CN211348253U - 大便隐血的检测试纸及检测卡和试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型提供了一种大便隐血的检测试纸及检测卡及试剂盒。所述检测试纸包括组装在一起的免疫层析法试纸和化学法试纸，至少化学法试纸的检测结果观测区域与样本传导垫的一端叠加，并保持化学法试纸的检测结果可被观察到，样本传导垫的另一端与免疫层析法试纸的试剂样本加样区接触。本实用新型运用双抗体夹心胶体金免疫层析技术和化学法联合，实现只需一次加样就可以对人体大便隐血的体外定性检测，以判断消化道是否有出血。操作简单，结果显示更有利于操作者判读。

Description

大便隐血的检测试纸及检测卡和试剂盒

技术领域

本实用新型属于医学检测领域，涉及大便隐血的检测试纸及检测卡和检测试剂盒。特别涉及双抗体夹心免疫层析法和化学法联合检测大便隐血的检测试纸及检测卡和试剂盒。

背景技术

大便隐血(FOB)是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。在临床消化道恶性肿瘤早期20％的患者可出现隐血试验阳性，晚期病人的隐血阳性率可达到90％以上，并且可呈持续性阳性；消化道出血、消化道溃疡病人大便隐血试验多呈间断性阳性；痢疾、直肠息肉、痔疮出血等也可使大便中出现较多红细胞，导致隐血试验阳性。因此，大便隐血检查可作为检测各种原因所致的消化道出血的重要检测试验，是较为有效的方法，目前临床检查大便隐血主要有胶体金免疫层析法和化学法。

市面上已有利用大便隐血的胶体金免疫层析法制作的测试条，例如中国专利ZL02114649.7。该专利公开了一种潜血金标测试条，包括衬板和保护层；在衬板的两端分别设有手持端吸水层和测试端吸水层；在手持端吸水层和测试端吸水层之间的衬板上设有检测层；在测试端吸水层与检测层之间设有抗人血红蛋白抗体金标抗体层；在检测层上设有检测线和控制线。市面上利用化学法检测大便隐血的方法种类繁多。常用的有邻甲苯胺法、还原酚酞法等。主要是根据血红蛋白接触活性法原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶活性催化分解过氧化物，使上述物质氧化，从而在检测试纸上发生颜色变化。

大便隐血的胶体金免疫层析法会受限于检测灵敏度的问题，某些情况下出现假阴性。而化学法受到的其他干扰因素多，假阳性率高。因此，临床上在检测FOB时，常同时进行免疫胶体金法和化学法检测。

例如中国专利ZL201410790838.5公开了FOB检测板，免疫胶体金法和化学法的检测试纸分别放置，并且分别加样。在检测时，因为需要两次加样而增加了操作步骤。同时，容易出现过量的样本聚集在化学法试纸上，导致化学色块中的化学品溶出和不均匀。又例如中国专利ZL200920096169.6,公开了一种双联法便潜血快速诊断层析试纸，是在塑料支撑板上一端设置上样垫，上样垫的一端上粘贴有化学法便潜血检测试纸，在化学法便潜血检测试纸的一端粘贴有疏水性物质的隔离带，所述的疏水性物质是聚乙烯或聚丙烯或聚氯乙烯；在上样垫的另一端紧密粘贴有包被标记人血红蛋白单抗的胶体金垫，在胶体金垫的另一端紧密粘贴有检测垫，在检测垫上包被有相互分离的检测T线和质控C线，在检测垫上另一端紧密粘贴有吸样垫；所述T线为包被在NC膜上的人血红蛋白单抗，所述C线为包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗体。尽管该方法只需要一次加样，但是由于上样垫与化学法试纸的一端或局部接触，样本在两者的接触处进入化学法试纸，并还需在该测试纸上流动一段时间才可能会布满整个化学法试纸，这会导致样本在化学法试纸上流动的同时，是化学法试纸上的药品分布不均匀而导致最终的显色不均匀，影响结果判读，或当样品量不够时，化学法试纸无法被样本完全布满而影响结果判读。

