CN207418762U - 一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其包括水平放置在恒温培养箱底板的培养瓶，该培养瓶的瓶盖上设有通气孔和加药孔，一通气管一端通过通气孔深入培养瓶内，另一端暴露于空气中；一加药小管，该加药小管一端通过加药孔深入培养瓶内，一端通过连接小管与一多通管的一个出液口相连通，该多通管的多个入口分别通过多个连接小管与多个诱导装置的出液口相连；每一所述诱导装置包括顶部倒置的诱导瓶及插入诱导瓶内部的诱导管，该诱导管的出液口通过连接小管与多通管入口连接。本实用新型有助于对细胞加入不同浓度的药物诱导其产生耐药属性，加药过程无菌可控，实现对细胞的大量培养，具有原理简单、价格便宜、实用性强、易操作等特点。

Description

一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，具体涉及一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置。

背景技术

乳腺癌(breast cancer)是一种严重危及女性健康的常见恶性肿瘤之一(吴晓娟.孕酮调节乳腺癌中乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制的研究[D].山东大学，2012.)。据调查显示，在恶性疾病患病人数与死亡人数中乳腺癌已经排名第5位，因此，有效防治乳腺癌且降低乳腺癌的患病率、死亡率尤为重要，尽管在乳腺癌的治疗过程中化学治疗药物是乳腺癌的重要治疗方法之一(曲艳红，杨科.紫杉类药物联合蒽环方案用于晚期乳腺癌术前化学治疗临床疗效评价[J].中国药业，2016，25(13)：60-63.)，但是在乳腺癌患者治疗过程中往往出现乳腺癌细胞对化疗药物的多药耐药进而导致治疗失败，即使是更换其他的化学治疗药物且其疗效也不佳，这就给化学治疗药物防治乳腺癌带来了巨大的挑战。

已经证实，乳腺癌多药耐药细胞的存在是导致乳腺癌化疗失败的主要原因之一，也是乳腺癌复发、转移等重要因素(彭洪薇，师锐赞，袁向飞，等.乳腺癌耐药细胞中c-fos抗凋亡作用的研究[J].中国癌症杂志，2014，24(8)：581-588.)，如何克服乳腺癌多药耐药且分析乳腺癌多药耐药的主要机制呢？这就需要建立乳腺癌耐药细胞株，例如乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株(赵亚新，刘洁凡，江明华，等.芹菜素抗乳腺癌多药耐药MCF-7/阿霉素细胞作用的研究[J].中国癌症杂志，2017，(8)：648-654)，并以乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株为研究对象，施加不同类型的抗乳腺癌药物，以此开展抗乳腺癌的实验研究，可见，建立乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株是尤为重要的。

在建立乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株的过程中，现有的细胞培养瓶需要多次拧开培养瓶盖且不能实现加药过程的快速化、可控化、无菌化，同时建立乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株的过程相对较长(大约5个月)，因此，开发出建立乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株的贴壁细胞培养瓶是非常迫切的。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本实用新型提供了一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置。

本实用新型的技术方案如下：

一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，包括

水平放置在恒温培养箱底板的培养瓶，该培养瓶的瓶盖上设有通气孔和加药孔，一通气管一端通过通气孔深入培养瓶内，另一端暴露于空气中；

一加药小管，该加药小管一端通过加药孔深入培养瓶内，一端通过连接小管与一多通管的一个出液口相连通，该多通管的多个入口分别通过多个连接小管与多个诱导装置的出液口相连；

每一所述诱导装置包括顶部倒置的诱导瓶及插入诱导瓶内部的诱导管，该诱导管的出液口通过连接小管与多通管入口连接。

优选的，所述连接小管与加药小管的连接处、连接小管与多通管的连接处及连接小管与诱导管的连接处均有密封弹性卡扣密封；

所述连接小管上均设有弹性小夹子。

优选的，所述诱导管从上到下为诱导管针头、诱导缓冲区及诱导管阀门，其中诱导管针头深入诱导瓶内，所述诱导管阀门上设有诱导管阀门手动钮。

优选的，所述诱导瓶顶部设有诱导瓶吊环，所述诱导瓶吊环内有一诱导瓶挂钩穿过，该诱导瓶挂钩粘贴于恒温培养箱顶板上。

优选的，所述加药小管上设有加药小管过滤器，该加药小管过滤器内设有三层膜性结构过滤装置。

优选的，所述加药小管上设有加药小管阀门，该加药小管阀门上设有加药小管阀门手动钮。

优选的，所述通气管在暴露于空气中的一端设有通气管过滤器。

优选的，所述培养瓶为斜颈培养瓶，当培养瓶水平放置在恒温培养箱底板上时，培养瓶瓶颈与恒温培养箱底板所成的夹角为20度，且培养瓶瓶颈与瓶盖在同一中轴线上；

培养瓶的瓶体和瓶盖之间通过螺纹密合连接；

所述培养瓶外表面设有培养瓶刻度标识。

优选的，所述加药小管的前端为加药小管针，该加药小管针的前端为加药小管针头；

该加药小管针头为立方体形状，且其与加药小管针所成的夹角为15度；

加药小管针头的后端设有一个加药小管针头内孔，前端设有多个加药小管针头外孔；

所述加药小管针头内孔与加药小管针头外孔之间有一层微孔纤维膜。

优选的，所述培养瓶上设有加药定时器，该加药定时器操作面板上设有时间显示屏幕、小时指示按钮、分钟指示按钮、秒指示按钮及开始/停止指示按钮。

优选的，所述诱导瓶上设有诱导瓶刻度标识。

优选的，所述培养瓶的底面积为115cm²，容积为500mL，培养瓶由聚氯乙烯材料制成。

优选的，所述诱导瓶容积为50mL。

优选的，所述通气孔及加药孔均为可伸缩乳胶小孔。

优选的，所述通气管过滤器是由1层0.45μm微孔纤维膜、1层0.22μm微孔纤维膜、1层0.45μm微孔纤维膜组成的三层膜性结构过滤器。

本实用新型具有下述优点：

(1)本实用新型的螺纹口斜颈培养瓶由聚氯乙烯材料制成且螺纹口斜颈培养瓶的底面积为115cm²，有助于常规大量培养细胞且促使其处于贴壁状态。

(2)螺纹口斜颈培养瓶侧壁一侧有加药定时器且加药定时器表面有时间显示屏幕、小时指示按钮、分钟指示按钮、秒指示按钮、开始/停止指示按钮，有助于随时观察细胞的培养时间及其不同浓度药物的加药时间，同时记录细胞不同时间段加药前后的基本培养状态。

(4)螺纹口斜颈培养瓶侧壁另一侧有螺纹口斜颈培养瓶刻度标识，有助于观察细胞培养液的多少，需要观察的时候只需要直立螺纹口斜颈培养瓶，通过螺纹口斜颈培养瓶刻度标识就可以清晰看到。

(5)螺纹口斜颈培养瓶平放于恒温培养箱底板上且螺纹口斜颈培养瓶瓶颈与恒温培养箱底板的顺时针夹角α为20度，螺纹口斜颈培养瓶瓶颈与螺纹口斜颈培养瓶瓶盖之间呈现螺纹紧密齿合状态且螺纹口斜颈培养瓶瓶颈与螺纹口斜颈培养瓶瓶盖在同一中轴线上，有助于避免螺纹口培养液溢出来且可以通过螺纹紧密齿合可以密封螺纹口斜颈培养瓶。

