CN207020192U - 一种检测抗生素残留的侧流片 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种检测抗生素残留的侧流片，所述侧流片包括一检测卡，所述的检测卡包括背衬，以及位于背衬上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、检测区、质控区和吸收垫。本实用新型的侧流片能够同时检测多种抗生素，适用于食品中抗生素残留的快速检测。

Description

一种检测抗生素残留的侧流片

技术领域

本实用新型涉及检测检验技术领域，具体地涉及一种检测抗生素残留的侧流片。

背景技术

随着我国经济的快速发展，人们追求效益最大化，抗生素的使用越来越普遍，如用抗生素治疗奶牛的乳腺炎；畜禽养殖户在饲料中添加抗生素和激素，提高种畜的抗病能力和食欲；水产养殖用户为了让大闸蟹加快脱壳过程、长得肥大生猛，给蟹喂食大量抗生素和激素等。我国是抗生素生产和使用大国，据统计每年约有6000吨抗生素用于饲料添加剂，占全球抗生素饲料添加剂的50％。

抗生素的大量滥用已经严重威胁到人们的身体健康，专家指出，经常食用含有抗生素的食品，即使是微量的，也能使人出现荨麻疹或造成过敏性休克。时常摄入含有抗生素的食品，可使某些菌株产生耐药性，从而带来预防与治疗某些人畜疾病的困难。如果长期食用抗生素残留的食物，可造成人体中一些非致病菌的死亡，使菌群平衡失调或引起核黄素缺乏症和紫癜性损伤。特别是氯霉素的滥用，极易损害人类骨髓的造血功能，并由此导致再生障碍性贫血的发生。

一般来说，肉类(畜禽)，鱼虾(水产)，蛋类，奶类，饲料、蜂蜜等产品需要进行抗生素检测，常用方法包括：液相色谱或液相色谱与质谱联用，微生物抑制法和酶联免疫方法。上述检测方法需要配合检测仪器使用，且检测时间较长，操作复杂，不便于现场检测。因此，本领域急需使用方便、结果可靠的检测抗生素残留的试剂和方法。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种使用方便、结果可靠的检测抗生素残留的侧流片。

在本实用新型的第一方面，提供了一种检测抗生素残留的侧流片，所述侧流片包括一检测卡，所述的检测卡包括背衬(0)，以及位于所述背衬上的从近端到远端的以下结构：样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(8)、检测区、质控区(6)、和吸收垫(7)；

并且所述的金标垫(2)包括：第一抗体负载区、第二抗体负载区和第三抗体负载区，其中，所述的第一抗体为胶体金标记的特异性针对四环素类抗生素的抗体，所述的第二抗体为胶体金标记的特异性针对磺胺类抗生素的抗体，所述的第三抗体为胶体金标记的特异性针对青霉素类抗生素的抗体；

并且所述检测区包括：第一检测区(3)、第二检测区(4)和第三检测区(5)，其中，所述的第一检测区(3)包被有四环素类抗生素的完全抗原，所述的第二检测区(4)包被有磺胺类抗生素的完全抗原，所述的第三检测区(5)包被有青霉素类抗生素的完全抗原。

在另一优选例中，所述的四环素类抗生素选自下组：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、或其组合。

在另一优选例中，所述的磺胺类抗生素选自下组：磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基嘧啶磺、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪钠、磺胺甲二唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、或其组合。

在另一优选例中，所述的青霉素类抗生素选自下组：青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、苯唑青霉素、头孢喹肟、头孢噻吩、或其组合。

在另一优选例中，所述的四环素类抗生素的完全抗原是四环素类抗生素与载体蛋白的偶联物。

在另一优选例中，所述的磺胺类抗生素的完全抗原是磺胺类抗生素与载体蛋白的偶联物。

在另一优选例中，所述的青霉素类抗生素的完全抗原是青霉素类抗生素与载体蛋白的偶联物。

在另一优选例中，所述载体蛋白选自下组：BSA、OVA、或其组合。

在另一优选例中，所述的背衬(0)为PVC板。

在另一优选例中，所述样品垫(1)为玻璃纤维。

在另一优选例中，所述吸收垫(7)为吸水纸。

在另一优选例中，所述的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(8)、和吸收垫(7)粘贴于所述背衬上。