实用新型内容

本实用新型采用双抗体夹心胶体金免疫层析技术和化学法联合检测大便隐血。试剂含有被预先包被在硝酸纤维素膜上测试区(T)的抗人血红蛋白单克隆抗体，质控区(C)的羊抗鼠IgG多克隆抗体。在金标垫中含有胶体金标记的抗人血红蛋白单克隆抗体和小鼠IgG。化学法试剂固定在金标垫的上方，通过一层薄滤纸与试剂加样区相连。检测时，滴入试剂加样区的样本，一部分通过金标垫，层析到硝酸纤维素膜上。阳性样本中的人血红蛋白与胶体金标记的抗体结合形成复合物，在层析作用下复合物沿着硝酸纤维素膜向前移动，经过测试区时与膜上包被的抗体结合形成双抗体夹心复合物而形成红色反应条带。胶体金标记的小鼠IgG移动到质控区与包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合形成红色条带。阴性样本在测试区(T)内没有出现红色条带，只形成质控区的红色条带。无论样本中是否含有人血红蛋白，质控区(C)都会形成一条红色条带，作为判断层析过程是否正常的标准。另一部分样本通过薄滤纸层析到化学法试剂上。根据血红蛋白接触活性法原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶活性催化分解过氧化物，使甲基联苯胺氧化，从而使化学法试剂显色。

本实用新型的目的之一是提供一种大便隐血的检测试纸包括组装在一起的免疫层析法试纸和化学法试纸，化学法试纸位于免疫层析法试纸上且不会遮盖免疫层析法试纸的检测结果显示区，化学法试纸和免疫层析法试纸之间通过阻隔层隔离，至少化学法试纸的检测结果观测区域与样本传导垫的一端叠加，并保持化学法试纸的检测结果可被观察到，样本传导垫的另一端与免疫层析法试纸的试剂样本加样区接触。

进一步的，在样本传导垫位于化学法试纸之上的方案中，并覆盖住化学法试纸或至少覆盖在化学法试纸的检测结果观测区，样本传导垫被样本浸湿后为透明状态，从而使化学法试纸的检测结果观测区的结果可以被观测。

进一步的，在样本传导垫位于化学法试纸下方的方案中，至少在化学法试纸的检测结果观测区的下方设有样本传导垫或者在全部的化学法试纸的下方设有样本传导垫。

进一步的，当样本传导垫位于化学法试纸之上时，阻隔层位于化学法试纸的下方；当样本传导垫位于化学法试纸的下方时，阻隔层位于样本传导垫的下方。

本实用新型还提供了一种大便隐血的检测卡，包括可相互组装在一起的上板和下板，本实用新型所述检测试纸安装在上板和下板之间，上板上设置有加样孔、化学法试纸观察窗和免疫层析法试纸结果观察窗。检测试纸安装在检测卡中后，化学法试纸的检测结果观测区位置与化学法试纸观察窗位置对应；免疫层析法试纸的检测结果观测区位置与免疫层析法试纸结果观察窗位置对应。

进一步的，检测卡的化学法试纸观察窗位于加样孔和免疫层析试纸结果观察窗之间。

本实用新型还提供了一种检测大便隐血检测方法，包括(1)提供一种大便隐血检测装置；(2)收集大便样本；(3)取一定量的大便样本与稀释液充分混匀，获得大便和稀释液的混合液；(4)将混合液滴加在大便隐血检测装置试剂样本加样区；(5)观察检测结果。

进一步的，所述大便隐血检测装置包括本实用新型所述的检测试纸或检测卡。

本实用新型还提供了一种检测大便隐血检测试剂盒，包括本实用新型所述的检测试纸或检测卡。

本实用新型的有益效果是：实现了一次性加样同时得到免疫法以及化学法的结果，并且化学法的显色更为均匀，且化学法与免疫法结果互不干扰。在一个实施方案中由于样本传导在加样后为透明状态，一方面不影响对化学法测试试纸的显色判读，另一方面有能有效保护化学法试纸不会被外力破坏或被外界物质污染。

附图说明

图1是第一种大便隐血的检测试纸的示意图。

图2是第一种大便隐血的检测试纸的分解图。

图3是图2中A处的放大图。

图4是第二种大便隐血的检测试纸的示意图。

图4-1是第二种大便隐血的检测试纸的分解图。

图5是大便隐血的检测卡的示意图。

图6是大便隐血的检测卡的分解图。

图7是检测时滴加样本的示意图。

具体实施方式

下面结合具体附图对本实用新型进行详细的说明。这些具体的实施例仅仅是在不违背本实用新型精神下的有限列举，并不排除本领域的一般技术人员把现有技术和本实用新型结合而产生的其他具体的实施方案。

