CN206553534U - 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 - Google Patents
一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 Download PDFInfo
- Publication number
- CN206553534U CN206553534U CN201720243905.0U CN201720243905U CN206553534U CN 206553534 U CN206553534 U CN 206553534U CN 201720243905 U CN201720243905 U CN 201720243905U CN 206553534 U CN206553534 U CN 206553534U
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- culture
- culture vessel
- lung cancer
- stem cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 31
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title abstract description 13
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 claims abstract description 29
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 60
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 24
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 7
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 abstract description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710114425 Homeobox protein Nkx-2.1 Proteins 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000777301 Homo sapiens Uteroglobin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000014429 Insulin-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 101100058550 Mus musculus Bmi1 gene Proteins 0.000 description 1
- -1 Nanog Proteins 0.000 description 1
- 102000008730 Nestin Human genes 0.000 description 1
- 108010088225 Nestin Proteins 0.000 description 1
- 101150085710 OCT4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010007125 Pulmonary Surfactant-Associated Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000007620 Pulmonary Surfactant-Associated Protein C Human genes 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 101710088547 Thyroid transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710159262 Transcription termination factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031083 Uteroglobin Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150101299 gene 4 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 210000005055 nestin Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本实用新型公开了一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器,包括培养容器主体,所述培养容器主体内壁设有包被层,包被层为γ聚谷氨酸材质。本实用新型提供的含有γ聚谷氨酸包被层的培养容器可以显著提高悬浮生长细胞球体的形成效率,24小时内即可形成理想的悬浮生长细胞球体,且肺癌干细胞在该悬浮生长细胞球体中高度富集,比现有的无血清培养基加细胞生长因子法效率更高,更便捷。
