CN214881585U - 一种细胞诱导培养袋及nk细胞诱导培养袋 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种细胞诱导培养袋及NK细胞诱导培养袋，所述细胞诱导培养袋包括具有一容纳空间的密封袋体以及与所述密封袋体连通的管体，所述管体包括用于取样或添加因子的二通管路，所述二通管路的一端与所述密封袋体连通连接；所述管体还包括三通管路，所述三通管路包括与所述密封袋体连通连接的主管路、用于进液的第一分支管路及用于向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液的第二分支管路；本实用新型提供的细胞诱导培养袋通过密封袋体培养细胞，通过二通管路取样或添加因子，通过三通管路的两路分支管路分别进行进液和向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液，在诱导阶段无需换瓶与转袋，直接进行补液操作，结构简单，操作方便。

Description

一种细胞诱导培养袋及NK细胞诱导培养袋

〖技术领域〗

本实用新型涉及细胞治疗试剂耗材技术领域，尤其涉及一种细胞诱导培养袋及NK细胞诱导培养袋。

〖背景技术〗

细胞治疗是近几年兴起的疾病治疗新技术，是指利用某些具有特定功能的细胞的特性，采用生物工程方法获取和/或通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。细胞治疗涉及细胞体外培养，其中，细胞体外培养是指在体外模拟体内环境，即把细胞生存环境中的变量如温度、酸碱度、营养条件等控制成与我们体内环境一样或相似，使之生长繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。

自然杀伤(NK)细胞是机体重要的免疫细胞，NK细胞与人体抗肿瘤、抗病毒感染与免疫调节有关，具备识别靶细胞、杀伤介质、分泌多种细胞因子的能力，其杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体。随着细胞免疫治疗临床研究及应用，NK细胞免疫治疗在血液肿瘤、实体瘤、新冠肺炎、亚健康调理等领域取得一定的效果，其安全性和疗效得到肯定。由于正常人体外周血中的NK细胞数量相对较少，需要经过体外分离及培养扩增，获得大量高纯度的NK细胞才能满足临床治疗的需要，因而如何获得高增殖数量、高纯度、高杀伤性的NK细胞已成为NK细胞免疫治疗的关键。

NK细胞的体外培养过程大致分为活化和扩增两个阶段；整个培养周期约14d左右。活化阶段为采集供者外周血，分离获取单个核细胞(PBMC)，在培养体系中加入抗体CD16和细胞因子IL-2来促进NK细胞的诱导，培养期间需进行补液和换瓶操作，培养体系逐级放大，扩增阶段细胞大量增殖，需将其转移到细胞诱导培养袋中继续培养至14d。

在NK细胞培养过程中，存在以下缺点：①诱导培养期间随着培养体积的增加，原培养瓶装量不够，需不断进行补液和换瓶操作，期间易造成污染，样品多时工作量比较大；②NK细胞是半贴壁半悬浮生长，且对外界环境比较敏感，诱导培养期间频繁换瓶补液等操作易造成NK细胞损伤，使培养的NK细胞纯度变低、数量减少；③培养期间不断换瓶使得培养NK细胞的成本变高；④NK细胞诱导方法为抗体联合因子诱导，在进行NK细胞诱导前需将抗体包被到培养瓶中，包被容易受操作经验影响。如何安全高效地对NK细胞进行体外培养成为本领域技术人员需要解决的技术问题。

〖实用新型内容〗

本实用新型的第一个目的旨在提供一种细胞诱导培养袋，结构简单、操作方便。

为了实现本实用新型的第一个目的，本实用新型采用了如下技术方案：

一种细胞诱导培养袋，包括具有一容纳空间的密封袋体以及与所述密封袋体连通的管体，所述管体包括用于取样或添加因子的二通管路，所述二通管路的一端与所述密封袋体连通连接；所述管体还包括三通管路，所述三通管路包括与所述密封袋体连通连接的主管路、用于进液的第一分支管路及用于向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液的第二分支管路。

作为具体的实施方式，所述三通管路还包括三通管件；所述主管路的一端端口固定密封在所述密封袋体的一侧，另一端端口与所述三通管件的主管连通连接；所述第一分支管路的一端端口与所述三通管件的一个支管连通连接，另一端端口作为向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液的添加口；所述第二分支管路的一端端口与所述三通管件的另一个支管连通连接，另一端端口用于进液。

作为具体的实施方式，所述第一分支管路的另一端端口配置有公鲁尔接头；所述第二分支管路的另一端端口配置有母鲁尔接头。

作为具体的实施方式，所述三通管件采用Y型三通或T型三通。

作为具体的实施方式，所述第一分支管路和第二分支管路的另一端端口套有保护帽；所述保护帽帽体外表面上设有多条用于防滑的竖直凸起。

作为具体的实施方式，所述第一分支管路上还设有第一止流夹和/或所述第二分支管路上还设有第二止流夹。

作为具体的实施方式，所述二通管路的一端端口固定密封在密封袋体的一侧，并与密封袋体内部的容纳空间连通，另一端端口为内旋密封接口，并配置有相应的密封接头。

作为具体的实施方式，所述二通管路和三通管路设在所述密封袋体的同一侧；所述密封袋体远离所述二通管路和三通管路的一侧对称制有两个定位孔。

进一步地，所述密封袋体靠近所述定位孔的一侧外表面上设置有记载细胞液培养信息的标签栏。

本实用新型的第二个目的旨在提供一种NK细胞诱导培养袋，通过包被抗体提高了NK细胞的诱导效率，结构简单、操作方便。

为了实现本实用新型的第二个目的，本实用新型采用了如下技术方案：

一种NK细胞诱导培养袋，采用上述细胞诱导培养袋；所述密封袋体内包括NK细胞诱导所需的包被抗体。

本实用新型的有益效果：

本实用新型提供的细胞诱导培养袋通过密封袋体培养细胞，通过二通管路取样或添加因子，通过三通管路的两路分支管路分别进行进液和向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液，在诱导阶段无需换瓶与转袋，直接进行补液操作，结构简单，操作方便。进一步地，本实用新型通过三通管件实现三通管路的两条管路。进一步地，本实用新型通过公鲁尔接头给配置有母鲁尔接头的细胞诱导培养袋充液，通过母鲁尔接头接收进液，扩增阶段可直接进行转袋，使用方便。进一步地，本实用新型通过保护帽防止密封袋体内液体流出。进一步地，本实用新型通过止流夹避免大量进液或出液时，无法很好地控制进液量或出液量。

本实用新型提供的NK细胞诱导培养袋具有以下优点：①NK细胞诱导培养袋的体积在20-200mL，在诱导阶段只需要进行补液，不需换瓶，操作步骤简单；②在NK细胞诱导培养袋中培养出的NK细胞损伤少，NK细胞纯度高；③本实用新型提供的NK细胞诱导培养袋包被有CD16抗体，在诱导过程无需再进行包被，使NK细胞培养规程标准化和简易化；④在活化阶段完成后，扩大培养阶段可直接进行转袋操作，与匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液，操作方便；⑤NK细胞诱导培养袋进样与取样管道在袋体同侧，大大减少了袋体体积，节约培养空间。

〖附图说明〗

为了更清楚地说明本实用新型实施例，下面对实施例中所需要使用的附图做简单的介绍。下面描述中的附图仅仅是本实用新型中的实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。

图1是本实用新型实施例提供的NK细胞诱导培养袋的示意图；

图2A是本实用新型实施例提供的一组NK细胞诱导培养袋和常规的NK细胞培养瓶对NK细胞进行培养时前七天诱导阶段生长曲线对比图；

图2B是本实用新型实施例提供的一组NK细胞诱导培养袋和常规的NK细胞培养瓶对NK细胞进行培养时全程生长曲线对比图；

图3A是常规的NK细胞培养瓶对NK细胞进行培养的NK细胞培养表型图；

图3B是本实用新型实施例提供的NK细胞诱导培养袋对NK细胞进行培养的NK细胞培养表型图；

附图标记说明：100-密封袋体，210-二通管路，221-主管路，222-第一分支管路，223-第二分支管路，224-三通管件，225-公鲁尔接头，226-母鲁尔接头，310-第一止流夹，320-第二止流夹，400-定位孔，500-标签栏。