在另一优选例中，所述的样品垫(1)和金标垫(2)部分重叠。

在另一优选例中，所述的检测区设置在靠近金标垫(2)的一侧，且所述的质控区(6)设置在靠近吸收垫(7)的一侧。

在另一优选例中，所述侧流片还包括卡盒(9)，以及位于所述卡盒上的加样孔(10)和观察窗(11)。

在另一优选例中，所述的检测卡完全设置于卡盒(9)中，所述加样孔(10)对应于所述检测卡上的样品垫(1)，且所述观察窗(11)对应于所述检测卡上的检测区和质控区。

在另一优选例中，所述卡盒的长度为80-90.0mm，宽度为10-20mm，且高度为4-5mm。

在另一优选例中，所述侧流片的长度为60-70mm，且宽度为3-4mm。

在另一优选例中，所述质控区(6)包含第四抗体，所述第四抗体特异性结合于所述第一抗体、第二抗体和第三抗体。

在另一优选例中，所述的第一检测区(3)、第二检测区(4)、第三检测区(5)和质控区(6)位于硝酸纤维素膜(8)上。

在另一优选例中，所述侧流片用于检测食品中的抗生素残留。

在另一优选例中，所述食品包括食用油、饲料、谷类和豆类。

在本实用新型的第二方面，提供了一种用于检测抗生素残留的试剂盒，所述试剂盒包括：

(i)一容器；以及

(ii)如本实用新型第一方面所述的检测抗生素残留的侧流片。

在另一优选例中，所述试剂盒还包括说明书。

应理解，在本实用新型范围内，本实用新型的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为本实用新型一种优选例的检测卡的结构剖视图。其中，1为样品垫，2为金标垫，3为第一检测区，4为第二检测区，5为第三检测区，6为质控区，7为吸收垫，8为硝酸纤维素膜，0为背衬。

图2为本实用新型一种优选例的检测抗生素残留的侧流片的俯视图。其中，9为卡盒，10为加样孔，11为观察窗。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入地研究，意外地发现了一种检测食品中抗生素残留的侧流片。具体地，根据检测时显色位置的不同，该侧流片可同时快速检测多种抗生素，包括但不限于四环素类抗生素、磺胺类抗生素和青霉素类抗生素，改变目前一个试剂只检测一种成分的现状。在此基础上，完成了本实用新型。

抗生素

抗生素(antibiotic)是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。

四环素类抗生素(Tetracyclines)是由放线菌产生的一类广谱抗生素，包括金霉素(chlotetracycline)、土霉素(oxytetracycline)、四环素(tetracycline)及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺基四环素等，其结构均含并四苯基本骨架。

如本文所用，术语“磺胺类药物”和“磺胺类抗生素”具有相同含义。磺胺类药物为人工合成的抗菌药，用于临床已近50年，具有抗菌谱较广、性质稳定、使用简便、生产时不耗用粮食等优点。临床常用的磺胺类药物都是以对位氨基苯磺酰胺(简称磺胺)为基本结构的衍生物。磺酰胺基上的氢，可被不同杂环取代，形成不同种类的磺胺药。它们与母体磺胺相比，具有效价高、毒性小、抗菌谱广、口服易吸收等优点。对位上的游离氨基是抗菌活性部分，若被取代，则失去抗菌作用。必须在体内分解后重新释出氨基，才能恢复活性。

青霉素是抗菌素的一种，是指分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是由青霉菌中提炼出的抗生素。青霉素属于β－内酰胺类抗生素(β－lactams),β－内酰胺类抗生素包括青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类、单环类、头霉素类等。青霉素是很常用的抗菌药品。

