CN215156763U - 一种用于数字pcr仪质量检测的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，包括盒体、位于盒体上方的盒盖、支撑座、温度记录仪、试剂管及96孔PCR板，支撑座设置在盒体上，支撑座上设置有温度记录仪、试剂管、96孔PCR板及多个凹槽。本实用新型的试剂盒对数字PCR仪器进行质量检测具有操作方便快捷的优点，能实时监测试剂盒内温度，显著提高数字PCR仪器检测结果的准确性。

Description

一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒

技术领域

本实用新型涉及一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，属于生物检测方面的技术领域。

背景技术

数字PCR仪是一种采用绝对核酸定量技术，即通过极限稀释将待测核酸均匀分散到相互分离的大量的微小反应单元中，每个反应单元中含有一个或零个待测核酸分子，经过PCR 反应后，采集终点荧光信号，基于泊松分布对核酸起始浓度进行绝对定量的仪器。这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面体现出的优势已被普遍认可，其在临床诊断、转基因成分定量、致病微生物检测、下一代测序、文库精确定量和结果验证等方面逐渐发挥重要作用。在新冠疫情中，数字PCR技术因其灵敏度高，提高了疑似病例确诊的准确度。

数字PCR方法已被作为标准方法写入国家标准，在经过实验室认可的相应检测实验室和分析测试中心将使用数字PCR 仪提供对外检测的数据。数字PCR仪在临床检测实验室的应用具有巨大潜力。各实验室认可的需求越来越多，数字PCR仪的性能检测需求量将持续增长。

数字PCR仪的国家产品标准和校准规范尚未发布，国外也未发布相应的国际标准，已发布的JJF 1527-2015 《聚合酶链反应分析仪校准规范》，只是针对数字PCR平台中独立的PCR仪的温度控制系统进行校准，而数字PCR系统的扩增过程包括样品分散、样品热循环和样品检测，仅仅对独立的温控系统进行校准无法反映仪器的真实性能，在对数字PCR仪质量检测时，需要使用到不同种类、体积的试剂，为方便数字PCR仪的性能进行检测，需要提供一种针对数字PCR仪的性能测试的试剂盒。

发明内容

本实用新型的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，便于对数字PCR仪进行质量检测，也便于实时监测试剂盒内温度以及摆放试剂盒位置，提高检测准确度与精密度，减小误差。

为达到上述目的，本实用新型所采用的技术方案是：

本实用新型提供一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，包括盒体、位于盒体上方的盒盖、支撑座及温度记录仪，所述支撑座设置在盒体上，所述支撑座包括第一区域、第二区域和第三区域，所述第一区域均匀分布有多个圆形凹槽；所述第二区设置有一方形凹槽；所述第三区域位于支撑座的右上侧，其上设置有温度记录仪，用于实时检测试剂盒的当前温度，所述温度记录仪设有可插拔U盘；所述盒盖上设置有透明区域，所述透明区域位于温度记录仪的上方，方便实时观测试剂盒温度及正确放置试剂盒位置标识。

进一步的，还包括若干个试剂容器，所述试剂容器能够匹配圆形凹槽固定。

进一步的，所述试剂容器外周设有螺纹，通过螺纹连接固定在圆形凹槽内。

进一步的，所述方形凹槽能够容纳96孔PCR板。

进一步的，所述支撑座与盒体一体成型，容纳在盒体内。

进一步的，所述支撑座的四周与盒体四周通过卡扣固定，所述卡扣设置在支撑座上。

进一步的，所述温度记录仪设置有报警器，当试剂盒实时温度大于预设温度阈值时，报警器启动，用于检测报警试剂盒异常温度。

进一步的，所述温度记录仪设置有温度记录模组，所述温度记录模组包括主控芯片，以及分别与主控芯片连接的温度检测模块、存储模块、数据处理模块。其中主控芯片用于控制每隔一定时间记录一次试剂盒的当前温度；所述存储模块用于存储温度数据与冷链时间和温度记录仪的校准证书；所述数据处理模块用于以加密PDF的形式记录试剂盒运输过程中的历史温度数据。

进一步的，所述温度记录仪包括可插拔的USB接口，所述USB接口和所述存储模块相连接，用于导出试剂盒运输过程中的历史温度数据。

与现有技术相比，本实用新型所达到的有益效果：

（1）本试剂盒设置多个凹槽，能够集成各种试剂，在节约样品和试剂的同时, 且方便操作，缩短检测周期，提高数字PCR仪进行质量检测的质量和速度，从而帮助提高检测的准确度和精密度，有利于仪器检测标准化的实现。

