CN204989197U - 肌钙蛋白i、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条 - Google Patents
肌钙蛋白i、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型公开了一种肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,包括底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫;所述试纸条由样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接粘贴在底板上构成。所述荧光标记物结合垫含有链霉亲和素标记荧光蛋白和生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体、生物素标记的肌红蛋白单克隆抗体、生物素标记的肌酸激酶同工酶单克隆抗体;所述硝酸纤维膜上有检测线和质控线。本实用新型与目前常见的检测心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶的方法相比(如:胶体金法),不仅大大缩短了检测时间,提高了检测灵敏度,同时联合检测还大大提高了便利性。
Description
技术领域
本实用新型属于免疫检测领域,具体涉及一种高灵敏度肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条。
背景技术
心肌肌钙蛋白I(CardiactroponinI,cTnI)是分子量22.5kD的心肌蛋白,和肌钙蛋白T(TnT),肌钙蛋白C(TnC)一起,形成肌钙蛋白复合体,从而对细胞内钙离子信号的传递和肌动-肌球蛋白的相互作用起着极其主要的作用。急性心肌梗塞(AMI)发作后肌钙蛋白复合体分解,cTnI快速地释放入血液循环。尽管骨髂肌中也有肌钙蛋白I,但其氨基酸组成和cTnI不同,造成二者的免疫活性不同,进而保证了cTnI测试的准确性。AMI症状发作后4-6小时cTnI才达到正常值上限,12-24小时后达到最高浓度,有时能维持6-10天。正常血清cTnI低于0.06ng/ml,有些AMI患者cTnI可高达1,300ng/ml。与CK-MB相比,cTnI对心肌损伤的诊断敏感性更高,特导性更强,持续时间更长。因此cTnI测定对再发AMI的诊断尤其有帮助,还可诊断微小心梗,故对不稳定性心绞痛(UA)和非ST抬高的AMI的鉴别有极大帮助。
肌红蛋白(Myoglobin,MYO)是一种氧结合血红素蛋白,其分子量为16.7KD,主要分布于心肌和骨骼肌组织,呈紧密球形。因为肾衰时也可增高,其特异性就不很高(76%)。但由于分子量小,容易释放入外周血,在心肌损伤时能很快释放出来,是即时的最易检出的心肌坏死时的生化标志物,即在出现症状后的1-3小时就可见于血清中(敏感性60%),其高峰为AMI后的3-6小时(敏感性90%)。由于其半衰期很短,故在较晚(6-8小时后)对AMI的诊断价值就很小。
肌酸激酶(Creatinekinase,CK)旧称为肌酸磷酸激酶(Creatinephosphokinase,CPK)。CK分子量为81000,由两个亚基组成。通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶,它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。CK在ATP参与下催化肌酸磷酸化,生成ATP和磷酸肌酸。肌酸激酶有四种同功酶形式:肌肉型(CK-MM)、脑型(CK-BB)、杂化型(CK-MB)和线粒体型(CK-MiMi)。CK-MM型主要存在于各种肌肉细胞中,CK-BB型主要存在于脑细胞中,CK-MB型主要存在于心肌细胞中,CK-MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。
CK-MB在传统心肌酶学中曾作为诊断AMI的金标准,然而25%-50%的AMI患者在发病4小时内处于正常水平,造成约10%的患者被漏诊。CK-MB的心肌特异性较高,胸痛发生后4-6小时开始升高,但亦存在于骨骼肌中,骨骼肌损伤时增高。另正常人血中也存在,正常存在与病理性增加之间有交叉,敏感性不高,不能诊断微小心肌梗死。
综上所述,cTnI、MYO、CK-MB几种心肌标志物的临床诊断价值各不相同,如果单一检测某一项指标对AMI的检测是不够的。研究认为对cTnI、MYO、CK-MB这三种标志物联合检测,进行动态监测,有助于防止漏诊。在胸痛发作1-3h内MYO的检测优于cTnI,但在4-6h这三种标志物均具有较高的敏感性,因此对胸痛的患者进行cTnI、MYO和CK-MB三项指标的联合检测,对于AMI的早期发现有重要价值。研究结果显示,cTnI、MYO、CK-MB三合一联合检测的敏感性为96.6%,特异性为95-8%,提高了单一指标诊断AMI的敏感性和特异性。三者有效结合,对AMI的早期诊断和排除提供了更确凿的指标支持,提高了诊断的窗口期,为胸痛发作或临床可疑为AMI的病人作出正确和及时的诊断,进而为临床医师及时抢救和诊治病人提供了快捷有效的依据。
目前国内市场上检测产品并不多,均采用胶体金法,但检测灵敏度有一定的不足。
胶体金法:
该检测应用了胶体金技术,包括胶体金标记的单克隆抗体和非特异性的抗抗体。当患者的标本(如:血清)加入标本孔,金标单克隆抗体与标本中的cTnI/MYO/CK-MB结合,形成金标记的抗原抗体复合物。该复合物在反应膜上移动,与固定在膜上的抗抗体结合形成更大的复合物,复合物颜色深浅与cTnI/MYO/CK-MB的浓度成正比。
生物素-亲和素系统(biotinavidinsystem,BAS),是一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世,BAS很快被广泛应用于医学各领域。将该系统应用于免疫组化,酶联免疫,荧光免疫,放射免疫等检测技术中,可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性,使方法更简便,有助于临床快速诊断,并利于进行大规模流行病学调查,成为研究免疫反应的有力工具。由于BAS检测系统经济快速,又无放射物质污染,不需复杂仪器,充分显示了此系统的巨大潜力和应用的可能性。
生物素-亲和素系统检测原理:BAS是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素与亲和素间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白,分子量为68kDa,由4个亚单位组成,对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质,链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素,因几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。利用生物素-亲和素系统研制肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检快速诊断试剂尚无报道。
实用新型内容
本实用新型的目的,在于提供一种肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其基于双抗体夹心法、荧光免疫侧向层析和生物素-链霉亲和素放大系统,提供高灵敏度肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条。使用本实用新型时,提高了检测灵敏度和检测稳定性,降低了非特异性结合,联合检测大幅度提高检测的准确性和便利性,检测时间不大于10分钟,大大提高了诊断效率。
本实用新型解决其技术问题的解决方案是:肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其包括底板,所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区,所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上,所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体、生物素标记的肌红蛋白单克隆抗体、生物素标记的肌酸激酶同工酶单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白;所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体构成的第一检测线、识别肌红蛋白另外一个表位的单克隆抗体构成的第二检测线、识别肌酸激酶同工酶另外一个表位的单克隆抗体构成的第三检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
作为上述技术方案的进一步改进,所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫,所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方,所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。
作为上述技术方案的进一步改进,所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条,所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。
作为上述技术方案的进一步改进,还包括卡壳,所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内,所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗,卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。
作为上述技术方案的进一步改进,所述观察窗为长方形孔。
作为上述技术方案的进一步改进,所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。
作为上述技术方案的进一步改进,所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
作为上述技术方案的进一步改进,所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
作为上述技术方案的进一步改进,所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳,所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。
本实用新型与现有技术相比,具有如下优点:
(1)本实用新型将荧光蛋白作为标记物,此标记物稳定性良好,有利于提高检测稳定性。
(2)本实用新型通过利用“链霉亲和素-生物素放大系统”,提高检测灵敏度,降低非特异性结合,有利于提高试剂盒性能。
(3)利用本实用新型进行心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶的检测时间不大于10分钟,心肌肌钙蛋白I检测线性范围为0.10ng/ml~30.00ng/ml,肌红蛋白检测线性范围为5.0ng/ml~500.0ng/ml,肌酸激酶同工酶检测线性范围为2.5ng/ml~200.0ng/ml,极大地提高了检测效率。
(4)本实用新型可通过荧光免疫分析仪对结果进行判读,可实现自动化,减少主观因素的影响,提供便利、快速、可靠的诊断结果。
(5)本实用新型卡壳设有样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗,根据分析仪器判定结果,准确可靠。
(6)本实用新型制作方便,体积小、便于携带。
(7)本实用新型检测成本较低。
(8)本实用新型可批量生产,适用于临床快速诊断和现场快速诊断;易于保存,有利于基层单位推广。
(9)本实用新型采用联合检测,一条检测条同时检测三项,相对于三条检测条同时检测更加方便。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单说明。显然,所描述的附图只是本实用新型的一部分实施例,而不是全部实施例,本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他设计方案和附图。
图1是本实用新型实施例一的结构示意图;
图2是本实用新型实施例二的结构示意图;
图3是本实用新型实施例三的结构示意图;
图4是本实用新型实施例四的结构示意图。
具体实施方式
以下将结合实施例和附图对本实用新型的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述,以充分地理解本实用新型的目的、特征和效果。显然,所描述的实施例只是本实用新型的一部分实施例,而不是全部实施例,基于本实用新型的实施例,本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例,均属于本实用新型保护的范围。另外,文中所提到的所有联接/连接关系,并非单指构件直接相接,而是指可根据具体实施情况,通过添加或减少联接辅件,来组成更优的联接结构。
参照图1,肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其包括底板5,所述底板5上依次设有样品垫1、荧光标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4,所述吸水垫4和荧光标记物结合垫2分别交叠压在硝酸纤维素膜3的两端后在硝酸纤维素膜3的表面形成检测区,荧光标记物结合垫2为玻璃纤维膜,所述样品垫1交叠压在荧光标记物结合垫2上,所述荧光标记物结合垫2上固定有生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(浓度0.3~1.5mg/mL)、肌红蛋白单克隆抗体(浓度0.3~1.5mg/mL)、肌酸激酶同工酶单克隆抗体(浓度0.3~1.5mg/mL)和链霉亲和素标记(或亲和素)的荧光蛋白(使用激发光波长530nm,发射光波长570nm,浓度0.1~2.0mg/mL);所述检测区内的硝酸纤维素膜3上固定有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体构成的第一检测线T1(浓度0.5~3mg/mL)、识别肌红蛋白另外一个表位的单克隆抗体构成的第二检测线T2(浓度0.5~3mg/mL)、识别肌酸激酶同工酶另外一个表位的单克隆抗体构成的第三检测线T3(浓度0.5~3mg/mL)和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线C(浓度0.2~2.0mg/mL),质控线C用于检测试纸条的有效性。
将生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体、生物素标记的肌红蛋白单克隆抗体、生物素标记的肌酸激酶同工酶单克隆抗体和链霉亲和素(或亲和素)标记的荧光蛋白固定在荧光标记物结合垫2上,将有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体、识别肌红蛋白另外一个表位的单克隆抗体、识别肌酸激酶同工酶另外一个表位的单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜上分别作为检测线T1、T2、T3和质控线C。当待测样品加到样品垫1上后,通过层析作用向前移动,样品中心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶分别对应与荧光标记物结合垫2上结合荧光标记物(荧光蛋白)的心肌肌钙蛋白I抗体(Mab-cTnI*Fluoro)、结合荧光标记物(荧光蛋白)的肌红蛋白抗体(Mab-MYO*Fluoro)、结合荧光标记物(荧光蛋白)的肌酸激酶同工酶抗体(Mab-CK-MB*Fluoro)反应形成复合物cTnI-Mab-cTnI*Fluoro、MYO-Mab-MYO*Fluoro、CK-MB-Mab-CK-MB*Fluoro,在层析作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜上包被的cTnI抗体、MYO抗体、CK-MB抗体(检测线)时,反应复合物分别对应被包被的cTnI抗体、MYO抗体、CK-MB抗体捕获形成复合物(Mab-cTnI-cTnI-Mab-cTnI*Fluoro、Mab-MYO-MYO-Mab-MYO*Fluoro、Mab-CK-MB-CK-MB-Mab-CK-MB*Fluoro)(检测线),通过荧光免疫分析仪读取检测线的反应信号,在激发光源的作用下,荧光物质发射特定波长的荧光信号,荧光免疫分析仪俘获荧光信号,通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数值,计算出样本中心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶的浓度,得到心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶检测结果。
作为上述技术方案的进一步改进,参照图3,所述荧光标记物结合垫2包括层叠的第一荧光标记物结合垫20和第二荧光标记物结合垫21,所述第一荧光标记物结合垫20的一端垫在样品垫1的下方,所述第二荧光标记物结合垫21交叠压在硝酸纤维素膜3的一端。荧光标记物结合垫2的分层设置,便于将荧光标记物结合垫2安装在样品垫1和硝酸纤维素膜3之间。
作为上述技术方案的进一步改进,参照图3所述第一荧光标记物结合垫20中插入样品垫下方的一端设有定位条22,所述样品垫1的下端面设有能容纳定位条22的定位槽。通过定位条22便于荧光标记物结合垫2和样品垫1之间的安装固定。
作为上述技术方案的进一步改进,参照图2和图4,还包括卡壳,所述底板5、样品垫1、荧光标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4均置于卡壳6内,所述卡壳6壳面上对应于硝酸纤维膜3的位置设有观察窗8,卡壳6壳面上对应于样品垫1的位置设有加样孔7。
作为上述技术方案的进一步改进,所述观察窗8为长方形孔。
作为上述技术方案的进一步改进,所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。
作为上述技术方案的进一步改进,所述样品垫1为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。样品垫由玻璃纤维构成,经表面活性剂缓冲液浸泡处理,干燥后使用。所述样品垫1的裁剪宽度为2.5~5.0mm。
作为上述技术方案的进一步改进,所述底板5为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
作为上述技术方案的进一步改进,所述卡壳6包括塑料上壳60和塑料下壳61,所述塑料上壳60扣合塑料下壳61上后形成卡壳6。
以上是对本实用新型的较佳实施方式进行了具体说明,但本发明创造并不限于所述实施例,熟悉本领域的技术人员在不违背本实用新型精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换,这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (9)
1.肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:其包括底板,所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区,所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上,所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体、生物素标记的肌红蛋白单克隆抗体、生物素标记的肌酸激酶同工酶单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白;所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体构成的第一检测线、识别肌红蛋白另外一个表位的单克隆抗体构成的第二检测线、识别肌酸激酶同工酶另外一个表位的单克隆抗体构成的第三检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
2.根据权利要求1所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫,所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方,所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。
3.根据权利要求2所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条,所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。
4.根据权利要求1至3任一项所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:还包括卡壳,所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内,所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗,卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。
5.根据权利要求4所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述观察窗为长方形孔。
6.根据权利要求4所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。
7.根据权利要求4所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
8.根据权利要求4所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
9.根据权利要求4所述的肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶定量联检试纸条,其特征在于:所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳,所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。
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C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |