CN208092064U

CN208092064U - 一种对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析试纸

Info

Publication number: CN208092064U
Application number: CN201720877302.6U
Authority: CN
Inventors: 杨笑熳; 胡秋实
Original assignee: 杨笑熳
Current assignee: CHINA INTELLECTECH BEIJING Corp.
Priority date: 2017-07-19
Filing date: 2017-07-19
Publication date: 2018-11-13
Anticipated expiration: 2027-07-19

Abstract

一种对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析试纸，包括样品垫[1]、结合垫[2]、分析膜[3]、吸水垫[4]、粘性底衬[5]和Max线指示贴[6]，所述样品垫[1]为双层结构，上层为网状毛细结构的玻璃纤维膜[11]，下层为滤血垫经试剂处理后形成的滤唾液层[12]，玻璃纤维膜[11]以覆膜、缝合或粘合的方式贴合在滤唾液层[12]上表面。吸水垫与分析膜形成第一结合区，结合垫与分析膜形成第二结合区，样品垫与结合垫形成第三结合区，各结合区长度以及略短长度为相应垫体长度的7/10‑4/5。利用本实用新型能应用在现场对唾液中的四氢大麻酚酸进行快速定量检测，为毒品筛查提供了便捷、高效的检测手段。

Description

一种对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析试纸

技术领域

本实用新型涉及一种基于上转发光免疫层析技术的试纸结构，特别涉及一种可对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行精确定量检测的基于上转发光免疫层析技术的试纸。

背景技术

四氢大麻酚酸是大麻的主要有效化学成份，大麻是一种中枢神经兴奋剂，吸食极易成瘾，是国家严格管制违禁药品之一。

传统对违禁药品的检测为尿液检测，由于其样本取样不便、尴尬，须有专门的取尿场所；另外尿液取样容易掺假、掉包，须有人一对一进行监督取尿；如此浪费人力、物力，造成人力不足。尤其是针对女性嫌疑人取尿样时需由女性工作人员监督，而女性工作人员严重短缺。由于上述缺点，尿液样本逐渐被唾液样本所取代，成为违禁药品筛查样本的主流。

目前已有针对尿液中四氢大麻酚酸检测的的上转发光免疫层析技术 (Up-converting Phosphor Technology based Lateral Flow assay,UPT-LF assay)，将尿液样品加入特制的由样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫、粘性底衬和Max线指示贴组成的上转发光免疫层析试纸(ZL 2013205506699)，使用上转发光免疫分析仪对该免疫层析试纸产生的特异信号进行检测，从而对尿液中四氢大麻酚酸浓度进行精确定量。然而，由于唾液样品和尿液样品中成分以及分散性均存在较大差异，已有适用于尿液样品检测的上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸并不能适用于唾液样品的检测，有必要开发针对唾液中四氢大麻酚酸定量检测的上转发光免疫层析试纸。

发明内容

为了克服现有技术中存在的不足，本实用新型目的在于提供一种对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸。

本实用新型提供的一种对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸，包括：包括样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫、粘性底衬和Max线指示贴，其中所述样品垫为双层结构，上层为网状毛细结构的玻璃纤维膜，下层为滤血垫经试剂处理后形成的滤唾液层，玻璃纤维膜以覆膜、缝合或粘合的方式贴合在滤唾液层上表面；所述吸水垫贴于分析膜的一侧且与分析膜形成第一结合区，结合垫贴于分析膜的另一侧且与分析膜形成第二结合区，样品垫贴于结合垫的另一侧之上且与结合垫形成第三结合区，Max线指示贴粘贴于结合垫与样品垫上且覆盖结合垫；所述第一结合区长度为吸水垫长度的7/10-4/5，所述第二结合区长度为结合垫长度的7/10-4/5；所述第三结合区长度为样品垫长度的7/10-4/5。

其中，滤唾液层为经缓冲液、表面活性剂、封闭蛋白、无机盐处理的滤血垫。

Max线指示贴与结合垫重叠一侧的边缘与结合垫平齐，与样品垫重叠一侧的边缘比样片垫略短，略短部分长度为样品垫长度的7/10-4/5。

具体的，所述第一结合区长度为吸水垫长度的15/20；所述第二结合区长度为结合垫长度的15/20；所述第三结合区长度为样品垫长度的15/20；

分析膜上在长度方向间距设置有平行的检测带T和质控带C，检测带T中包被有四氢大麻酚酸-牛血清白蛋白交联抗原，质控带C中包被有兔抗羊IgG。

结合垫中固定有UCP结合物混合物，UCP结合物混合物中包括：检测结合物和质控结合物，检测结合物为UCP-四氢大麻酚酸单克隆抗体结合物，质控结合物为UCP-羊IgG结合物。

采用以上方案，本实用新型对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸，首先针对唾液样品的性状，将样品垫设计为双层结构，上层为网状毛细玻璃纤维膜首先使唾液样品快速分散，下层为特制经缓冲液、表面活性剂、封闭蛋白、无机盐处理的滤唾液层，可最大限度的减少唾液中各成分的干扰；另外整个试纸涉及的重叠区域包括“吸水垫与分析膜重叠的第一结合区”、“结合垫与分析膜重叠的第二结合区”、“样品垫与结合垫重叠的第三结合区”，均采用重度重叠方式，根据所确定的检测目标物四氢大麻酚酸与试剂的结合及其在试纸上的移动特点，设计重叠幅度为各自的7/10-4/5(即14/20-16/20)，从而保证液体样本在样品垫与结合垫中的充分浸润混匀，使得样本中的检测靶标与检测结合物充分反应，进而提升检测敏感性。

因此，本实用新型所建立的对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸，保留了操作简便、快速、敏感性高、特异性好、可精确定量等诸多特性，更能针对唾液样品检测这一全新的领域提出了可行的解决方案，能应用在现场对唾液中的四氢大麻酚酸进行快速定量检测，克服了对尿液样品检测所带来的不便。

附图说明：

图1：本实用新型对唾液中四氢大麻酚酸定量检测试纸立体结构图；

图2：本实用新型对唾液中四氢大麻酚酸定量检测试纸剖面结构示意图；

图3：本实用新型对唾液中四氢大麻酚酸定量检测试纸粘贴示意图；

图4：对唾液中四氢大麻酚酸标准品浓度检测的标准曲线。

1、样品垫，11、玻璃纤维膜，12、滤唾液层，2、结合垫，3、分析膜，4、吸水垫，5、粘性底衬，6、Max线指示贴，7、UCP结合物混合物，8、UCP-四氢大麻酚酸单克隆抗体结合物，9、UCP-羊IgG结合物，10、检测带T，11、质控带 C。

下面结合附图进一步说明本实用新型。

具体实施方式：

参见图1和图2所示，本实用新型提供对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸，其整体由等宽的条带状样品垫1、结合垫2、分析膜3、吸水垫4、粘性底衬5、Max线指示贴6几部分以及试纸外壳组成。其中：

样品垫1为双层结构，上层为玻璃纤维膜11，其为网状毛细纤维结构，能吸附比同等纤维素滤纸更多的水分，使所接触到的唾液样品快速分散；下层为滤唾液层12，通常为纤维素纸质材料制成的厚度1-2cm的滤血垫，经适宜的缓冲液、表面活性剂、封闭蛋白、无机盐处理，可最大限度的减少唾液中各成分的干扰；玻璃纤维膜11可以覆膜的方式贴合在滤唾液层12上表面，由试纸外壳压合，或根据所设计的试纸尺寸在边缘缝合，或使用不含有干扰四氢大麻酚酸检测成分的胶粘合。

结合垫2中固定有UCP结合物混合物7，UCP结合物混合物7中包括：检测结合物和质控结合物，检测结合物为UCP-四氢大麻酚酸单克隆抗体结合物8，质控结合物为UCP-羊IgG结合物9；

分析膜3上设置有检测带T10、质控带C11，两条带在长度方向上相互平行且有一定间隔；检测带T10包被有四氢大麻酚酸-牛血清白蛋白交联抗原，质控带C11包被有兔抗羊IgG；

样品垫1、结合垫2、分析膜3和吸水垫4依次粘贴于粘性底衬5上，其中分析膜3贴于粘性底衬5的中间，吸水垫4贴于分析膜3的一侧之上，两者重合部分形成第一结合区，第一结合区长度L1为吸水垫4长度的7/10-4/5，较好为15/20；结合垫2贴于分析膜3的另一侧之上，两者重合部分形成第二结合区，第二结合区长度L2为结合垫2长度的7/10-4/5，较好为15/20；样品垫1贴于结合垫2的另一侧之上，两者重合部分形成第三结合区，第三结合区长度L3为样品垫1长度的7/10-4/5，较好为15/20；Max线指示贴6粘贴于结合垫2与样品垫1之上且覆盖结合垫2，其中与结合垫2重叠一侧，边缘与结合垫2平齐；与样品垫1重叠一侧，边缘比样片垫1略短，略短部分长度L4为样品垫1长度的7/10-4/5，较好为15/20。

该上转发光免疫层析(UPT-LF)试纸的制备方法为：

A.样品垫1的制备：将4ml样品垫处理液(pH7.2磷酸盐缓冲液，含 0.01％SDS、0.5％脱脂奶粉、2％NaCl)滴加到20cm×1.5cm的滤血垫上，于37℃下烘干2h，得下层滤唾液层12，上层覆盖一层普通玻璃纤维膜11，覆盖方式为覆膜、缝合或粘合，得样品垫1，备用；

B.结合垫2的制备：将检测结合物(UCP-四氢大麻酚酸单克隆抗体结合物8)和质控结合物(UCP-羊IgG结合物9)混合，得UCP结合物混合物7，用结合物稀释液(pH7.2磷酸盐缓冲液，含1％脱脂奶粉)将UCP结合物混合物7稀释至终浓度为2mg/ml，将UCP结合物混合物7加于玻璃纤维、聚酯膜或无纺布上，于45℃下烘干1.5h，得结合垫2，备用；

C.分析膜3的制备：将2mg/ml四氢大麻酚酸-牛血清白蛋白交联抗原和 2mg/ml兔抗羊IgG喷点于硝酸纤维素膜或尼龙膜上分别作为检测带T10和质控带C11，于37℃下烘干1h，得分析膜3，备用；

D.将样品垫1、结合垫2、分析膜3和吸水垫4依次粘贴于粘性底衬5(可选择PVC板等隔水材料)上，将Max线指示贴6(可选择PVC膜等隔水材料)粘贴于样品垫1、结合垫2上，确保相互之间的重叠关系(如图3所示)；将试纸剪切为4mm宽单独可用的成品，得本实用新型唾液中四氢大麻酚酸浓度定量检测试纸；成型的试纸可直接使用或置入塑料外壳中使用。

使用本实用新型对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测过程如下：

A.添加样品：将待测样品(唾液)与样品处理液(pH7.2磷酸盐缓冲液)按 1:9比例混匀后，100μl/条滴加至上述样品垫1的玻璃纤维11上；

B.层析反应：静置数分钟待层析反应完成；

C.结果判读：用市售吸毒现场检测仪对试纸进行扫描，将检测带T10]和质控带C[11]的信号强度(即峰面积)依次赋值于T和C，T/C为四氢大麻酚酸的检测值；

D.结果定量：依次对四氢大麻酚酸系列浓度标准品进行测定获得与每个浓度对应的T/C值，以T/C值作为X、以标准品浓度作为Y，绘制标准浓度工作曲线并拟合定量计算公式，将每个样品检测获得的T/C值代入定量计算公式(定量方程见图4)即可获得其中所含四氢大麻酚酸的精确浓度。

对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析(UPT-LF) 试纸检测四氢大麻酚酸标准品敏感性与线性范围：

将购自公安部物证鉴定中心的四氢大麻酚酸标准品用普通唾液稀释后，与样品处理液(pH7.2磷酸盐缓冲液)按1:9比例混匀，100μl/条加到本实用新型四氢大麻酚酸定量检测试纸上，层析数分钟后扫描，标准曲线见图4，得出的实验结果如表1：

表1：四氢大麻酚酸定量检测试纸检测四氢大麻酚酸标准品敏感性

可见，使用本实用新型四氢大麻酚酸定量检测试纸对唾液中的四氢大麻酚酸检测敏感性为1ng/ml，在1-10000ng/ml的范围内可以精确定量。本实用新型可有效应用于对唾液样品中微量四氢大麻酚酸的定量检测，为违禁药品筛查提供了便捷、高效的检测手段。

Claims

1.一种对唾液中四氢大麻酚酸浓度进行定量检测的上转发光免疫层析试纸，包括样品垫[1]、结合垫[2]、分析膜[3]、吸水垫[4]、粘性底衬[5]和Max线指示贴[6]，所述样品垫[1]、结合垫[2]、分析膜[3]和吸水垫[4]依次粘贴于粘性底衬[5]上，其中分析膜[3]贴于粘性底衬[5]的中间，吸水垫[4]贴于分析膜[3]的一侧且与分析膜[3]形成第一结合区，结合垫[2]贴于分析膜[3]的另一侧且与分析膜[3]形成第二结合区，样品垫[1]贴于结合垫[2]的另一侧之上且与结合垫[2]形成第三结合区，Max线指示贴[6]粘贴于结合垫[2]与样品垫[1]上且覆盖结合垫[2]；其特征在于：

所述样品垫[1]为双层结构，上层为网状毛细结构的玻璃纤维膜[11]，下层为滤血垫经试剂处理后形成的滤唾液层[12]，玻璃纤维膜[11]以覆膜、缝合或粘合的方式贴合在滤唾液层[12]上表面；

所述第一结合区长度为吸水垫[4]长度的7/10-4/5，所述第二结合区长度为结合垫[2]长度的7/10-4/5；所述第三结合区长度为样品垫[1]长度的7/10-4/5；

所述分析膜[3]上在长度方向间距设置有平行的检测带T[10]和质控带C[11]，检测带T[10]中包被有四氢大麻酚酸-牛血清白蛋白交联抗原，质控带C[11]中包被有兔抗羊IgG；

所述结合垫[2]中固定有UCP结合物混合物[7]，UCP结合物混合物[7]中包括：检测结合物和质控结合物，检测结合物为UCP-四氢大麻酚酸单克隆抗体结合物[8]，质控结合物为UCP-羊IgG结合物[9]。

2.如权利要求1所述的上转发光免疫层析试纸，其特征在于，Max线指示贴[6]与结合垫[2]重叠一侧的边缘与结合垫[2]平齐，与样品垫[1]重叠一侧的边缘比样片垫[1]略短，略短部分长度为样品垫[1]长度的7/10-4/5。

3.如权利要求1或2所述的上转发光免疫层析试纸，其特征在于，所述第一结合区长度为吸水垫[4]长度的15/20；所述第二结合区长度为结合垫[2]长度的15/20；所述第三结合区长度为样品垫[1]长度的15/20。

4.如权利要求3所述的上转发光免疫层析试纸，其特征在于，所述Max线指示贴[6]由隔水材料制成。

5.如权利要求4所述的上转发光免疫层析试纸，其特征在于，滤唾液层[12]为经缓冲液、表面活性剂、封闭蛋白、无机盐处理的滤血垫。