Description
技术领域
本实用新型属于干细胞领域,具体涉及一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器。
背景技术
肺癌是目前对人类的健康和生命危害最大的恶性肿瘤之一。迄今为止,现有的肺癌治疗方法仅可延长患者的生存期,改善其生活质量,几乎所有的患者最终仍死于原发病。近年来有学者提出,在肿瘤组织中存在极小一部分具备无限增殖潜能和自我更新能力的干细胞群体,对肿瘤的发生、发展起着至关重要的作用,针对这部分细胞的靶向治疗将会给肿瘤治疗带来深远影响。但由于肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在肿瘤组织中的含量极少,这成为制约CSCs研究发展的主要障碍。因此,建立一种高效的富集CSCs方法,对后续实验研究的顺利进行非常必要,也是目前CSCs领域研究的重要课题之一。
当前肺癌干细胞研究的焦点是分离和鉴定肺癌干细胞,一般采用流式细胞仪分选可能的肺癌细胞亚群,再进行生物学鉴定,以证明其干细胞特性。但由于缺乏特异性的干细胞筛选的分子标志,筛选结果争议较大。肿瘤干细胞标志物是一些在肿瘤干细胞中特异性高表达(阳性表达)、不表达或低表达(阴性表达)的分子。国外一些学者通过研究报道,CD133(+)/nestin(+)可能为肺癌干细胞的标记物。研究过程中,可以按照肿瘤干细胞具有能在无血清悬浮培养条件下富集的特性,采用添加生长因子的无血清培养基对肺癌细胞进行悬浮培养,获得肺癌细胞球体,然后对分离到的肺癌细胞球体进行生物学功能鉴定。
目前,在实际的动物细胞培养过程中,血清是最为常用和基本的添加物。无血清培养基则可以在不添加血清的条件下即为细胞的体外生长和繁殖提供良好的条件。从原代肿瘤中获取肿瘤细胞,在含有适当生长因子(如碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子等)的无血清培养基中培养,非肿瘤干细胞由于“血清饥饿”,将无法正常存活,但肿瘤干细胞却可以存活并繁殖,由此肿瘤细胞将得到纯化并维持干细胞状态,其得率也将提高,更好进行各项研究。无血清培养具有实用、简单、快捷等诸多优点,可快速获得足够数量的干细胞。
以陈平等人的研究为例(肺癌干细胞富集及相关标志物的表达,中国组织工程研究第19卷第14期),使用含有表皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子1以及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基对SPCA-1肺癌细胞诱导培养5-10d可获得悬浮生长细胞球体。RT-PCR检测肺球体细胞,除表达肺癌干细胞标志CD24和CD221外,还表达细支气管肺泡干细胞标志CCSP和SP-C,此外,肺球体细胞表达胚胎干细胞的主干基因OCT4、Nanog、Bmi-1和肺干细胞的主干基因TTF-1。
上述方法确实可以有效获得肺癌干细胞,但是培养过程较为繁琐且诱导效率较低,需要培养5-10d才可获得悬浮生长细胞球体,且在球体形成之前每隔2d就需要添加一次生长因子。
发明内容
本实用新型的目的在于提供一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器,以高效、快捷获取悬浮生长细胞球体及肺癌干细胞,提高科研效率。
上述目的是通过如下技术方案实现的:
一种提高肺癌干细胞富集效率的培养容器,包括培养容器主体,培养容器主体内壁还设有包被层,包被层为γ聚谷氨酸材质。
优选地,所述γ聚谷氨酸分子量为70万克/摩尔。
优选地,所述培养容器为培养瓶。
更优选地,培养瓶规格为25cm2、75cm2、175cm2。
优选地,所述培养容器为培养皿。
更优选地,培养皿规格为35mm、60mm、100mm。
优选地,所述培养容器为培养板。
更优选地,培养板规格为6孔、12孔、24孔。
一种制备上述培养容器的方法,包括如下步骤:
步骤S1,将无菌γ聚谷氨酸溶于无菌水中,制成浓度为0.1-0.2mg/mL的γ聚谷氨酸溶液,用0.22μm滤膜过滤,备用;
步骤S2,取上述γ聚谷氨酸溶液加入培养容器中,充分摇匀使其均匀铺满于整个细胞培养容器的底部,放入37℃培养箱中静置4-6小时;
步骤S3,从培养箱中取出培养器皿,用无菌水清洗2-3次,置于37℃培养箱备用。
本实用新型的有益效果:
本实用新型提供的含有γ聚谷氨酸包被层的培养容器可以显著提高悬浮生长细胞球体的形成效率,24小时内即可形成理想的悬浮生长细胞球体,且肺癌干细胞在该悬浮生长细胞球体中高度富集,比现有的无血清培养基加细胞生长因子法效率更高,更便捷。