〖具体实施方式〗

下面结合附图，对本实用新型进行详细的说明。

为了使本实用新型的目的、技术方案、优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

如图1所示，一种细胞诱导培养袋，包括具有一容纳空间的密封袋体100以及与该密封袋体100连通连接的管体；管体包括二通管路210以及三通管路，二通管路210的一端与密封袋体100连通连接，用于少量取样或添加因子；三通管路包括与密封袋体100连通连接的主管路221，与主管路221连通连接、用于进液的第一分支管路222以及与主管路221连通连接、用于向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液的第二分支管路223。

如图1所示，二通管路210的一端端口固定密封在密封袋体100的一侧，并与密封袋体100内部的容纳空间连通，另一端端口为内旋密封接口，并配置有相应的密封接头，方便注射器反复穿刺少量取样或添加因子；注射器穿刺取样或添加因子后，密封接头自动封闭，保证袋内液体不会溢出以及保证密封接口始终处于无菌状态，细胞诱导培养袋内的细胞液在细胞诱导培养袋添加各种保养液时不被污染，且细胞液不会回流。

如图1所示，主管路221的一端端口固定密封在密封袋体100的一侧，并与密封袋体100内部的容纳空间连通，另一端端口与三通管件224的主管连通连接；第一分支管路222的一端端口与三通管件224的一个支管连通连接，另一端端口配置有公鲁尔接头225，用于对配置有母鲁尔接头的细胞诱导培养袋进行填充；第二分支管路223的一端端口与三通管件224的另一个支管连通连接，另一端端口配置有母鲁尔接头226，用于大量液体进出。

在本实施例中，三通管件224采用Y型三通；在其它实施例中，三通管件224采用T型三通。

在本实施例中，细胞诱导培养袋通过公鲁尔接头225插入另一个同样结构的细胞诱导培养袋的母鲁尔接头226或通过公鲁尔接头225插入其它结构的、配置有母鲁尔接头的细胞诱导培养袋，对另一个细胞诱导培养袋进行填充转袋，减少操作步骤。

在本实施例中，为避免大量进液或出液时，无法很好地控制进液量或出液量，在第一分支管路222上还设有第一止流夹310，在第二分支管路223上还设有第二止流夹320；且第一止流夹310与第一分支管路222、第二止流夹320与第二分支管路223均可通过系绳活动连接。

在本实施中，第一分支管路222连接有公鲁尔接头225的端口以及第二分支管路223连接有母鲁尔接头226的端口套有保护帽，保护帽帽体外表面上设有多条用于防滑的竖直凸起，防止密封袋体100内液体流出及方便操作员使用镊子打开保护帽。

在本实施例中，密封袋体100的四周通过热合制成密封边缘；二通管路210和三通管路设在密封袋体100的同一侧，密封袋体100远离二通管路210和三通管路的一侧对称制有两个定位孔400，向外输液时，可以使用定位孔400将密封袋体100倒挂，便于细胞液向外流出；密封袋体100靠近定位孔400的一侧设置有记载细胞液培养信息的标签栏500，标签栏500由木浆纸制成，长50mm、宽20mm，标签栏500上记载的信息有：姓名、日期、细胞类型。

在本实施例中，所述袋体、管路均由PE(聚乙烯)材料制作。PE材料是乙烯经聚合制得的一种热塑性树脂，具有透水率低、透气性好、化学稳定性好等优点，在常温下不溶于任何已知溶剂中，为培养NK细胞提供优质的生存环境。与此同时，PE材料透明柔韧，便于在显微镜下观察细胞状态和细胞增殖情况，正常使用情况下细胞诱导培养袋不会发生破袋现象。

在本实施例中，细胞诱导培养袋用于培养NK细胞，密封袋体100内不仅包含NK细胞液，而且含有NK细胞诱导所需的包被抗体CD16；如图2A、图2B、图3A、图3B所示，相比现有技术中前期诱导分化使用细胞培养瓶进行包被处理再进行NK诱导培养，本申请实施例提供的细胞诱导培养袋包含包被抗体CD16，NK细胞诱导效率高，扩增效果更好。

