CN213548770U - 双滤膜截流装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型属于食用菌菌种生产技术领域，尤其涉及一种双滤膜截流装置。是基于把固体斜面菌种转变成菌丝悬浮液，设计了双滤膜截流装置对菌丝悬浮液进行过滤，减少了中间使用移液管的环节能大大降低摇瓶菌种的污染率。包括架台、玻璃管及三角瓶；所述玻璃管通过固定架安装在架台一侧，该玻璃管通过软管与三角瓶相连通；该玻璃管管体上设置有上盖及下盖，玻璃管体与上盖间设置有滤膜一，玻璃管体与下盖间也设置有滤膜二。

Description

双滤膜截流装置

技术领域

本实用新型属于食用菌菌种生产技术领域，尤其涉及一种双滤膜截流装置。

背景技术

食用菌菌种生产通常有固体菌种生产和液体菌种生产两条途径，目前生产食用菌液体摇瓶菌种使用的菌种是试管斜面菌种，使用的接菌工具是接种针，用接种针把固体斜面菌种切割成小块后接入摇瓶内振荡培养。

这种传统的摇瓶菌种生产工艺存在六个弊病：一是菌种块切割不均匀。

二是接菌种数量无法定量。

三是液体菌种培养时菌种启动慢。

四是液体菌种培养结束时菌球均一性差，菌球数量少；菌球大小不匀。

五是培养周期长。

六是污染率高。

发明内容

本发明就是针对现有技术存在的缺陷，提供一种双滤膜截流装置。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案，其特征在于，包括架台、玻璃管及三角瓶；所述玻璃管通过固定架安装在架台一侧，该玻璃管通过软管与三角瓶相连通；该玻璃管管体上设置有上盖及下盖，玻璃管体与上盖间设置有滤膜一，玻璃管体与下盖间也设置有滤膜二。

进一步地，所述架台为铁架台，架台底部设置有防滑垫。

进一步地，所述固定架包括横杆，横杆的一端固连有固定套，横杆的另一端固连有固定卡箍；固定套套于铁架台的立杆外，一定位螺钉穿过固定套与立杆相接触；调节定位螺钉伸进固定套的深度，可将固定套与立杆锁紧为一体或松开；玻璃管安装于固定卡箍内。

更进一步地，所述固定卡箍包括两个相对而设的半圆结构，玻璃管位于两半圆形成的整圆结构内，且该整圆结构两侧分别通过紧固螺钉紧固，将两半圆结构固定为一整圆结构。

进一步地，所述软管采用医用透明软管，软管上设置有用于控制流体的夹子，所述玻璃管管体上设置有侧阀门，管体经侧阀门与软管相连。

进一步地，所述玻璃管管体外壁设置有刻度线。

进一步地，所述下盖设置有下阀门。

进一步地，所述上盖顶部设置有开口，开口内设置有硅胶塞，硅胶塞内置玻璃顶管，玻璃顶管顶部设置有硅胶堵头。

进一步地，所述上盖与玻璃管相对应的一端端口内设置有筛网一，滤膜一放置于筛网一上，并以密封胶圈一压紧于滤膜一上，上盖与玻璃管螺纹连接，当上盖拧紧于玻璃管上时，筛网一、滤膜一及胶圈一固定为一整体。

进一步地，所述下盖与玻璃管相对应的一端端口内设置有筛网二，滤膜二放置于筛网二上，并以密封胶圈二压紧于滤膜二上，下盖与玻璃管螺纹连接，当下盖拧紧于玻璃管上时，筛网二、滤膜二及胶圈二固定为一整体。

与现有技术相比本发明有益效果。

本实用新型是基于把固体斜面菌种转变成菌丝悬浮液，设计了双滤膜截流装置对菌丝悬浮液进行过滤，选择30μm～100μm菌丝片段的悬浮液作为液体菌种接入液体培养基内，而且在双滤膜截流装置上设计了阀门和医用透明软管能定量给三角摇瓶接菌的功能，减少了中间使用移液管的环节能大大降低摇瓶菌种的污染率。菌丝悬浮液内有大量菌丝片段，因此萌发点多，启动快，菌球数量多，菌龄一致，发酵液中菌球均一性非常好，发酵周期比传统的摇瓶菌种接菌工艺缩短48h左右。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明。本发明保护范围不仅局限于以下内容的表述。

图1-3是本发明整体结构示意图。

图中，1为防滑垫、2为架台、3为定位螺钉、4为固定套、5为紧固螺钉、6为玻璃管、7为密封胶圈一、8为滤膜一、9为上盖、10为硅胶塞、11为玻璃顶管、12为硅胶堵头、13为侧阀门、14为软管、15为夹子、16为三角瓶、17为下盖、18为刻度线、19为密封胶圈二、20为滤膜二、21为下阀门。

具体实施方式

如图1-3所示，本发明包括架台2、玻璃管6及三角瓶16；所述玻璃管6通过固定架安装在架台2一侧，该玻璃管6通过软管14与三角瓶16相连通；该玻璃管6管体上设置有上盖9及下盖17，玻璃管6体与上盖9间设置有滤膜一8，玻璃管6体与下盖17间也设置有滤膜二20。

优选地，所述架台2为铁架台2，架台2底部设置有防滑垫1。

优选地，所述固定架包括横杆，横杆的一端固连有固定套4，横杆的另一端固连有固定卡箍；固定套4套于铁架台2的立杆外，一定位螺钉3穿过固定套4与立杆相接触；调节定位螺钉3伸进固定套4的深度，可将固定套4与立杆锁紧为一体或松开；玻璃管6安装于固定卡箍内。

优选地，所述固定卡箍包括两个相对而设的半圆结构，玻璃管6位于两半圆形成的整圆结构内，且该整圆结构两侧分别通过紧固螺钉5紧固，将两半圆结构固定为一整圆结构。

优选地，所述软管14采用医用透明软管14，软管14上设置有用于控制流体的夹子15，所述玻璃管6管体上设置有侧阀门13，管体经侧阀门13与软管14相连。

优选地，所述玻璃管6管体外壁设置有刻度线18。

优选地，所述下盖17设置有下阀门21。

优选地，所述上盖9顶部设置有开口，开口内设置有硅胶塞10，硅胶塞10内置玻璃顶管11，玻璃顶管11顶部设置有硅胶堵头12。

优选地，所述上盖9与玻璃管6相对应的一端端口内设置有筛网一，滤膜一8放置于筛网一上，并以密封胶圈一7压紧于滤膜一8上，上盖9与玻璃管6螺纹连接，当上盖9拧紧于玻璃管6上时，筛网一、滤膜一8及胶圈一7固定为一整体。

优选地，所述下盖17与玻璃管6相对应的一端端口内设置有筛网二，滤膜二20放置于筛网二上，并以密封胶圈二19压紧于滤膜二20上，下盖17与玻璃管6螺纹连接，当下盖17拧紧于玻璃管6上时，筛网二、滤膜二20及胶圈二19固定为一整体。

具体地，安装时，筛网卡接于上盖9或下盖17内，或者上盖9和下盖17的端部均设置有凹台，筛网放置于凹台上，用胶圈将滤膜固定于上方，且上盖9和下盖17扣合于玻璃管6上，或者上盖9和下盖17螺纹连接于玻璃管6上，完成连接固定。固定滤膜时，在无菌条件下取出灭完菌的上盖9和下盖17，用镊子把滤膜放在盖子里面带筛网的平面上，平面上再放一个密封胶圈，再把安装完生物滤膜和胶圈的上盖9和下盖17分别扭紧到玻璃管6上（下盖17安装在侧面带阀门出口的一端），双滤膜固定完成。安装双滤膜截流装置时：把安装完上盖9和下盖17的玻璃管6固定到铁架台2上，玻璃管6安装高度以下盖17阀门出口处高于三角瓶16瓶口15cm为宜。玻璃管6侧面及下盖17的阀门在开始过滤前处于关闭状态。