（2）设置多个试剂容器，可一次性对数字PCR仪的多个关键参数进行检测，提高了检测的通量，减轻检测人员的劳动强度。

（3）通过温度记录仪，设置位于温度记录仪上方的透明区域，方便实时观测试剂盒内的温度，对温度记录仪数据的读取能对试剂盒运输过程中的温度进行溯源，保证试剂盒内试剂储存状态稳定，确保试剂的质量；同时透明区域对正确放置试剂盒位置起到标识作用。

附图说明

图1是本实用新型实施例一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒的结构示意图；

图2是本实用新型实施例数字PCR仪检测结果图；

图中：1、盒体；2、盒盖；3、支撑座；4、核酸标准品管；5、数字PCR反应液管；6、引物探针混合溶液管；7、第一荧光素溶液管；8、第二荧光素溶液管；9、第三荧光素溶液管；10、第四荧光素溶液管；11、第五荧光素溶液管；12、ddH₂O管；13、96孔PCR板；14、温度记录仪；15、透明区域。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本实用新型的技术方案，而不能以此来限制本实用新型的保护范围。

在本实用新型的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、 “底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本实用新型的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

在本实用新型的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

如图1所示，为一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒的结构示意图，包括盒体1、位于盒体1上方的盒盖2、支撑座3及温度记录仪14，支撑座3设置在盒体1上。

可实施的，支撑座3与盒体1一体成型，容纳在盒体1内，或支撑座3的四周设置有卡扣，与盒体1四周可拆卸固定。支撑座3上设置有第一区域、第二区域和第三区域，第一区域均匀分布有多个圆形凹槽，用于放置多个试剂容器，包括有1个核酸标准品管4、一个数字PCR反应液管5，一个引物探针混合溶液管6，5个荧光素溶液管，5个荧光素溶液管分别为：第一荧光素溶液管7、第二荧光素溶液管8、第三荧光素溶液管9、第四荧光素溶液管10和第五荧光素溶液管11，一个ddH₂O管12。

第二区设置有一方形凹槽，能够容纳96孔PCR板13；第三区域位于支撑座3的右上侧，其上设置有温度记录仪14，用于实时检测试剂盒的当前温度，温度记录仪14设有可插拔U盘；盒盖2上设置有透明区域15，透明区域15位于温度记录仪14的上方，用于实时检测试剂盒的当前温度及正确放置试剂盒位置标识。

本试剂盒中，核酸标准品管4装有特定拷贝数浓度的核酸标准品，装入量为25 μL；数字PCR反应液管5装入量为500 μL，包含数字PCR缓冲液、MgCl₂、dNTPs及DNA聚合酶，5个荧光素溶液管分别装有FAM、HEX、cy3、cy5、cy5.5的荧光素溶液。引物探针混合溶液管6的容量为10 μL，5个荧光素溶液管容量均为60 μL，ddH₂O管12容量为110 μL。可实施的，溶液管外周设有螺纹，通过螺纹连接匹配圆形凹槽固定。

温度记录仪14内置温度探头，能够实时记录试剂盒在存储和运输过程中的温度数据，温度记录仪14上的LED屏显示实时温度，且盒盖2上设置透明区域15的面积不小于温度记录仪的LED屏幕和温度记录仪上的报警灯面积的总和，可通过盒盖2的透明区域15观察试剂盒内的实时温度。

温度记录仪14设置有报警器，当检测到的试剂盒实时温度高度预设温度阈值时，报警器启动，点亮报警灯，用于检测报警试剂盒异常温度。

该温度记录仪14还包括可插拔的USB接口，USB接口和存储模块相连接，用于导出试剂盒运输过程中的历史温度数据。温度记录仪每隔设定的时间记录一次试剂盒的当前温度，根据实际应用情况，优选5分钟记录一次试剂盒的实时温度。

温度记录仪14设置有温度记录模组，温度记录模组包括主控芯片，以及分别与主控芯片连接的温度检测模块、存储模块、数据处理模块。其中主控芯片用于控制每隔一定时间记录一次试剂盒的当前温度；存储模块用于存储温度数据与冷链时间，并且存储模块存储有温度记录仪的校准证书，确保温度记录仪的溯源性；数据处理模块用于以加密PDF的形式记录试剂盒运输过程中的历史温度数据。