在本实施例中，细胞诱导培养袋均采用γ射线进行照射灭菌，确保密封袋体100内处于无菌状态细胞诱导培养袋。在本实施例中，密封袋体100呈方体状，长200mm，宽100mm，厚度108μm，容量20-200ml，密度0.894-0.904；主管路221的长度为35cm，第一分支管路222和第二分支管路223的长度为20cm，主管路221、第一分支管路222和第二分支管路223的管内直径均为5mm；二通管路210的长度为2cm，管内直径为5mm；定位孔的直径为1cm，方便对细胞诱导培养袋进行挂放。

本实用新型还提供了一种NK细胞诱导培养袋，所述NK细胞诱导培养袋采用上述细胞诱导培养袋，且所述密封袋体内预先装有NK细胞诱导所需的包被抗体。

如图2A和图2B所示，本实用新型实施例提供的NK细胞诱导培养袋对NK细胞进行培养时，诱导阶段及扩增阶段NK细胞的生长速度快于常规的NK细胞培养瓶对NK细胞进行培养时NK细胞的生长速度。

如图3A所示，采用常规NK细胞培养瓶对NK细胞进行培养得到的NK细胞，通过流式细胞仪分析NK细胞表型，NK表型CD3^-CD56⁺为48.18％；如图3B所示，采用本实施例提供的NK细胞诱导培养袋对NK细胞进行培养得到的NK细胞，通过流式细胞仪分析NK细胞表型，得NK表型CD3^-CD56⁺为60.88％。采用本实施例提供的NK细胞诱导培养袋进行NK细胞培养的NK细胞纯度更高。

以上所述仅是本实用新型的优选实施例，本实用新型的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本实用新型思路下的技术方案均属于本实用新型的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本实用新型的保护范围。

Claims (10)

1.一种细胞诱导培养袋，包括具有一容纳空间的密封袋体以及与所述密封袋体连通的管体，其特征在于：所述管体包括用于取样或添加因子的二通管路，所述二通管路的一端与所述密封袋体连通连接；所述管体还包括三通管路，所述三通管路包括与所述密封袋体连通连接的主管路、用于进液的第一分支管路及用于向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液的第二分支管路。

2.根据权利要求1所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述三通管路还包括三通管件；所述主管路的一端端口固定密封在所述密封袋体的一侧，另一端端口与所述三通管件的主管连通连接；所述第一分支管路的一端端口与所述三通管件的一个支管连通连接，另一端端口作为向匹配的细胞诱导培养袋填充细胞液的添加口；所述第二分支管路的一端端口与所述三通管件的另一个支管连通连接，另一端端口用于进液。

3.根据权利要求2所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述第一分支管路的另一端端口配置有公鲁尔接头；所述第二分支管路的另一端端口配置有母鲁尔接头。

4.根据权利要求3所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述三通管件采用Y型三通或T型三通。

5.根据权利要求3所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述第一分支管路和第二分支管路的另一端端口套有保护帽；所述保护帽帽体外表面上设有多条用于防滑的竖直凸起。

6.根据权利要求2所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述第一分支管路上还设有第一止流夹和/或所述第二分支管路上还设有第二止流夹。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述二通管路的一端端口固定密封在密封袋体的一侧，并与密封袋体内部的容纳空间连通，另一端端口为内旋密封接口，并配置有相应的密封接头。

8.根据权利要求1-6任意一项所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述二通管路和三通管路设在所述密封袋体的同一侧；所述密封袋体远离所述二通管路和三通管路的一侧对称制有两个定位孔。

9.根据权利要求8所述的细胞诱导培养袋，其特征在于：所述密封袋体靠近所述定位孔的一侧外表面上设置有记载细胞液培养信息的标签栏。

10.一种NK细胞诱导培养袋，其特征在于：采用权利要求1-9任意一项所述的细胞诱导培养袋；所述密封袋体内包括NK细胞诱导所需的包被抗体。

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