附图说明
图1为本实用新型培养瓶结构示意图,图中1为γ聚谷氨酸包被层;
图2为本实用新型培养皿结构示意图,图中1为γ聚谷氨酸包被层;
图3为本实用新型培养板结构示意图,图中1为γ聚谷氨酸包被层。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图详细介绍本实用新型的技术方案和技术效果。未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如教科书和实验指南中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件,为本领域普通技术人员熟知或易于获知。
实施例1本实用新型培养瓶的制备
取市售T-75培养瓶(国产科晶培养瓶,产品编号191-203118,透气滤膜盖,斜口,螺口,灭菌;T-75指平放时可用细胞培养面积为75cm2,此为本领域技术人员公知常识)备用,在此基础上实验室自制本实用新型提供的培养瓶,具体步骤如下:
步骤S1,将γ聚谷氨酸(采用γ射线钴60照射灭菌,分子量70万克/摩尔)溶于无菌水中,制成浓度为0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液,用0.22μm滤膜过滤,备用;
步骤S2,取γ聚谷氨酸溶液15mL加入上述T-75培养瓶中(溶液高度约0.2cm),充分摇匀使其均匀铺满于整个细胞培养瓶的底部,放入37℃培养箱中静置5小时;
步骤S3,从培养箱中取出培养瓶,用无菌水清洗培养瓶底部2-3次,置37℃培养箱备用。
显微镜观察显示,细胞培养瓶底部形成均匀的γ聚谷氨酸包被层,包被层厚度约0.4mm。
结构示意图如图1所示。还可以采用市售的T-25培养瓶、T-175培养瓶制成可用细胞培养面积分别为25cm2、175cm2的本实用新型培养瓶,制备时分别添加0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液5mL、35mL,包被层厚度约0.4mm。
当然,为了提高科研人员的工作效率,可以制备成预包被培养瓶成品销售给科研人员。
实施例2本实用新型培养皿的制备
取市售规格60mm细胞培养皿(上海翼飞生物科技,灭菌;细胞生长面积21cm2,高度为15mm,此为本领域技术人员公知常识)备用,在此基础上实验室自制本实用新型提供的细胞培养皿,具体步骤如下:
步骤S1,将γ聚谷氨酸(采用γ射线钴60照射灭菌)溶于无菌水中,制成浓度为0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液,用0.22μm滤膜过滤,备用;
步骤S2,取γ聚谷氨酸溶液5mL加入上述60mm细胞培养皿(溶液高度约0.24cm),充分摇匀使其均匀铺满于整个细胞培养皿的底部,放入37℃培养箱中静置5小时;
步骤S3,从培养箱中取出培养皿,用无菌水清洗培养皿底部2-3次,置37℃培养箱备用。
显微镜观察显示,细胞培养皿底部形成均匀的γ聚谷氨酸包被层,包被层厚度约0.48mm。
结构示意图如图2所示。还可以采用市售的35mm培养皿(高度10mm,细胞生长面积8cm2)、100mm培养皿(高度20mm,细胞生长面积55cm2)制成本实用新型培养皿,分别添加0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液3mL、10mL,包被层厚度分别约为0.75mm、0.36mm。
当然,为了提高科研人员的工作效率,可以制备成预包被培养皿成品销售给科研人员。
实施例3本实用新型培养板的制备
取市售6孔板(国产迈博瑞,灭菌;单孔面积9.5cm2,单孔体积16.5mL,此为本领域技术人员公知常识)备用,在此基础上实验室自制本实用新型提供的细胞培养皿,具体步骤如下:
步骤S1,将γ聚谷氨酸(采用γ射线钴60照射灭菌)溶于无菌水中,制成浓度为0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液,用0.22μm滤膜过滤,备用;
步骤S2,取γ聚谷氨酸溶液2.5mL加入上述6孔板(溶液高度约0.26cm),充分摇匀使其均匀铺满于整个细胞培养孔的底部,放入37℃培养箱中静置5小时;
步骤S3,从培养箱中取出培养板,用无菌水清洗培养孔底部2-3次,置37℃培养箱备用。
显微镜观察显示,细胞培养孔底部形成均匀的γ聚谷氨酸包被层,包被层厚度约0.52mm。
结构示意图如图3所示。还可以采用市售的12孔板(单孔面积3.9cm2,单孔体积6.5mL)、24孔板(单孔面积1.75cm2,单孔体积2.9mL)制成本实用新型培养板,分别添加0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液2mL、1mL,包被层厚度分别约为1mm、1.1mm。
当然,为了提高科研人员的工作效率,可以制备成预包被培养板成品销售给科研人员。
实施例4不同培养容器对肺癌干细胞成球的影响
