CN213689647U - 一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型提供了一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒，包括膜条和试剂槽，试剂槽中放有缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品和显色液，膜条设置有m×n的矩阵微孔，其中，12≤m≤15，7≤n≤10，m×n≥105，矩阵微孔包括90个以上的食物特异性抗原微孔、6个校准点微孔、3～5个阳性质控微孔和至少1个阴性质控微孔。本实用新型的试剂盒可以同时检测90项以上食物特异性IgG，提高了检测效率和通量；本实用新型的试剂盒避免了仅有一个质控点的试剂盒在质控数据出错的时候导致所有检测数据的无效，可以通过阳性质控微孔对校准点微孔建立的标准曲线进行分别校正，减少了由于检测仪器的信号偏移造成的检测偏差。

Description

一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒

技术领域

本实用新型涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒。

背景技术

变态反应性疾病是一种常见的疾病，它是由广泛存在的变应原引发的，大约有5-10％的人受变应原的侵扰。引发过敏反应的物质称为变应原，其中食物是重要的变应原之一。人体对食物敏感可引起食物变态反应，目前认为主要有两种类型：由IgE介导的速发型过敏反应，病发迅速，病症明显；由IgG介导的迟发型变态反应，反应通常在接触食物几小时或几天后才会出现反应症状，如消化道症状(腹痛、腹泻、口臭、口腔溃疡、胃肠胀气等肠胃功能失调)、皮肤症状(湿疹、荨麻疹)、呼吸症状(哮喘、慢性咳嗽、慢性鼻炎、鼻窦炎)、神经方面(头晕、头痛、偏头痛、睡眠障碍)、精神方面(焦虑、犹豫、注意力涣散、暴躁易怒、坐立不安)及其它慢性症状。

通常情况下，由食物引起的IgG介导的异常反应称之为食物不耐受，这是一种复杂的免疫反应性疾病。当肠胃分泌的消化酶不足，胃肠道动力不足时，食物无法被完全消化。一些食物被分解成多肽类的中分子，这些中分子容易被吸收进入血液循环。免疫系统将进入血液的某种或多种中分子物质当成有害物质，从而产生过度的保护性免疫反应，产生食物特异性IgG抗体，IgG抗体与食物颗粒形成免疫复合物(Ⅲ型变态反应)。这些IgG免疫复合物随着血液循环，在身体内不同部位沉积，进而引起一系列相关部位的病症。因此，通过检测血清中食物特异性IgG，对于确定不耐受食物与过敏性疾病轻重程度的诊断具有重要价值。

目前，临床上食物不耐受检测一般采用酶联免疫法(ELISA)和免疫印迹法。传统酶联免疫法(ELISA)能定量检测食物特异性IgG抗体水平来反应食物不耐受状况，可针对性检测不同食物的IgG抗体浓度。但传统酶联免疫法(ELISA) 的局限是单个反应器中只能检测一种生物指标，通量低，检测成本高，而在食物不耐受检测领域中，需要检测的食物种类多达几十种甚至上百种。

实用新型内容

本实用新型的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种同时检测 90项以上食物特异性IgG的试剂盒。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案为：一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒，所述试剂盒包括膜条和试剂槽，所述试剂槽中放有缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品和显色液，所述膜条设置有m×n的矩阵微孔，其中，12≤m≤15，7≤n≤10，m×n≥105，所述矩阵微孔包括90个以上的食物特异性抗原微孔、6个校准点微孔、3～5个阳性质控微孔和至少1个阴性质控微孔；

以所述膜条所在的平面建立虚拟平面坐标系，以所述膜条其中一条对角线两端的两个微孔分别为(1，1)和(m，n)坐标点，所述6个校准点微孔由浓度依次增大的顺序分别位于坐标点(1，1)、(1，2)、(1，3)、(1，4)、(1，5)、 (1，6)的位置上，所述3～5个阳性质控微孔分别位于坐标点(a，n)的位置上，所述3～5个阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位，1≤a≤m。