(6)螺纹口斜颈培养瓶瓶盖有通气管乳胶孔、加药小管针乳胶孔，通气管乳胶孔、加药小管针乳胶孔分别有通气管、加药小管针穿过，通气管的一端穿过通气管乳胶孔深入螺纹口斜颈培养瓶内，通气管的另一端位于螺纹口斜颈培养瓶瓶颈外侧且通气管末端有通气管过滤器，通气管过滤器是由1层0.45μm微孔纤维膜、1层0.22μm微孔纤维膜、1层0.45μm微孔纤维膜组成的三层膜性结构过滤器，这些设计有助于对螺纹口斜颈培养瓶对空气进行三重膜性结构过滤且可以保证细胞获得足够的气体供应，同时还可以通过设计通气管乳胶孔、加药小管针乳胶孔密封细胞培养体系与加药体系。

(7)加药小管上有加药小管针、加药小管手柄、加药小管过滤器、加药小管阀门，加药小管针的前端为加药小管针头，加药小管针头为立方体形状且加药小管针头与加药小管针的顺时针夹角β为15度，加药小管针头近端是1个加药小管针头内孔且加药小管针头远端是15个加药小管针头外孔，加药小管针头外孔与加药小管针头内孔之间有一层0.22μm微孔纤维膜，加药小管针后面是加药小管手柄，加药小管手柄后面是加药小管过滤器且加药小管过滤器由1层0.45μm微孔纤维膜、1层0.22μm微孔纤维膜、1层0.45μm微孔纤维膜组成的三层膜性结构过滤器，这些设计有助于对所加药物进行过滤，且可以减少所加药物对细胞培养体系的冲击作用。

(8)加药小管过滤器后面是加药小管阀门且加药小管阀门上有加药小管阀门手动钮，有助于手动控制加药进程。

(9)加药小管与连接小管一端相连接，且连接处有密封弹性卡扣密封，且连接小管上有弹性小夹子，连接小管另一端连接多通管出口端d，连接处有密封弹性卡扣密封，多通管入口端a、b、c分别连接于连接小管的一端，连接处有密封弹性卡扣密封，且连接小管上有弹性小夹子，连接小管另一端连接诱导管的一端，连接处有密封弹性卡扣密封，这些设计有助于密封细胞加药体系，且可以对细胞培养体系进行不同浓度加药，以此将非常有利于后续实验的顺利开展。

(10)诱导管有诱导管阀门、诱导管缓冲区且诱导管阀门上有诱导管阀门手动钮，诱导管的一端呈长针状且直接插入诱导瓶瓶塞而深入诱导瓶内，有助于随时控制加药进程。

(11)诱导瓶容积为50mL且诱导瓶包括头部、体部、尾部三部分，诱导瓶体部有诱导瓶刻度标识且诱导瓶尾部有诱导瓶吊环，不同的诱导瓶内装有不同浓度的药物且彼此之间不存在干扰，同时还可以随时观察针对细胞所加药物的药量。

附图说明

图1为本实用新型的整体结构示意图。

图2为本实用新型的螺纹口斜颈培养瓶瓶盖的结构示意图。

图3为本实用新型的加药小管的针头侧面、下面、上面的结构示意图。

图4为本实用新型的加药定时器的结构示意图。

附图标记说明：1、11、21-恒温培养箱顶板；2、12、22-诱导瓶挂钩；3、13、23-诱导瓶吊环；4、14、24-诱导瓶刻度标识；5、15、25-诱导瓶；6、16、26-诱导瓶瓶塞；7、17、27-诱导管缓冲区；8、18、28-诱导管；9、19、29-诱导管阀门；10、20、30-诱导管阀门手动钮；31、32、33、34、43、44、45、46-密封弹性卡扣；35、36、37、38-弹性小夹子；39、40、41、42-连接小管；47-四通硅胶管；48-加药小管阀门；49-加药小管阀门手动钮；50-加药小管；51-加药小管过滤器；52-加药小管手柄；53-加药小管针；54-加药小管针头；55-通气管；56-通气管过滤器；57-螺纹口斜颈培养瓶瓶盖；58-恒温培养箱底板；59-螺纹口斜颈培养瓶刻度标识；60-加药定时器；61-螺纹口斜颈培养瓶；62-加药小管针乳胶孔；63-通气管乳胶孔；64-加药小管针头内孔；65-加药小管针头外孔；66-纤维膜；67-时间显示屏幕；68-小时指示按钮；69-分钟指示按钮；70-秒指示按钮；71-开始/停止指示按钮。