如本文所用，所述的青霉素是指青霉素类抗生素，包括青霉素G，氨苄青霉素，阿莫西林，苯唑青霉素，头孢喹肟，头孢噻吩，或其组合。

如本文所用，所述的“待测抗生素”是指本实用新型的侧流条检测的抗生素，具体包括四环素类抗生素、磺胺类药物和青霉素类抗生素。

检测方法和工作原理

为了便于理解本实用新型，给出本实用新型侧流片的检测原理。应理解，本实用新型的保护范围并不受该原理的影响或限制。

本实用新型采用竞争法免疫层析的原理，将四环素类抗生素的完全抗原(第一复合物)、磺胺类抗生素的完全抗原(第二复合物)、以及青霉素类抗生素的完全抗原(第三复合物)分别固定于硝酸纤维膜上的第一检测区、第二检测区和第三检测区(固相抗原)，将胶体金标记的特异性针对四环素类抗生素的抗体(第一抗体)、胶体金标记的特异性针对磺胺类抗生素的抗体(第二抗体)以及胶体金标记的特异性针对青霉素类抗生素的抗体(第三抗体)固定于金标垫，并按图1组成检测试条并装卡中。将待检样本通过加样孔加到检测卡一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合金标垫上的胶体金标记的第一抗体、第二抗体和第三抗体，再依次移动至第一检测区、第二检测区、第三检测区、质控区。如果样本中不含有待测抗生素，胶体金标记的第一抗体、第二抗体和第三抗体会分别被固定在硝酸纤维素膜上的第一复合物、第二复合物和第三复合物捕获，从而在第一检测区、第二检测区、第三检测区形成红色条带。如果样本中含有一定浓度某种待测抗生素，如含有四环素，金标垫上胶体金标记的第一抗体在被溶解后会先与样本中四环素结合，从而抑制第一抗体与硝酸纤维素膜上的第一复合物的结合，第一检测区的条带颜色将会减弱或者消失；第二抗体与第二复合物的结合、第三抗体与第三复合物的结合不会受到影响，第二检测区和第三检测区仍形成红色条带。如样本中同时含有两种或多种待测抗生素，如同时含有四环素、磺胺类药物和青霉素，胶体金标记的第一抗体、第二抗体和第三抗体与硝酸纤维素膜上的第一复合物、第二复合物和第三复合物的结合均会受到抑制，第一检测区、第二检测区、第三检测区的条带颜色均会减弱或者消失。换言之，当待检样本中含有某种抗生素时，与之对应的抗体与检测区域的结合受到影响，对应的检测区域的带颜色会减弱或者消失。

本实用新型在硝酸纤维素膜的质控区设置有第四抗体，所述第四抗体特异性结合于所述第一抗体、第二抗体和第三抗体，无论待检样品中是否含有待测抗生素，胶体金标记的第一抗体、第二抗体和第三抗体总能与质控区的第四抗体结合形成红色条带，该条带是判定层析过程是否正常和检测板是否失效的标准，同时也作为定量分析中控制批间差的计算指标。

灵敏度

本实用新型的侧流片灵敏度如下：

四环素类检测域值：

磺胺类检测域值：

青霉素类检测域值：

侧流片的制造

在本实用新型中，所述侧流片的各组成元件(或组件)可选用本领域已有的材料制成。

背衬0可以用任何稳定的、无孔的材料制成，其强度应足以支承材料和粘于其上的各组成元件。因为许多测定用水作为扩散介质，因此背衬0较佳地是基本上不透水的。在一个优选例中，背衬0是用聚合物膜制成的，更佳地是用聚氯乙烯膜制成的(如PVC胶板)。

样品垫1可用任何吸收性材料制成。可使用的材料例子包括：纤维素、硝酸纤维素、乙酸纤维素、玻璃纤维、尼龙、聚电解质离子交换膜、丙烯共聚物/尼龙、和聚醚砜。

吸收垫7可以用任何能吸收作为样品和缓冲液的液体的材料制成。吸收垫7的吸收能力应足够大，以便吸收添加至测试条的液体。适用于吸收垫7的材料的例子包括纤维素和吸水滤纸。