上述的同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒通过对试剂盒膜条的改进，可以同时处理90项以上食物特异性IgG的检测，在膜条上依次设置连续的校准点微孔用于建立定量标准曲线，并且在坐标点(a，n)的位置上设置质控点且阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位，用于判定检测数据的有效性，使得处理的90项以上食物特异性IgG每隔十个左右的样品就有一个质控点，避免了仅有一个质控点的试剂盒在质控数据出错的时候导致所有检测数据的无效，上述的试剂盒可以分区域的判断数据的有效性，有利于节约劳动力，而且阳性质控微孔设置在(a，n)的位置上且阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位，可以对校准点微孔建立的标准曲线进行分别校正，以适用于不同区域的样品，减少了检测过程中由于加样操作误差造成的检测偏差，减少了由于检测仪器的信号偏移造成的检测偏差，提高了检测结果的准确度。

优选地，所述m＝15，n＝7，所述矩阵微孔包括4个阳性质控微孔。

上述的试剂盒膜条的矩阵微孔分布更合理，更加节约空间并且同时更有利于减小误差，提高检测结果的准确度。

优选地，所述矩阵微孔中至少有一个阴性质控微孔的位置为(x,y)，其中， 6≤x≤8，3≤y≤4。

优选地，所述4个阳性质控微孔分别位于坐标点(2，7)、(5，7)、(8，7)、 (11，7)。

上述的试剂盒膜条的矩阵微孔分布更合理，更加节约空间并且同时更有利于减小误差，提高检测结果的准确度。

优选地，所述各个食物特异性抗原微孔中均包被有食物特异性抗原，所述食物特异性抗原的食物种类包括切达干酪，白软干酪，牛肉，鸡肉，猪肉，鸡蛋，羊肉，火鸡，酸奶，巧克力，玉米，大米，小麦，大豆，柠檬，菠菜，青豆，小米，杏仁，芝麻，腰果，花生，旱芹，茄子，青椒，欧芹，卷心菜，胡萝卜，菜花，嫩豌豆，葵花籽，黑胡桃，蓝莓，菠萝，橘子，桃，苹果，榴莲，芒果，香蕉，葡萄，柚子，草莓，哈密瓜，麦芽，黑麦，酵母，蔗糖，黄油，肉桂，芥末，蜂蜜，咖啡，燕麦，大麦，荞麦，西兰花，杂色豌豆，大蒜，洋葱，可乐豆，红茶，牛奶，螃蟹，对虾，鳕鱼，羊奶，蛤，三文鱼，沙丁鱼，带鱼，扇贝，龙虾，草鱼，牡蛎，鳟鱼，金枪鱼，红辣椒，大葱，生菜，黄瓜，马铃薯，南瓜，甘薯，香菜，小白菜，西红柿，蘑菇，西瓜，橄榄，鹅肉，鸭肉，鹌鹑蛋，鹅蛋，鸭蛋，莲子，山楂和黑米中的至少90种。

上述的试剂盒可以同时处理90项以上食物特异性IgG的检测，检测的食物种类丰富。

优选地，所述各个食物特异性抗原通过配制成食物特异性抗原包被液点样在所述膜条表面，点样的直径为150～200μm。

优选地，所述膜条为硝酸纤维素膜。

优选地，所述封闭液为10％牛血清白蛋白-PBS；所述显色液为1-Step TMB；所述缓冲液为含质量浓度0.05％吐温20的TBST溶液；所述酶标抗体为HRP抗人IgG，所述酶标抗体的浓度为0.8～1.2mg/L。

优选地，所述试剂盒还设置有反应槽，所述反应槽包括2×6个反应区，所述各个反应区的规格为16×35mm。

上述的试剂盒设置反应槽，并且在反应槽设置多个反应区，可以同时进行样本检测。

优选地，所述试剂盒还包括密封膜，所述密封膜为塑料薄膜，所述密封膜贴附在所述膜条上并包围所述膜条。

上述的试剂盒设置密封膜保护膜条，避免膜条污染。

本实用新型的有益效果在于：本实用新型提供了一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒，提高了检测效率和通量；本实用新型的同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒既可以通过直接观察显色液颜色进行半定量，也可以通过分析仪定量而且灵敏度高；本实用新型的同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒通过对试剂盒膜条的校准点和质控点位置关系的改进，避免了仅有一个质控点的试剂盒在质控数据出错的时候导致所有检测数据的无效，本实用新型的试剂盒可以分区域的判断数据的有效性，有利于节约劳动力，而且阳性质控微孔的设置可以对校准点微孔建立的标准曲线进行分别校正，以适用于不同区域的样品，减少了检测过程中由于加样操作误差造成的检测偏差，减少了由于检测仪器的信号偏移造成的检测偏差，提高了检测结果的准确度。

附图说明

图1为本实用新型实施例的试剂盒的膜条的结构示意图。

其中，1、膜条，2、矩阵微孔，3阳性质控微孔，4、校准点微孔。

具体实施方式

为更好的说明本实用新型的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本实用新型作进一步说明。

实施例1

作为本实用新型实施例的一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒，所述试剂盒包括膜条和试剂槽，所述试剂槽中放有缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品和显色液，所述膜条设置有m×n的矩阵微孔，其中，12≤m≤15， 7≤n≤10，m×n≥105，所述矩阵微孔包括90个以上的食物特异性抗原微孔、6个校准点微孔、3～5个阳性质控微孔和至少1个阴性质控微孔；

以所述膜条所在的平面建立虚拟平面坐标系，以所述膜条其中一条对角线两端的两个微孔分别为(1，1)和(m，n)坐标点，所述6个校准点微孔由浓度依次增大的顺序分别位于坐标点(1，1)、(1，2)、(1，3)、(1，4)、(1，5)、 (1，6)的位置上，所述3～5个阳性质控微孔分别位于坐标点(a，n)的位置上，所述3～5个阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位。

本实施例的同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒通过对试剂盒膜条的改进，可以同时处理90项以上食物特异性IgG的检测，在膜条上依次设置连续的校准点微孔用于建立定量标准曲线，并且在坐标点(a，n)的位置上设置质控点且阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位，用于判定检测数据的有效性，使得处理的90项以上食物特异性IgG每隔十个左右的样品就有一个质控点，避免了仅有一个质控点的试剂盒在质控数据出错的时候导致所有检测数据的无效，上述的试剂盒可以分区域的判断数据的有效性，有利于节约劳动力，而且阳性质控微孔设置在(a，n)的位置上且阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位，可以对校准点微孔建立的标准曲线进行分别校正，以适用于不同区域的样品，减少了检测过程中由于加样操作误差造成的检测偏差，减少了由于检测仪器的信号偏移造成的检测偏差，提高了检测结果的准确度。

为了使试剂盒的膜条的矩阵微孔分布更合理，更加节约空间并且同时更有利于减小误差，提高检测结果的准确度，所述m＝15，n＝7，所述矩阵微孔包括4 个阳性质控微孔。

进一步地，所述矩阵微孔中至少有一个阴性质控微孔的位置为(x,y)，其中，6≤x≤8，3≤y≤4。

进一步地，，所述4个阳性质控微孔分别位于坐标点(2，7)、(5，7)、(8， 7)、(11，7)。试剂盒膜条的矩阵微孔分布更合理，更加节约空间并且同时更有利于减小误差，提高检测结果的准确度。

为了使试剂盒可以同时处理90项以上食物特异性IgG的检测，所述各个食物特异性抗原微孔中均包被有食物特异性抗原，所述食物特异性抗原的食物种类包括切达干酪，白软干酪，牛肉，鸡肉，猪肉，鸡蛋，羊肉，火鸡，酸奶，巧克力，玉米，大米，小麦，大豆，柠檬，菠菜，青豆，小米，杏仁，芝麻，腰果，花生，旱芹，茄子，青椒，欧芹，卷心菜，胡萝卜，菜花，嫩豌豆，葵花籽，黑胡桃，蓝莓，菠萝，橘子，桃，苹果，榴莲，芒果，香蕉，葡萄，柚子，草莓，哈密瓜，麦芽，黑麦，酵母，蔗糖，黄油，肉桂，芥末，蜂蜜，咖啡，燕麦，大麦，荞麦，西兰花，杂色豌豆，大蒜，洋葱，可乐豆，红茶，牛奶，螃蟹，对虾，鳕鱼，羊奶，蛤，三文鱼，沙丁鱼，带鱼，扇贝，龙虾，草鱼，牡蛎，鳟鱼，金枪鱼，红辣椒，大葱，生菜，黄瓜，马铃薯，南瓜，甘薯，香菜，小白菜，西红柿，蘑菇，西瓜，橄榄，鹅肉，鸭肉，鹌鹑蛋，鹅蛋，鸭蛋，莲子，山楂和黑米中的至少90种。

进一步地，所述各个食物特异性抗原通过配制成食物特异性抗原包被液点样在所述膜条表面，点样的直径为150～200μm。

进一步地，所述膜条为硝酸纤维素膜。

进一步地，所述封闭液为10％牛血清白蛋白-PBS；所述显色液为1-Step TMB；所述缓冲液为含质量浓度0.05％吐温20的TBST溶液；所述酶标抗体为 HRP抗人IgG，所述酶标抗体的浓度为0.8～1.2mg/L。

为了可以同时进行平行试验，减小误差，所述试剂盒还设置有反应槽，所述反应槽包括2×6个反应区，所述各个反应区的规格为16×35mm。

为了保护膜条，避免膜条污染所述试剂盒还包括密封膜，所述密封膜为塑料薄膜，所述密封膜贴附在所述膜条上并包围所述膜条。

进一步的，矩阵微孔分布如表1所示。

表1 膜条的矩阵微孔分布

效果例

1、应用本实施例的同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒进行检测。

(一)分析试剂和仪器：

缓冲液：含0.1％吐温20的TBST溶液(1×)，调pH为7.4；

封闭液：10％牛血清白蛋白(V)-PBS，pH 7.4；

酶标抗体：HRP抗人IgG(Fc-特异性)购自Southern Biotech公司，货号 6140-05；用含10％小牛血清的pH 7.40、1M PBS稀释，稀释比例为1：1000；浓度为1.0mg/L；

人IgG标准品：将IgG(Abcam，ab97225)使用含10％小牛血清的pH 7.4、1M PBS配制成五个不同浓度作为标准品，标准品浓度分别是0U/mL、50U/mL、 100U/mL、200U/mL、400U/mL，500U/mL标准品经国际质控血清校准；

显色液：含0.48g/L TMB的柠檬酸缓冲液，(Thermo Scientific，货号是 37574)；

分析仪：基于比色的CCD或CMOS分析仪。

分析样品：血浆或血清；

反应槽：包含2*6个小槽，每个小槽的尺寸为16*35mm。

分析的生物指标：血液中的总IgG(IgG1,IgG2,IgG3,IgG4)。

实验前，将所有试剂平衡至室温。

(二)检测方法：

(1)稀释样品，量取10μl血清以1:200(v/v)的比例加入样本稀释液稀释，轻柔混合，避免产生泡沫；

(2)将膜条置于反应槽中，取1000μl稀释的血清样品加入反应槽中， 22～25℃孵育1小时，静置；

(3)弃去孔内反应液体；

(4)使用1000μl清洗缓冲液(1×)洗涤膜条，重复5次，吸干残存液体；

(5)每个小槽中加入100 0μl样本稀释液稀释的酶标抗体，孵育30～60分钟，静置；

(6)弃去孔内反应液，洗涤重复步骤5；

(7)加入TMB显色液1000μl/孔，室温、避光条件下孵育15分钟，静置；

(8)弃去孔内反应液；

(9)加入1000μl蒸馏水洗涤膜条，重复5次，晾干膜条；

(10)直接肉眼观察显色程度或者利用分析仪读数判定。

分析仪读数判定标准为：浓度小于50U/mL为阴性(0级)，浓度50-100U/mL 为阳性(1级)，浓度100-200U/mL为阳性(2级)，浓度大于200U/ml为阳性(3 级)。

根据显色程度进行定性判读标准是：低于校准点3(50U/mL)为0级，介于校准点3(50U/mL)与4(100U/mL)之间为1级，介于校准点4(100U/mL) 与5(200U/mL)之间为2级，高于校准点5(200U/mL)为3级。

根据显色程度，可以知道0级的浓度低于50U/mL，1级的浓度介于50U/mL 和100U/mL之间，2级的浓度介于100U/mL和200U/mL之间，3级的浓度高于 200U/mL，说明本实施例的试剂盒可以通过肉眼显色观察实现半定量检测。

本实施例的试剂和的分析仪读数检测结果的性能。

1.精密度测定

使用本实施例的试剂盒以鸡蛋，牛奶、西红柿、龙虾为例，从临床样品中分别选取阴性血清、弱阳性血清和中等阳性血清，分别进行20次批内和10批间测定，结果如表2(小麦)、表3(牛奶)、表4(西红柿)、表5(龙虾)所示。

表2 鸡蛋特异性精密度测定结果

表3 牛奶特异性精密度测定结果

表4 西红柿特异性精密度测定结果

表5 龙虾特异性精密度测定结果

2.方法定量限与线性范围

配置标准曲线，每个浓度点平行点样6个，并分别进行检测一次；计算各浓度平均值、RSD和回收率；方法定量限的确定标准：RSD小于20％且回收率在80％-120％范围内的最低浓度点视为定量限浓度，即LOQ；线性范围的确定标准：RSD小于20％，回收率在80％-120％范围内，且以理论浓度比率与实际信号响应峰面积比率绘制成的回归曲线R2>0.95，即满足线性范围的要求；

验证实验数据如表6、表7所示，本检测的LOQ为25U/mL，线性范围为 25-400U/mL。

表6 回归曲线中的曲线点浓度

表7 定量限实验结果

从表2-7所示，中结果可知，本发明的试剂盒具有良好的精密度，符合达到免疫诊断试剂的基本要求，能够满足中国临床检测的技术需要。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非对本实用新型保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本实用新型作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本实用新型的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本实用新型技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种同时检测90项以上食物特异性IgG的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括膜条和试剂槽，所述试剂槽中放有缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品和显色液，所述膜条设置有m×n的矩阵微孔，其中，12≤m≤15，7≤n≤10，m×n≥105，所述矩阵微孔包括90个以上的食物特异性抗原微孔、6个校准点微孔、3～5个阳性质控微孔和至少1个阴性质控微孔；

以所述膜条所在的平面建立虚拟平面坐标系，以所述膜条其中一条对角线两端的两个微孔分别为(1，1)和(m，n)坐标点，所述6个校准点微孔由浓度依次增大的顺序分别位于坐标点(1，1)、(1，2)、(1，3)、(1，4)、(1，5)、(1，6)的位置上，所述3～5个阳性质控微孔分别位于坐标点(a，n)的位置上，所述3～5个阳性质控微孔间隔2-3个坐标单位，其中，1≤a≤m。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述m＝15，n＝7，所述矩阵微孔包括4个阳性质控微孔。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述矩阵微孔中至少有一个阴性质控微孔的位置为(x,y)，其中，6≤x≤8，3≤y≤4。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述4个阳性质控微孔分别位于坐标点(2，7)、(5，7)、(8，7)、(11，7)。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述各个食物特异性抗原微孔中均包被有食物特异性抗原，所述食物特异性抗原的食物种类包括切达干酪，白软干酪，牛肉，鸡肉，猪肉，鸡蛋，羊肉，火鸡，酸奶，巧克力，玉米，大米，小麦，大豆，柠檬，菠菜，青豆，小米，杏仁，芝麻，腰果，花生，旱芹，茄子，青椒，欧芹，卷心菜，胡萝卜，菜花，豌豆，葵花籽，黑胡桃，蓝莓，菠萝，橘子，桃，苹果，榴莲，芒果，香蕉，葡萄，柚子，草莓，哈密瓜，麦芽，黑麦，酵母，蔗糖，黄油，肉桂，芥末，蜂蜜，咖啡，燕麦，大麦，荞麦，西兰花，杂色豌豆，大蒜，洋葱，可乐豆，红茶，牛奶，螃蟹，对虾，鳕鱼，羊奶，蛤，三文鱼，沙丁鱼，带鱼，扇贝，龙虾，草鱼，牡蛎，鳟鱼，金枪鱼，红辣椒，大葱，生菜，黄瓜，马铃薯，南瓜，甘薯，香菜，小白菜，西红柿，蘑菇，西瓜，橄榄，鹅肉，鸭肉，鹌鹑蛋，鹅蛋，鸭蛋，莲子，山楂和黑米中的至少90种。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述各个食物特异性抗原通过配制成食物特异性抗原包被液点样在所述膜条表面，点样的直径为150～200μm。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述膜条为硝酸纤维素膜。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还设置有反应槽，所述反应槽包括2×6个反应小槽，所述各个反应小槽的规格为16×35mm。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括密封膜，所述密封膜为塑料薄膜，所述密封膜贴附在所述膜条上并包围所述膜条。

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