具体实施方式

现结合实施及图1-3对本实用新型的构造、形状及特点进一步详细的说明。应当理解，本实施例仅用于说明本实用新型，而不用于限定本实用新型的保护范围。

本实施例具体公开了一种如图1所示的建立乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株的贴壁细胞培养瓶，该贴壁细胞培养瓶的基本组成包括1个螺纹口斜颈培养瓶61、1个加药小管50、4个连接小管(39、40、41、42)、4个弹性小夹子(35、36、37、38)、8个密封弹性卡扣(31、32、33、34、43、44、45、46)、1个四通硅胶管47、3个诱导管(8、18、28)、3个诱导瓶(5、15、25)、1个通气管55、1个加药定时器60、1个恒温培养箱底板58、恒温培养箱顶板(1、11、21)。

其中，螺纹口斜颈培养瓶61由聚氯乙烯材料制备而成且螺纹口斜颈培养瓶61的底面积为115cm²，螺纹口斜颈培养瓶61侧壁另一侧有螺纹口斜颈培养瓶刻度标识59且螺纹口斜颈培养瓶61的最大容积刻度标识为500mL，螺纹口斜颈培养瓶61侧壁一侧有加药定时器60，加药定时器60操作面板上有时间显示屏幕67、小时指示按钮68、分钟指示按钮69、秒指示按钮70及开始/停止指示按钮71。螺纹口斜颈培养瓶61平放于恒温培养箱底板58上且螺纹口斜颈培养瓶61瓶颈与恒温培养箱底板58的顺时针夹角α为20度，螺纹口斜颈培养瓶61瓶颈与螺纹口斜颈培养瓶瓶盖57之间呈现螺纹紧密齿合状态，螺纹口斜颈培养瓶61瓶颈与螺纹口斜颈培养瓶瓶盖57在同一中轴线上，螺纹口斜颈培养瓶瓶盖57上设有通气管乳胶孔63、加药小管针乳胶孔62，通气管乳胶孔63、加药小管针乳胶孔62分别有通气管55、加药小管针53穿过，通气管55的一端穿过通气管乳胶孔63深入螺纹口斜颈培养瓶61内，通气管55的另一端位于螺纹口斜颈培养瓶61瓶颈外侧，通气管55末端有通气管过滤器56，通气管过滤器56是由1层0.45μm微孔纤维膜、1层0.22μm微孔纤维膜、1层0.45μm微孔纤维膜组成的三层膜性结构过滤器。加药小管50上有加药小管针53、加药小管手柄52、加药小管过滤器51、加药小管阀门48，加药小管针53的前端为加药小管针头54，加药小管针头54为立方体形状，加药小管针头54与加药小管针53的顺时针夹角β为15度，加药小管针头54近端是1个加药小管针头内孔64，加药小管针头54远端是15个加药小管针头外孔65，加药小管针头外孔65与加药小管针头内孔64之间有一层0.22μm微孔纤维膜66，加药小管针53后面是加药小管手柄52，加药小管手柄52后面是加药小管过滤器51且加药小管过滤器51由1层0.45μm微孔纤维膜、1层0.22μm微孔纤维膜、1层0.45μm微孔纤维膜组成的三层膜性结构过滤器，加药小管过滤器51后面是加药小管阀门48且加药小管阀门48上有加药小管阀门手动钮49，加药小管50与连接小管42一端相连接，连接处有密封弹性卡扣46密封，连接小管42上有弹性小夹子38，连接小管42另一端连接四通硅胶管47出口端d，连接处有密封弹性卡扣34密封，四通硅胶管47有四个口即1个四通硅胶管47出口端d和3个四通硅胶管47入口端a、b、c，四通硅胶管47入口端a、b、c分别连接于连接小管(39、40、41)的一端，连接处有密封弹性卡扣(43、44、45)密封，且连接小管(39、40、41)上有弹性小夹子(35、36、37)，连接小管(39、40、41)另一端连接诱导管(8、18、28)的一端，连接处有密封弹性卡扣(31、32、33)密封，诱导管(8、18、28)有诱导管阀门(9、19、29)、诱导管缓冲区(7、17、27)且诱导管阀门(9、19、29)上有诱导管阀门手动钮(10、20、30)，诱导管(8、18、28)的另一端呈长针状且直接插入诱导瓶瓶塞(6、16、26)且深入诱导瓶(5、15、25)内，诱导瓶(5、15、25)容积为50mL，诱导瓶(5、15、25)包括头部、体部、尾部三部分，诱导瓶(5、15、25)头部前端为诱导瓶瓶塞(6、16、26)，诱导瓶(5、15、25)体部有诱导瓶刻度标识(4、14、24)且诱导瓶(5、15、25)底部有诱导瓶吊环(3、13、23)，诱导瓶吊环(3、13、23)有诱导瓶挂钩(2、12、22)穿过，诱导瓶挂钩(2、12、22)粘贴于恒温培养箱顶板(1、11、21)上。

本实用新型的具体使用流程如下：

本实用新型在使用过程中，对乳腺癌MCF-7加入不同浓度的阿霉素且诱导乳腺癌MCF-7产生对阿霉素的耐药属性，同时有助于保证乳腺癌MCF-7加药过程可控化、无菌化，设计1个通气管55主要是为了促进乳腺癌MCF-7顺利通气，设计1个加药定时器60主要是为了随时显示针对乳腺癌MCF-7加入阿霉素的具体加药时间且保证对乳腺癌MCF-7进行定时加入阿霉素，设计1个加药小管50的特殊结构例如1个加药小管针头内孔、滤膜、外孔的特殊结构，主要是为了减少阿霉素对乳腺癌MCF-7的直接冲击且可以实现针对乳腺癌MCF-7的大量培养。

本实用新型专利可以对1种乳腺癌细胞株MCF-7加入50mg/mL(A)、55mg/mL(B)、60mg/mL(C)的阿霉素，需要先在3个诱导瓶(25、15、5)中分别装入50mg/mL(A)、55mg/mL(B)、60mg/mL(C)的阿霉素。

若不对乳腺癌细胞株MCF-7进行加药，则旋紧加药小管阀门手动钮49，此时本实用新型可以满足不拧开螺纹口斜颈培养瓶瓶盖57的前提下，常规培养乳腺癌细胞株MCF-7。

若对乳腺癌细胞株MCF-7加入50mg/mL(A)阿霉素，需要旋松加药小管阀门手动钮49，同时旋紧诱导管阀门手动钮(10、20)且使用弹性小夹子(37、36)夹紧连接小管(41、40)，此时50mg/mL(A)阿霉素经过诱导瓶25、诱导管28、连接小管39、四通硅胶管47入口端a、四通硅胶管47、四通硅胶管47出口端d、连接小管42、加药管50、加药针53、加药小管针头54、加药小管针头内孔64、加药小管针头外孔65，进入乳腺癌细胞株MCF-7培养体系。

若对乳腺癌细胞株MCF-7加入55mg/mL(B)阿霉素，需要旋松加药小管阀门手动钮49，同时旋紧诱导管阀门手动钮(30、10)且使用弹性小夹子(35、37)夹紧连接小管(39、41)，此时55mg/mL(B)阿霉素经过诱导瓶15、诱导管18、连接小管40、四通硅胶管47入口端b、四通硅胶管47、四通硅胶管47出口端d、连接小管42、加药管50、加药针53、加药小管针头54、加药小管针头内孔64、加药小管针头外孔65，进入乳腺癌细胞株MCF-7培养体系。

若对乳腺癌细胞株MCF-7加入60mg/mL(C)阿霉素，需要旋松加药小管阀门手动钮49，同时旋紧诱导管阀门手动钮(30、20)且使用弹性小夹子(35、36)夹紧连接小管(39、40)，此时60mg/mL(C)阿霉素经过诱导瓶5、诱导管8、连接小管41、四通硅胶管47入口端c、四通硅胶管47、四通硅胶管47出口端d、连接小管42、加药管50、加药针53、加药小管针头54、加药小管针头内孔64、加药小管针头外孔65，进入乳腺癌细胞株MCF-7培养体系。

当乳腺癌细胞株MCF-7已经适应了50mg/mL(A)、55mg/mL(B)、60mg/mL(C)阿霉素的时候，需要提高阿霉素的加药浓度，例如设定65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL阿霉素进行加药处理乳腺癌细胞株MCF-7。

最终本实用新型专利可以实现对乳腺癌细胞株MCF-7加入不同浓度的阿霉素，进而建立乳腺癌MCF-7耐阿霉素细胞株。

以上对本实用新型的描述仅是说明性的，而非限制性的，本专业技术人员应当理解，在权利要求限定的精神与范围之内可对其进行许多修改、变化或等效修饰，但是它们都将落入本实用新型的保护范围内。

Claims (10)

1.一种诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，包括

水平放置在恒温培养箱底板的培养瓶，该培养瓶的瓶盖上设有通气孔和加药孔，一通气管一端通过通气孔深入培养瓶内，另一端暴露于空气中；

一加药小管，该加药小管一端通过加药孔深入培养瓶内，一端通过连接小管与一多通管的一个出液口相连通，该多通管的多个入口分别通过多个连接小管与多个诱导装置的出液口相连；

每一所述诱导装置包括顶部倒置的诱导瓶及插入诱导瓶内部的诱导管，该诱导管的出液口通过连接小管与多通管入口连接。

2.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述连接小管与加药小管的连接处、连接小管与多通管的连接处及连接小管与诱导管的连接处均有密封弹性卡扣密封；

所述连接小管上均设有弹性小夹子。

3.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述诱导管从上到下为诱导管针头、诱导缓冲区及诱导管阀门，其中诱导管针头深入诱导瓶内，所述诱导管阀门上设有诱导管阀门手动钮。

4.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述诱导瓶顶部设有诱导瓶吊环，所述诱导瓶吊环内有一诱导瓶挂钩穿过，该诱导瓶挂钩粘贴于恒温培养箱顶板上。

5.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述加药小管上设有加药小管过滤器，该加药小管过滤器内设有三层膜性结构过滤装置。

6.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述加药小管上设有加药小管阀门，该加药小管阀门上设有加药小管阀门手动钮。

7.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述通气管在暴露于空气中的一端设有通气管过滤器。

8.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述培养瓶为斜颈培养瓶，当培养瓶水平放置在恒温培养箱底板上时，培养瓶瓶颈与恒温培养箱底板所成的夹角为20度，且培养瓶瓶颈与瓶盖在同一中轴线上；

培养瓶的瓶体和瓶盖之间通过螺纹密合连接；

所述培养瓶外表面设有培养瓶刻度标识。

9.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述加药小管的前端为加药小管针，该加药小管针的前端为加药小管针头；

该加药小管针头为立方体形状，且其与加药小管针所成的夹角为15度；

加药小管针头的后端设有一个加药小管针头内孔，前端设有多个加药小管针头外孔；

所述加药小管针头内孔与加药小管针头外孔之间有一层微孔纤维膜。

10.如权利要求1所述的诱导细胞耐药的贴壁细胞培养装置，其特征在于，所述培养瓶上设有加药定时器，该加药定时器操作面板上设有时间显示屏幕、小时指示按钮、分钟指示按钮、秒指示按钮及开始/停止指示按钮。