，其中的一体式数字PCR仪包括芯片上料模块；液滴生成模块，能够在微液滴生成过程中将加样腔内的样本生成微液滴后转移存储至反应腔中；温度循环模块，以使反应腔内的微液滴实现扩增；荧光检测模块，能够在微液滴检测过程中将反应腔中的微液滴转移至荧光检测区后再转移至加样腔，并在此过程中完成微液滴荧光检测；芯片废弃模块；调度机构，用于在主控模块的控制下在芯片上料模块、液滴生成模块、温度循环模块、荧光检测模块、芯片废弃模块之间转移一体式微液滴芯片，并能够将温度循环模块中的一体式微液滴芯片上下翻转180°后再转移至荧光检测模块中。本实用新型，自动化程度及集成化程度高，能够提升检测分析作业的效率，降低人力成本。

Description

一体式数字PCR仪

技术领域

本实用新型属于数字PCR分析仪技术领域，具体涉及一种一体式数字PCR仪。

背景技术

数字PCR是最新的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种绝对定量的方法，其主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至生物芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个，这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号，根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。传统的数字PCR分析仪功能单一，需要手动操作多台仪器配合完成一次扩增及检测工作。随着社会的发展，医疗行业及科研领域等对PCR分析的高通量、自动化、高速度、集成化等提出了更高的要求。

实用新型内容

因此，本实用新型要解决的技术问题在于提供一种一体式数字PCR仪，以克服现有技术中的数字PCR仪功能单一，需要手动操作多台仪器配合完成一次扩增及检测工作，检测效率低的不足。

为了解决上述问题，本实用新型提供一种一体式数字PCR仪，包括：芯片上料模块，用于放置加样完毕的一体式微液滴芯片，所述一体式微液滴芯片包括芯片本体，所述芯片本体上构造有加样腔、反应腔、荧光检测区；液滴生成模块，用于供给所述一体式微液滴芯片油气，能够在微液滴生成过程中将所述加样腔内的样本生成微液滴后转移存储至反应腔中；温度循环模块，用于对所述反应腔内的微液滴形成加热制冷循环，以使所述反应腔内的微液滴实现扩增；荧光检测模块，能够在微液滴检测过程中将所述反应腔中的微液滴转移至所述荧光检测区后再转移至所述加样腔，并对处于所述荧光检测区的微液滴进行荧光检测；芯片废弃模块，用于存储经过检测后的所述一体式微液滴芯片；调度机构，用于在主控模块的控制下在所述芯片上料模块、液滴生成模块、温度循环模块、荧光检测模块、芯片废弃模块之间转移所述一体式微液滴芯片，并能够将所述温度循环模块中的一体式微液滴芯片上下翻转180°后再转移至所述荧光检测模块中。

在一些实施方式中，所述一体式微液滴芯片包括芯片本体，所述芯片本体内构造有微液滴生成结构、油液接口、气液接口，所述气液接口与所述反应腔连通，所述加样腔与所述微液滴生成结构连通，所述油液接口与所述微液滴生成结构连通；当所述一体式微液滴芯片处于所述液滴生成模块中时，所述液滴生成模块能够在所述加样腔与所述气液接口之间形成第一压力差，在所述油液接口与所述气液接口之间形成第二压力差，所述第一压力差和所述第二压力差分别驱动所述加样腔中的样本和所述油液接口的生成油进入所述微液滴生成结构，生成的微液滴进入并存储于所述反应腔中；当所述一体式微液滴芯片处于所述荧光检测模块中时，所述荧光检测模块能够驱动检测推动油从所述气液接口进入所述反应腔，使得所述反应腔中的微液滴从所述反应腔中流出至所述微液滴生成结构，所述液滴生成模块还能够驱动检测分隔油从所述油液接口进入所述微液滴生成结构，所述检测分隔油将从所述反应腔中流出至所述微液滴生成结构中的微液滴分隔形成队列，进入所述荧光检测区。

在一些实施方式中，所述微液滴生成结构包括油液管道以及连通管道，所述油液管道与所述连通管道成十字交叉，所述连通管道包括处于十字交叉点的第一侧且与所述反应腔连通的第一管道以及处于所述十字交叉点的第二侧且与所述加样腔连通的第二管道，所述油液接口与油液管道连通。

在一些实施方式中，以所述芯片本体的第一侧面处于水平方位为参照，所述反应腔与所述加样腔处于所述第一侧面上，所述反应腔与所述芯片本体的所述第一侧面的连接接口向上延伸，且成下小上大的喇叭口。

在一些实施方式中，所述反应腔内还构造有自下而上延伸的气液管道，所述气液管道的下口与所述气液接口连通，所述气液管道的上口高于所述连接接口的上口。

在一些实施方式中，所述第一管道与所述连接接口之间具有微液滴观测区。

在一些实施方式中，所述荧光检测区处于所述第二管道上。

在一些实施方式中，所述加样腔包括开口腔以及密封连接于所述开口腔的开口处的密封盖；和/或，所述加样腔设置有滤膜或者排气孔。

在一些实施方式中，在所述微液滴进入所述反应腔内之前，所述反应腔内预置轻油。

本实用新型还提供一种一体式数字PCR仪的控制方法，包括如下步骤：

芯片上料步骤，将一体式微液滴芯片置入芯片上料模块中；

液滴生成步骤，将所述芯片上料模块中的一体式微液滴芯片转移至液滴生成模块中，并控制所述一体式微液滴芯片的加样腔内的样本生成微液滴后存储于反应腔内；

温度循环步骤，在所述一体式微液滴芯片上下翻转180°后，对处于所述一体式微液滴芯片底部的反应腔内的微液滴内的微液滴形成加热制冷循环；

荧光检测步骤，在所述反应腔内的微液滴扩增完毕后，控制所述反应腔内的微液滴进入荧光检测区并完成荧光检测；

芯片废弃步骤，将荧光检测完毕的一体化微液滴芯片转移至芯片废弃模块内。

本实用新型提供的一种一体式数字PCR仪及其控制方法，在所述主控模块的控制下，所述调度机构能够将所述一体式微液滴芯片在各个功能模块之间协调运转，实现了芯片上料、液滴生成、PCR扩增、荧光检测与分析直至芯片废弃全流程集成操作，自动化程度及集成化程度高，能够提升检测分析作业的效率，降低人力成本。

附图说明

图1为本实用新型实施例的一体式数字PCR仪的结构构成示意图；

图2为图1中的一体式微液滴芯片的立体结构示意图；

图3为图2中的微液滴生成结构的结构示意图；

图4为微液滴生成过程示意；

图5为微液滴生成后存储于反应腔内的示意；

图6为图1中的一体式微液滴芯片上下翻转180°后反应腔内的状态示意；

图7为图6状态下向反应腔内通入油液后的状态示意(图中箭头示出微液滴及油液流向)；

图8为微液滴从反应腔内迫出后的状态示意；

图9为图1中的荧光检测模块工作光路原理示意图；

图10为本实用新型实施例的数字PCR仪的检测结果。

附图标记表示为：

1、芯片本体；11、反应腔；111、连接接口；112、气液管道；12、加样腔；121、开口腔；122、密封盖；21、油液管道；22、第一管道；23、第二管道；31、油液接口；32、气液接口；33、荧光检测区；34、微液滴观测区；4、微液滴；5、检测推动油；91、激发光源；92、激发光；93、荧光；94、分光光路；95、荧光检测单元；100、一体式微液滴芯片；200、芯片上料模块；300、液滴生成模块；400、温度循环模块；500、荧光检测模块；600、芯片废弃模块；700、调度机构；800、主控模块。

具体实施方式

结合参见图1至图10所示，根据本实用新型的实施例，提供一体式数字PCR仪，包括：芯片上料模块200，用于放置加样完毕的一体式微液滴芯片100，所述一体式微液滴芯片100包括芯片本体1，所述芯片本体1上构造有加样腔12、反应腔11、荧光检测区33；液滴生成模块300，用于供给所述一体式微液滴芯片100油气(也即油液或者压力气体)，能够在微液滴生成过程中将所述加样腔12内的样本生成微液滴4后转移存储至反应腔11中；温度循环模块400，用于对所述反应腔11内的微液滴4形成加热制冷循环，以使所述反应腔11内的微液滴4实现扩增；荧光检测模块500，能够在微液滴检测过程中将所述反应腔11中的微液滴4转移至所述荧光检测区33后再转移至所述加样腔12，并对处于所述荧光检测区33的微液滴4进行荧光检测；芯片废弃模块600，用于存储经过检测后的所述一体式微液滴芯片100；调度机构700，用于在主控模块800的控制下在所述芯片上料模块200、液滴生成模块300、温度循环模块400、荧光检测模块500、芯片废弃模块600之间转移所述一体式微液滴芯片100，并能够将所述温度循环模块400中的一体式微液滴芯片100上下翻转180°后再转移至所述荧光检测模块500中。该技术方案中，在所述主控模块800的控制下，所述调度机构700能够将所述一体式微液滴芯片100在各个功能模块之间协调运转，实现了芯片上料、液滴生成、PCR扩增、荧光检测与分析直至芯片废弃全流程集成操作，自动化程度及集成化程度高，能够提升检测分析作业的效率，降低人力成本，更为重要的是，本实用新型中的调度机构700能够被配置为使所述一体式微液滴芯片100上下翻转180°，从而使所述液滴生成、PCR扩增以及荧光检测分析的操作流程可以集成于同一个芯片也即所述一体式微液滴芯片100之上，集成度以及自动化程度都能够得到进一步提高。

在一些实施方式中，所述一体式微液滴芯片100包括芯片本体1，所述芯片本体1内构造有微液滴生成结构、油液接口31、气液接口32，所述气液接口32与所述反应腔11连通，所述加样腔12与所述微液滴生成结构连通，所述油液接口31与所述微液滴生成结构连通；当所述一体式微液滴芯片100处于所述液滴生成模块300中时，所述液滴生成模块300能够在所述加样腔12与所述气液接口32之间形成第一压力差(也即所述液滴生成模块300具有的气路与所述加样腔12及所述气液接口32连通)，在所述油液接口31与所述气液接口32之间形成第二压力差(也即所述液滴生成模块300具有的液路与所述油液接口31与所述气液接口32连通)，所述第一压力差和所述第二压力差分别驱动所述加样腔12中的样本和所述油液接口31的生成油进入所述微液滴生成结构，生成的微液滴4进入并存储于所述反应腔11中；当所述一体式微液滴芯片100处于所述荧光检测模块500中时，所述液滴生成模块300能够驱动检测推动油5从所述气液接口32进入所述反应腔11，使得所述反应腔11中的微液滴4从所述反应腔11中流出至所述微液滴生成结构，所述液滴生成模块300还能够驱动检测分隔油从所述油液接口31进入所述微液滴生成结构，所述检测分隔油将从所述反应腔11中流出至所述微液滴生成结构中的微液滴4分隔形成队列，进入所述荧光检测区33。通过对所述微液滴生成结构的分时复用(以所述一体式微液滴芯片100的翻转前后为分时界限)，将液滴生成、扩增和检测都集成在一张芯片当中，实现全集成、全封闭的数字PCR流程，不仅继承了液滴尺寸均一、液滴数量不易受限制、荧光检测信噪比高等优点，还克服了原有的芯片结构复杂，生成和检测在不同芯片中完成，集成度低，难以自动化等困难，是数字PCR领域的一个重要的技术突破。

作为所述微液滴生成结构的一种具体的实现方式，所述微液滴生成结构包括油液管道21以及连通管道，所述油液管道21与所述连通管道成十字交叉，所述连通管道包括处于十字交叉点的第一侧且与所述反应腔11连通的第一管道22以及处于所述十字交叉点的第二侧且与所述加样腔12连通的第二管道23，所述油液接口31与油液管道21连通。

在一些实施方式中，参见图2所示，以所述芯片本体1的第一侧面处于水平方位为参照，所述反应腔11与所述加样腔12处于所述第一侧面上，所述反应腔11与所述芯片本体1的所述第一侧面的连接接口111向上延伸，且成下小上大的喇叭口，成喇叭口的连接接口111能够利于微液滴4由第一管道22的进入所述反应腔11，也利于所述微液滴4从所述反应腔11中进入所述第一管道22中，防止微液滴4的羁留。需要说明的是，此时的所述反应腔11及加样腔12皆处于所述芯片本体1的第一侧面(具体为顶面)，进入所述反应腔11内的微液滴4皆集聚于所述连接接口111处，在进行PCR扩增时，需要将所述芯片本体1整体倒置也即翻转180°，使微液滴4能够处于所述反应腔11的反应区内。

在一些实施方式中，所述反应腔11内还构造有自下而上延伸的气液管道112，所述气液管道112的下口与所述气液接口32连通，所述气液管道112的上口高于所述连接接口111的上口，这样能够防止在所述反应腔11内为负压时，所述微液滴生成结构生成的微液滴4在进入所述反应腔11后进一步从所述气液管道112流出。

在一些实施方式中，所述第一管道22与所述连接接口111之间具有微液滴观测区34，所述微液滴观测区34的通流面积远大于所述第一管道22的流通面积，也即所述微液滴观测区34为一个在所述第一管道22上扩大的区域(宽度变大)，以使进入该区域的微液滴4的流速降低，可方便外部相机成像，记录液滴形态，判断液滴生成过程的状态是否正常。

在一个实施方式中，所述荧光检测区33处于所述第二管道23上，在所述第二管道23上，所述反应腔11内流出的微液滴4在通过十字交叉点时能够在所述油液管道21内的检测油的作用下被分隔成有合适间距的液滴队列，从而在外部系统的作用下完成荧光检测。

作为一种具体的实现方式，所述加样腔12包括开口腔121以及密封连接于所述开口腔121的开口处的密封盖122，以便于操作人员向所述加样腔12内加入样本。进一步的，所述加样腔12设置有滤膜或者排气孔，当加样腔12变成废液池的时候(也即在液滴芯片翻转倒置时)，排除一定的空气，防止所述加样腔12内积累压力。

在一些实施方式中，在所述微液滴4进入所述反应腔11内之前，所述反应腔11内预置轻油(也即密度较小的油液)，保证所述轻油能够始终处于所述反应腔11内的微液滴4的顶部，解决扩增时微液滴蒸发的问题，实现免热盖PCR。

根据本实用新型的实施例，还提供一种一体式数字PCR仪的控制方法，包括如下步骤：

芯片上料步骤，将一体式微液滴芯片100置入芯片上料模块200中；

液滴生成步骤，将所述芯片上料模块200中的一体式微液滴芯片100转移至液滴生成模块300中，并控制所述一体式微液滴芯片100的加样腔12内的样本生成微液滴4后存储于反应腔11内；

温度循环步骤，在所述一体式微液滴芯片100上下翻转180°后，对处于所述一体式微液滴芯片100底部的反应腔11内的微液滴内的微液滴4形成加热制冷循环；

荧光检测步骤，在所述反应腔11内的微液滴扩增完毕后，控制所述反应腔11内的微液滴进入荧光检测区33并完成荧光检测；

芯片废弃步骤，将荧光检测完毕的一体化微液滴芯片转移至芯片废弃模块内。

以下结合一个具体的实施例对本实用新型的一体式数字PCR仪的工作原理作进一步介绍。

第一步，首先，将30微升的体系(即样本)加到加样腔12中，30微升的PCR体系包含10微升的Bio-Rad公司的ddPCR Supermix for Probes，GJB2基因上下游引物试剂5微升和含有1ng基因组DNA的模板5微升。一体式微液滴芯片100整体如图2所示，一张芯片包含了8个平行独立的液滴芯片结构，每个结构都包含有加样腔12、油液接口31、气液接口32、微液滴生成结构、反应腔11，然后，将密封盖122盖紧或粘接，使加样腔12密封，加样腔12中最好有带滤膜或者口径小的排气孔。

第二步，将加了样本的所述一体式微液滴芯片人工放置于一体式数字PCR仪中所述的芯片上料模块200，然后关闭舱门，启动仪器流程。

第三步，所述的调度机构700在扫描确认一体式微液滴芯片100的状态后，调度机构700会从所述的芯片上料模块200中抓取一体式微液滴芯片100，转移至液滴生成模块300中。

第四步，在所述的液滴生成模块300中进行微液滴制备，如图3和图4所示。首先，向油液接口31提供液滴生成所需的生成油Bio-Rad Generation Oil，生成油液中含有能使液滴稳定的表面活性剂；向气液接口32提供负压，压力大小为-200mBar，使得与加样腔12和油液接口31形成压力差。其中，加样腔12与微液滴生成结构中的第二管道23相连，油液接口31与微液滴生成结构中的油液管道21相连，第一管道22和气液接口32均与反应腔11相连，其中第一管道22与连接接口111相连，气液接口32与气液管道112相连。微液滴生成结构的各个部分如图2所示，油液管道21有两条分支，分别位于第二管道23和第一管道22两侧，且均与油液接口31相连。在压力差的驱动下，反应体系进入第二管道23中，生成油进入油液管道21中，并在十字结构处交汇，在流体剪切力与表面张力的作用下，形成尺寸均一的油包水微液滴。十字处管道深度约为70微米，宽度为80微米，液滴尺寸约为100微米。微液滴进入第一管道22，并在进入微液滴观测区34后降低流速，形成密集的液滴群落，方便相机成像记录，液滴生成过程原理图如图4所示。生成的液滴流经第一管道22后到达反应腔11的连接接口111。连接接口111的底部有斜坡结构(也即前述的喇叭口)，斜坡底部与第一管道22相连通。液滴生成流程结束时，撤掉施加在芯片接口处的压力差，此时液滴应仍位于气液管道112下方，如图5所示。

第五步，在完成微液滴制备后，所述的调度机构700将芯片从所述的液滴生成模块300中取出，并将芯片上下翻转，使液滴从连接接口111转移至反应区(也即远离所述连接接口111)，如图6所示。

第六步，所述的调度机构700将翻转后的芯片放置如所述的温度循环模块400。反应区的结构应采取热传递效率高的设计，比如采用深度高、厚度薄的扁平设计，温度循环模块400从左右两侧给反应区进行加热和制冷，不仅保证温度传导的距离短，还保证较大的接触面积，从而实现高效的热传递。在本实施例中，温度循环流程为先进行一个95℃10分钟的预变性，然后是40个温度循环，每个循环中95℃5秒，60℃15秒，最后4℃保温。为了减少蒸发，可在反应腔11内提前放置30微升低密度的防挥发试剂(例如所述的轻油)。

第七步，在完成扩增反应后，调度机构700将芯片从温度循环模块400中转移至所述的荧光检测模块500中，进行微液滴荧光检测。荧光检测模块500向气液接口32中注入检测油，不断充满反应腔11。在这个过程中，液滴液面不断上升，然后经过连接接口111的斜坡引导，进入第一管道22中，如图7所示。液滴经过第一管道22中的观测区时，也可利用相机对液滴进行明场成像，从而对扩增反应后的液滴状态进行评估。同时，荧光检测模块500向油液接口31中注入检测油，检测油经由油液管道21，在十字管道处与液滴队列汇合，并将紧密排列的液滴分隔成有合适间距的液滴队列。液滴队列依次通过位于第二管道23的荧光检测区33，如图8所示。

荧光检测区33对应的位置，是荧光检测模块500的荧光检测焦点。荧光检测过程如图9所示，荧光检测模块500的激发光源91将激发光92，如波长为488nm和532nm的激光或LED窄带光，通过分光光路94聚焦到荧光检测区33。液滴在依次通过荧光检测区33的过程中，液滴内激发出的荧光93，同样会被分光光路94接收，并分配至荧光检测单元95上采集，从而获得每个液滴的荧光信息，如图10所示。利用液滴的荧光信息，划定信号阈值，对液滴的阴阳性进行区分，并利用泊松分布模型，计算出样本中目标分子的拷贝数。最后完成荧光检测的液滴进入加样腔12中，由于加样腔12已经被密封盖122密封，因此不会与芯片外的环境接触，杜绝了气溶胶污染的可能，实现了全封闭的数字PCR流程。

第八步，在完成所有样本的检测后，调度机构700将芯片从荧光检测模块500中取出，转移至芯片废弃模块600中，完成整个数字PCR检测流程。

本领域的技术人员容易理解的是，在不冲突的前提下，上述各有利方式可以自由地组合、叠加。

以上仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。以上仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本实用新型的保护范围。

Claims (9)

1.一种一体式数字PCR仪，其特征在于，包括：

芯片上料模块(200)，用于放置加样完毕的一体式微液滴芯片(100)，所述一体式微液滴芯片(100)包括芯片本体(1)，所述芯片本体(1)上构造有加样腔(12)、反应腔(11)、荧光检测区(33)；

液滴生成模块(300)，用于供给所述一体式微液滴芯片(100)油气，能够在微液滴生成过程中将所述加样腔(12)内的样本生成微液滴(4)后转移存储至反应腔(11)中；

温度循环模块(400)，用于对所述反应腔(11)内的微液滴(4)形成加热制冷循环，以使所述反应腔(11)内的微液滴(4)实现扩增；

荧光检测模块(500)，能够在微液滴检测过程中将所述反应腔(11)中的微液滴(4)转移至所述荧光检测区(33)后再转移至所述加样腔(12)，并对处于所述荧光检测区(33)的微液滴(4)进行荧光检测；

芯片废弃模块(600)，用于存储经过检测后的所述一体式微液滴芯片(100)；

调度机构(700)，用于在主控模块(800)的控制下在所述芯片上料模块(200)、液滴生成模块(300)、温度循环模块(400)、荧光检测模块(500)、芯片废弃模块(600)之间转移所述一体式微液滴芯片(100)，并能够将所述温度循环模块(400)中的一体式微液滴芯片(100)上下翻转180°后再转移至所述荧光检测模块(500)中。

2.根据权利要求1所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，

所述一体式微液滴芯片(100)包括芯片本体(1)，所述芯片本体(1)内构造有微液滴生成结构、油液接口(31)、气液接口(32)，所述气液接口(32)与所述反应腔(11)连通，所述加样腔(12)与所述微液滴生成结构连通，所述油液接口(31)与所述微液滴生成结构连通；

当所述一体式微液滴芯片(100)处于所述液滴生成模块(300)中时，所述液滴生成模块(300)能够在所述加样腔(12)与所述气液接口(32)之间形成第一压力差，在所述油液接口(31)与所述气液接口(32)之间形成第二压力差，所述第一压力差和所述第二压力差分别驱动所述加样腔(12)中的样本和所述油液接口(31)的生成油进入所述微液滴生成结构，生成的微液滴(4)进入并存储于所述反应腔(11)中；

当所述一体式微液滴芯片(100)处于所述荧光检测模块(500)中时，所述液滴生成模块(300)能够驱动检测推动油(5)从所述气液接口(32)进入所述反应腔(11)，使得所述反应腔(11)中的微液滴(4)从所述反应腔(11)中流出至所述微液滴生成结构，所述液滴生成模块(300)还能够驱动检测分隔油从所述油液接口(31)进入所述微液滴生成结构，所述检测分隔油将从所述反应腔(11)中流出至所述微液滴生成结构中的微液滴(4)分隔形成队列，进入所述荧光检测区(33)。

3.根据权利要求2所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，所述微液滴生成结构包括油液管道(21)以及连通管道，所述油液管道(21)与所述连通管道成十字交叉，所述连通管道包括处于十字交叉点的第一侧且与所述反应腔(11)连通的第一管道(22)以及处于所述十字交叉点的第二侧且与所述加样腔(12)连通的第二管道(23)，所述油液接口(31)与油液管道(21)连通。

4.根据权利要求3所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，以所述芯片本体(1)的第一侧面处于水平方位为参照，所述反应腔(11)与所述加样腔(12)处于所述第一侧面上，所述反应腔(11)与所述芯片本体(1)的所述第一侧面的连接接口(111)向上延伸，且成下小上大的喇叭口。

5.根据权利要求4所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，所述反应腔(11)内还构造有自下而上延伸的气液管道(112)，所述气液管道(112)的下口与所述气液接口(32)连通，所述气液管道(112)的上口高于所述连接接口(111)的上口。

6.根据权利要求5所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，所述第一管道(22)与所述连接接口(111)之间具有微液滴观测区(34)。

7.根据权利要求3所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，所述荧光检测区(33)处于所述第二管道(23)上。

8.根据权利要求1所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，所述加样腔(12)包括开口腔(121)以及密封连接于所述开口腔(121)的开口处的密封盖(122)；和/或，所述加样腔(12)设置有滤膜或者排气孔。

9.根据权利要求1所述的一体式数字PCR仪，其特征在于，在所述微液滴(4)进入所述反应腔(11)内之前，所述反应腔(11)内预置轻油。

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