一、实验材料
细胞株:人肺癌细胞株SPCA-1为本公司长期冻存,复苏后置于DMEM培养液(含体积分数为10%胎牛血清)中进行传代培养,得到活跃增殖期细胞备用。
包被培养皿:按实施例2方法制备,规格60mm。
常规培养皿A:直接采用实施例2中市售培养皿,规格60mm,无γ聚谷氨酸包被层。
常规培养皿B:超低吸附培养皿,上海昨非实验室设备有限公司,规格60mm,无包被。
无血清DF12培养液购于昆明中云美生物技术有限公司。
其他仪器和试剂均为本领域技术易于获得的常规仪器和试剂。
二、实验方法
1、球体培养和分离
包被培养皿:将活跃增殖期肺癌细胞置于无血清DF12培养液中,调整细胞浓度为2×107/L,取5mL细胞培养于包被培养皿中,常规条件培养至球体形成为止。收集细胞,离心(100×g)后留取球体细胞沉淀备用,对球体细胞进行免疫荧光检测。
常规培养皿A:将活跃增殖期肺癌细胞置于无血清DF12培养液中,调整细胞浓度为2×107/L,取5mL细胞培养于常规培养皿A中,常规条件培养至球体形成为止。收集细胞,离心(100×g)后留取球体细胞沉淀备用,对球体细胞进行免疫荧光检测。
常规培养皿B:将活跃增殖期肺癌细胞置于无血清DF12培养液中,调整细胞浓度为2×107/L,取5mL细胞培养于常规培养皿B中,分别加入20μg/L不同的细胞生长因子,包括重组人成纤维细胞生长因子10、重组人表皮细胞生长因子以及重组人胰岛素样生长因子1,每隔2d添加1次上述3种因子,常规条件培养至球体形成为止。收集细胞,离心(100×g)后留取球体细胞沉淀备用,对球体细胞进行免疫荧光检测。
2、免疫荧光检测
细胞浓度调整至1×109/L,取200μL滴于盖玻片培养过夜,用40g/L多聚甲醛进行固定,利用非离子型表面活性剂0.1%TritonX-100增加细胞膜通透性,然后进行染色;一抗为OCT4特异性抗羊多克隆IgG,稀释浓度为1:50,置于4℃湿盒中反应过夜,经PBS淋洗去除非结合的抗体,然后用异硫氰酸荧光素标记的驴抗羊多克隆IgG于室温中反应2h,再次PBS淋洗,DAPI染核,封固,置于荧光显微镜下进行观察。
三、实验结果
1、细胞球体形成速度
现有技术多采用常规培养皿B的富集方法,无血清培养基加细胞生长因子诱导,一般5-10天可收获悬浮生长细胞球体。本实施例三组富集方法形成悬浮生长细胞球体时间如下表:
包被培养皿 | 常规培养皿A | 常规培养皿B | |
时间 | 22小时 | 14天 | 8天 |
与常规培养皿A相比,常规培养皿B培养液中含有细胞生长因子,证明细胞生长因子确实可以诱导悬浮生长细胞球体形成;与常规培养皿A相比,包被培养皿于培养皿底部包被有γ聚谷氨酸包被层,但不含细胞生长因子,结果22小时即可形成理想的悬浮生长细胞球体。
可以看出,与现有技术相比,本实用新型培养皿可以显著提高细胞球体形成速度。
2、免疫荧光检测球体细胞标志物的表达
OCT4为干细胞干性基因,肿瘤干细胞中OCT4基因表达呈阳性,且表达量高。通过测定细胞样本中OCT4阳性细胞的比率可以评估细胞样本中干细胞的含量。
本实施例三组富集方法获得的悬浮生长细胞球体中OCT4阳性细胞比例如下表:
与SPCA-1细胞相比,本实施例三组富集方法获得的悬浮生长细胞球体中OCT4阳性细胞比例均显著升高;与现有技术常规培养皿B相比,常规培养皿A培养法悬浮生长细胞球体中非干细胞比例较高,包被培养皿培养法悬浮生长细胞球体中干细胞含量略高。
上述实验表明,本实用新型提供的含有γ聚谷氨酸包被层的培养容器可以显著提高悬浮生长细胞球体的形成效率,24小时内即可形成理想的悬浮生长细胞球体,且肺癌干细胞在该悬浮生长细胞球体中高度富集,比现有的无血清培养基加细胞生长因子法效率更高,更便捷。
上述实施例的作用在于说明本实用新型的实质性内容,但并不以此限定本实用新型的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解,可以对本实用新型的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本实用新型技术方案的实质和保护范围。
Claims (8)
1.一种提高肺癌干细胞富集效率的培养容器,包括培养容器主体,其特征在于:所述培养容器主体内壁设有包被层,包被层为γ聚谷氨酸材质。
2.根据权利要求1所述的培养容器,其特征在于:γ聚谷氨酸分子量为70万克/摩尔。
3.根据权利要求1或2所述的培养容器,其特征在于:所述培养容器为培养瓶。
4.根据权利要求3所述的培养容器,其特征在于:培养瓶规格为25cm2、75cm2、175cm2。
5.根据权利要求1或2所述的培养容器,其特征在于:所述培养容器为培养皿。
6.根据权利要求5所述的培养容器,其特征在于:培养皿规格为35mm、60mm、100mm。
7.根据权利要求1或2所述的培养容器,其特征在于:所述培养容器为培养板。