当U盘插入到读取设备中，以加密PDF的形式记录试剂盒运输过程中的历史温度数据，包括存储温度数据与冷链时间，记录试剂盒在运输过程及收到后存放到冰箱的时间。

利用本实用新型的提供的试剂盒，对数字PCR仪的质量进行检测，具体包括如下步骤：

1）测试前需将数字PCR仪开机预热至少10min。

2）将U盘插入到读取设备中，读取试剂盒运输过程中的历史温度数据，确保试剂盒运输过程中的温度符合运输的温度要求。

3）将数字PCR反应液、引物探针溶液、核酸标准品溶液混合，建立数字PCR扩增反应体系。按仪器实际具有的荧光通道，将数字PCR反应液与待测荧光通道匹配的荧光素溶液分别混合，分别建立FAM、HEX、cy3、cy5、cy5.5荧光通道检测反应体系。将数字PCR反应液、引物探针溶液、ddH₂O混合，建立空白对照反应体系1。将数字PCR反应液、ddH₂O混合，建立空白对照反应体系2。

4）按微滴生成仪的操作要求，将反应体系分别生成微滴。

5）将96孔PCR板13中的A1～A7加入数字PCR扩增反应体系的微滴；B1～B6加入FAM荧光通道检测反应体系的微滴；按仪器实际具有的荧光通道，加入荧光通道检测反应体系的微滴C1～C6加入HXE荧光通道检测反应体系的微滴；D1～D6加入20 μL cy3荧光通道检测反应体系的微滴；D1～D6加入cy5荧光通道检测反应体系的微滴；E1～E6加入cy5.5荧光通道检测反应体系的微滴；A8加入空白对照反应体系1的微滴，B8、C8、D8和E8分别加入空白对照反应体系2的微滴。

6）按封膜仪的操作要求，对96孔PCR板13进行封膜。

7）将该96孔PCR板13置于PCR检测仪中，参照仪器操作说明设定扩增条件，设定待测样品、空白对照参数进行PCR反应，记录样品摆放顺序。

8）按数字PCR读取仪的要求，对96孔PCR板13中的信号进行读取。

9）结果分析：

待测核酸标准品的拷贝数浓度相对示值误差≤±30%，重复性≤10 %，反应单元个数>10000且重复性≤10 %。阴阳微滴簇明显分开，空白对照1、2正常，结果表明该数字PCR仪测得结果的拷贝数浓度相对示值误差和重复性结果好。

如图2所示，为本实用新型实施例数字PCR仪检测结果图，待测荧光素荧光强度重复性≤10 %，反应单元个数大于10000，结果表明该数字PCR仪的荧光通道的荧光强度及重复性结果好。

以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本实用新型的保护范围。

Claims (9)

1.一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，包括盒体（1）、位于盒体（1）上方的盒盖（2）、支撑座（3）及温度记录仪（14），所述支撑座（3）设置在盒体（1）上，所述支撑座（3）包括第一区域、第二区域和第三区域，所述第一区域均匀分布有多个圆形凹槽；所述第二区设置有一方形凹槽；所述第三区域位于支撑座（3）的右上侧，其上设置有温度记录仪（14），所述温度记录仪（14）设有可插拔U盘；所述盒盖（2）上设置有透明区域（15），所述透明区域（15）位于温度记录仪（14）的上方。

2.根据权利要求1所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，还包括若干个试剂容器，所述试剂容器能够匹配圆形凹槽固定。

3.根据权利要求2所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂容器外周设有螺纹，通过螺纹连接固定在圆形凹槽内。

4.根据权利要求1所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述方形凹槽能够容纳96孔PCR板。

5.根据权利要求1所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述支撑座（3）与盒体（1）一体成型，容纳在盒体（1）内。

6.根据权利要求1所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述支撑座（3）的四周与盒体（1）四周通过卡扣固定，所述卡扣设置在支撑座（3）上。

7.根据权利要求1所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述温度记录仪（14）设置有报警器，用于检测报警试剂盒异常温度。

8.根据权利要求1所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述温度记录仪设置有温度记录模组，所述温度记录模组包括主控芯片，以及分别与主控芯片连接的温度检测模块、存储模块、数据处理模块。

9.根据权利要求8所述的一种用于数字PCR仪质量检测的试剂盒，其特征在于，所述温度记录仪（14）包括可插拔的USB接口，所述USB接口和所述存储模块相连接，用于导出试剂盒运输过程中的历史温度数据。

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