抗体

四环素类抗生素的结构均含并四苯基本骨架，所以免疫筛选得到的抗体能共同识别此类似部位，从而同时与多种四环素类抗生素结合。

磺胺类药物都是以对位氨基苯磺酰胺(简称磺胺)为基本结构的衍生物，免疫筛选得到的抗体能共同识别此类似部位，从而同时与多种磺胺类药物结合。

青霉素类共同点为内酰胺环，抗体类识别内酰胺环部位，从而能和它们结合来检测它们。

第四抗体同时结合第一抗体、第二抗体和第三抗体，优选的第四抗体为羊抗鼠IgG多抗。

本实用新型所用的抗体均为市售。

胶体金标记

胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。

胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。

免疫金标记技术(Immunogold labelling technique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。

在本实用新型侧流条的制备中，优选地，取40nm胶体金，用0.1M K₂CO₃调pH，以每毫升胶体金5μg抗体进行标记，标记液离心后得沉淀，沉淀用10mM pH7.2PBS溶解，并在650nm下测定吸光值OD，以1-3OD涂铺聚脂材料上并烘干，即为本实用新型检测卡中的金标垫。

侧流条的制备

本实用新型侧流片的各组成元件(或组件)采用本领域通用的技术方法制造和组装。

优选地，用包被缓冲液稀释第一复合物、第二复合物、第三复合物和质控抗体，将稀释后的四种捕获液分别均匀地包被于作为检测部件的硝酸纤维膜上，四种捕获液体渗入硝酸纤维素膜后分别形成第一检测区、第二检测区、第三检测区和质控区。

分别将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫通过粘合剂粘贴于背衬上。用切条机切成4mm的检测卡，置于卡盒内，加样孔对准检测卡样品垫位置，压紧后组装成检测试剂盒，加入干燥剂铝箔密封包装保存。

本实用新型的优点：

本实用新型所述的检测抗生素残留的侧流片克服了现有方法中需逐个检测不同种类抗生素的弊端，通过在同一侧流条上设置三个检测区，快速高效准确地特异性检测多种抗生素。

以下结合具体的实施例，进一步说明本实用新型。需理解，以下的描述仅为本实用新型的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本实用新型保护范围的限制。在充分理解本实用新型的基础上，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本实用新型的技术方案做出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本实用新型的保护范围之中的。

实施例1

侧流片的结构

本实用新型的检测抗生素残留的侧流片(或测试条)包括卡盒和位于卡盒内的检测卡。

一种优选的检测卡的结构如图1所示，其包括背衬0，以及位于背衬上的：样品垫1、金标垫2、硝酸纤维素膜8、检测区(或检测线)，包括第一检测区3和第二检测区4、第三检测区5、质控区6(或对照区、对照线、质控线)、和吸收垫7。

一种优选的卡盒9的结构如图2所示，其上包括加样孔10和观察窗11。并且，所述的检测卡完全设置于卡盒9中，所述加样孔10对应于所述检测卡上的样品垫1，且所述观察窗11对应于所述检测卡上的第一检测区3、第二检测区4、第三检测区5和质控区6

具体地，本实用新型的侧流片具有以下特点：

背衬0的长度与侧流片相同。

样品垫1位于测试条的一端，吸收垫7位于测试条的另一端。

金标垫2上负载有三种抗体，第一抗体为胶体金标记的特异性针对四环素类抗生素的抗体，第二抗体为胶体金标记的特异性针对磺胺类药物的抗体，第三抗体为胶体金标记的特异性针对青霉素类抗生素的抗体，上述抗体均为市售。