8.根据权利要求7所述的培养容器,其特征在于:培养板规格为6孔、12孔、24孔。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201720243905.0U CN206553534U (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201720243905.0U CN206553534U (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN206553534U true CN206553534U (zh) | 2017-10-13 |
Family
ID=60364117
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201720243905.0U Expired - Fee Related CN206553534U (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN206553534U (zh) |
-
2017
- 2017-03-14 CN CN201720243905.0U patent/CN206553534U/zh not_active Expired - Fee Related
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Feng et al. | An injectable non-cross-linked hyaluronic-acid gel containing therapeutic spheroids of human adipose-derived stem cells | |
CN109609460B (zh) | 一种人脑胶质瘤细胞系及其建立方法和应用 | |
CN106754364A (zh) | 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 | |
CN106367393B (zh) | 小鼠前列腺癌循环肿瘤细胞系及前列腺癌循环肿瘤细胞分离和培养方法 | |
CN101821383A (zh) | 一种用于人成体原始间充质干细胞体外规模化培养的培养基、方法及获得的原始间充质干细胞及其应用 | |
CN102492623A (zh) | 海水盾纤毛虫体外活体培养培养基的制备及培养方法 | |
CN103396995B (zh) | 一种筛选乳腺癌干细胞的三维培养方法 | |
CN107075443A (zh) | 三维细胞培养系统和使用该系统的细胞培养方法 | |
CN104450610B (zh) | 一种人羊膜间充质干细胞传代培养方法 | |
CN206553534U (zh) | 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器 | |
CN103184188A (zh) | 中枢神经系统药物研究的原代同源三细胞四维模型及构建方法 | |
CN105441386A (zh) | 一种猪极小胚胎样干细胞培养与鉴定方法 | |
CN104152410A (zh) | 一种构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的方法 | |
CN104087554A (zh) | 一种人胸腺瘤细胞系及其用途 | |
CN104988120B (zh) | 一种pH值稳定的淋巴细胞培养基及其制备方法和应用 | |
CN101525596A (zh) | 一种使用同一份脐带血的血清来收获干细胞的方法 | |
CN106754679A (zh) | 一种细胞培养基和培养羊膜间充质干细胞的方法 | |
CN103074300A (zh) | 间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系建立及肿瘤微环境中间充质干细胞遗传稳定性变化特征 | |
CN102409021A (zh) | 金华猪成纤维细胞系的建立及其培养方法 | |
CN103173407A (zh) | 利用宫内膜干细胞诱导分化肝脏细胞的方法 | |
WO2022227289A1 (zh) | 三明治夹层培养体系用于检测类器官对大分子药物敏感性的方法 | |
CN101732709B (zh) | 一种多层培养瓶培养原代细胞制备出血热疫苗的方法 | |
JPH11243948A (ja) | 動物細胞増殖用の細胞培養床基材及びその調製方法 | |
CN114181896A (zh) | 一种脐带间充质干细胞营养液制备方法及其应用 | |
US20180072855A1 (en) | Method for preparing a cellulose sponge and mixed solution thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171013 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |