CN204832205U - 一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸 - Google Patents
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Abstract
一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸，包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件6，上方设有第二固定部件7，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位第一检测线8和第二检测线9分别包被有抗sFlt-1或抗Endoglin的单克隆或多克隆抗体，在所述第一检测线和第二检测线的两边分别设有控制线10，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的sFlt-1和Endoglin抗体以及控制线偶合物。
Description
技术领域
本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种用于快速检测子痫标示物的胶体金试纸。
背景技术
HELLP综合征是一组表现为溶血(hemolysis)，肝酶升高(elevafedliverenzymes)和血小板减少(lowptatelefs)的综合征，是重度子痫前期的严重并发症，是严重威胁孕产妇及围生儿生命的病理妊娠，在所有孕产妇中发生率为0.2-0.8％，在重度子痫前期中发生率大概10％(2-20％)。HELLP综合征通常发生于子痫前期患者的妊娠末期三个月，有时发生于妊娠中期三个月，发生于产后48-72小时内的较罕见。该疾病的诊断较复杂，没有特殊的临床指征，故容易与其他疾病混淆，比如妊娠期急性脂肪肝，特发性血小板减少症，溶血性尿毒性综合征，阑尾炎等。
子痫前期(PE)是导致孕产妇死亡的主要原因之一,全球发病率3-5％。在欧美发达国家其发病率为2～5％，在发展中国家其发病率为10％左右，在亚洲和非洲，它占到了孕产妇死亡人数的9％。10％-15％的孕妇死亡直接与子痫前期和子痫前期的并发症相关。子痫前期的定义为孕20周及以后才开始出现的至少2次间隔4小时的高血压(血压>140/90mmHg)、蛋白尿(>300mg/24h或+)和水肿，并于产后6周恢复正常。另可伴有以下临床表现：头痛、右上腹痛、精神异常等，严重者可导致HELLP综合征。子痫前期不仅对孕妇造成诸如抽搐发作、胎盘早剥、弥散性血管内凝血(DIC)、肝肾功能衰竭、肺水肿、脑出血、血栓栓塞、远期的心脑血管疾病、死亡等危害,也可以对胎儿造成如宫内发育不良、宫内生长受限、早产、死亡等影响。发生过子痫前期的孕妇日后发生心血管疾病、脑卒中和糖尿病的风险也会增加，胎儿日后也有更大的风险发生高血压、心血管疾病、糖尿病和肾病综合症。
胎盘缺血理论认为：子痫前期的发生主要由于孕早期的胎盘功能不全所致，其病理生理过程分为两个阶段，第一阶段：子宫内膜和内层的肌层发育不良以致胚胎滋养层细胞对肌层动脉的浸润不良，子宫动脉早期灌注不良，缺血及缺血后的再灌注，使胎盘局部产生剧烈的氧化应激反应，从而导致绒毛的退化、绒毛膜形成的停滞，严重者致广泛的绒毛退化和小胎盘的出现，导致胎儿宫内生长受限或者发展为早期发病的子痫前期。第二阶段：基于第一阶段的胎盘缺血再灌注损伤，使其释放许多血管活性物质如VEGF的受体、sFlt-1等，这些因子通过绒毛间隙进入孕妇体的血液循环系统，刺激产生炎性细胞因子并致孕妇发生全身炎症反应，造成全身血管内皮细胞的破坏以及血管的高反应性，进一步产生并加重子痫前期的临床症状。近几年，由于分子生物学技术的进步，研究人员的目光转向了这些来源于胎盘或母体，在母体内可被检测到的，反映胎盘功能状态的血清生物学指标，大量研究开始关注从孕妇血液中寻找胎盘来源的相关生物标志物对子痫前期进行诊断或预测。越来越多的生物学标志物如血管内皮生长因子受体(sFlt-1)、可溶性Endoglin(sEng)等。
sFlt-1最初是在人类血管内皮细胞的上清液中发现的。编码sFlt-1的基因通过其前体mRNA的不同剪接，形成两种不同的表达，一种是全长的膜结合受体形式即Flt-1，可以传递信息。另一种是截断的可溶性受体即sFlt-1，可结合配体，阻止信号的传导。由于它仅有胞外配体结合域，缺乏酪氨酸信号段，所以它主要是拮抗VEGF的促进内皮细胞增生、维持内皮细胞存活的生物学作用。同时，sFlt-1的另一配体是胎盘生长因子(PlGF)，它也可以拮抗PLGF对胎盘的生物学效应，因而造成全身内皮功能失调，产生高血压、蛋白尿等临床表现。子痫前期患者血清中sFlt-1的水平在20周即开始升高，在孕晚期明显上升，且可早于临床症状出现前4-5周。另有研究发现，早发型子痫前期孕妇孕晚期血清中sFlt-1较晚发型子痫前期变化更为明显。子痫前期患者体内高水平的sFlt-1可作为预测指标。
Endoglin为一种转化生长因子Β(TGF2Β)结合蛋白，他调节细胞对TGF2Β的反应，许多研究表明其与血管生成有关，并且作为新生血管的重要标记物，可作为子痫前期的发生的预测指标。研究发现，在氧张力较低的妊娠4-9周时绒毛组织sEng表达水平明显升高，而在氧张力较高的妊娠10周以后其表达水平则明显减低，提示缺氧可上调胎盘的组织sEng表达，而子痫前期存在胎盘缺血、缺氧，因此子痫前期胎盘组织sEng表达水平升高亦可能是继发事件。
鉴于目前尚无快速检测子痫标示物的方法，本实用新型的目的是提供一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸以及一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸盒，所述试纸和试纸盒具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点。
实用新型内容
本实用新型的一个目的是提供一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸，本实用新型所述快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速诊断。
本实用新型的技术方案是：
一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸，包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件6，上方设有第二固定部件7，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位第一检测线8和第二检测线9分别包被有抗sFlt-1或抗Endoglin的单克隆或多克隆抗体，在所述第一检测线和第二检测线的两边分别设有控制线10，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的sFlt-1和Endoglin抗体以及控制线偶合物。
进一步地，所述控制线10包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
进一步地，所述第一固定部件6为双面胶，第二固定部件7为单面胶。
进一步地，所述试纸外还包括一外壳11，所述外壳包裹所述试纸外，露出样本垫片5、硝酸纤维素膜2上的第一检测线8、第二检测线9、两条控制线10、以及吸水垫3。
进一步，所述两条控制线10与第一检测线8和第二检测线9为平行设置。
本实用新型所述的试纸盒具有方便携带和贮存的优点。
其中，本实用新型所述子痫标示物蛋白sFlt-1为血管内皮生长因子受体、Endoglin为一种转化生长因子Β(TGF2Β)结合蛋白。
本实用新型所述快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸或试纸盒的工作原理是：采用免疫反应原理，通过双抗体夹心法制备而成。检验时样本中的sFlt-1和Endoglin抗原首先分别与偶合垫上的sFlt-1和Endoglin抗体偶合物发生免疫反应，形成免疫复合物。其后免疫复合物随着样本在硝基纤维素膜上层析流动，当免疫复合物层析至硝基纤维素膜上的检测区(sFlt-1和Endoglin检测线)时，分别与预先包被在硝基纤维素膜上的抗sFlt-1和Endoglin抗体发生反应从而被固定在硝基纤维素膜的检测线上。样本中的sFlt-1和Endoglin越多，检测线上的复合物越多，条带上的光密度值就越高。同时，在检测过程中，控制线偶合物(即DNP-BSA标记的胶体金)，也会随样本在硝基纤维素膜上层析，当层析至硝基纤维素膜的控制线时，DNP-BSA胶体金会与预先包被在硝基纤维素膜上的抗DNP抗体发生反应从而被固定在对照区(控制线)上。由于胶体金为红色，因而固定在硝基纤维素膜控制线上的抗DNP中的DNP-BSA胶体金免疫复合物将显示红色。当样本中不含sFlt-1和Endoglin时，则只显示两条控制线。当样本含sFlt-1和Endoglin时，检测线就会分别清晰的显示出来。
当反应结束后，利用多功能免疫检测仪(瑞莱生物工程(深圳)有限公司)将控制线和检测线的光密度进行分析，并将所分析得到的结果进行运算，从而得到相对光密度值(RI)。然后检测仪根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对sFlt-1和Endoglin的浓度进行计算并显示结果，分别以ng/mL和pg/mL为单位表示。
附图说明
图1是本实用新型所述快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸的一种优选实施方式的结构示意图。
其中，1:支撑垫片，2:硝酸纤维素膜，3:吸水垫，4:偶合物垫片，5:样本垫片，6:第一固定部件，7:第二固定部件，8:第一检测线，9:第二检测线，10:控制线。
图2是本实用新型所述快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸盒的一种优选实施方式的示图。
其中，3:吸水垫，5:样本垫片，8:第一检测线，9:第二检测线，10:控制线，11:外壳。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型所述快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸或试纸盒进行详细说明，不能理解为是对本实用新型的限制。以下实施例中所使用的材料和试剂除特别说明外，均为普通市售。
【实施例1】制备快速检测子痫标示物的胶体金试纸
如图1所示的胶体金试纸结构，包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片远离硝酸纤维素膜2的一端上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方粘接第一固定部件6，优选双面胶，上方粘接第二固定部件7，优选单面胶，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位第一检测线8和第二检测线9分别包被有sFlt-1和Endoglin的单克隆抗体，在所述第一检测线和第二检测线的两边分别设有控制线10，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的sFlt-1和Endoglin抗体以及控制线偶合物。
所述控制线10包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
其中，硝酸纤维素膜2在试纸中用于固定包被抗体，同时也是免疫反应的发生处；第一检测线8和第二检测线9是分别将sFlt-1和Endoglin抗体使用PBS、甲醇等缓冲液稀释到0.5mg/ml的浓度，取1ul/cm划线于所述硝酸纤维素膜1上，干燥，即得；控制线10是将抗DNP抗体使用PBS、甲醇等缓冲液稀释到0.5mg/ml的浓度，取1ul/cm划线于所述硝酸纤维素膜1上，干燥，即得。
其中，所述偶合物垫片4的原材料为玻璃纤维滤膜，将用于制备偶合物垫片的玻璃纤维滤膜放入预封闭缓冲液(包含0.1-1％的酪蛋白，0.5-5％的牛血清白蛋白、0.005-0.5％的硼酸、0.01-0.2％的PEG)中浸泡5分钟后取出，干燥，用Biodot包膜仪器将金标记的sFlt-1和Endoglin单克隆抗体以及控制线偶合物涂布在偶合物垫片4上，涂布量是1ul/mm，干燥，即得。优选地，所述偶合物垫片4的预封闭缓冲液包含0.8％的酪蛋白，4％的牛血清白蛋白，0.007％的硼酸，0.1％的PEG。
其中，所述样本垫片5可对液态样品起到初步过滤作用。将样本垫片用封闭液(包含：0.1-1％的Tris，0.1-1％的酪蛋白,0.05-0.5％的鼠抗人红细胞)浸泡5分钟后，干燥，即得。优选地，所述样本垫片封闭液包含：0.3％的Tris，0.8％的酪蛋白,0.3％的鼠抗人红细胞。
将上述各组成部件按图1所示结构粘贴在支撑垫片1上，获得快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸。
【实施例2】用本实用新型所述试纸快速定量检测sFlt-1和Endoglin
取本实用新型优选的一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸，如图1所示，包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件6，上方设有第二固定部件7，其特征在于，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位第一检测线8和第二检测线9分别包被有抗sFlt-1或抗Endoglin的单克隆或多克隆抗体，在所述第一检测线和第二检测线的两边分别设有控制线10，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的sFlt-1和Endoglin抗体以及控制线偶合物。优选地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金；按以下步骤进行检测：1)抽取的病人血清、血浆或全血等待检样本，如低温保存样本需恢复至室温。2)将待测样品加入样本垫片5上，反应。3)判读，将所述试纸置于多功能免疫检测仪,SSJ-2或MINI(瑞莱生物工程(深圳)有限公司)中判定结果。
【实施例3】用本实用新型所述试纸盒快速定量检测sFlt-1和Endoglin
取本实用新型优选的一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin的试纸盒，如图1和图2所示，所述试纸包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫3，另一端连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方粘接第一固定部件6，优选双面胶，上方粘接第二固定部件7，优选单面胶，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位第一检测线8和第二检测线9分别包被有抗sFlt-1和Endoglin的单克隆抗体，在所述第一检测线和第二检测线的两边分别设有控制线10，所述偶合物垫4上涂布有金标记的sFlt-1和Endoglin抗体以及控制线偶合物。优选地，所述控制线10包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。所述试纸还包括一外壳11，所述外壳包裹所述试纸，露出样本垫片5、硝酸纤维素膜2上的第一检测线8、第二检测线9和两条控制线10、以及吸水垫3。按以下步骤进行检测：1)采集病人的血清、血浆或全血等待检样本，如低温保存样本需恢复至室温。2)将待测样品加入样本垫片5上，反应。3)判读，将所述试纸置于多功能免疫检测仪,SSJ-2或MINI(瑞莱生物工程(深圳)有限公司)中判定结果。
Claims (5)
1.一种快速定量检测sFlt-1和Endoglin试纸，包括支撑垫片(1)，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜(2)，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫(3)，另一端上方层叠连接偶合物垫片(4)，所述偶合物垫片上方层叠连接样本垫片(5)，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件(6)，上方设有第二固定部件(7)，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(2)中间部位第一检测线(8)和第二检测线(9)分别包被有抗sFlt-1或抗Endoglin的单克隆或多克隆抗体，在所述第一检测线和第二检测线的两边分别设有控制线(10)，所述偶合物垫片(4)上涂布有金标记的sFlt-1和Endoglin抗体以及控制线偶合物。
2.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述控制线(10)包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
3.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述第一固定部件(6)为双面胶，第二固定部件(7)为单面胶。
4.如权利要求1-3中任一项所述的试纸，其特征在于，所述试纸外还包括一外壳(11)，所述外壳包裹所述试纸外，露出样本垫片(5)、硝酸纤维素膜(2)上的第一检测线(8)、第二检测线(9)、两条控制线(10)、以及吸水垫(3)。
5.如权利要求4所述的试纸，其特征在于，所述两条控制线(10)与第一检测线(8)和第二检测线(9)为平行设置。
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