CN208532785U - 一种快速简便的单细胞挑取装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种快速简便的单细胞挑取装置。所述单细胞挑取装置包括一移液器，所述移液器依次连接枪头和软管；所述软管的另一端连接一毛细管；所述移液器的量程为100μL～10mL；所述枪头为带滤芯枪头。本实用新型快速简便的单细胞挑取装置仅需移液器、软管、枪头、毛细管即可完成单细胞挑取，无需操作者用嘴操作避免了污染风险，同时使用移液器代替嘴操作可以提高操作的灵活性和单次挑取的数量；无需大型仪器设备避免了浪费；经本装置挑取后的单细胞可用于单细胞全基因组测序、单细胞甲基化测序、单细胞转录组测序等技术领域。

Description

一种快速简便的单细胞挑取装置

技术领域

本实用新型涉及一种快速简便的单细胞挑取装置。

背景技术

目前单个细胞的获取主要依赖人工和自动化的方式。人工挑取主要采用口吸管的方式进行，需要操作者用嘴配合吸管将单个细胞从平皿中挑取出来，操作繁琐且存在一定的污染风险；自动化挑取则需要依赖大型昂贵的仪器设备，存在成本较高的问题。

如现有技术中的如下方案：组装口吸管，将制备好的毛细管尾端较粗部分插入空腔中，尾端深入空腔1mm，在另一端插入一干净的带滤芯枪头，操作者保持观察显微镜姿势，右手持空腔端，左手扶住显微镜载物台防止视野漂移。在显微镜视野下将毛细管尖端反复扫过视野，确定针尖位置，保持针尖处于液面上方不接触液体。针尖进入液面前持续轻轻吹气，进入液面后保证没有液体虹吸进针头，也不吹出气泡。保持吹气状态慢慢将针移动到目标细胞附近，移动到距离细胞2～3个细胞直径的距离后，猛吸气，将细胞吸入针头内，成功后迅速将针抬离液面。进入毛细管液体体积不超出毛细管较细部分(约1μL)。

如现有技术中的如下方案：取一枚4号静脉注射针，将针尖部分磨平，平滑处理。距离针口约0.3cm处将针折成90°，静脉注射针的管尾部与100μL移液器连接。操作前静脉注射针高压灭菌烘干，并取一段长约12.0cm，直径0.3cm的实心竹棒，在一端劈开约2.0cm，开裂处夹持静脉注射针手执部，细金属线扎紧固定。该种以小号注射针、竹管和移液器组成的设备，其中小号注射针的孔径为0.2mm，孔径过大挑取细胞时会造成吸取的液体总体积过大，其次各组件连接气密性差，使用100uL量程的移液器无法实现挑取，因此本方案无法应用于单细胞测序领域。

上述现有技术均用于细胞培养，不能用于单细胞全基因组测序、单细胞转录组测序及单细胞甲基化测序等技术领域。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种快速简便的单细胞挑取装置，利用该单细胞挑取装置挑取后的单细胞可用于单细胞全基因组测序、单细胞甲基化测序、单细胞转录组测序等技术领域。

本实用新型所提供的快速简便的单细胞挑取装置，包括一移液器，所述移液器依次连接枪头和软管；所述软管的另一端连接一毛细管。

所述的单细胞挑取装置中，所述移液器的量程为100μL～10mL。

所述的单细胞挑取装置中，所述枪头可为普通或带滤芯枪头。

所述的单细胞挑取装置中，所述软管可为塑料软管，具体可为胶皮管。

所述的单细胞挑取装置中，所述软管的内径可为4mm～15mm，长度可为 10cm～30cm。

所述的单细胞挑取装置中，所述毛细管通过一空腔端与所述软管相连接；

所述毛细管深入所述空腔端的深度可为2mm～20mm。

所述的单细胞挑取装置中，所述毛细管的针尖部分的内径可为50～200μm，针管部分的内径为0.5～1mm，长度可为3～6cm。

使用本实用新型单细胞挑取装置时，可按照如下步骤进行：操作者保持观察显微镜姿势，右手持空腔端，左手持移液器。在显微镜视野下将毛细管尖端反复扫过视野，确定针尖位置，保持针尖处于液面上方不接触液体。针尖进入液面前按下排液键至半量程，进入液面后保证没有液体虹吸进针头，也不吹出气泡。保持排液状态慢慢将针移动到目标细胞附近，移动到距离细胞2～3个细胞直径的距离后，缓慢抬起排液键，将细胞吸入针头内，成功后迅速将针抬离液面。进入毛细管液体体积不超出毛细管较细部分(约1μL)。

本实用新型公开了一种快速简便的单细胞挑取装置，该装置仅需移液器、软管、枪头、毛细管即可完成单细胞挑取，无需操作者用嘴操作避免了污染风险，同时使用移液器代替嘴操作可以提高操作的灵活性和单次挑取的数量；无需大型仪器设备避免了浪费；经本装置挑取后的单细胞可用于单细胞全基因组测序、单细胞甲基化测序、单细胞转录组测序等技术领域。

附图说明

图1为本实用新型单细胞挑取装置的结构示意图。

图中各标记如下：

1移液器、2枪头、3胶皮管、4毛细管、5空腔端。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

如图1所示，为本实用新型提供的快速微量的单细胞挑取装置的结构示意图，它包括一移液器1，移液器1依次连接枪头2和胶皮管3，胶皮管3的另一端连接一毛细管4。该单细胞挑取装置中，移液器1的量程为1mL；胶皮管3的内径为4mm，长度为25cm。其中，毛细管针尖部分的内径为50μm，长度约为5cm，其通过一空腔端5 与胶皮管3相连接，深入空腔端5的深度为5mm。

本实用新型中，毛细管4是按照如下步骤制作的：

(1)仪器准备：超净工作台紫外灭菌30min，通风10min。细胞计数器开机。

(2)试剂准备：胰酶、完全培养基、PBS平衡至室温。

(3)装置准备：拉制毛细管。关闭超净台内风机，点燃酒精灯，待酒精灯外焰稳定后，双手持毛细管，两手间距5cm，毛细管保持水平状态，将手持毛细管中点置于酒精灯外焰处约1.5s后，毛细管呈熔融状态，水平快速错动毛细管两次，立即水平向两侧快速拉毛细管两端至两手大约相距17cm。两手再向两侧稍用力，使毛细管从中部断裂。手持毛细管，令毛细管尖端快速掠过外焰两次，使尖端圆滑，不易造成细胞损伤。掰断毛细管尾端，使尾端部分约为1cm，针尖部分约为5cm。

使用本实用新型单细胞挑取装置时，可按照下述步骤进行：

(1)以25ml培养瓶中细胞汇合度(细胞面积占视野面积的比例)80～90％为例，用滴管或移液管吸去培养器皿中的旧培养液。加入3mL细胞培养用PBS，洗去残留的旧培养基。加入时注意不要直接冲击细胞，溶液顺器皿内壁加入。用滴管或移液管吸去培养瓶中的PBS。向瓶内加入1ml胰蛋白酶，轻轻反复倾斜培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面。放入细胞培养箱中，不同细胞需要的消化时间不同，时间以从培养箱中取出后细胞无明显脱落，横向轻拍培养瓶后细胞大量脱落为最佳时间。在生物安全柜中迅速加入3mL完全培养基终止消化。在生物安全柜内将15mL离心管插到试管架上，开盖备用。手持培养瓶向身体方向45°倾斜，吸取培养瓶中溶液从上至下冲洗贴壁细胞，重复7次，使细胞全部进入到溶液中，轻柔吹打溶液7次使细胞分散。持培养瓶角度，将溶液转移到15mL离心管中。盖紧管盖室温，200g，离心5min。

(2)用滴管或移液管吸去上清液，加入1mLPBS，将移液器调至200μL量程，上下轻轻吹吸15次，使细胞分散混匀。取10μL细胞悬液到290μL PBS中，移液器调至60μL量程，上下轻轻吹吸15次，使细胞分散混匀。用细胞计数仪或血细胞计数板对细胞悬液定量。细胞密度约约为10⁵至10⁶个/mL。将移液器调至200μL量程，上下轻轻吹吸细胞悬液5次，使细胞再次分散。将细胞悬液稀释至1mL PBS中，密度 5×10⁴个/mL(稀释时加入细胞悬液体积＝1mL×5×10⁴/细胞悬液中细胞密度，用PBS补至1mL)。将移液器调至200μL量程，上下轻轻吹吸细胞悬液7次，使细胞再次分散。再取稀释的细胞60μL到含1940μL PBS的15mL离心管中溶液总体积2mL含约1500 个细胞。将移液器调至400μL量程，上下轻轻吹吸细胞悬液7次，使细胞分散，将溶液全部转移至60mm直径低吸附细胞培养皿中。

(3)将培养皿置于显微镜下，10×目镜，10×物镜，总放大倍数100倍。找到目标细胞，目标细胞与周围细胞间距要大于10倍细胞直径。

(4)准备PBS或细胞裂解液，分装至200μL离心管中(每管PBS1μL，裂解液体积根据实验方案调整)，室温，离心15s，插在冰上待用。

(5)组装吸管，将制备好的毛细管尾端较粗部分插入空腔中，尾端深入空腔1mm，在另一端插入一干净的带滤芯枪头，使用1mL量程移液器连接上述枪头，调整移液器量程至400μL。

(6)操作者保持观察显微镜姿势，右手持空腔端，左手持移液器。在显微镜视野下将毛细管尖端反复扫过视野，确定针尖位置，保持针尖处于液面上方不接触液体。针尖进入液面前按下排液键至半量程，进入液面后保证没有液体虹吸进针头，也不吹出气泡。保持排液状态慢慢将针移动到目标细胞附近，移动到距离细胞2～3个细胞直径的距离后，缓慢抬起排液键，将细胞吸入针头内，成功后迅速将针抬离液面。进入毛细管液体体积不超出毛细管较细部分(约1μL)。

(7)打开一管分装的PBS或细胞裂解液，将针头插入液滴，缓慢按下排液键，将针内液体全部吹进管内，抽出针头，盖上管盖，插回冰上，完成挑取。

利用本实用新型挑取的单细胞可应用于如下领域：

高通量测序：使用MALBAC技术对挑取的单个细胞进行单细胞扩增，使用Tn5 建库技术对单细胞扩增产物进行建库，文库使用illumina Hiseq X10测序平台进行测序。

信息分析：通过数据QC、数据比对、统计分析确定所挑取的细胞基因组、转录组和甲基化水平，确定所挑取的细胞所携带的遗传信息完整性，可分析染色体非整倍体、染色体微扩增微缺失、表观遗传学特征等。

Claims (1)

1.一种单细胞挑取装置，其特征在于：所述单细胞挑取装置包括一移液器，所述移液器依次连接枪头和软管；所述软管的另一端连接一毛细管；

所述移液器的量程为100μL~10mL；

所述枪头为带滤芯枪头；

所述软管为胶皮管；

所述软管的内径为4mm~15mm，长度为10cm~30cm；

所述毛细管通过一空腔端与所述软管相连接；

所述毛细管深入所述空腔端的深度为2mm~20mm；

所述毛细管的针尖部分的内径为50~200μm，针管部分的内径为0.5~1mm，长度为3~6cm。