应用本双滤膜截流装置的液体摇瓶菌种采用菌丝悬浮液接菌法。

A.菌丝悬浮液制备。

1.取一支45ml的离心管，装入26-27粒玻璃珠，注入纯净水至25.5ml刻度旋紧盖子，三角瓶16内装200ml无菌水用纱布封口线绳系紧，接种针、镊子、枪头盒及枪头（5ml）（枪头先用剪子剪去头部，使头部直径达到3-4mm）用报纸包好，双滤膜截流装置所有组件装在聚丙烯塑料袋包扎好，一起放入高压灭菌器中，121℃灭菌25min。

2.在超净台里用接种针取出试管里的菌种(可带少量培养基)装入离心管中，每支试管可制1支离心管的菌丝悬浮液。

3.离心管在混匀仪上振荡7min，用玻璃珠击碎菌种块形成菌丝悬浮液。

4.固定滤膜：在无菌条件下取出灭完菌的上盖9和下盖17，用镊子把下固定网先固定到盖子的卡扣处，再把100μm和30μm的滤膜分别放在固定网（筛网）上，再把上固定网分别扣在滤膜上方并固定在盖子的卡扣处，双滤膜固定完成。

5.安装双滤膜截流装置：把装有滤膜的上盖9和下盖17分别旋紧在滤膜装置的玻璃管6上（下盖17安装在侧面带阀门出口的一端）。把安装完上盖9和下盖17的玻璃管6固定到铁架台2上，玻璃管6安装高度以下盖17阀门出口处高于三角瓶16瓶口15cm为宜。玻璃管6侧面及下盖17的阀门在开始过滤前处于关闭状态。

6.过滤洗脱菌丝悬浮液：用微量取液器取离心管内的菌丝悬浮液上清液20ml，从双滤膜截流装置上盖9的玻璃管6注入滤膜截流装置中，菌丝悬浮液进入到上盖9的滤膜空间内并通过100μm滤膜后流入玻璃管6内，又通过下盖17的3 0μm滤膜进入到下盖17的空间内。打开下盖17的阀门排出滤液。当玻璃管6内的菌丝悬浮液都排空后，再次从上盖9注入无菌水对玻璃管6内的菌丝悬浮液片段进行洗脱，洗脱排空三次后关闭下盖17的阀门，第四次注入无菌水到玻璃管6的30ml处。通过双滤膜截流装置（图3）对菌丝悬浮液进行过滤、洗脱后，把肉眼可见大的(＞100μm)或过碎的（＜3 0μm）菌丝片段都过滤掉，玻璃管6内菌丝悬浮液中就是符合要求的30-100μm菌丝片段。

B.三角摇瓶制备。

1.材料：1000ml三角瓶16洗净控干，16层纱布及21×21(cm)双层报纸封口用，17×33聚丙烯袋剪去5cm套瓶口用。

2.方法：每三角瓶16装400ml液体培养基，用16层纱布报纸及聚丙烯塑料袋封口，三角摇瓶随接种针等工具一起装入高压灭菌器中121℃灭菌25min。

C. 接种量及操作方法。

1.接菌量为1%。

2.调微量取液器刻度至4ml。

3. 用双滤膜截流装置给三角瓶16接菌丝悬浮液在超净台里先把灭过菌的医用透明软管14接到滤膜截流装置侧面阀门的玻璃管6上，软管14另一头插入三角瓶16瓶口内，打开阀门，用软管14上的夹子15控制菌丝悬浮液的流量，当滤膜截流装置玻璃管6上刻度下降4ml时用夹子15关闭软管14停止加注菌丝悬浮液，再如此接完剩下的三角瓶16，每支离心管菌丝悬浮液可接5个摇瓶(400ml/1000ml三角瓶16)。

D.振荡培养。

接完菌的三角瓶16应当立即放入振荡培养箱中，调好温度、转速，关闭照明灯进行振荡培养。

具体实施例：1.用常规方法制作黑木耳液体菌种（摇瓶编号CK）。

配方：黄豆粉0.3%，蛋白胨0.2%，葡萄糖1.5%，红糖1%，KH₂PO₄0.2%，MgSO₄0.1%，VB11片，水1000ml。

接菌：待培养液降至25-27℃在超净台里接入一半试管菌种（切成0.5cm²小块）。

培养：25℃，rpm175恒温培养箱内震荡培养。

培养结果：经过192h震荡培养，菌液呈棕红色，菌球较多，大小不一，菌球呈悬浮状。

2、用菌丝悬浮液法制作黑木耳液体菌种。

配方：黄豆粉0.3%，蛋白胨0.2%，葡萄糖1.5%，红糖1%，KH₂PO₄0.2%，MgSO₄0.1%，VB11片，水1000ml。

灭菌：121℃ 25min灭菌。

过滤接菌：在超净台内，用双滤膜截流装置对菌丝悬浮液进行过滤洗脱，然后把过滤洗脱完的菌种用双滤膜截流装置定量接入三角摇瓶液体培养基内。

每支离心管菌丝悬浮液可接5个摇瓶(400ml/1000ml三角瓶16)。

培养：25℃，rpm175恒温培养箱内震荡培养。

培养结果：经过144h震荡培养，菌液呈淡黄色，菌球数量极大，大小均匀，菌球呈悬浮状。

结论与分析。接菌量优势：传统摇瓶一支试管一般可以接2个摇瓶，使用该方法一支试管斜面菌种经过菌丝破碎、截流装置过滤、洗脱后制成的菌丝悬浮液可定量接5个摇瓶，比传统方法多接3个摇瓶，接菌数量增加150%。

发酵周期优势：传统制摇瓶方法需要发酵192h，而用菌丝悬浮液接菌法只需要144h，比传统做法缩短48h，缩短25%的发酵周期。

发酵结果差异很大：传统方法发酵结束时菌球大小不一，均一性差，菌龄长，菌种存在老化变异现象。在工厂化流水线接菌时大菌球非常容易堵塞接菌枪头。而使用菌悬液法制摇瓶发酵结束时菌球大小一致，均一整齐，菌龄一致，菌种活力强，数量极大。

可以理解的是，以上关于本发明的具体描述，仅用于说明本发明而并非受限于本发明实施例所描述的技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换，以达到相同的技术效果；只要满足使用需要，都在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.双滤膜截流装置，其特征在于，包括架台、玻璃管及三角瓶；

所述玻璃管通过固定架安装在架台一侧，该玻璃管通过软管与三角瓶相连通；该玻璃管管体上设置有上盖及下盖，玻璃管体与上盖间设置有滤膜一，玻璃管体与下盖间也设置有滤膜二。

2.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述架台为铁架台，架台底部设置有防滑垫。

3.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述固定架包括横杆，横杆的一端固连有固定套，横杆的另一端固连有固定卡箍；固定套套于铁架台的立杆外，一定位螺钉穿过固定套与立杆相接触；调节定位螺钉伸进固定套的深度，可将固定套与立杆锁紧为一体或松开；玻璃管安装于固定卡箍内。

4.根据权利要求3所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述固定卡箍包括两个相对而设的半圆结构，玻璃管位于两半圆形成的整圆结构内，且该整圆结构两侧分别通过紧固螺钉紧固，将两半圆结构固定为一整圆结构。

5.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述软管采用医用透明软管，软管上设置有用于控制流体的夹子，所述玻璃管管体上设置有侧阀门，管体经侧阀门与软管相连。

6.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述玻璃管管体外壁设置有刻度线。

7.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述下盖设置有下阀门。

8.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述上盖顶部设置有开口，开口内设置有硅胶塞，硅胶塞内置玻璃顶管，玻璃顶管顶部设置有硅胶堵头。

9.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述上盖与玻璃管相对应的一端端口内设置有筛网一，滤膜一放置于筛网一上，并以密封胶圈一压紧于滤膜一上，上盖与玻璃管螺纹连接，当上盖拧紧于玻璃管上时，筛网一、滤膜一及胶圈一固定为一整体。

10.根据权利要求1所述的双滤膜截流装置，其特征在于：所述下盖与玻璃管相对应的一端端口内设置有筛网二，滤膜二放置于筛网二上，并以密封胶圈二压紧于滤膜二上，下盖与玻璃管螺纹连接，当下盖拧紧于玻璃管上时，筛网二、滤膜二及胶圈二固定为一整体。

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