实施例1

如图1至3所示的大便隐血的检测试纸100包括组装在一起的免疫层析法试纸和化学法试纸。免疫层析法试纸包括底卡1，样本垫2、标记垫6、检测垫7和吸水垫10依次搭接并粘贴于底卡之上。化学法试纸5位于免疫层析法试纸上且不会遮盖免疫层析法试纸的检测结果显示区，化学法试纸5和免疫层析法试纸之间通过阻隔层4隔离，阻隔层位于化学法试纸的下方。样本传导垫3的一端完全覆盖在化学法试纸5之上或至少覆盖在化学法试纸的检测结果观测区之上。样本传导垫3选用具吸水性且浸润后呈透明状的材料，从而可以观察到被其覆盖的化学法试纸的检测结果。样本传导垫3的另一端与样本垫2接触，例如样本传导垫3覆盖在样本垫2上。

免疫层析法试纸的检测结果显示区至少包括检测线8，根据检测项目的不同，检测线可以是多个。检测结果显示区还可以包括质控线9。化学法试纸的检测结果观测区是指通过该区域的颜色变化情况判断出化学法检测结果，这个区域可以是整张化学法试纸或化学法试纸中的一定区域。

大便隐血的检测试纸的试剂样本加样区是指试剂或样本滴加的区域，例如免疫层析法试纸的样本垫或样本传导垫等，在一个优选的方案中，样本垫和样本传导垫之间液体可以相互传递。

相对于免疫层析法试纸，化学法试纸5可以位于样本垫、标记垫、检测垫上，或横跨在样本垫、标记垫、检测垫中的两个或三个区域。

可以通过不干胶将化学法试纸5靠近检测线非检测结果观测区的一端与免疫层析法试纸粘贴在一起。或者阻隔层4采用双面胶，将化学法试纸粘贴在免疫层析法试纸上。将化学法试纸固定在免疫层析法试纸上的其他合适的方法均可以被考虑。

在一些实施方式中，还可在组装在一起的免疫层析法试纸和化学法试纸上粘贴一层不干胶，保证组装的牢固性等。进一步粘贴了不干胶后，免疫层析法试纸的检测结果显示区和化学法试纸检测结果观测区仍能被检测者观察到。

本实施例所述的大便隐血的检测试纸的免疫层析法试纸采用双抗体夹心胶体金免疫层析法和化学法联合检测大便隐血。试剂含有被预先包被在检测垫7上检测线8的抗人血红蛋白单克隆抗体(例如小鼠单克隆抗体)，质控线9的羊抗鼠IgG多克隆抗体。在标记垫6中含有标记物，标记物例如为胶体金标记的抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记的小鼠IgG。化学法试纸5采用四甲基联苯胺法，其至少包含有四甲基联苯胺和过氧化羟基异丙苯试剂。

制作实施例1所述大便隐血的检测试纸的方法如下。

底卡1选用塑料材质，样本垫2选用玻纤或无纺布、标记垫6选用聚酯膜、玻纤或无纺布，检测垫7采用硝酸纤维素膜，吸水垫10选用滤纸。样本传导垫3选用具吸水性且浸润后呈透明状的材料，例如一款厚度为0.1mm的滤纸，具有良好的溶液传导性能，以及在浸润后为透明状态。将该滤纸覆盖住化学法试纸并同时与样本垫连接。阻隔层4选用不透水或基本不透水的材质，且具有一定的粘性，例如双面胶。化学法试纸5选用滤纸。

人血红蛋白单抗标记胶体金颗粒的制备方法：以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为20-60nm的胶体金溶液，取10mL上述胶体金溶液放置在烧杯内，用0.1-0.3mol/LK₂CO₃溶液调节pH值至6.5-8.0，按每毫升胶体金溶液加入8-12微克人血红蛋白单抗，室温搅拌0.5-2小时，加入一定量封闭剂，封闭搅拌20-40分钟，8000-12000r/m离心20-40分钟，弃去上清液，用胶体金复溶液复溶到需要体积，按一定浓度喷在处理有表面活性剂的聚酯膜上，干燥后切割为所需尺寸的标记垫备用。

人血红蛋白单抗包被的方法：用0.015M，pH7.4的磷酸盐缓冲液将人血红蛋白单抗稀释至1.0mg/mL，然后用点膜机在NC膜上以1.0uL/mL的溶液量进行点膜。同时在NC膜上包被羊抗鼠IgG作为质控线。点膜完成后将产品放入37℃，湿度小于30％的环境下干燥过夜，备用。

化学法试纸的制备方法：配制化学法的试剂溶液，该溶液包括4％w/w邻联甲苯胺；6％w/w过氧化羟基异丙苯；90％w/w缓冲剂、稳定剂和助色剂的溶液，将滤纸浸泡试剂溶液后，在70℃环境下烘干，切割为所需尺寸备用。在一个具体的方案中，缓冲剂为磷酸氢二钠，稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮和助色剂为乙基橙。

将备用的样本垫2、标记垫6、检测垫7和吸水垫10相互依次搭接在一起并粘附在底卡1上形成双抗体夹心胶体金免疫层析测试纸。化学法试纸5通过阻隔层4固定在样本垫与标记垫的上方。将样本传导垫3的一端完全覆盖在化学法试纸5上，样本传导垫3另一端搭接在样本垫2上。

检测时，滴加在试剂样本加样区的样本一部分通过样本垫2传递至标记垫6，样本和标记垫上的试剂随样本液体流动至检测垫7上，通过观测检测线8和质控线9可以判断免疫法的结果。在样本传导垫3上的另一部分样本沿着样本传导垫3流动到化学测试纸5上方，并垂直地渗透到化学法试纸5，由于样本传导垫3在样本加入后为透明状态，可以透过呈透明状态的样本传导垫3对化学法试纸5的反应结果进行直接观测。

阳性样本中的血红蛋白与标记垫上的胶体金标记的抗人血红蛋白单克隆抗体结合形成复合物，在层析作用下，复合物沿着硝酸纤维素膜向前移动，经过测试区(即检测线8)时与膜上的抗人血红蛋白单克隆抗体结合形成双抗体夹心复合物，从而使检测线8形成能被观察到的有色条带。若样本中不含有血红蛋白的阴性样本，则检测线8不能形成能被观察到的有色条带。样本中的血红蛋白与化学法试纸上的试剂反应呈现颜色变化。

样本收集在干净、干燥、防水并且不含去污剂和防腐剂的容器内。收集足够多的大便样本(1-2毫升或1-2克)以便能得到有代表性的样本。检测时，取一定量的大便样本(约50毫克)与稀释液充分混匀，并静置2分钟后使用。稀释液中包括磷酸盐和EDTA。

实施例2

如图4和图4-1所示，与实施例1所述大便隐血的检测试纸的结构稍有不同，在本实施例中，样本传导垫3位于化学法试纸5的下方，至少在化学法试纸的检测结果观测区的下方设有样本传导垫。阻隔层4设于样本传导垫和免疫层析法试纸之间，阻隔层4位于样本传导垫3的下方。图4和图4-1所示的大便隐血的检测试纸检测大便隐血的实验结果与实施例1的方案一致，只是在装配的工艺上略微复杂。当双抗体夹心胶体金免疫层析测试纸组装完成后，样本传导垫3一端与样本垫2相连，样本传导垫3的另一端放置在化学法试纸之下，然后在化学法试纸的上方通过透明不干胶将化学法试纸和样本传导垫粘连，至少不干胶在化学法试纸的结果观测区的不干胶是透明的，这保证了化学法试纸与样本传导垫稳定接触。

在另外的一些方案中，免疫层析法试纸可以选用其他合适的结构，比如免疫层析法试纸包括预先包被有检测线并具有背衬的硝酸纤维素膜，样本垫搭接在硝酸纤维素膜的上游，样本垫上包含标记物。因为硝酸纤维素膜是带背衬的，因此可以不用底卡作为支撑。该方案的免疫层析法试纸可以装配在检测卡的上板和下板之间，比如安装在图6所示的上下板之间。

实施例3检测效果的对比实验

收集大便隐血阴性与阳性的大便各20人份，实验组是按实施例1制作的检测试纸，对照组A是按中国专利ZL200920096169.6制作的检测试纸，样本垫与化学法试纸部分接触实现一次加样，对照组B是按中国专利ZL201410790838.5制作的需要两次加样的检测试纸，将是实验组和对照组A、B进行平行的对比实验，观察它们化学法试纸的显色结果与状态。大便隐血样本的制作方法(如加buffer)