检测区(也称检测线)位于样品垫1和吸收垫7之间，包括第一检测区3、第二检测区4和第三检测区5，优选地，第一检测区3位于靠近样品垫1的一端，通常检测区设置在硝酸纤维素膜8上，通过所述硝酸纤维素膜连接标记的金标垫2和吸水垫7。优选地，所述硝酸纤维素膜8上还设置有质控区6(也称质控线)，质控区6位于检测区和吸收垫7之间。

其中，所述的第一检测区3包被有四环素类抗生素的完全抗原；所述的第二检测区4包被有磺胺类药物的完全抗原，所述的第三检测区5包被有青霉素的完全抗原。质控区6包被有第四抗体，所述第四抗体特异性结合于所述的第一抗体、第二抗体和第三抗体。

实施例2

侧流片的使用

1.采集检测样本，本实施例以牛奶为检测样本；

2.将检测卡平放，用滴管吸取待检样本溶液，垂直滴加3滴于加样孔中，加样后开始计时。

3.5分钟内读取检测结果。

结果判断：

A：第一检测区、第二检测区、第三检测区和质控区同时变色(红色)，表明样本中不含待测抗生素或其浓度低于最低检测值，检测结果为阴性。

B:质控区变色(红色)，而第一检测区、第二检测区和第三检测区不变色，表明样本中同时含有四环素类抗生素、磺胺类药物和青霉素，检测结果为阳性。

C：质控区和某一个或两个检测区变色(红色)，而其他检测区不变色，表明样本含有与不变色检测区相对应的抗生素，检测结果为阳性。

D：质控区不变色，无论检测区是否变色，均表明本次检测无效。

在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种检测抗生素残留的侧流片，其特征在于，所述侧流片包括一检测卡，所述的检测卡包括背衬(0)，以及位于所述背衬上的从近端到远端的以下结构：样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(8)、检测区、质控区(6)、和吸收垫(7)；

并且所述的金标垫(2)包括：第一抗体负载区、第二抗体负载区和第三抗体负载区，其中，所述的第一抗体为胶体金标记的特异性针对四环素类抗生素的抗体，所述的第二抗体为胶体金标记的特异性针对磺胺类抗生素的抗体，所述的第三抗体为胶体金标记的特异性针对青霉素类抗生素的抗体；

并且所述检测区包括：第一检测区(3)、第二检测区(4)和第三检测区(5)，其中，所述的第一检测区(3)包被有四环素类抗生素的完全抗原，所述的第二检测区(4)包被有磺胺类抗生素的完全抗原，所述的第三检测区(5)包被有青霉素类抗生素的完全抗原。

2.如权利要求1所述的侧流片，其特征在于，所述的检测区设置在靠近金标垫(2)的一侧，且所述的质控区(6)设置在靠近吸收垫(7)的一侧。

3.如权利要求1所述的侧流片，其特征在于，所述侧流片还包括卡盒(9)，以及位于所述卡盒上的加样孔(10)和观察窗(11)。

4.如权利要求3所述的侧流片，其特征在于，所述的检测卡完全设置于卡盒(9)中，所述加样孔(10)对应于所述检测卡上的样品垫(1)，且所述观察窗(11)对应于所述检测卡上的检测区和质控区(6)。

5.如权利要求4所述的侧流片，其特征在于，所述卡盒的长度为80-90.0mm，宽度为10-20mm，且高度为4-5mm。

6.如权利要求1所述的侧流片，其特征在于，所述侧流片的长度为60-70mm，且宽度为3-4mm。

7.如权利要求1所述的侧流片，其特征在于，所述质控区(6)包含第四抗体，所述第四抗体特异性结合于所述第一抗体、第二抗体和第三抗体。

8.如权利要求1所述的侧流片，其特征在于，所述的第一检测区(3)、第二检测区(4)、第三检测区(5)和质控区(6)位于硝酸纤维素膜(8)上。

9.一种用于检测抗生素残留的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(i)一容器；以及

(ii)如权利要求1-8任一所述的检测抗生素残留的侧流片。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括说明书。