阴性大便样本对比实验结果

实验组的20张检测试纸的化学法测试试纸均显示均匀的黄色色块。对照组A的20张检测试纸的化学法测试试纸部分色块表面溶液过量，在窗口四周聚集且出现浅绿色，易被判读为假阳。对照组B的20张检测试纸的化学法测试试纸，当样本浑浊时，色块被遮盖导致无法观察；样本均没有被色块吸收完全，导致窗口内存在大量的样本而影响观察。

阳性大便样本对比实验结果

实验组的20张检测试纸的化学法测试试纸均显示均匀的绿色色块。对照组A的20张检测试纸的化学法测试试纸的色块显色不均匀，部分样本的色块上约一半的面积为黄色，一半的面积为绿色；另一部分样本的色块上，呈现的部分深绿色与部分浅绿色相交。对照组B的20张检测试纸的化学法测试试纸，当样本浑浊或者样本颜色较深时，色块被遮盖或影响导致无法观察；样本均没有被色块吸收完全，导致窗口内存在大量的样本而影响观察；阳性样本的指示剂会随着时间会逐渐溶解至样本中，导致观察结果不准确。

实施例4

如图5至6所示大便隐血的检测卡200，包括上板201以及与其紧密扣合的下板102，实施例1所述的大便隐血的检测试纸固定于上板和下板之间。上板和下板之间通过定位柱和定位孔扣合在一起。上板201上设置有加样孔203、化学法检测试纸结果观察窗204和免疫层析试纸结果观察窗205。当上板、下板和大便隐血的检测试纸组装在一起后，加样孔203位于大便隐血的检测试纸的样本垫之上，化学法检测试纸观察窗204位于化学法检测试纸之上，免疫层析试纸结果观察窗205位于NC膜之上，并可观察到检测线和质控线。

如图7所示，检测时，将经过处理的样本滴加在加样孔203内。滴加样本后，在1分钟内通过观察窗204读取化学法试纸的测试结果。若化学法检测试纸的颜色从黄色到绿色或深绿色变化，则判断为阳性。若化学法检测试纸的颜色保持黄色，不发生明显变化，则判断为阴性。若化学法检测试纸的显色明显不均匀，表明不正确的操作过程或试剂已变质损坏，应重新测试。滴加样本后，当在5～10分钟内通过观察窗205读取免疫层析试纸的测试结果。若检测线和质控线均出现红色条带，则判断为阳性。若仅质控线出现红色条带，则判断为阴性。若质控线未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂已变质损坏，应重新测试。

利用实施例4的大便隐血的检测卡分别检测大便隐血阴性样本和与大便阳性的样板各20人份。测试结果显示与样本实际情况相同。检测阴性样本时，化学法测试试纸均显示均匀的黄色色块。检测阳性样本时，化学法测试试纸均显示均匀的绿色色块。

Claims (8)

1.一种大便隐血的检测试纸，包括组装在一起的免疫层析法试纸和化学法试纸，其特征在于，化学法试纸位于免疫层析法试纸上且不会遮盖免疫层析法试纸的检测结果显示区，化学法试纸和免疫层析法试纸之间通过阻隔层隔离，至少化学法试纸的检测结果观测区域与样本传导垫的一端叠加，并保持化学法试纸的检测结果可被观察到，样本传导垫的另一端与免疫层析法试纸的试剂样本加样区接触。

2.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于，样本传导垫位于化学法试纸之上，并覆盖住化学法试纸或至少覆盖在化学法试纸的检测结果观测区，样本传导垫被样本浸湿后为透明状态，从而使化学法试纸的结果可以被观测。

3.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于，样本传导垫位于化学法试纸的下方，至少在化学法试纸的检测结果观测区的下方设有样本传导垫。

4.根据权利要求2或3所述的检测试纸，其特征在于，当样本传导垫位于化学法试纸之上时，阻隔层位于化学法试纸的下方；当样本传导垫位于化学法试纸的下方时，阻隔层位于样本传导垫的下方。

5.一种大便隐血的检测卡，包括可相互组装在一起的上板和下板，其特征在于：权利要求1至4之一所述的检测试纸安装在上板和下板之间，上板上设置有加样孔、化学法试纸观察窗和免疫层析试纸结果观察窗。

6.根据权利要求5所述的检测卡，其特征在于，包括化学法试纸观察窗位于加样孔和免疫层析试纸结果观察窗之间。

7.一种检测大便隐血检测试剂盒，包括权利要求1至4之一所述的检测试纸或权利要求5至6之一所述的检测卡。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，包括稀释液。

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